Wir danken Katharina Haberland für die Bildbearbeitung. Finanzierung: Der leitende Autor erhielt eine KKF Zuschuss der Technischen Universität München die Einrichtung eines neuen Forschungslabor.

HINWEIS: Vor Durchführung des vorgestellten Modells, müssen die entsprechenden Tierschutzgesetze eingesehen werden und muss eine Genehmigung der örtlichen Behörden erhalten werden. In dieser Arbeit wurden alle Experimente in Übereinstimmung mit den Leitlinien für die Forschung mit Tieren und der deutschen Rechtsvorschriften über den Schutz von Tieren durchgeführt. Die Versuche wurden von der örtlichen Tierpflegekommission genehmigt. 1. Vorbereitung der Tiere und chirurgische Elevation der Klappe <ol style="margin-left: 40px;"><li> Halten Sie Tiere in Einzelkäfigen bei Raumtemperatur von 22-24 ° C und bei einer relativen Luftfeuchtigkeit von 60-65% mit einem 12-Stunden-Tag-und-Nacht-Zyklus. Lassen Mäuse freien Zugang zu Trinkwasser und Standardlaborfutter. Halten Sie immer sterile Bedingungen während Überleben Chirurgie. </li><li> Betäuben die Maus durch intraperitoneale (ip) Injektion von 0,1 ml Salzlösung pro 10 g Körpergewicht, die 90 mg / kg Körpergewicht Ketamin-Hydrochlorid und 25 mg /kg KG dihydroxylidinothiazine Hydrochlorid. Anästhesie ist für die Tier Vorbereitung, Operation und anschließende Mikroskopie notwendig. Überprüfen Sie die Betäubung durch Überprüfung der Reaktion auf einen schmerzhaften Reiz. Während der Zeit der Anästhesie, gelten Tierarzt Salbe auf die Augen, um Trockenheit zu verhindern. </li><li> Nach Einleitung der Narkose ausreichend, enthaaren die Rückseite mit einem elektrischen Rasierer. Hiernach gelten Enthaarungscreme auf die rasierte Fläche, um die restlichen Haare zu entfernen. </li><li> Während Verweilzeit der Enthaarungscreme von ~ 7-10 min, bereiten Instrumente, einschließlich Hautzange und Mikro Zangen, Scheren und Mikro Schere, Nahtmaterial und einem Filzstift. Desinfizieren und bereiten die Titankammer, indem die beiden Schrauben mit der Mutter an der Kammerbasis und durch Befestigen selbstklebenden Schaumstoff (Fig. 1 AC) um das Fenster von der Kammer Gegen Dichtigkeit des Kammersystems zu gewährleisten. </li><li> Entfernen Sie alle Enthaarungscreme von der Rückseite durch Waschenes mit lauwarmem Wasser. Dann trocknen und desinfizieren Sie die Haut mit einer alkoholhaltigen Lösung. </li><li> Platzieren Sie die Maus in Bauchlage und definieren die Mittellinie des Rückens. Fassen Sie die Haut zentral und heben Sie ihn in eine Falte (Abb. 2A) zu erstellen. Durch Transillumination mit jeder Art von Lichtquelle, entscheiden, wo sie provisorisch platzieren Sie den Titanrahmen (Abb. 2B). Stellen Sie sicher, dass die distalen Äste der seitlichen Brustwandarterie (LTA) kranial und der Arteria circumflexa ilium profunda (DCIA) kaudal natürlich durch die Mitte der Fenster der Kammer (Fig. 2B-D). Sobald die Positionierung der Kammer durchgeführt wird, zu perforieren beide Hautschichten ganz am Boden der Falte zur späteren Fixierung der Titanrahmen. Entfernen Sie nun die Titanrahmen, platzieren Sie die Maus in Bauchlage und definieren die Mittellinie des Rückens, wenn nötig. </li><li> Umriss der Klappe senkrecht auf die Wirbelsäule ausgehend von der Mittellinie mit einem Breite-zu-Länge-Verhältnis von 15 x 11 mm in einer seitlich auf und zufällig perfundiert Klappe führen. Dann beschreiben eine zusätzliche Hautfläche von 2 mm erstreckt, um der Gegenseite (Fig. 2C, D). Dieser Bereich ist mit der Pinzette aufgenommen und später an den Titanrahmen vernäht, ohne mit dem Klappenbereich sichtbar. </li><li> Nach der endgültigen Kennzeichnung, einzuschneiden die Klappe. Dabei durchtrennen sowohl das LTA und DCIA und heben die Klappe (Fig. 2E). Es besteht keine Notwendigkeit für die Koagulation oder die Ligation der durchtrennten Gefäße. </li><li> Platzieren der Kammer Schraube durch den zuvor hergestellten Haut Perforationen (Fig. 2F) und fixieren den skinfold sowohl vorne und nach hinten innerhalb des Kammerrahmens des erhöhten Klappe an der Rückseite Teil des Rahmens unter Verwendung der Löcher der Kammerrahmen und einem 5-0 Knopfnähten (Abb. 2G). </li><li> Naht der vertikalen Schenkeln der Klappe zurück in die umgebende Haut mit Hilfe von 5-0 Nähten ( <strong&gt; Abb. 2H, I). </li><li> Zuschneiden eine halbkreisförmige Bereich der Haut seitlich der kleinen Hautstreifen von 2 mm, das heißt, auf der anderen Seite der Klappe, um die Klappe des Gefäßsystems zu beobachten. Dies ermöglicht den direkten Blick durch das Sichtfenster der Kammer, die eine Fläche von 90 mm ​​2 hat. </li><li> Entfernen Sie die gelatineartigen losen Zellgewebe von der quergestreiften Muskulatur mit mikrochirurgischen Instrumenten und optische Lupe oder Mikroskop, um die Bildqualität während der Mikroskopie verbessern. Versuchen Sie nicht für Schiffe innerhalb der muskulären Gewebeschichten beschädigen. </li><li> Schließlich Abdichtung der Kammer durch die Montage des Gegen des Rahmens, der zuvor mit selbsthaftenden Schaumstoffstreifen vorne begabt wurde, kranial und posterior, bedew der Klappe mit topischen Bisbenzimid und Kochsalzlösung (Fig. 2J). Danach gelten die Beobachtungsfenster mit einem Deckglas mit einem Sprengring. Versuchen Sie nicht, alle Luftblasen unter dem Glas einzuschließen (Abb. 2K, L). Die Haut wird auf dem Deckglas durch Adhäsionskräfte haften. </li></ol> 2. Intravital Epifluoreszenzmikroskopie <ol style="margin-left: 40px;"><li> Wartezeit von 24 Stunden nach der chirurgischen Vorbereitung der ersten mikroskopischen Analyse für optimale optische Qualität. Diese Analyse stellt die Grundlinie der Mikroskopie und wird an Tag 3, 5, 7 und 10 nach der Operation wiederholt. Jedes Mal, betäuben die Maus wie in Schritt 1.2 beschrieben. Legen Sie das Tier in einer lateralen Dekubitusposition auf einer maßgeschneiderten Plexiglas Träger. So das Muskelgewebe Schichten der Klappe an der Abdeckung Glas anhaftende Blick up-Stationen. </li><li> Injizieren von 0,05 ml 5% grüne Fluoreszenz Dextran (Molekulargewicht 150.000) und 0,05 ml 1% stark fluoreszierenden Rhodamin-Farbstoff-Familie in eine Schwanzvene oder retrobulbären Venenplexus. Die grün fluoreszierenden Dextran färbt die nicht-zelluläre Bestandteile des Blutes, wenn intravenös angewendet (iv). Das fluoreszierende Rhodamin Flecken Leukozyten und Blutplättchen, die dist sein könnenvon anderen zellulären und nicht-zellulären Komponenten inguished. Schließlich Bisbenzimid färbt Kernkomponenten, die mehr oder weniger Fluoreszenz zu emittieren nach dem Stand der Kondensation. </li><li> Anschließend platzieren Sie die Maus unter dem Mikroskop. Stellen Sie sicher, das Mikroskop enthält eine LED-System - LED-Lichtstrahl-Kombinationen für 470 &amp; 425 nm, 365 &amp; 490 nm und 540 &amp; 580 nm sowie die entsprechenden Filtersätzen (62 HE BFP / GFP / HcRed, Bereich 1: 350 bis 390 nm Anregungswellenlänge, aufgeteilt 395 nm / 402-448 nm; Bereich 2: 460-488 nm, geteilt 495 nm / 500-557 nm; Bereich 3: 567-602 nm, geteilt 610 nm / 615 nm bis unendlich 20 Rhodamin, Bereich. : 540-552 nm, geteilt 560 nm, Emission 575 bis 640 nm). </li><li> Notieren Sie die Standbilder und Motion-Bilder mit einem Charge-Coupled Device Videokamera und speichern Sie sie auf einer Computer-Festplatte für weitere Offline-Analyse. </li><li> Verwenden Sie unterschiedliche Ziele (2.5X, NA (numerische Apertur) = 0,06 für Panoramablick auf die Kammer; 5X,NA = 0,16; 10X, NA = 0,32; 20X, NA = 0,50; 50X, NA = 0,55) für Aufnahmen der Regionen von Interesse. </li><li> Praktisch, teilen die Klappenfläche, die durch das Fenster der Kammer in drei Bereiche von gleicher Höhe, also einen proximalen, einen mittleren und einen distalen Bereich der am weitesten von der Gefäß Zulauf (Fig. 3F) sichtbar ist. Für die Bildaufnahme, gehen auf folgende Weise zu jeder Beobachtungszeit Punkt: <ol><li> Scannen Sie den Gewebe Bild für Bild in das Fenster der Kammer von proximal nach distal mit der 5X Ziel. </li><li> In jedem Bereich der Klappe, wählen zweiter oder dritter Ordnung Arteriolen und die sie begleitenden Venolen mit leicht identifizierbaren Verzweigungsmuster. Mit dem 5X, 10X oder 20X Ziel, stellen Sie Ausdrucke der arteriolovenular Bündel, um einfach wieder zu lokalisieren die Bündel im gesamten Beobachtungszeitraum. </li><li> Mit dem 20x-Objektiv und dem 50X Ziel, weitere Rekord 5-6 Kapillare Felder und &quot;apoptotischen&quot;Felder pro Fläche der Klappe sind. Alle Bilder mit dem 10X und 20X Ziele aufgenommen wurden das blaue Licht (Fluoreszenz Dextran) und grünes Licht (Rhodamin) Filter, während Bilder mit der 5X und 50X objektiven Verwendung blauem Licht (Fluoreszenz Dextran) und Weißlicht (Bisbenzimid) Filter aufgezeichnet, jeweils . </li></ol></li></ol> 3. Analyse der aufgezeichneten Daten HINWEIS: Bei der Verwendung eines computerunterstützten Bildanalysesystems Quantifizierung aller aufgezeichneten Parameter off-line wie folgt 29. <ol style="margin-left: 40px;"><li> Messung der Fläche der nicht-perfundierte bzw. nekrotischen Gewebes (mm 2). <ol><li> Verwenden Sie den vollständigen gescannt Raumfenster Bild mit dem 5X Ziel (von 2.6.1) aufgezeichnet und das fluoreszierende Dextran zu nicht-durchbluteten jeweils nekrotischen Gewebes zu messen. Verwenden Sie &quot;AreaBo&quot; Funktion, um die nicht-durchbluteten dunklen Bereich zu messen: border die nicht-durchbluteten Bereich und berechnen Sie die Fläche in mm 2 unter Verwendung der Software Gebiet Messalgorithmen. </li></ol></li><li> Messung der mikrovaskulären Durchmesser in Arteriolen, Kapillaren und Venolen (um). <ol><li> Last Video oder Bilder aus den aufgezeichneten AV-Bündel oder die kapillaren Felder in die Software. Für beste Ergebnisse verwenden Sie die Standbilder oder Videos mit der höchsten Vergrößerung, wo bestimmte Grenzen des Schiffes sind deutlich sichtbar. </li><li> Mit der Funktion &quot;DiamPe&quot; der Software, um sicherzustellen, werden die Messungen senkrecht zur Wand des Schiffes durchgeführt. Um dies zu tun markieren zwei Punkten auf der Gefässwand und mit dem dritten Klick Marke der senkrechten Durchmesser des Gefäßes. Die Software wird die Messung in &amp; mgr; m auszuführen. </li><li> Wiederholen Sie die Messungen an den gleichen Gefäßen für alle Aufnahmen an der gleichen Stelle. Messung mehrerer Kapillaren mittleren Durchmesser ansammeln. </li></ol></li><li> Analyse von roten Blutzellen (RBC) Geschwindigkeit in Arteriolen, Kapillaren and Venolen (mm / sec). <ol><li> Für arteriolären roten Blutkörperchen (RBC) Geschwindigkeit (mm / s) Messungen mit der &quot;VeloLSD&quot; Funktion der Software, und wählen Sie die gleichen Schiffe in der fluoreszierenden Dextran Fenster, für das die Durchmesser gemessen worden. </li><li> Analysieren mit dem computerunterstützten Bildanalysesystems unter Verwendung der Zeilenverschiebungsverfahren, die auf der Grundlage der Messung der Verschiebung (mm) einer einzelnen intravaskulären Graustufenmuster über der Zeit (sec) ist. </li></ol></li><li> Messung der volumetrischen Blutströmung in Gefßen (pl / sec). <ol><li> Volumetrischen Blutströmung (pl / sec) in den Arteriolen, Kapillaren und Venolen von RBC Geschwindigkeit und Gefäßquerschnittsfläche zu berechnen (π * r 2) entsprechend der Gleichung von Gross und Aroesty, dh Q = V * π * r 2 unter Annahme einer zylindrischen Behälterform 30. </li></ol></li><li> Messung der funktionellen Kapillardichte der RBC-perfundierten Kapillaren (nutritive Perfusion: cm / cm <sup&gt; 2). <ol><li> Legen Sie eine bespielte Fluoreszenz Kapillare Feld mit 20X Objektivvergrößerung in die Software. Mit der Funktion &quot;DensLA&quot; funktionelle Kapillardichte der RBC-perfundierten Mikrogefäße zu messen. </li><li> Verfolgen Sie die perfundierten Kapillaren mit dem Cursor und markieren die durchblutete Gefäße. Markieren Sie nicht nicht-durchbluteten Kapillaren, Arteriolen oder Venolen. Die Software wird funktionelle Kapillardichte der perfundierten Kapillaren in cm / cm 2 zu messen. Wiederholen Sie die Schritte für die anderen aufgenommenen Kapillare Felder. </li></ol></li><li> Messung der Verwindung der Mikrogefäße (mikrovaskuläre Remodeling), frühe Anzeichen von Angiogenese wie Knospe und Sprossbildung und neu gebildeten Mikrogefäßen. <ol><li> Last aufgenommenen Videos oder Rahmen aus fluoreszierenden Kapillare Felder in die Software. Identifizieren gyrose Gefäße und die Funktion &quot;TorqIx&quot; der Software. Verfolgen Sie die definitive Gefäßfluss mit dem Verlauf und enden mit einem Rechtsklick. Die Software wirdeine gerade Linie für den direkten Weg und wird es im Zusammenhang mit der zurückverfolgt Weg zu bringen. HINWEIS: Achten Sie auf Anzeichen von Angiogenese wie Knospen, Sprossen und neu gebildete Kapillaren, die in der Regel senkrecht von den bereits bestehenden Kapillaren ausgehen. Messung der Dichte der neu gebildeten Gefäße, wie in Schritt 3.5 beschrieben. </li></ol></li><li> Identifizierung der Merkmale für den apoptotischen Zelltod, wie beispielsweise Kernkondensation, Fragmentierung und / oder margination (Zellen / mm 2). <ol><li> Legen Bisbenzimid aufgenommene Videos (50X Objektiv) in die Software. Mit der Funktion &quot;DenseNA&quot;. Markieren apoptotischen Zellen nach den genannten Eigenschaften wie Kernkondensation, Fragmentierung und Margination mit einem Linksklick. </li><li> Nach Markieren aller charakteristischen Zellen im ganzen Video, klicken Sie auf &quot;N / A&quot; in der Software, die automatisch zu zählen alle markierten Zellen und teilen sie in der gesamten Region. Das Ergebnis wird sein, apoptotischeZellen / mm 2. </li></ol></li><li> Analyse der Leukozytenadhäsion an das vaskuläre Endothel, welche Entzündungen. Intermittent Adhärenz von Leukozyten (Roll Leukozyten; Einhaltung &lt;30 sec: Anzahl der Rollen / mm 2 Endotheloberfläche) und feste Anhaftung von Leukozyten (kleben Leukozyten; Einhaltung&gt; 30 sec: Anzahl der Aufkleber / mm 2 Endotheloberfläche). <ol><li> Analysieren die entzündliche Reaktion durch Zählen der Anzahl von Rhodamin markierten Leukozyten, die die endotheliale Auskleidung der post-kapillaren Venolen für eine Zeitspanne von ≥30 sec (&quot;Sticker&quot;) entsprechen und die intermittierenden anhaftenden Leukozyten (&lt;30 sec, &quot;Walzen&quot;) . Venulären Leukozytenadhärenz als Zellen pro mm 2 endotheliale Oberfläche angegeben. </li></ol></li><li> Messung der intravaskulären und Zwischengraustufen als Parameter für die mikrovaskulären Leckage (makromolekulare Extravasation E = E1 / E2). <ol><li> Beurteilen makromolekularen leakage als Parameter der mikrovaskulären Durchlässigkeit nach einer iv Injektion eines fluoreszierenden Dextran. Densitometrisch ermitteln mehreren Graustufen in das Gewebe unmittelbar benachbart zur Kapillare Gefäßwand (E1) sowie in der Randzellfreien Plasmas der Behälter (E2). Dann berechnen makromolekulare Extravasation (E) als das Verhältnis E1 / E2 31. </li></ol></li></ol> 4. Postoperative Pflege <ol style="margin-left: 40px;"><li> Bringen Sie das Tier in einem separaten Käfig, um das Unternehmen von anderen Tieren zu vermeiden, bis vollständig erholt. Sie ein Tier nicht unbeaufsichtigt lassen, bis es ausreichend das Bewusstsein wiedererlangt, um Brustlage zu halten. Überwachung Tiere täglich für Blutungen, lokale und systemische Infektionszeichen und die Lage der Kammer. </li><li> Werten Sie den allgemeinen Zustand des Tieres durch die Beobachtung der motorischen Aktivität, Körpergewicht, Anzeichen von Schmerzen, Toleranz gegenüber dem Verband und auto-Verstümmelung. </li><li> Halten Sie den Mäusen eine pro Käfig Mutu vermeidenal Manipulation der Kammer. Bei Anzeichen von Schmerzen, gelten Buprenorphin in einer Dosis von 0,05 bis 0,1 mg / kg KG, subkutan in 8 Stunden Intervallen. </li></ol> 5. Euthanasie und Explantation des Hautkammer <ol style="margin-left: 40px;"><li> Am Tag 10, opfern Tiere mit einer Überdosis eines Narkose Droge (150 mg / kg Pentobarbital). </li><li> Entfernen Sie die Kammer und probieren Sie die Klappe Gewebe zur immunhistochemischen und molekular Protein-Assays. Gewebeproben für die konventionelle Histologie (Formalin) und quantifizierbare Proteinassays (flüssiger Stickstoff oder Trockeneis). </li></ol>

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	<li>McFarlane, R., De Young, G., Henry, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+design+of+a+pedicle+flap+in+the+rat+to+study+necrosis+and+its+prevention.">The design of a pedicle flap in the rat to study necrosis and its prevention.</a> Plast Reconstr Surg. 35, 177-182 (1965).</li><li>Finseth, F., Cutting, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+neurovascular+island+skin+flap+for+the+study+of+the+delay+phenomenon.">An experimental neurovascular island skin flap for the study of the delay phenomenon.</a> Plast Reconstr Surg. 61, 412-420 (1978).</li><li>Petry, J. J., Wortham, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anatomy+of+the+epigastric+flap+in+the+experimental+rat.">The anatomy of the epigastric flap in the experimental rat.</a> Plast Reconstr Surg. 74, 410-413 (1984).</li><li>Achauer, B. M., Black, K. S., Litke, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcutaneous+PO2+in+flaps:+a+new+method+of+survival+prediction.">Transcutaneous PO2 in flaps: a new method of survival prediction.</a> Plast Reconstr Surg. 65, 45-45 (1980).</li><li>Vollmar, B., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+microvascular+oxygen+supply+and+tissue+oxygenation+in+hepatic+ischemia/reperfusion.">Assessment of microvascular oxygen supply and tissue oxygenation in hepatic ischemia/reperfusion.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 428, 403-408 (1997).</li><li>Menger, M. D., Barker, J. H., Messmer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+blood+perfusion+during+postischemic+reperfusion+in+striated+muscle.">Capillary blood perfusion during postischemic reperfusion in striated muscle.</a> Plast Reconstr Surg. 89, 1104-1114 (1992).</li><li>Uhl, E., R&#246;sken, F., Curri, S. B., Menger, M. D., Messmer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+skin+flap+necrosis+by+transdermal+application+of+buflomedil+bound+to+liposomes.">Reduction of skin flap necrosis by transdermal application of buflomedil bound to liposomes.</a> Plast Reconstr Surg. 102, 1598-1604 (1998).</li><li>Pang, C. Y., Neligan, P., Nakatsuka, T., Sasaki, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+the+fluorescein+dye+test+for+prediction+of+skin+flap+viability+in+pigs.">Assessment of the fluorescein dye test for prediction of skin flap viability in pigs.</a> J Surg Res. 41, 173-181 (1986).</li><li>Hjortdal, V. E., Hansen, E. S., Henriksen, T. B., Kjolseth, D., Soballe, K., Djurhuus, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microcirculation+of+myocutaneous+island+flaps+in+pigs+studied+with+radioactive+blood+volume+tracers+and+microspheres+of+different+sizes.">The microcirculation of myocutaneous island flaps in pigs studied with radioactive blood volume tracers and microspheres of different sizes.</a> Plast Reconstr Surg. 89, 116-122 (1992).</li><li>Pang, C. Y., Neligan, P., Nakatsuka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+microsphere+technique+for+measurement+of+capillary+blood+flow+in+random+skin+flaps+in+pigs.">Assessment of microsphere technique for measurement of capillary blood flow in random skin flaps in pigs.</a> Plast Reconstr Surg. 74, 513-521 (1984).</li><li>Sandison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+the+microscopic+study+of+living+growing+tissues+by+the+introduction+of+a+transparent+chamber+in+the+rabbit's+ear.">A new method for the microscopic study of living growing tissues by the introduction of a transparent chamber in the rabbit's ear.</a> The Anatomical Record. 28, 281-287 (1924).</li><li>Algire, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Adaptation+of+the+Transparent-Chamber+Technique+to+the+Mouse.">An Adaptation of the Transparent-Chamber Technique to the Mouse.</a> Journal of the National Cancer Institute. 4, 1-11 (1943).</li><li>Lehr, H. A., Leunig, M., Menger, M. D., Nolte, D., Messmer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+skinfold+chamber+technique+for+intravital+microscopy+in+nude+mice.">Dorsal skinfold chamber technique for intravital microscopy in nude mice.</a> Am J Pathol. 4, 1055-1062 (1993).</li><li>Barker, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+animal+model+to+study+microcirculatory+changes+associated+with+vascular+delay.">An animal model to study microcirculatory changes associated with vascular delay.</a> Br J Plast Surg. 52, 133-142 (1999).</li><li>Erni, D., Sakai, H., Banic, A., Tschopp, H. M., Intaglietta, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+microhemodynamics+in+ischemic+skin+flap+tissue+by+intravital+microscopy.">Quantitative assessment of microhemodynamics in ischemic skin flap tissue by intravital microscopy.</a> Ann Plast Surg. 43, 405-414 (1999).</li><li>Roesken, F., Sch&#228;fer, T., Spitzer, W. J., Vollmar, B., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+the+microcirculation+of+osteomyocutaneous+flaps+using+fluorescence+microscopy.">In vivo analysis of the microcirculation of osteomyocutaneous flaps using fluorescence microscopy.</a> Br J Plast Surg. 52, 644-652 (1999).</li><li>Harder, Y., Amon, M., Erni, D., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+ischemic+tissue+injury+in+a+random+pattern+flap:+a+new+mouse+model+using+intravital+microscopy.">Evolution of ischemic tissue injury in a random pattern flap: a new mouse model using intravital microscopy.</a> J Surg Res. 121, 197-205 (2004).</li><li>Harder, Y., Contaldo, C., Klenk, J., Banic, A., Jakob, S. M., Erni, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preconditioning+with+monophosphoryl+lipid+A+improves+survival+of+critically+ischemic+tissue.">Preconditioning with monophosphoryl lipid A improves survival of critically ischemic tissue.</a> Anesth Analg. 100, 1786-1792 (2005).</li><li>Rezaeian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoieton+protects+critically+perfused+flap+tissue.">Erythropoieton protects critically perfused flap tissue.</a> Ann Surg. 248, 919-929 (2008).</li><li>Harder, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+reduces+necrosis+in+critically+ischemic+myocutaneous+tissue+by+protecting+nutritive+perfusion+in+a+dose-dependent+manner.">Erythropoietin reduces necrosis in critically ischemic myocutaneous tissue by protecting nutritive perfusion in a dose-dependent manner.</a> Surgery. 145, 10-1016 (2009).</li><li>Rezaeian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin-induced+upregulation+of+endothelial+nitric+oxide+synthase+but+not+vascular+endothelial+growth+factor+prevents+musculocutaneous+tissue+from+ischemic+damage.">Erythropoietin-induced upregulation of endothelial nitric oxide synthase but not vascular endothelial growth factor prevents musculocutaneous tissue from ischemic damage.</a> Lab Invest. 90, 40-51 (2010).</li><li>Rezaeian, F., Ong, M. F., Harder, Y., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-acetylcysteine+attenuates+leukocytic+inflammation+and+microvascular+perfusion+failure+in+critically+ischemic+random+pattern+flaps.">N-acetylcysteine attenuates leukocytic inflammation and microvascular perfusion failure in critically ischemic random pattern flaps.</a> Microvasc Res. 82, 28-34 (2011).</li><li>Rezaeian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ghrelin+protects+musculocutaneous+tissue+from+ischemic+necrosis+by+improving+microvascular+perfusion.">Ghrelin protects musculocutaneous tissue from ischemic necrosis by improving microvascular perfusion.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 302, 603-610 (2012).</li><li>Rezaeian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+preconditioning+with+Erythropoietin+reduces+ischemia-induced+skin+necrosis.">Long-term preconditioning with Erythropoietin reduces ischemia-induced skin necrosis.</a> Microcirculation. , (2013).</li><li>Harder, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+preconditioning+reduces+ischemic+tissue+necrosis+by+heat+shock+protein+(HSP)-32-mediated+improvement+of+the+microcirculation+rather+than+induction+of+ischemic+tolerance.">Heat shock preconditioning reduces ischemic tissue necrosis by heat shock protein (HSP)-32-mediated improvement of the microcirculation rather than induction of ischemic tolerance.</a> Ann Surg. 242, 869-878 (2005).</li><li>Tobalem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+shockwave-induced+capillary+recruitment+improves+survival+of+musculocutaneous+flaps.">Local shockwave-induced capillary recruitment improves survival of musculocutaneous flaps.</a> J Surg Res. 184, 1196-1204 (2013).</li><li>Lindenblatt, N., Calcagni, M., Contaldo, C., Menger, M. D., Giovanoli, P., Vollmar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+for+studying+the+revascularization+of+skin+grafts+in+vivo:+the+role+of+angiogenesis.">A new model for studying the revascularization of skin grafts in vivo: the role of angiogenesis.</a> Plast Reconstr Surg. 122, 169-1680 (2008).</li><li>Schweizer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+hemodynamics+during+vascular+regeneration+in+critically+ischemic+murine+skin+studied+by+intravital+microscopy+techniques.">Morphology and hemodynamics during vascular regeneration in critically ischemic murine skin studied by intravital microscopy techniques.</a> Eur Surg Res. 47, 222-230 (2011).</li><li>Klyscz, T., J&#252;nger, M., Jung, F., Zeintl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cap+image&#8212;a+new+kind+of+computer-assisted+video+image+analysis+system+for+dynamic+capillary+microscopy.">Cap image&#8212;a new kind of computer-assisted video image analysis system for dynamic capillary microscopy.</a> Biomed. Tech. 42, 168-1675 (1997).</li><li>Gross, J. F., Aroesty, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mathematical+models+of+capillary+flow:+a+critical+review.">Mathematical models of capillary flow: a critical review.</a> Biorheology. 9, 225-264 (1972).</li><li>Menger, M. D., Pelikan, S., Steiner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+ischemiareperfusion+injury+in+striated+muscle:+significance+of+&#8216;reflow+paradox.">Microvascular ischemiareperfusion injury in striated muscle: significance of &#8216;reflow paradox.</a> Am J Physiol. 263 (6 part 2), 1901-1906 (1992).</li></ol>

Um ischämischen Komplikationen zu verringern und dadurch die Verbesserung der klinischen Ergebnisse wird genauere Kenntnis der pathophysiologischen Prozesse bei kritisch durchbluteten Gewebeklappe erforderlich. Die Entwicklung neuer Tiermodelle, die akute persistent Ischämie imitieren ist daher zwingend. Dementsprechend konnten wir eine leicht reproduzierbare und zuverlässige Modell erlaubt für sich wiederholende morphologischen, dynamische und funktionale Echtzeit-Auswertung der verschiedenen Parameter des Muskel- ...

Abdeckung der freiliegenden Sehnen, Knochen und Implantatmaterial in der rekonstruktiven Chirurgie beruht auf der Verwendung von Klappen. Eine Klappe ist ein Block von Gewebe, das an seiner Gefäßstiel, der arteriellen Zustroms und eines venösen Abflusses garantiert übertragen wird. Trotz breiten Know-how und die Verfügbarkeit von einer Vielzahl von Klappen zu übertragen ist, werden Ischämie-induzierten Komplikationen reichen von Wund Aufschlüsselung der Gesamtgewebeverlust noch angetroffen. Während konservative Behandlung und Heilung durch sekundäre Absicht kann nach kleineren Gewebsnekrose erwarten, signifikante Lappennekrose erfordert in der Regel chirurgische Revision, einschließlich Debridement, Wundanlage und sekundäre Rekonstruktion. Dies erhöht die Morbidität, verlängert Krankenhausaufenthalt und damit zu erhöhten Kosten im Gesundheitswesen. Klappen mit einem undefinierten Muster Vaskulatur oder zufällig perfundiert Bereiche in dem distalen Bereich der am weitesten von der arteriellen Zustrom sind besonders anfällig für ischämische Schädigung. Acco<html> rdingly wurden zahlreiche experimentelle und klinische Studien, die Entwicklung der Nekrose sowohl ausgewertet, axialen Musterklappen (definiert Blutversorgung) und Zufallsmuster Klappen (undefined Blutversorgung) 1-3. Die wichtigsten Ergebnisse sind häufig auf makroskopische Auswertung der Größe des nekrotischen Bereich basiert. Um die Ursachen und Mechanismen der Gewebenekrose beurteilen näher konzentrierte mehrere Studien auf der Analyse der Mikrozirkulation. Verschiedene Techniken wurden eingesetzt, um die Gewebedurchblutung zu messen, einschließlich der Analyse von Gewebesauerstoffspannung mit polarographischen Elektroden 4-5, sowie die Messung der Blutströmung unter Verwendung der Laser-Doppler-Flussmessung 6-7, Farbstoffdiffusions 8 und 9-10 Mikrokügelchen. Diese Techniken sind jedoch nur für Mess indirekte Parameter der Gewebedurchblutung zu ermöglichen und keine morphologischen Analyse der microhemodynamic Prozesse innerhalb eines einzelnen interessierenden Bereich einer Klappe zu ermöglichen. t &quot;&gt; Sandison ist bekannt, dass der erste, der eine transparente Kammer eingesetzt hat für die in vivo Studien, die er bei Kaninchen 11 geführt verlängert sein 1943 -. etwa 20 Jahre später - Algire war der erste, wie eine transparente Kammer anzupassen anwendbar zu sein bei Mäusen, um das Verhalten von Mikroimplantate von Tumorzellen 12 zu studieren. Aufgrund der Tatsache, dass Mäuse sind so genannte lose Haut Tieren und nach einigen technischen Raffinessen in den folgenden Jahren waren Lehr und Mitarbeiter in der Lage, sich anzupassen wie eine Rückenhautkammer der Entwicklung eines kleineren und leichteren Titankammer. Diese Kammer aktiviert Auswertung mittels Intravitalfluoreszenzmikroskopie, eine Technik, die direkten und wiederholenden Darstellung von einer Reihe von morphologischen und Mikrozirkulationsmerkmale und deren Veränderungen im Laufe der Zeit unter verschiedenen physiologischen und pathophysiologischen Bedingungen ermöglicht, wie Ischämie-Reperfusionsschaden 13. Bei der Untersuchung von PErfusion von Haut, Muskeln und Knochen Klappen unter normalen und pathologischen Bedingungen zwei Trends aufgetreten: Erstens, die &quot;akut&quot; Klappe Modelle, die nicht die Rückenhautkammer verwenden wie die gestielten Ohrenklappe in der Maus 14, die seitlich auf der Basis Insel Hautlappen im Hamster 15 und der Verbund gestielten Lappen bei der Ratte 16. Zweitens, die &quot;chronische&quot; Klappe Modell, bei dem die Kombination von einer Klappe mit einer Rückenhautkammer erlaubt wiederholende Mikrozirkulation über mehrere Tage mit Intravitalfluoreszenzmikroskopie analysiert. Es besteht aus einem zufällig perfundiert muskulokutanen Klappe, die in der Hautkammer der Maus 17 integriert ist. Seine Breite-zu-Länge-Verhältnis wurde gewählt, dass eine Situation der akuten persistent Ischämie führt durchweg in ~ 50% Klappen Gewebsnekrose 10 bis 14 Tage nach Lappenhebung. Diese reproduzierbare Ausmaß der Gewebsnekrose ermöglicht die weitere Auswertung der beiden, Schutz (dh Entwicklung less Nekrose) und schädlichen Faktoren (dh Entwicklung von mehr Nekrose) auf der Klappe Pathophysiologie. In den letzten Jahren wurden mehrere experimentelle Publikationen, die die Wirkung von verschiedenen prä-, peri- und postKonditionierungsVerfahren, einschließlich der Verabreichung von Tissue-Schutzsubstanzen 18-24 und der lokalen Anwendung der physiologischen Stressfaktoren wie Wärmeschockwellen 25 und 26, entstanden. Die quantitativen Analysen der Nekrose, mikrovaskulären Morphologie und Mikrozirkulationsparameter kann weiter auf immunhistochemischen Analysen und Protein-Assays korreliert werden. Verschiedene Proteine ​​und Moleküle, einschließlich vaskulärer endothelialer Wachstumsfaktor (VEGF), Stickstoffmonoxid-Synthasen (NOS), Nuklearfaktor kappa B (NF-kB), und Hitzeschockproteinen (HSP-32: Häm-Oxygenase-1 (HO-1) und HSP- 70) haben gezeigt, dass eine Rolle bei der Gewebeschutz spielen. Auf der Grundlage dieser Kammer Klappe Modell wurden zwei Modifikationen in orde entwickeltr zu Neovaskularisation und Mikrozirkulation während Hauttransplantation Heilung 27 und angiogene Entwicklungen in einem gestielten Klappe mit axialen Muster Perfusion 28 zu analysieren. Wir präsentieren eine reproduzierbare und zuverlässige Modell, das eine ischämisch fochten musculocutaneus Klappe in der Maus Hautkammer enthält. Dieses Modell ermöglicht die Visualisierung und Quantifizierung der Mikrozirkulation und die Hämodynamik durch Intravital Auflicht-Fluoreszenz-Mikroskopie.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1611">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;"><a name="RANGE!A1:D55">Name of Reagent/ Equipment</a></td>
			<td style="width:244px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:931px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">C57Bl/6 mice 6-8w 20-22g</td>
			<td style="width:244px;">Charles River</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">depilation cream</td>
			<td style="width:244px;">Veet</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>any depilation cream</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">titanium chamber</td>
			<td style="width:244px;">Irola</td>
			<td align="right" style="width:119px;">160001</td>
			<td>Halteblech M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">slotted cheese head screw</td>
			<td style="width:244px;">Screws and More</td>
			<td align="right">842210</td>
			<td>DIN84 M2x10</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">hexagon full nut</td>
			<td style="width:244px;">Screws and More</td>
			<td align="right">93422</td>
			<td>DIN934 M2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">snap ring</td>
			<td style="width:244px;">Schaefer-Peters</td>
			<td align="right">472212</td>
			<td>DIN472 J12x1,0</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">cover glass</td>
			<td style="width:244px;">Volab</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>custom-made cover glass 11,8mm in diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">fixing foam</td>
			<td style="width:244px;">tesamoll</td>
			<td>05559-100</td>
			<td>tesamoll Standard I-Profile</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">ketamine hydrochloride</td>
			<td style="width:244px;">Parke Davis</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Ketavet&#174;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">dihydroxylidinothiazine hydrochloride</td>
			<td style="width:244px;">Bayer</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Rompun&#174;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Buprenorphin</td>
			<td style="width:244px;">Essex Pharma</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Temgesic&#174;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Saline 0,9%</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">desinfection alcohol</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Vicryl 5-0</td>
			<td style="width:244px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;">V 490 H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Ethilon 5-0</td>
			<td style="width:244px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;">EH 7823 H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">1ml syringes</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">surgical skin marker with flexible ruler</td>
			<td style="width:244px;">Purple surgical</td>
			<td>PS3151</td>
			<td>any surgical skin marker and flexible ruler</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">pointed scissors</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Micro-Scissors</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">normal scissors</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">2 clamps</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">fine anatomic forceps</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">micro-forceps</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">hex nuter driver</td>
			<td style="width:244px;">wiha</td>
			<td>1018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">screwdriver</td>
			<td style="width:244px;">wiha</td>
			<td style="width:119px;">685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">snap ring plier</td>
			<td style="width:244px;">Knipex</td>
			<td style="width:119px;">4411J1</td>
			<td>12-25mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">wire cutter</td>
			<td style="width:244px;">Knipex</td>
			<td style="width:119px;">70 02 160</td>
			<td>Wire cutter is used to cut screws short; 160mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">trans-illumination light</td>
			<td style="width:244px;">IKEA</td>
			<td>501.632.02</td>
			<td>LED light Jansj&#246;; any light&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">magnification glasses</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">intravital microscope</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>490035-0001-000</td>
			<td>Scope.A1.Axiotech</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">LED system</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>423052-9501-000</td>
			<td>Colibri.2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">LED module 365nm</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>423052-9011-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">LED module 470nm</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>423052-9052-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">LED module 540-580nm</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>423052-9121-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Filter set 62 62 HE BFP + GFP + HcRed</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>489062-9901-000</td>
			<td>range 1: 350-390nm excitation wavelength split 395 / 402-448nm; range 2: 460-488nm, split 495nm / 500-557nm; range 3: 567-602nm, split 610nm / 615-infinite</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Filter set 20 Rhodamine</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>485020-0000-000</td>
			<td>540-552nm, split 560, emission 575-640nm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">2,5x objective NA=0,06</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>421020-9900-000</td>
			<td>A-Plan 2,5x/0.06</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">5x objective NA=0,16</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>420330-9901-000</td>
			<td>EC Plan-Neofluar 5x/0.16 M27</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">10x objetive NA=0,30</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>420340-9901-000</td>
			<td>EC Plan-Neofluar 10x/0.30 M27</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">20x objective NA=0.50</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>420350-9900-000</td>
			<td>EC Plan-Neofluar 20x/0.50 M27</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">50x objective NA=0,55</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>422472-9960-000</td>
			<td>LD Epiplan-Neofluar 50x/0.55 DIC 27</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">ZEN imaging software</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>ZenPro 2012</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">CapImage</td>
			<td style="width:244px;">Dr. Zeintl</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Fluorescein isothiocyanate-dextran</td>
			<td style="width:244px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">45946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">bisBenzimide H 33342 trihydrochloride</td>
			<td style="width:244px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">B2261</td>
			<td>harmful if swallowed; causes severe skin burns and eye damage, may cause repiratory irritat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Rhodamine 6G chloride</td>
			<td style="width:244px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">R634</td>
			<td>harmful if swallowed; may cause genetic defects; may cause cancer; may damage fertility or the unborn child</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:319px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Pentobarbital</td>
			<td style="width:244px;">Merial</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Narcoren&#174;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ischemic tissue injury in the dorsal skinfold chamber of the mouse: a skin flap model to investigate acute persistent ischemia

Trotz tiefen Erfahrung und die moderne Operationstechniken werden Ischämie-induzierten Komplikationen reichen von Wund Aufschlüsselung umfangreiche Gewebsnekrose noch auftritt, vor allem in der rekonstruktiven Klappenchirurgie. Mehrere experimentelle Klappenmodelle wurden entwickelt, um die Ursachen und Mechanismen zu analysieren und Behandlungsstrategien zu untersuchen, um ischämische Komplikationen zu verhindern. Der limitierende Faktor der meisten Modelle ist die fehlende Möglichkeit, mikrovaskuläre Architektur und Hämodynamik direkt und wiederholt zu visualisieren. Das Ziel des Protokolls war es, ein gut etabliertes Mausmodell Gunter diese bereits erwähnt fehlt Elemente präsentieren. Härtere et al. Haben ein Modell eines musculocutaneus Klappe mit einem zufälligen Perfusion Muster, das akute persistent Ischämie und Ergebnisse in ~ 50% Nekrose nach 10 Tagen, wenn unbehandelt gehalten erfährt entwickelt. Mit Hilfe der intravital Epifluoreszenzmikroskopie ermöglicht dieses Modell Kammer wiederholende VisualisierungMorphologie und Hämodynamik in verschiedenen Regionen von Interesse über die Zeit. Verbundenen Prozesse wie Apoptose, Entzündung und Angiogenese mikrovaskulären Leckage untersucht und immunhistochemische und molekular Protein-Assays korreliert werden. Bis heute hat das Modell Durchführbarkeit und Reproduzierbarkeit in mehreren veröffentlichten experimentellen Studien zur Untersuchung der Wirkung von prä-, peri- und Postkonditionierung ischämisch fochten Gewebe bewährt.

Nekrose Der Hauptendpunkt dieses Modells - Gewebsnekrose folgenden Lappen (dh Induktion der akuten persistent Ischämie) - wiederholt gemessen und makroskopisch wie in Abbildung 3 über einen Zeitraum von 10 Tagen gezeigt dargestellt. Endgültige Festlegung Lappennekrose tritt in der Regel zwischen 5 und 7 Tage nach der Operation und wird durch einen roten Fransen, dh Zone Vasodilatation und mikrovaskuläre Remodeling gekennzeichnet, die si...

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Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Das Fenster des murinen Rückenhautkammer dargestellt visualisiert eine Zone von akuter Ischämie persistent eines muskulokutanen Klappe. Intravital Epifluoreszenzmikroskopie Genehmigungen für direkte und wiederholte Bewertung der Mikrogefäß und Quantifizierung der Hämodynamik. Morphologische und hämodynamische Ergebnisse kann weiter mit histologischen und molekularen Analysen korreliert werden.

Ischämischen Gewebeschädigung des Rückenhautkammer der Maus: Ein Hautlappen Modell zu Akute Persistent Ischämie Untersuchen

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

16.6K Aufrufe.  Technische Universität München.  Das Fenster des murinen Rückenhautkammer dargestellt visualisiert eine Zone von akuter Ischämie persistent eines muskulokutanen Klappe. Intravital Epifluoreszenzmikroskopie Genehmigungen für direkte und wiederholte Bewertung der Mikrogefäß und Quantifizierung der Hämodynamik. Morphologische und hämodynamische Ergebnisse kann weiter mit histologischen und molekularen Analysen korreliert werden. 

Serie: Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite tissue. Ischemia reperfusion injury (IRI) is a known cause of partial free flap failure and has no effective treatment. Establishing a laboratory model of this injury can prove costly both financially as larger mammals are conventionally used and in the expertise required by the technical difficulty of these procedures typically requires employing an experienced microsurgeon. This publication and video demonstrate the effective use of a model of IRI in rats which does not require microsurgical expertise. This procedure is an in situ model of a transverse abdominis myocutaneous (TRAM) flap where atraumatic clamps are utilized to reproduce the ischemia-reperfusion injury associated with this surgery. A laser Doppler Imaging (LDI) scanner is employed to assess flap perfusion and the image processing software, Image J to assess percentage area skin survival as a primary outcome measure of injury.

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

Free tissue transfer is widely employed in reconstructive surgery to restore form and function following oncological resection and trauma. Preconditioning this tissue prior to surgery may improve outcome. This article describes an in situ transverse rectus abdominis myocutaneous flap (TRAM) in rats as a means for testing preconditioning strategies.

In situ Quer Bauchmuskel myokutane Flap: Eine Ratte Modell myokutane Ischämie Reperfusion Injury

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite ...

Forschung

Medizin

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

Ischämie-Reperfusion-Modell des akuten Nierenschädigung und nach der Verletzung Fibrose bei Mäusen

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

Einem Mausmodell der myokardialen Ischämie-Reperfusion Injury durch Ligation des linken vorderen absteigenden Arterie

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and unrelieved pressure due to immobility. Animal models have been developed that attempt to mimic these conditions for the purpose of furthering our understanding of the complexity of chronic wounds. The model described herein is a rat ischemic skin flap model that permits a prolonged reduction of blood flow resulting in wounds that become ischemic and resemble a chronic wound phenotype (reduced vascularization, increased inflammation and delayed wound closure). It consists of a bipedicled dorsal flap with 2 ischemic wounds placed centrally and 2 non-ischemic wounds lateral to the flap as controls. A novel addition to this ischemic skin flap model is the placement of a silicone sheet beneath the flap that functions as a barrier and a splint to prevent revascularization and reduce contraction as the wounds heal. Despite the debate of using rats for wound healing studies due to their quite distinct anatomic and physiologic differences compared to humans (i.e., the presence of a panniculus carnosus muscle, short life-span, increased number of hair follicles, and their ability to heal infected wounds) the modifications employed in this model make it a valuable alternative to previously developed ischemic skin flap models.

The rat, due to its size, availability, and rather docile behavior, has been utilized as a research model for many years. The goal of this protocol is to utilize the rat as an ischemic skin wound healing model to provide valuable insight into the pathophysiology of chronic wounds.

Demonstration der Ratte ischämische Hautwunde Modell

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

Diffuse Optical Spectroscopy for the Quantitative Assessment of Acute Ionizing Radiation Induced Skin Toxicity Using a Mouse Model

Acute skin toxicities from ionizing radiation (IR) are a common side effect from therapeutic courses of external beam radiation therapy (RT) and negatively impact patient quality of life and long term survival. Advances in the understanding of the biological pathways associated with normal tissue toxicities have allowed for the development of interventional drugs, however, current response studies are limited by a lack of quantitative metrics for assessing the severity of skin reactions. Here we present a diffuse optical spectroscopic (DOS) approach that provides quantitative optical biomarkers of skin response to radiation. We describe the instrumentation design of the DOS system as well as the inversion algorithm for extracting the optical parameters. Finally, to demonstrate clinical utility, we present representative data from a pre-clinical mouse model of radiation induced erythema and compare the results with a commonly employed visual scoring. The described DOS method offers an objective, high through-put evaluation of skin toxicity via functional response that is translatable to the clinical setting.

We present a diffuse optical spectroscopic (DOS) approach that provides quantitative optical biomarkers of skin response to radiation. We describe DOS instrumentation design, optical parameters extraction algorithms and the animal handling procedures required to yield representative data from a pre-clinical mouse model of radiation induced erythema.

Diffuse Optische Spektroskopie zur quantitativen Beurteilung Akute ionisierender Strahlung induzierte Hauttoxizität Mit einem Maus-Modell

Acute skin toxicities from ionizing radiation (IR) are a common side effect from therapeutic courses of external beam radiation therapy (RT) and ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute respiratory distress syndrome (ARDS), characterized by neutrophilic alveolitis, and injury to both alveolar epithelium and vascular endothelium. Clinically, ARDS is defined by acute onset of hypoxemia, bilateral patchy pulmonary infiltrates and non-cardiogenic pulmonary edema. Human studies have provided us with valuable information about the physiological and inflammatory changes in the lung caused by ARDS, which has led to various hypotheses about the underling mechanisms. Unfortunately, difficulties determining the etiology of ARDS, as well as a wide range of pathophysiology have resulted in a lack of critical information that could be useful in developing therapeutic strategies.
Translational animal models are valuable when their pathogenesis and pathophysiology accurately reproduce a concept proven in both in vitro and clinical settings. Although large animal models (e.g., sheep) share characteristics of the anatomy of human trachea-bronchial tree, murine models provide a host of other advantages including: low cost; short reproductive cycle lending itself to greater data acquisition; a well understood immunologic system; and a well characterized genome leading to the availability of a variety of gene deletion and transgenic strains. A robust model of low pH induced ARDS requires a murine ALI that targets mainly the alveolar epithelium, secondarily the vascular endothelium, as well as the small airways leading to the alveoli. Furthermore, a reproducible injury with wide differences between different injurious and non-injurious insults is important.
The murine gastric acid aspiration model presented here using hydrochloric acid employs an open tracheostomy and recreates a pathogenic scenario that reproduces the low pH pneumonitis injury in humans. Additionally, this model can be used to examine interaction of a low pH insult with other pulmonary injurious entities (e.g., food particles, pathogenic bacteria).

This protocol induces acute lung injury in a mouse that has close fidelity to the pathogenesis of acid pneumonitis observed in humans. We generate a maximal acute nonlethal low pH lung injury and account for differences in rodent-human anatomic respiratory structure using an open tracheostomy coupled with circumferential pressure release.

Offene Tracheotomie Magensäure Aspiration Mausmodell der akuten Lungenschädigung Ergebnisse in Maximal Akute nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent re-oxygenation of the tissues (reperfusion). In the skin, ischemia-reperfusion (IR) is the main contributing factor to the pathophysiology of pressure ulcers. While the cascade of events leading up to the inflammatory response has been well studied, the spatial and temporal responses of the different subsets of immune cells to an IR injury are not well understood. Existing models of IR using the clamping technique on the skin flank are highly invasive and unsuitable for studying immune responses to injury, while similar non-invasive magnet clamping studies in the skin flank are less-than-ideal for intravital imaging studies. In this protocol, we describe a robust model of non-invasive IR developed on mouse ear skin, where we aim to visualize in real-time the cellular response of immune cells after reperfusion via multiphoton intravital imaging (MP-IVM).

This protocol describes the induction of an ischemia-reperfusion (IR) model on mouse ear skin using magnet clamping. Using a custom-built intravital imaging model, we study in vivo inflammatory responses post-reperfusion. The rationale behind the development of this technique is to extend the understanding of how leukocytes respond to skin IR injury.

Induzierende Ischemia-Reperfusionsschaden in der Maus-Ohr-Haut für intravital Multiphotonenionisation Imaging von Immunantworten

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

A Model of Free Tissue Transfer: The Rat Epigastric Free Flap

Free tissue transfer has been increasingly used in clinical practice since the 1970s, allowing reconstruction of complex and otherwise untreatable defects resulting from tumor extirpation, trauma, infections, malformations or burns. Free flaps are particularly useful for reconstructing highly complex anatomical regions, like those of the head and neck, the hand, the foot and the perineum. Moreover, basic and translational research in the area of free tissue transfer is of great clinical potential. Notwithstanding, surgical trainees and researchers are frequently deterred from using microsurgical models of tissue transfer, due to lack of information regarding the technical aspects involved in the operative procedures. The aim of this paper is to present the steps required to transfer a fasciocutaneous epigastric free flap to the neck in the rat.
This flap is based on the superficial epigastric artery and vein, which originates from and drain into the femoral artery and vein, respectively. On average the caliber of the superficial epigastric vein is 0.6 to 0.8 mm, contrasting with the 0.3 to 0.5 mm of the superficial epigastric artery. Histologically, the flap is a composite block of tissues, containing skin (epidermis and dermis), a layer of fat tissue (panniculus adiposus), a layer of striated muscle (panniculus carnosus), and a layer of loose areolar tissue.
Succinctly, the epigastric flap is raised on its pedicle vessels that are then anastomosed to the external jugular vein and to the carotid artery on the ventral surface of the rat's neck. According to our experience, this model guarantees the complete survival of approximately 70 to 80% of epigastric flaps transferred to the neck region. The flap can be evaluated whenever needed by visual inspection. Hence, the authors believe this is a good experimental model for microsurgical research and training.

This paper describes the steps required to raise a fasciocutaneous epigastric free flap and transfer it to the neck in the rat.

Ein Modell der freien Gewebetransfer: Die Ratte Epigastrische Freie Flap

Free tissue transfer has been increasingly used in clinical practice since the 1970s, allowing reconstruction of complex and otherwise untreatable defects ...

Modified Heterotopic Hindlimb Osteomyocutaneous Flap Model in the Rat for Translational Vascularized Composite Allotransplantation Research

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand and face transplants and, more recently, abdominal wall, uterus, and urogenital transplants. Functional outcomes have exceeded initial expectations, and most recipients enjoy an improved quality of life. However, as clinical experience accumulates, chronic rejection and complications from the immunosuppression must be addressed. In many cases where grafts have failed, the causative pathology has been ischemic vasculopathy. <span style="font-size: 11pt; line-height: 115%; font-family: Arial, sans-serif; color: rgb(41, 43, 49); background-image: initial; background-position: initial; background-size: initial; background-repeat: initial; background-attachment: initial; background-origin: initial; background-clip: initial;">The biological mechanisms of the acute and chronic rejection associated with VCA, especially ischemic vasculopathy, are important areas of research. However, due to the very small number of VCA patients, the evaluation of proposed mechanisms is better addressed in an experimental model. Multiple groups have used animal models to address some of the relevant unsolved questions in VCA rejection and vasculopathy. Several model designs involving a variety of species are described in the literature. Here we present a reproducible model of VCA heterotopic hindlimb osteomyocutaneous flap in the rat that can be utilized for translational VCA research. This model allows for the serial evaluation of the graft, including biopsies and different imaging modalities, while maintaining a low level of morbidity.

Vascularized composite allograft offers life-altering benefits to transplant recipients, but the biological causes of graft rejection and vasculopathy remain poorly understood. The rodent surgical model presented here offers a reproducible, clinically relevant model of transplantation, allowing researchers to evaluate rejection events and potential therapeutic strategies to prevent their occurrence.

Modifiziertes Heterotopisches Hindlimb Osteomyoskan Flap Model im Rat für translational Vasculariisierte Composite Allotransplantation Research

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand ...

Scratch Migration Assay and Dorsal Skinfold Chamber for In Vitro and In Vivo Analysis of Wound Healing

Impaired cutaneous wound healing is a major concern for patients suffering from diabetes and for elderly people, and there is a need for an effective treatment. Appropriate in vitro and in vivo approaches are essential for the identification of new target molecules for drug treatments to improve the skin wound healing process. We identified the &#946;3 subunit of voltage-gated calcium channels (Cav&#946;3) as a potential target molecule to influence the wound healing in two independent assays, i.e., the in vitro scratch migration assay and the in vivo dorsal skinfold chamber model. Primary mouse embryonic fibroblasts (MEFs) acutely isolated from wild-type (WT) and Cav&#946;3-deficient mice (Cav&#946;3 KO) or fibroblasts acutely isolated from WT mice treated with siRNA to down-regulate the expression of the Cacnb3 gene, encoding Cav&#946;3, were used. A scratch was applied on a confluent cell monolayer and the gap closure was followed by taking microscopic images at defined time points until complete repopulation of the gap by the migrating cells. These images were analyzed, and the cell migration rate was determined for each condition. In an in vivo assay, we implanted a dorsal skinfold chamber on WT and Cav&#946;3 KO mice, applied a defined circular wound of 2 mm diameter, covered the wound with a glass coverslip to protect it from infections and desiccation, and monitored the macroscopic wound closure over time. Wound closure was significantly faster in Cacnb3-gene-deficient mice. Because the results of the in vivo and the in vitro assays correlate well, the in vitro assay may be useful for the high-throughput screening before validating the in vitro hits by the in vivo wound healing model. What we have shown here for wild-type and Cav&#946;3-deficient mice or cells might also be applicable for specific molecules other than Cav&#946;3.

Here, we present a protocol for an in vitro scratch assay using primary fibroblasts and for an in vivo skin wound healing assay in mice. Both assays are straightforward methods to assess in vitro and in vivo wound healing.

Scratch Migration Assay und Dorsal Skinfold Kammer für In Vitro und In Vivo Analyse der Wundheilung

Impaired cutaneous wound healing is a major concern for patients suffering from diabetes and for elderly people, and there is a need for an effective ...