Diese Arbeit wurde an der Keck School of Medicine, University of California, USA, und am University College London, UK durchgeführt. KL wird von National Institute of Health Gewährung 5 U19 CA148112-02 finanziert. BG wurde von einer Projektgruppe Zuschuss aus dem Eve Appeal gynäkologische Onkologie Charity (UK) finanziert. Einige dieser Arbeiten am UCLH / UCL durchgeführt wurde teilweise Finanzierung aus dem Department of Health NIHR Biomedical Research Centre Förderprogramm.

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	<li>Jelovac, D., Armstrong, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+in+the+diagnosis+and+treatment+of+ovarian+cancer.">Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer.</a> CA Cancer J. Clin. , (2011).</li><li>Office for National Statistics. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Statistics registrations: registrations of cancer diagnosed in 2008. , (2011).</li><li>K&#246;bel, M., Kalloger, S. E., Santos, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+type+and+substage+predict+survival+in+stage+I+and+II+ovarian+carcinoma:+insights+and+implications.">Tumor type and substage predict survival in stage I and II ovarian carcinoma: insights and implications.</a> Gynecol. Oncol. 116, 50-56 (2010).</li><li>K&#246;bel, M., Kalloger, S. E., Boyd, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+carcinoma+subtypes+are+different+diseases:+implications+for+biomarker+studies.">Ovarian carcinoma subtypes are different diseases: implications for biomarker studies.</a> PLoS Med. 5, e232 (2008).</li><li>Smith, L. H., Morris, C. R., Yasmeen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer:+can+we+make+the+clinical+diagnosis+earlier.">Ovarian cancer: can we make the clinical diagnosis earlier.</a> Cancer. 104, 1398-1407 (2005).</li><li>Aviv, A., Hunt, S. C., Lin, J., Cao, X., Kimura, M., Blackburn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impartial+comparative+analysis+of+measurement+of+leukocyte+telomere+length/DNA+content+by+Southern+blots+and+qPCR.">Impartial comparative analysis of measurement of leukocyte telomere length/DNA content by Southern blots and qPCR.</a> Nucleic Acids Res. 39, e134 (2011).</li><li>Kim, N. W., Wu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+quantification+and+characterization+of+telomerase+activity+by+the+telomeric+repeat+amplification+protocol+(TRAP.">Advances in quantification and characterization of telomerase activity by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP.</a> Nucleic Acids Res. 25, 2595-2597 (1997).</li><li>Lawrenson, K., Grun, B., Benjamin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+fibroblasts+promote+neoplastic+transformation+of+partially+transformed+ovarian+epithelial+cells+in+a+three-dimensional+model+of+early+stage+ovarian+cancer.">Senescent fibroblasts promote neoplastic transformation of partially transformed ovarian epithelial cells in a three-dimensional model of early stage ovarian cancer.</a> Neoplasia. 12, 317-325 (2010).</li><li>Lawrenson, K., Benjamin, E., Turmaine, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+three-dimensional+modelling+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells.">In vitro three-dimensional modelling of human ovarian surface epithelial cells.</a> Cell Prolif. 42, 385-393 (2009).</li><li>Lawrenson, K., Sproul, D., Grun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+genetic+and+clinical+heterogeneity+in+epithelial+ovarian+cancers.">Modelling genetic and clinical heterogeneity in epithelial ovarian cancers.</a> Carcinogenesis. 32, 1540-1549 (2011).</li><li>Grun, B., Benjamin, E., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+in+vitro+cell+biology+models+of+ovarian+and+endometrial+cancer.">Three-dimensional in vitro cell biology models of ovarian and endometrial cancer.</a> Cell Prolif. 42, 219-228 (2009).</li><li>Zietarska, M., Maugard, C. M., Filali-Mouhim, A., Alam-Fahmy, M., Tonin, P. N., Provencher, D. M., Mes-Masson, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+description+of+a+3D+in+vitro+model+for+the+study+of+epithelial+ovarian+cancer+(EOC.">Molecular description of a 3D in vitro model for the study of epithelial ovarian cancer (EOC.</a> Mol. Carcinog. 46, 872-885 (2007).</li><li>Shield, K., Ackland, M. L., Ahmed, N., Rice, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+spheroids+in+ovarian+cancer+metastases:+Biology+and+pathology.">Multicellular spheroids in ovarian cancer metastases: Biology and pathology.</a> Gynecol Oncol. 113, 143-148 (2009).</li><li>Dafou, D., Grun, B., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcell-mediated+chromosome+transfer+identifies+EPB41L3+as+a+functional+suppressor+of+epithelial+ovarian+cancers.">Microcell-mediated chromosome transfer identifies EPB41L3 as a functional suppressor of epithelial ovarian cancers.</a> Neoplasia. 12, 579-589 (2010).</li><li>Levanon, K., Crum, C., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+pathogenesis+of+serous+ovarian+cancer+and+its+clinical+impact.">New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact.</a> J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).</li><li>Kurman, R. J., Shih, I. e. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathogenesis+and+extraovarian+origin+of+epithelial+ovarian+cancer--shifting+the+paradigm.">Molecular pathogenesis and extraovarian origin of epithelial ovarian cancer--shifting the paradigm.</a> Hum. Pathol. 42, 918-931 (2011).</li></ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Die Biologie der Early-Stage-epithelialen Ovarialkarzinom (EOC) ist wenig bekannt. Vielleicht eines der Haupthindernisse in diesem Bereich seit vielen Jahren war der Mangel an Verständnis für die Gewebe-spezifische Ursachen der Krankheit und die Bedeutung der Rolle der Mikroumgebung in EOC Entwicklung. In den letzten Jahren hat sich herausgestellt, dass sich EOC eine heterogene Erkrankung mit mehreren unterschiedlichen Subtypen histopathologischen, wahrscheinlich mit verschiedenen zellulären Ursprung für verschieden...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens </td><td> Lieferant </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> PolyHEMA, geeignet für die Zellkultur </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> Molekularbiologie Ethanol </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> Sterilem Wasser für die Zellkultur </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> Medium 199 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Hyclone Fötales Rinderserum </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;td&gt; Gentamicin </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> Amphotericin B </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-Hygro-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0,25% Trypsin-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> Zellsieb (40 oder 70 m) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> Anti-Fibroblasten Oberflächenprotein Antikörper, Klon 1B10 </td><td> Sigma </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> Anti-pan-Zytokeratin Antikörper (C11) </td><td> Santa Cruz </td><td> sc-8018 </td></tr><tr><td> Polybrene (Hexadimethrinbromid) </td><td> Sigma </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Telomerase PCR ELISA PLUS </td><td> Roche </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Telomere Länge Assay </td><td> Roche </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Reagenzien und Geräte im Sinne dieser Studie.

heterotypic three-dimensional in vitro modeling of stromal-epithelial interactions during ovarian cancer initiation and progression

Epithelialen Eierstockkrebs (EOC) sind die häufigste Todesursache bei gynäkologischen Malignomen in westlichen Gesellschaften. Trotz der Fortschritte in der chirurgischen Behandlungen und verbesserten Platin-basierten Chemotherapie, hat es wenig Verbesserung EOC Überlebensraten für mehr als vier Jahrzehnten 1,2. Während im Stadium I Tumoren haben 5-Jahres-Überlebensraten&gt; 85%, sind die Überlebensraten für Stufe III / IV der Krankheit &lt;40%. So konnten die hohen Sterblichkeitsraten für EOC deutlich verringert werden, wenn die Tumore bei früheren, mehr behandelbar, Stufen 3-5 nachgewiesen wurden. Derzeit wird die molekulare genetische und biologische Grundlage der frühen Stadium der Erkrankung die Entwicklung nur unzureichend verstanden. Genauer gesagt, ist nur wenig über die Rolle der Mikroumgebung während Tumorinitiation bekannt, aber bekannten Risikofaktoren für EOC (zB Alter und Parität) legen nahe, dass die Mikroumgebung eine zentrale Rolle spielt in der frühen Entstehung der EOC. Wir entwickelten deshalb dreidimensionale heterotypische Modellesowohl der normalen Ovar und frühzeitig Eierstockkrebs. Für den normalen Ovar, wir co-kultivierten normalen Ovarien Oberflächenepithelzellen (IOSE) und normalen Stromazellen Fibroblasten (Inof) Zellen durch Transduktion retrovrial der katalytischen Untereinheit der humanen Telomerase Holoenzym (hTERT), um die Lebensdauer dieser Zellen in Kultur immortalisierten erstrecken. Um die frühesten Stadien der Ovarialepithelzellen Zelltransformation Überexpression des CMYC Onkogen in IOSE Zellen, wieder mit Inof Zellen co-kultiviert modellieren. Diese heterotypische Modelle wurden verwendet, um die Auswirkungen des Alterns und der Seneszenz der Transformation und Invasion von Epithelzellen zu untersuchen. Hier beschreiben wir die methodischen Schritte Entwicklung dieser dreidimensionalen Modells; diese Methoden sind nicht spezifisch für die Entwicklung einer normalen Ovar und Eierstockkrebs Geweben und könnte verwendet werden, um andere Gewebearten zu untersuchen, wo stromalen und epithelialen Zell-Wechselwirkungen sind ein grundlegendes Aspekt des Gewebes Wartung und diSease Entwicklung.

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Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Wir beschreiben Methoden zur Gründung<em&gt; In vitro</em&gt; Heterotypische dreidimensionalen Modellen, umfassend ovariellen normalen Fibroblasten und Eierstock Oberfläche oder Eierstockkrebs Epithelzellen. Wir diskutieren den Einsatz dieser Modelle Stroma-Epithel-Interaktionen, die während Eierstockkrebs Entwicklung auftreten studieren.

Heterotypische Dreidimensionale<em&gt; In Vitro</em&gt; Modellierung von Stromal-Epithelial Interaktionen beim Eierstockkrebs Initiation und Progression

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

heterotypic-three-dimensional-vitro-modeling-stromal-epithelial

Research

JoVE Journal

Medicine

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

15.0K Aufrufe.  University of Southern California. Wir beschreiben Methoden zur Gründung In vitro Heterotypische dreidimensionalen Modellen, umfassend ovariellen normalen Fibroblasten und Eierstock Oberfläche oder Eierstockkrebs Epithelzellen. Wir diskutieren den Einsatz dieser Modelle Stroma-Epithel-Interaktionen, die während Eierstockkrebs Entwicklung auftreten studieren.