Die Autoren bedanken sich alle Mitglieder der Ricke Labor, Vergangenheit und Gegenwart zu danken. Wir danken Calvin Patten, Jr., DVM und Brigitte Raabe, DVM, für hilfreiche Anmerkungen zum Protokoll. Wir möchten das NIDDK, NCI und NIEHS für ihre finanzielle Unterstützung für diese Studien bestätigen: R01DK093690, R01CA123199, RC2ESO18764. TMN ist Auszubildender in der Medical Scientist Training Program an der University of Rochester durch NIH T32 GM07356 finanziert, die NIH unter Ruth L. Kirschstein National Research Service Award F30DK093173 unterstützt auch dieses Projekt. CDV wird durch T32CA157322 und ABT unterstützt durch T32ES007015 an der Universität von Wisconsin-Madison unterstützt. Der Inhalt ist ausschließlich der Verantwortung der Autoren und nicht notwendigerweise die offizielle Meinung des National Institute of General Medical Sciences oder NIH.

1. Aufbereitung von Druck Hormone / Drug Pellet <ol><li> Dieses Verfahren sollte in einem Stoffsicherheitsabzug erfolgen, während das Tragen eines Labormantel, Handschuhe, Maske, Schutzbrille und Haube. Um eine Kreuzkontamination zu vermeiden, ist es entscheidend, dass die Pelletherstellung Ausrüstung wird gründlich mit 70% igem Ethanol vor und nach der Herstellung jeder Art von Pellet gereinigt. </li><li> Mit Hilfe eines analytischen Maßstab und wiegen Papier, messen gewünschte Menge des Hormons / Drogenpulver. Etwa 5% Extra-Material wird empfohlen, um den Verlust beim Pressen zubringen. </li><li> Einige Hormone / Medikamente erfordern ein Bindemittel oder Füllstoffe, die vor der Herstellung Pellet vermischt wird. Zum Beispiel, um eine 2,5 mg Tablette aus 17β-Östradiol herzustellen, verbinden das Hormon mit 22,5 mg Cholesterin, das in einer 25 mg Tablette führt. </li><li> Vorsichtig in Werkzeugsatz, Ort übertragen unter der Presse und schieben Hebel fest nach unten, um Pellets zu komprimieren. Verwenden Sie den Druck konstant zu halten sind konstante Oberflächenein Volumenverhältnis. </li><li> Die Stempelhalter Next umzukehren und drücken Sie den Hebel wieder nach unten, um das Pellet zu lösen. </li><li> Überprüfen Pellet für Integrität und festzustellen, ob endgültige Masse innerhalb gewünschten Bereich. Ein akzeptabler Bereich ist ± 5% Unterschied in der endgültigen Masse (beispielsweise ein akzeptabler Bereich für eine 25 mg Tablette ist von 23,8 bis 26,3 mg). </li><li> Pellets können vor der Operation gemacht und gespeichert (Bedingungen und die Dauer der Speicherung hängt von der Stabilität des Arzneimittels oder Hormons in Pelletherstellung verwendet) werden. Hormon Pellets können als Alternative zur Herstellung pelle erworben werden. Einkauf Pellets vermeidet die Verwendung von nicht-pharmazeutischer Qualität Medikamente, da sie formuliert und zusammengesetzt werden. </li></ol> 2. Herstellung von Zell Rekombinante Xenografts <ol><li> Ernte und Kultur primären Maus urogenitalen Mesenchym (UGM) Stromazellen für weniger als 4 Wochen vor dem für die Zählung gesammelt. </li><li> Kultur immortalisierten epithelialen Prostatazelllinien in der üblichen ModeIonen und sammeln für die Zählung. Für dieses Beispiel vorzubereiten rekombinante Zelltransplantate durch Mischen von 100.000 BPH-1-Epithel-Zellen pro Transplantat mit 250.000 UGM Stromazellen pro Graft in Suspension. </li><li> Pellet-Zellen zusammen und resuspendieren in genügend neutralisiert Typ 1 Rattenschwanzkollagen, um die gewünschte Anzahl von Transplantaten, die jeweils in einem Volumen von 25 &amp;mgr; l bis 50 &amp;mgr; l zu machen. </li><li> Eingestellt rekombinanten Transplantate bei 37 ° C für 15 Minuten und dann die Abdeckung mit Wachstumsmedium für die Lagerung bei 37 ° C für bis zu 48 Stunden vor der Transplantation. </li></ol> 3. Herstellung von Seiden Xenografts <ol><li> Pflegen universellen Vorsichtsmaßnahmen für durch Blut übertragbaren Krankheitserregern während der Gewebebeschaffung und chirurgischen Eingriff. Nach Institutional Review Board Genehmigung und Einwilligung, erhalten frische Prostatagewebe aus chirurgischen Resektion. Für Untersuchungen der Wachstums BPH kann Gewebe von transurethrale Resektion der Prostata oder einfach Prostatektomie geerntet werden. Primäre Xenografts von PRCA oder gutartige prostaß Gewebe kann von radikalen Prostatektomie Proben gewonnen werden. </li><li> Shop gewonnene Gewebe in isotonischer gepufferten Zellmedium oder physiologischer Kochsalzlösung auf Eis. Abhängig von den Gewebe-und Lagerbedingungen können die Proben für 24 Stunden vor der Herstellung der Gewebetransplantate gespeichert werden. Gängige Praxis ist es, die Probe in drei Stücke teilen, mit einem Abschnitt in Formalin fixiert und routinemäßig für die Histologie verarbeitet, Rast einem Stück für die molekulare Analyse eingefroren und ein Stück weiter in das Gewebe Xenografts (1-3 mm groß) eingeteilt. </li></ol> 4. Herstellung von Feuerpolierte Glaspipetten <ol><li> Das Tragen von Schutzbrille, Laborkittel und hitzebeständige Handschuhe, Ort Pasteur-Glaspipettenspitze in Bunsenbrenner-Flamme bei ca. 60 °-Winkel zu starten. </li><li> Halten Sie eine konstante, leichte Bewegung auf die Pipette, um Hotspots zu vermeiden. </li><li> Zeichnen Sie die Spitze dünn und Feuerpolitur mit dem Ziel, eine leicht gebogene Ende mit einem abgerundeten, geschlossenen Spitze. </li></ol&gt; 5. Vorbereitung der Instrumente und OP-Suite <ol><li> Autoklav alle Instrumente. Vor der Operation, kontrollieren alle Instrumente, wobei darauf zu sterilen Bereich zu halten. </li><li> Bis sterilen OP-Bereich mit saugfähigen Kissen, Dissektion Umfang, Anästhesie Nasenkegel, chirurgische Instrumente und zum Arbeitsbereich gerichtet Wärmelampe ein. Um Werkzeuge zwischen Mäusen, vorgewärmte Perle Sterilisator sterilisieren. </li><li> Bauen und Testnarkosegerät; wiegen Gasfänger. </li><li> Mit den Mikrowellen-, Wärme-Wachs-Pads für bis zu 5 min (in 1 min-Schritten, Kneten des Wachs-Pad, um geschmolzen und nicht geschmolzenen Wachs kombinieren) bei 70-80% der Leistung, bis alle das Wachs gleichmäßig geschmolzen. Durch Berührung, sicherzustellen, dass die Unterlage ist nicht zu heiß und Platz unter dem leeren Käfig Nager Erholung. </li><li> Don persönliche Schutzausrüstung für Nager chirurgische Verfahren, einschließlich OP-Maske, Haube, Handschuhen und Kleid. </li></ol> 6. Chirurgische Verfahren: Nierenkapsel Xenografting<ol><li> Alle Verfahren, die Forschung Tiere sollten mit Zustimmung des institutionellen Tierpflege und Verwendung Ausschüssen durchgeführt werden. Vor der Einleitung der Narkose, beachten Sie die Maus, um Gesundheit und Wohlbefinden zu gewährleisten. </li><li> Platzieren Sie die Maus in die Kammer für die Induktion der Isofluran-Narkose bei 3-5%. Wenn das Tier sich nicht mehr bewegt und die Atemfrequenz verringert hat, Transfer zum Nasenkegel in der Bauchlage und Aufrechterhaltung einer Narkose bei 1-3%. </li><li> Falls erforderlich, verwenden Knipser, die Rückseite der Maus zu rasieren. Dies ist nicht bei der Nutzung athymischer (nu / nu) Mäuse benötigt. </li><li> Festem Druck auf den Gurt des erweiterten Hinterfuß Angemessenheit der Narkose zu evaluieren. Wenn die Maus reagiert auf Druck wird mehr Zeit für die Anästhesie wirksam wird benötigt. Wenn nötig, Anästhesie Fluss einstellen leicht auf eine adäquate Anästhesie zu erreichen. </li><li> Wenn die Maus ausreichend betäubt Desinfektion des Operationsstelle mit chirurgischen Jod (Betadine)-Lösung, gefolgt von70% Alkohol. </li><li> Don sterile Handschuhe und ein Kleid, gelten sterilen Tüchern zur Operationsstelle. Heben Sie die Rückenhaut mit einem Paar von Zahnzange und mit den groben Schere einen 2-3 cm dorsalen Mittellinienschnitt. </li><li> Mit stumpfen Schere oder einer Sonde, trennen Sie die darunter liegenden Dermis von der Körperwand (auf beiden Seiten des Einschnitts für die bilaterale Pfropfen oder auf der einen Seite für die einseitige Transplantation). </li><li> Positionieren Sie die Maus in Seitenlage, und ermitteln die Lage der Niere, indem Sie die Nieren Profil durch den Muskel Wand. Mit leichtem Handdruck mit dem Daumen und Zeigefinger auf dem Bauch kann mit Visualisierung inneren Organe zu unterstützen. </li><li> Mit feinen Iris Schere, und kümmert sich um große Gefäße und Nerven der Wirbelsäule zu vermeiden, machen Sie einen 1 cm langer Schnitt in der Körperwand parallel zur Wirbelsäule. Widen diesen Einschnitt, um 1,5 bis 2,0 cm (etwas länger als der langen Achse der Niere) durch leichtes Öffnen der Schere weiter nach, indem sie in der ersten Einschnitt. </li><li> Exteriorisieren die Niere durch leichten Druck außerhalb der Muskelwand auf beiden Seiten der Niere mit dem Zeigefinger und Daumen. Tuck die Haut Kanten unterhalb der exteriorisierten Niere, die auf der Körperwand ruhen wird. Während die Niere exteriorisiert, pflegen Hydratation der Nierenkapsel durch die Anwendung steriler Kochsalzlösung. </li><li> Mit feinen Pinzette Nr. 5 heben die Nierenkapsel aus dem Parenchym der Niere und mit einem feinen Skalpell, machen Sie eine 2 -4 mm Schnitt in der Kapsel. Die Größe des Einschnitts wird durch die Größe des Transplantats bestimmt, sollte aber, um die Integrität der Kapsel zu halten, minimiert werden. </li><li> Bearbeiten Sie ein Glas Pasteur-Pipette, die mit einem geschlossenen Ende abgerundet unter der Kapsel tangential zur Oberfläche der Niere dünn und feuerpolierte gezogen worden ist. Öffnen Sie vorsichtig eine kleine Kapsel Tasche für Transplantate mit großer Sorgfalt nicht, das Nierenparenchym beschädigen. </li><li> Die Schnittkante der Nierenkapsel wird mit den feinen Pinzette angehoben und das Transplantat is unter der Kapsel mit der feuerpolierten Glaspipette in die Tasche eingesetzt. Mehrere Transplantate unter die Nierenkapsel platziert werden und gleichmäßig auf die Niere Oberfläche beabstandet. </li><li> Wenn im Verlauf der Pfropfung wird entwässert die Kapsel sollte durch Anwendung steriler Kochsalzlösung befeuchtet werden. </li><li> Beim Pfropfen abgeschlossen ist, heben Sie die Seiten der Muskelwand Einschnitt, um die Niere wieder in die Körperhöhle zu ersetzen. Beachten Sie, dass die Transplantate nicht aus unter der Kapsel rutschen. </li><li> Schließen Sie die Muskelwand mit einer einzigen Naht (4-0, FS-2 Vicrylnaht). Der chirurgische Eingriff kann auf der kontralateralen Niere durch Neupositionierung der Maus wiederholt werden. </li><li> Beim Pfropfen abgeschlossen ist, kann die Maus subkutane Implantation Pellet im gleichen chirurgischen Eingriff unterziehen (siehe Protokoll Schritt 7). </li><li> Mit Zahnzangen, richten Sie die Hautschnitt Kanten und gelten 2-3 chirurgische Wundklammern, um den Einschnitt zu schließen. Verwalten Analgesie (wir verwenden 5-10 mg / kg carprofen mit einer subkutanen Injektion) und platzieren Sie die Maus in die Seitenlage in der Wiederherstellungs Käfig. Stellen Sie sicher, Aufrechterhaltung der Körpertemperatur mit Wärme aus einer Lampe oder einem Heizkissen. Beachten Sie zur vollständigen Wiederherstellung der Maus, die in weniger als 15 Minuten auftreten sollte. </li><li> Mäuse sollte für die nächsten 24 Stunden auf Anzeichen von postoperativen Schmerzen beobachtet werden, Blutungen und / oder anderen Komplikationen. Kontrollieren Sie regelmäßig chirurgischen Schnitt für Anzeichen einer Infektion. </li><li> Wundklammern entfernen mit chirurgischer Wundklammer Entnahmevorrichtung 7-14 Tage nach der Operation. </li></ol> 7. Chirurgische Verfahren: Die subkutane Implantation Pellet <ol><li> Wiederholen Sie die Schritte 6.1-6.5 von Nierenkapsel xenografting chirurgischen Eingriff. </li><li> Heben Sie die Rückenhaut mit einem Paar von Hautzange und mit den groben Schere einen 1-2 cm dorsalen Mittellinienschnitt. </li><li> Mit stumpfen Schere oder einer Sonde, trennen Sie die darunter liegenden Dermis von der Körperwand kranial. </li><li> Mit Hautzangen,heben die Schädel Aspekt der Hautschnitt, und hält das Hormon Pellet vorsichtig mit geraden, gezahnten Pinzette, legen Sie die Pellet-und Release am Genick, in der Sie mit dem stumpfen Sonde erstellt Tasche. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte von 6,18-6,20 Nierenkapsel xenografting chirurgischen Eingriff. Bei Durchführung subkutane Implantation nur Pellet, verwenden Sie ein chirurgischer Wundklammer, um den chirurgischen Eingriff zu schließen. </li></ol>

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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+hormone+action+in+prostatic+carcinogenesis:+stromal+androgen+receptors+mediate+prostate+cancer+progression,+malignant+transformation+and+metastasis.">Androgen hormone action in prostatic carcinogenesis: stromal androgen receptors mediate prostate cancer progression, malignant transformation and metastasis.</a> Carcinogenesis. 33, 1391-1398 (2012).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+efficient+xenograft+models+for+benign+and+malignant+human+prostate+tissue.">Development and characterization of efficient xenograft models for benign and malignant human prostate tissue.</a> The Prostate. 64, 149-159 (2005).</li><li>Goto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximal+prostatic+stem+cells+are+programmed+to+regenerate+a+proximal-distal+ductal+axis.">Proximal prostatic stem cells are programmed to regenerate a proximal-distal ductal axis.</a> Stem Cells. 24, 1859-1868 (2006).</li><li>Xin, L., Ide, H., Kim, Y., Dubey, P., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+regeneration+of+murine+prostate+from+dissociated+cell+populations+of+postnatal+epithelia+and+urogenital+sinus+mesenchyme.">In vivo regeneration of murine prostate from dissociated cell populations of postnatal epithelia and urogenital sinus mesenchyme.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 11896-11903 (2003).</li><li>Priolo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+genomic+characterization+of+mouse+xenografts+of+human+primary+prostate+tumors.">Establishment and genomic characterization of mouse xenografts of human primary prostate tumors.</a> Am. J. Pathol. 176, 1901-1913 (2010).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Mulder, G. B., Luo, Y., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+Rodent+Surgery+for+the+New+Surgeon.">Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), e2586 (2011).</li></ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen konkurrieren.

Dieses Papier und die hierin beschriebenen Protokoll beschreiben die Herstellung von Druckhormon und / oder Drogen-Pellets und das chirurgische Verfahren für die subkutane Implantation von Pellets Mäusen. Je nach Fragestellung angegangen werden, kann diese Technik einzeln oder in Kombination mit Nierenkapsel xenografting der Prostatazelle rekombinante Transplantate oder Prostatagewebe Heterotransplantate, die Techniken weit in Prostata-Forschung verwendet werden, sind von 17 bis 19 durchgeführt werden. Zus...

Prostatakrebs (PRCA) und gutartige Prostata-Hyperplasie (BPH) sind erhebliche gesundheitliche Belastungen. PRCA ist die zweithäufigste Organkrebserkrankung bei Männern und eine der häufigsten Ursachen bei Krebserkrankungen ein. BPH ist auch sehr weit verbreitet unter älteren Männern, und es wird geschätzt, dass die klinische Manifestation der BPH, Symptome der unteren Harnwege (LUTS), wird von 50 bis 90% der Männer, 2 beeinflussen. Während Androgene und Östrogene bekannt, in PRCA BPH und wichtig zu sein, unser Verständnis der hormonellen Mechanismen, die Krebsentstehung und das Wachstum zugrunde liegen, ist noch unvollständig 3,4. Einfach und genetisch manipulierbaren Tiermodellen untermauern die Studien, die diese Prioritäten in Prostata-Forschung adressieren. In hormonabhängigen Krankheiten wie PRCA und BPH, die Verwendung von subkutanen, langsame Freisetzung Hormon Pellets, isoliert oder in Kombination mit Nierenkapsel xenografting (die Übertragung von Zellen, Geweben oder Organen von einer Spezies in eine andere) in die immunocompromised Mäusewirt, ein einfaches und reproduzierbares Verfahren zur Untersuchung der hormonellen Regulation des Wachstums und der Krebsentstehung. Die subkutane Implantation Hormon Pellet ist eine einfache und reproduzierbare Technik zur hormonellen Regulation der Krebsentstehung und gutartige Wachstum in der Prostata 5 zu studieren. Subkutane Implantation von erwachsenen männlichen Mäusen, die mit 25 mg Testosteron (T) und 2,5 mg 17β-Estradiol (E 2), bewirkt eine Erhöhung der Serum-E 2 und allmählichen Abnahme der T, wieder die dynamische hormonelle Milieu der alternden Männern 5,6. Zudem rekapituliert dieses Modell viele der klinischen Merkmale der BPH-LUTS 5,7. Alternative Methoden der Hormongabe orale / Magensonde Verwaltung oder intraperitoneale Injektion, die Leiden verursachen, um den Nager sind weniger konsequent bei der Bereitstellung der gleichen Menge der Droge im Laufe der Zeit, und sind arbeitsintensiver als eine einmalige chirurgische Implantation. Andere Modi für subkutane hormone und / oder Medikamentenabgabe sind Silastic Kapseln 8. Zwar haben wir auch Erfahrung mit der Nutzung der Silastic Kapseln, werden komprimiert Pellets für ihre Benutzerfreundlichkeit und Reproduzierbarkeit begünstigt. Außerdem Freisetzungsraten von Druckhormon Pellets besser imitieren die bei alternden Männern 5,7 beobachtet dynamische Sexualsteroidhormonverhältnisse. Seit der Entwicklung von genetisch immungeschwächten Mäusen wurden zahlreiche in-vivo-Modellsysteme, die xenografting Techniken für die Untersuchung einer Vielzahl von normalen und erkrankten Geweben entwickelt worden. Es gibt einige grundlegende Kategorien von xenografting. Gewebe Xenotransplantate bestehen aus einem kleinen Stück von intaktem Gewebe, das eine normale Struktur, bösartiger Tumor, oder gutartige Wachstum sein kann. Szot et al. (2007) haben vor kurzem beleuchtet Nierenkapsel xenografting der Langerhans-Inseln 9. Aamdal et al. (1985) beschrieben Nierenkapsel xenografting von 27 menschlichen Tumorzelllinien in immunocompromised Maus beherbergt 10. Grafts kann auch aus einem einzigen immortalisierten Zelllinie (Krebs oder nicht-tumor) bestehen, oder aus einer immortalisierten Zelllinie kombiniert mit Zellen aus Mesenchym (Zelltransplantat rekombinanten) isoliert bestehen. Wir bevorzugen xenografting von Zell Rekombinanten, die jeweiligen Rollen von Stroma und Epithel in der Entwicklung von PRCA und BPH zu sondieren. Cunha et al. (1980) war der erste, zu berichten, dass bei erwachsenen Mäuse-Blase Epithel mit embryonalen Urogenitalsinus Mesenchym (UGM) und xenografted unter die Nierenkapsel des männlichen Mäusen Gastgeber kombiniert, entwickelt das Gewebe in die Strukturen ähnlich Prostata acini 11. Norman et al. (1986) zeigten, dass erwachsenen Maus Prostata-duktalen Epithel und UGM, wenn im Gewebe Rekombinanten kombiniert, unterziehen duktalen Wachstum und Verzweigung Morphogenese 12. Hayward et al. (1988) zeigte, dass die menschliche Prostata-Epithel reagiert auf fetale m induktivesenchyme in ähnlicher Weise 13. Ein hormonelles Modell der Karzinogenese in der Prostata, indem die immortalisierte humane epitheliale Prostatazelllinie BPH-1 mit AWS, wurde zuerst von 14 (2001), Wang et al. Berichtet und wurde ausführlich in unserem Labor 15 verwendet. Dieses Modell ist für das Verständnis PRCA Progression gut geeignet, da die gutartigen Prostata-Epithel verwandelt, um Metastasen, erweiterte Modellierung PRCA bei Menschen 5. Da die spezifischen Komponenten können genetisch manipuliert werden, ist die Zelltransplantation rekombinanten besonders nützlich als ein Ansatz zur Stroma-Epithel-Wechselwirkungen zu beurteilen. Andere Websites sind für xenografting intradermale, subkutane und orthotopen 16 Standorten. Je nach Gewebe und Krankheitsverlauf von Interesse sind, können diese geeignete alternative Ansätze. Für die Studie von Prostata-Krebsentstehung und gutartige hormonelle Wachstumsregulation, wählen wir die NierenkapselStandort für xenografting aufgrund seiner höheren Graft nehmen Rate, reichlich Blutversorgung und die Fähigkeit, eine größere Anzahl von Fremdtransplantaten in einem geschlossenen Ort 16 implantieren. Außerdem hormonelle Manipulation der Wirtsmaus, die in Prostataatrophie Ergebnisse beschränkt die Verwendung von Prostata-orthotope Transplantation 16. Dieses Protokoll beschreibt Techniken der Druck Hormon / Arzneimittelpelletherstellung und chirurgische Implantation sowie Nierenkapsel xenografting der menschlichen Prostata Zell-und Gewebetransplantaten. Zusammen bilden diese Techniken bieten eine empfindliche Assays zu bestimmen, ob eine gentechnisch veränderte Maus ist anfälliger für PRCA und / oder BPH Initiierung als Kontrollstämme. Xenografting ist eine leistungsfähige Technik für die in vivo-Bewertung des Potentials der experimentellen Zellen histologischen und molekularen Eigenschaften von malignen Erkrankungen zu entwickeln, sowie ein Assay für neue Behandlungsstrategien für eine Vielzahl von gutartigen und bösartigen Erkrankungen.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EQUIPMENT &amp; MATERIALS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pellet press</td>
			<td>PARR Industries </td>
			<td>2815</td>
			<td>3mm Punch &amp; Die set</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Analytical Balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>1918302</td>
			<td>Voyager or other</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Bunsen burner</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-962Q</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>L2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Deltaphase Pad Kit (reheatable wax)</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>39DP</td>
			<td>Alternative to an electric heating pad</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Hot Bead sterilizer</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>18000-45</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Isoflurane Vaporizer</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>VAP3000</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Induction Chamber</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>RES644</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>F/AIR Canister</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>80120</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>4 port Manifold</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>RES536</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Rebreathing Circuits</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>CIR529</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Inlet/Outlet Fittings</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>VAP203/4</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pressure Reg/Gauge</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>OXY508</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Oxygen Flowmeter</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>OXY660</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>21mm Clear Tubing</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>301-150</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Small Mice Nose Cone</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>ACC526</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile surgical gown</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>350.79866.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Surgical mask</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>350.50111.2</td>
			<td>2-ply w/ earloops</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile gauze</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.14100.2</td>
			<td>2 x 2 inches</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile Gloves</td>
			<td>Kimberly Clark</td>
			<td>55092</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Bouffant</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.27100.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cotton Tip Applicator</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.06220.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Surgical Scrub Wash</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>733.80010.3</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile Fields (Fenestrated)</td>
			<td>General Econopak, Inc</td>
			<td>88VCSTF</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>REAGENTS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C-3292</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Testosterone Proprionate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T-1875</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>17&beta;-estradiol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E-2758</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.33161.3</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.70200.3</td>
			<td>Injectable (Rimadyl)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Webster Veterinary</td>
			<td>07-836-3379</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.74504.3</td>
			<td>NaCl 0.9%, Injectable</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>SURGICAL INSTRUMENTS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Straight Sharp/Blunt Scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tools (F.S.T.)</td>
			<td>14054-13</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Toothed, Curved)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11055-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fine Iris scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14090-09</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe Scalpel</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>10071-12</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dumont #5 forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glass Pasteur pipets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S67050</td>
			<td>5" length</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Curved)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Straight)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11050-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Vicryl Suture</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>295-92100.2</td>
			<td>4-0, FS-2, Absorbable</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Needle Holder w/ scissor action</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12002012</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Wound Clips</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>ACS CS</td>
			<td>May use 7mm or 9mm clips</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Reflex Wound Clipper</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12031-09</td>
			<td>Correspond w/ wound clip size</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Would Clip Remover</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12033-00</td>
			<td>Universal</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterilization Container</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>20810-01</td>
			<td>Any autoclavable container will do</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Syringe w/ needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>148292C</td>
			<td>1cc, 25Gx1</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ear Tag Applicator</td>
			<td>National Band &amp; Tag Co.</td>
			<td>1005s1</td>
			<td>Alternative to ear notching</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Small Animal Ear Tags</td>
			<td>National Band &amp; Tag Co.</td>
			<td>1005-1</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

renal capsule xenografting and subcutaneous pellet implantation for the evaluation of prostate carcinogenesis and benign prostatic hyperplasia

Neue Therapien für zwei gemeinsame Prostataerkrankungen, Prostata-Krebs (PRCA) und gutartige Prostata-Hyperplasie (BPH), hängen entscheidend von der Bewertung ihrer Experimente hormonellen Regulation. Sex Steroidhormone (vor allem Androgene und Östrogene) sind wichtig, PRCA und BPH, wir sondieren ihre jeweilige Rolle bei der Induktion Wachstum der Prostata und Krebsentstehung bei Mäusen mit Experimenten mit Druckhormon Pellets. Hormon-und / oder Drogen-Pellets sind leicht mit einer Pelletpresse hergestellt und operativ in das subkutane Gewebe der männlichen Maus Wirt implantiert. Wir beschreiben auch ein Protokoll für die Bewertung der hormonellen Karzinogenese durch Kombinieren subkutane Implantation Hormon Pellet mit xenografting Prostatazell Rekombinanten unter die Nierenkapsel von immungeschwächten Mäusen. Darüber hinaus subkutane Implantation Hormon Pellet, in Kombination mit Nierenkapsel xenografting der BPH Gewebe, ist nützlich, um die hormonelle Regulation der gutartigen prost besser zu verstehenaß Wachstum und neue Therapien, die auf Sexualsteroidhormon Wege zu testen.

<html> Abhängig von der Hypothese getestet werden soll, kann die Nierenkapsel xenografting von Gewebe-oder Zell Rekombinanten isoliert oder in Kombination mit subkutaner Implantation Hormon Pellets durchgeführt werden. Eine schematische Darstellung eines hypothetischen Experiment kombiniert Nierenkapsel xenografting Experiment mit subkutanen Implantation Hormon Pellet wird in 1 dargestellt. Eine Vielzahl von pulverförmigen und / oder kristallinen Substanzen bei der Herstellung von Druck Pellets mit de...

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Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

Wir beschreiben die Herstellung von Druckhormonpellets sowie subkutane chirurgischen Implantation in Mäuse. Diese Strategie kann mit dem Wachstum von Zellen und Geweben Xenotransplantate unter die Nierenkapsel von Nacktmäusen ohne Thymus hormonelle Regulation der Karzinogenese und der gutartigen Prostatawachstum zu beurteilen kombiniert werden.

Nierenkapsel Xenografting und subkutane Implantation Pellet für die Beurteilung von Prostata-Karzinogenese und benigne Prostatahyperplasie

New therapies for two common prostate diseases,  prostate cancer (PrCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH), depend  critically on experiments ...

renal-capsule-xenografting-subcutaneous-pellet-implantation-for

Research

JoVE Journal

Medicine

24.9K Aufrufe.  University of Wisconsin-Madison.  Wir beschreiben die Herstellung von Druckhormonpellets sowie subkutane chirurgischen Implantation in Mäuse. Diese Strategie kann mit dem Wachstum von Zellen und Geweben Xenotransplantate unter die Nierenkapsel von Nacktmäusen ohne Thymus hormonelle Regulation der Karzinogenese und der gutartigen Prostatawachstum zu beurteilen kombiniert werden. 

Serie: Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

Evaluation von Nanopartikel-Aufnahme in Tumoren in Echtzeit über Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Forschung

Medizin

Cell Population Analyses During Skin Carcinogenesis

Cancer development is a multiple-step process involving many cell types including cancer precursor cells, immune cells, fibroblasts and endothelial cells. Each type of cells undergoes signaling and functional changes during carcinogenesis. The current challenge for many cancer researchers is to dissect these changes in each cell type during the multiple-step process in vivo. In the last few years, the authors have developed a set of procedures to isolate different cell populations during skin cancer development using K14creER/R26-SmoM2YFP mice. The procedure is divided into 6 parts: 1) generating appropriate mice for the study (K14creER+ and R26-SmoM2YFP+ mice in this protocol); 2) inducing SmoM2YFP expression in mouse skin; 3) preparing mouse skin biopsies; 4) isolating epidermis from skin; 5) preparing single cells from epidermis; 6) labeling single cell populations for flow cytometry analysis. Generation of sufficient number of mice with the right genotype is the limiting step in this protocol, which may take up to two months. The rest of steps take a few hours to a few days. Within this protocol, we also include a section for troubleshooting. Although we focus on skin cancer, this protocol may be modified to apply for other animal models of human diseases.

Carcinogenesis is a process involving interactions between cancer cells and the cancer microenvironment. To dissect the molecular events, one needs to isolate different cell populations at different stages during cancer development. Using a mouse model for basal cell carcinoma, we describe a protocol for cell analyses during carcinogenesis.

Handy Bevölkerung Analysen Während Hautcarcinogenese

Cancer development is  a multiple-step process involving many cell types including cancer precursor  cells, immune cells, fibroblasts and endothelial ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions preclinically. However, valid assessment of pathological alterations often requires histological analysis, and when performed ex vivo, necessitates death of the animal. Therefore in conventional experimental settings, intra-individual follow-up examinations are rarely possible. Thus, development of murine endoscopy in live mice enables investigators for the first time to both directly visualize the gastrointestinal mucosa and also repeat the procedure to monitor for alterations. Numerous applications for in vivo murine endoscopy exist, including studying intestinal inflammation or wound healing, obtaining mucosal biopsies repeatedly, and to locally administer diagnostic or therapeutic agents using miniature injection catheters. Most recently, molecular imaging has extended diagnostic imaging modalities allowing specific detection of distinct target molecules using specific photoprobes. In conclusion, murine endoscopy has emerged as a novel cutting-edge technology for diagnostic experimental in vivo imaging and may significantly impact on preclinical research in various fields.

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Small animal imaging techniques allow serial diagnostic examinations and therapeutic interventions in vivo. Recently, the scope of applications has significantly widened and currently includes assessment of colonic tumor development, wound healing and monitoring of inflammation. This protocol illustrates these diverse potential applications of murine endoscopy.

Murine Endoskopie für<em&gt; In Vivo</em&gt; Multimodale Bildgebung der Krebsentstehung und Bewertung der Darm Wundheilung und Entzündung

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or subvert anti-tumor immune responses in order to survive and flourish. Tumors take advantage of a number of different mechanisms of immune &#8220;escape,&#8221; including the recruitment of tolerogenic DC, immunosuppressive regulatory T cells (Tregs), and myeloid-derived suppressor cells (MDSC) that inhibit cytotoxic anti-tumor responses. Conversely, anti-tumor effector immune cells can slow the growth and expansion of malignancies: immunostimulatory dendritic cells, natural killer cells which harbor innate anti-tumor immunity, and cytotoxic T cells all can participate in tumor suppression. The balance between pro- and anti-tumor leukocytes ultimately determines the behavior and fate of transformed cells; a multitude of human clinical studies have borne this out. Thus, detailed analysis of leukocyte subsets within the tumor microenvironment has become increasingly important. Here, we describe a method for analyzing infiltrating leukocyte subsets present in the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Mouse B16 melanoma tumor cells were inoculated subcutaneously in C57BL/6 mice. At a specified time, tumors and surrounding skin were resected en bloc and processed into single cell suspensions, which were then stained for multi-color flow cytometry. Using a variety of leukocyte subset markers, we were able to compare the relative percentages of infiltrating leukocyte subsets between control and chemerin-expressing tumors. Investigators may use such a tool to study the immune presence in the tumor microenvironment and when combined with traditional caliper size measurements of tumor growth, will potentially allow them to elucidate the impact of changes in immune composition on tumor growth. Such a technique can be applied to any tumor model in which the tumor and its microenvironment can be resected and processed.

This protocol describes a method for the detailed evaluation of leukocyte subsets within the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Chemerin-expressing B16 melanoma cells were implanted subcutaneously into syngeneic mice. Cells from the tumor microenvironment were then stained and analyzed by flow cytometry, allowing for detailed leukocyte subset analyses.

Bewertung der Tumor-infiltrierenden Leukozyten-Untergruppen in einer subkutanen Tumormodell

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine balloon denudation model, which is comparable with established vessel injury models in large animals. The aorta denudation model with balloon catheters mimics the clinical setting and leads to comparable pathobiological and physiological changes. Briefly, after performing a horizontal incision in the aorta abdominalis, a balloon catheter will be inserted into the vessel, inflated, and introduced retrogradely. Inflation of the balloon will lead to intima injury and overdistension of the vessel. After removing the catheter, the aortic incision will be closed with single stiches. The model shown in this article is reproducible, easy to perform, and can be established quickly and reliably. It is especially suitable for evaluating expensive experimental therapeutic agents, which can be applied in an economical fashion. By using different knockout-mouse strains, the impact of different genes on MH development can be assessed.

This article demonstrates a murine model to study the development of myointimal hyperplasia (MH) after aortic balloon injury.

Ballon-basierte Verletzungen induzieren Myointimal Hyperplasie in der Bauchschlagader Maus

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the quality of life. BPH includes 2 major treatments: medication and surgery. Surgical treatment is often the most effective and final intervention. Holmium laser enucleation of the prostate (HoLEP), one of the most efficient surgical procedures for BPH, is conducted transurethrally. During surgery, the most important and most difficult part is to locate the surgical capsule of the prostate, which is consistent to the idea of anatomic surgery. Different skills may be needed in treating different parts of the prostate. HoLEP tends to be efficient and safe with good hemostatic properties, and able to treat bladder calculus, which may be the complications of BPH. The technique is particularly suitable for prostate of varying volumes and sizes. Indeed, HoLEP also presents certain disadvantages, such as a long learning curve and costly equipment. Regardless, this method may be the "new standard" and the excellent method for the surgical treatment of BPH.

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate HoLEP.

Here we present a safe and efficient protocol, holmium laser enucleation of the prostate, to treat benign prostatic hyperplasia.

Chirurgische Behandlung der benignen Prostatahyperplasie: Holmium Laser Enukleation der Prostata (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the ...

Enucleation of the Prostate for the Treatment of Benign Prostatic Hyperplasia Using a 980 nm Diode Laser

In the aging male population, the occurrence of lower urinary tract symptoms (LUTS) caused by benign prostatic hyperplasia (BPH) is a common problem. Here, we introduce a new technique called 980 nm diode laser enucleation (DiLEP) to treat BPH1. Diode lasers can absorb both water and hemoglobin at the same time, so they are good for cutting and hemostasis2. The diode laser was approved by the FDA in 2007, and has been used in the treatment of BPH because of its effective cutting and hemostasis effect3. DiLEP presents several advantages over other techniques, such as TURP, HoLEP, and PVP. During the procedure, we define the boundary of a high-volume prostate and separate it into three lobes with a diode laser by burning two rings and one groove (like a Cupid&#39;s arrow). Compared to other procedures, mDiLEP has fewer intraoperative complications, a shorter learning curve, and achieves more tissue resection.

Here, we present a protocol for modified 980 nm diode laser enucleation to treat large volume benign prostatic hyperplasia.

Enukleation der Prostata zur Behandlung der gutartigen Prostatahyperplasie mit einem 980 nm Diodenlaser

In the aging male population, the occurrence of lower urinary tract symptoms (LUTS) caused by benign prostatic hyperplasia (BPH) is a common problem. ...

Direct Drug Delivery to Kidney via the Renal Artery

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research field. Accumulation of drugs in certain organs may give rise to adverse and unwanted effects, depending on the nature of injectate. To minimize spillover and/or accumulation in other tissues, the herein described method directs the formulation into the renal artery bloodstream by inserting a catheter in the infra renal aorta, just below where it branches into the renal artery, resulting in the kidney as first reached organ and distributing of formulation throughout the kidney.
This manuscript provides a detailed description of the method, as well as its challenges and difficulties. It guides the experimenter to become skillful with this type of microsurgery that requires accuracy under sterile conditions. Speed is crucial for minimizing the ischemia and practicing the procedure will increase the chance of successful injections without adverse effects. By modulating the time between injection and reperfusion as well as the injected volume, the risk of spillover to other organs is mitigated. 
Note that this technique is suitable for single dosing strategies.

This manuscript describes a method for targeted delivery to a single kidney via a catheter placed in the infrarenal abdominal aorta in the mouse.

Direkte Medikamentenabgabe an die Niere über die Nierenarterie

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to detect drug exposure. The rat blood sampling method determines the quality of the plasma and further affects the precision of the test results. The subclavian vein blood collection method described in this protocol collects blood samples repeatedly in the conscious state of animals to meet the needs of PK and TK tests. The skills of restraint handling and appropriate procedure of needle incision ensure the success rate of blood collection. It is easy to operate while ensuring the quality of plasma and at the same time catering to animal welfare. However, this method requires skilled operation, and an improper one may cause animal weakness, pain, lameness, and even mortality. The current method has been used in the testing facility for a 4-week oral toxicity study in Sprague Dawley (SD) rats with TK. The maximum amount of blood collected within 24 h did not exceed 20% of the animal's total blood. The animals' body weight was more than 200 g for males and females. The data showed that the animals' bodyweight increased steadily every week, and the clinical observation was normal after repetitive sample collection.

The present protocol describes a simple and efficient method for collecting blood from the subclavian vein in rats. It enables rapid, timely, and easily identifiable sampling without anesthesia and obtains high-quality blood through repetitive sample collection.

Wiederholte Blutentnahme aus der Vena subclavia einer bewussten Ratte

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...

A Retrograde Implantation Approach for Peritoneal Dialysis Catheter Placement in Mice

Murine models are employed to probe various aspects of peritoneal dialysis (PD), such as peritoneal inflammation and fibrosis. These events drive peritoneal membrane failure in humans, which remains an area of intense investigation due to its profound clinical implications in managing patients with end-stage kidney disease (ESKD). Despite the clinical importance of PD and its related complications, current experimental murine models suffer from key technical challenges that compromise the models&#39; performance. These include PD catheter migration and kinking and usually warrant earlier catheter removal. These limitations also drive the need for a greater number of animals to complete a study. Addressing these drawbacks, this study introduces technical improvements and surgical nuances to prevent commonly observed PD catheter complications in a murine model. Moreover, this modified model is validated by inducing peritoneal inflammation and fibrosis using lipopolysaccharide injections. In essence, this paper describes an improved method to create an experimental model of PD.

This article describes modifications of a procedure to implant a peritoneal dialysis catheter in a murine model to avoid major technical issues observed with the conventional techniques.