This work was supported by the DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft, German Research Foundation) SFB 854 (Sonderforschungsbereich, collaborative research center). 
Thanks to Hans-Holger G&#228;rtner, Audiovisuelles Medienzentrum, Otto-von-Guericke University Magdeburg, Magdeburg, Germany, for technical support.

Diese Studie wurde mit Genehmigung des Landes Sachsen und Sachsen-Anhalt, Regierungspräsidium Dresden / Halle durchgeführt werden, nach § 8 des Gesetzes für den Tierschutz (24D-9168,11-1 / 2008-24). 1 Zellisolation 1.1 Herstellung von Ober- und Unterschenkel <ol><li> Anesthetize der Maus unter Verwendung einer 5% Isofluran Konzentration durch Verdampfen von Isofluran in einem geschlossenen Behälter. Wenn sich die Maus nicht mehr bewegt für 3 Sekunden, führen Sie den Genickbruch. </li><li> Desinfizieren Sie die Hinterbeine mit Ethanol (96%). Haut und Muskeln entfernen und trennen Sie die Knochen mit einem sterilen Skalpell. <ol><li> Beginnen Sie mit einem Leistenhautschnitt, und verlängern die Inzision in Richtung der Innenknöchel und die eine Kreis Präparation der Haut um den Unterschenkel. Entfernen Sie die Haut der Beine vollständig durch Abziehen es proximal. </li><li> Nehmen Sie den Quadrizeps vom Femur mit einem scharfen Skalpell entfernen sowohl die vorderen peroneusund die Wadenmuskelgruppen und desartikulieren das Bein im Hüftgelenk durch die Anordnung und sezieren die Bänder. </li><li> Starten Sie nach vorne und fahren rund um das Gelenk durch vorsichtiges Drehen des Beins und Durchschneiden der Bänder, wodurch der gemeinsame disarticulating. </li></ol></li><li> Waschen Femur und Tibia mit 96% Ethanol für ein Minimum von 90 Sekunden auf eine aseptische Zellpräparation zu gewährleisten. Fahren Sie mit der Waschprozess mit sterilem PBS abzuspülen restliche Ethanol. Hinweis: Alle nachfolgenden Schritte müssen steril zur Vermeidung von Verunreinigungen sein. </li></ol> 1.2 Ernte von Knochenmark <ol><li> Schneiden Sie das proximale und distale Ende jedes Knochens mit einer feinen Schere, um den Zugriff auf die Ober- und Unterschenkelwellen zu gewinnen. Seien Sie vorsichtig mit diesem Schritt, da diese Knochen sehr leicht brechen. </li><li> Spülen die Knochen mit warmem Medium (M199 + 10% fötales Kälberserum (FCS) + 1% Penicillin / Streptomycin). Verwenden Sie eine sterile 28-G-Nadel, eine 1-ml-Spritze und zwischen 10 bis 15 ml Medium proKnochen zum Spülen. </li><li> Halten Sie die Knochen mit einer feinen Pinzette und spülen Sie eins nach dem anderen, bis sie halbdurchscheinend macht. Druck vorsichtig auf das Ende des Spritzenkolbens anwenden, um die Zellspannung zu minimieren. </li><li> Filtern Sie das Knochenmark durch einen 70 &amp; mgr; m Nylon-Web und sammeln das Filtrat. Um die maximale Menge an Knochenmarkextrakt wiederholt gründlich von den distalen und proximalen Enden. </li><li> Spülen Sie das Sieb mit PBS und sammeln das Filtrat. Vorsichtig zu entfernen Schmutz und Zellkonglomerate durch leichtes Rühren und Pipettieren. </li></ol> 1.3 Anbau <ol><li> Zentrifugieren Sie die Zellsuspension bei 250 · g für 10 min bei RT. Überstand verwerfen und die Zellen resuspendieren mit etwa 25 ml Medium. Wiederholen Sie einmal. </li><li> Die Zellen in 6 ml Medium nach der zweiten Waschstufe. Mischungs 50 ul der Zell-Lösung mit 50 ul Trypanblau. Zählen Sie die Zellen in einer Zählkammer unter einem Lichtmikroskop. Berechnung der Anzahl von cEllen in der Lösung mit dieser Formel: <img alt="Gleichung 1" fo:content-width="1.3in" src="/files/ftp_upload/52347/52347eq1.jpg" /></li><li> Seed die Zellen auf 6-Well-Ultra-Low-Befestigungsfläche Platten dauerhafte Haftung an der Unterseite der Platte zu verhindern. Verwenden Sie eine Konzentration von 10 6 Zellen pro ml mit bis zu 6 ml pro Vertiefung. </li><li> Ergänzen Sie die Suspension mit 20 ng / ml M-CSF auf die Zelldifferenzierung fördern. </li><li> Kultur die Zellen für 5 Tage bei 37 ° C und 5% Kohlendioxid und beobachten täglich. </li></ol> 1.4 Die Ernte der Zellen Hinweis: Diese Schritte sollten auf Eis durchgeführt werden. Gehen Sie entweder mit 1.4.1 oder 1.4.2 entsprechend. <ol><li> Zu diesem Zeitpunkt ernten die gesamte Kultur, einschließlich differenzierter Makrophagen, die zu den Kulturplatten haftet, auch wenn sie ultra-low-Befestigungsfläche Platten. <ol><li> Ernte der gesamten Kultur durch vorsichtiges Pipettieren und Abnehmen mit einer Lösung von 4 ° C PBS, 0,5% Rinderserumalbumin (BSA) und 2 mM EDTA. Wiederholen, bis die Platten frei von verbleibenden anhaftenden Zellen - Bestätigung unter dem Mikroskop, wenn nicht sicher. </li></ol></li><li> Alternativ verwerfen adhärenten Makrophagen durch Ernte des Überstands mit den Zellen in Suspension, die überwiegend Monozyten enthalten. <ol><li> Ernte der nicht-adhärenten Zellen mit einer Lösung von EDTA-freies PBS und 0,5% BSA. Sie nicht zu viel Kraft, um zu vermeiden, verdrängen leicht anhaftenden Makrophagen gelten. </li></ol></li></ol> 1.5 FACS-Analyse (optional) Anmerkung: Es ist möglich, die Zellsuspension von CD117 + Stamm- und Vorläuferzellen durch die Verwendung von MACS abzureichern. Verwenden Hersteller Protokolle für dieses Verfahren. <ol><li> Ernte der Zellen gemäß einem der Schritte 1.4.1 oder 1.4.2. </li><li> Zentrifugieren Sie die Zellen bei 250 × g für 10 Minuten bei 4 ° C und wiederholen Sie diesen Schritt wieder. </li><li> Resuspendieren mindestens 250.000 Zellen in 300 ul FACS buffer pro Sonde. </li><li> Übertragungszelle Lösung auf eine 96-well-Platte (30 &amp; mgr; l pro Vertiefung). </li><li> Zentrifugieren Sie die Zellsuspension bei 250 xg für 5 Minuten bei 4 ° C. </li><li> Entfernen Sie den Überstand und fügen Sie 25 ul Antikörper in jede Vertiefung (Verwendung Hersteller Verdünnung). </li><li> Färben die Zellen mit Antikörpern (nach Herstellerprotokollen für Zell Phänotypisierung nach den Schritten 1.5.1-1.5.6. Üblicherweise verwendete Marker für Monozyten / Makrophagen zur Identität CD11b, F4 / 80 (Figur 3), CD115 (Abbildung 2), Gr- 1. Anmerkung: Für eine weitere Beschreibung von Zell Lösungen ist die Verwendung von Markern, wie CD4, CD8a, CD11c, CD25, CD45, CD45R, CD62L, CD80, CD86, CD145, CD117, MHCⅡ, Ly6C, Ly6G und CD192 empfohlen. Cellular Eigenschaften wurden zuvor beschrieben 12. </li><li> Die Sonden für 20 min Inkubation bei 4 ° C. </li><li> Zentrifuge die Sonden bei 250 × g für 5 min bei 4 ° C und Resuspension mit 200 ul FACS-Puffer. Wiederholen thist Schritt zweimal. </li><li> Übertragen Sie die Sonden in FACS-Röhrchen und führen Sie die FACS-Analyse 12. </li><li> Führen FACS-Analyse 12 am Tag 0, 3 und 5, um die Zelldifferenzierung zu analysieren. </li></ol> 2. Injektion in die Schwanzvene 2.1 Vorbereitung <ol><li> Erwärmen die Tiere auf einer Heizplatte bei 37 ° C für ca. 10 min. Beachten Sie die Tiere unter Erwärmung auf Anzeichen einer Überhitzung zu erkennen. </li><li> Resuspendieren der Monozyten, isoliert in Schritten 1.1- 1.4, in 150 ul NaCl, und laden Sie die Zellen in eine 1 ml Insulinspritze mit einer 30G Nadel. Die Lösung leicht vortexen vor dem Laden der Spritze, um sicherzustellen, dass alle Monozyten injiziert werden. Immer Griff Zellen auf Eis, Wärme-vermittelte Bindung und Aktivierung von Monozyten zu vermeiden. </li></ol> 2.2 Einstweilige <ol><li> Vermeiden Sie andere Mäuse stören im Käfig bei der Auswahl einer Maus zur intravenösen Injektion. </li><li> Platzieren Sie die Maus in die Restrainer. Vermeiden Sie zu viel prEssure und seien Sie vorsichtig mit den Hinterbeinen. (Figur 4) Hinweis: Alternativ können Sie auch eine Vollnarkose zu stressfreien Umgang mit den Tieren zu gewährleisten. </li><li> Stellen Sie sicher, dass die Maus bietet Platz zum Atmen vor dem Schließen der Verzögerer. </li></ol> 2.3 Injection <ol><li> Desinfizieren Sie die Injektionsstelle mit Desinfektionsmittel. Spray auf dem Schwanz der Maus und lassen Sie stehen für mindestens 1 min. </li><li> Stoppen Venenblutdurchfluß des Schwanzes durch sanften Druck auf die seitlichen Heckseite oberhalb der Injektionsstelle, für eine bessere Sichtbarkeit der Venen. </li><li> Drehen Sie den Schwanz 90 Grad, vor der Injektion. (Figur 5) </li><li> Injizieren bei einem Winkel von 45 Grad. Injizieren Sie langsam und nicht mehr als 5 &amp; mgr; l pro g zu schaden Tiere zu vermeiden. </li><li> Wenn es eine Blase, die ein Zeichen für eine fehlgeschlagene Einspritzung ist, ab sofort nicht und wiederholen Sie die Injektion weiter proximal. </li><li> Stoppen Sie die Blutungen an der Injektionsseite durch leichten pressure für etwa 1 min. </li><li> Am Ende des Verfahrens, öffnen Sie die Rückziehvorrichtung und die Maus in seinem Käfig. </li><li> Beachten Sie die Maus für 20 Minuten, um sicherzustellen, dass das Tier nicht von der Injektions geschädigt und Brustlage beibehalten wird. Verlängern Sie die Zeit der Beobachtung, bis die Maus gewinnt ausreichend Bewusstsein. Bringen Sie die Maus, um das Unternehmen von anderen Tieren nur nachdem sie vollständig erholt hat. </li></ol>

<ol>
	<li>Herold, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+monocytes:+a+novel+strategy+for+in+vivo+augmentation+of+collateral+vessel+growth.">Transplantation of monocytes: a novel strategy for in vivo augmentation of collateral vessel growth.</a> Hum Gene Ther. 15 (1), 1-12 (2004).</li><li>Herold, J., Tillmanns, H., Xing, Z., Strasser, R. H., Braun-Dullaeus, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+transduction+of+monocytes:+promising+vehicles+for+therapeutic+arteriogenesis.">Isolation and transduction of monocytes: promising vehicles for therapeutic arteriogenesis.</a> Langenbecks Arch Surg. 391 (2), 72-82 (2006).</li><li>Francke, A., Weinert, S., Strasser, R. H., Braun-Dullaeus, R. C., Herold, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+bone+marrow+derived+monocytes:+a+novel+approach+for+augmentation+of+arteriogenesis+in+a+murine+model+of+femoral+artery+ligation.">Transplantation of bone marrow derived monocytes: a novel approach for augmentation of arteriogenesis in a murine model of femoral artery ligation.</a> American Journal Of Translational Research. 5 (2), 155-169 (2013).</li><li>Leon, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell+differentiation+potential+of+mouse+monocytes:+monocytes+represent+immediate+precursors+of+CD8-+and+CD8++splenic+dendritic+cells.">Dendritic cell differentiation potential of mouse monocytes: monocytes represent immediate precursors of CD8- and CD8+ splenic dendritic cells.</a> Blood. 103 (7), 2668-2676 (2004).</li><li>Timmerman, J. M., Levy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell+vaccines+for+cancer+immunotherapy.">Dendritic cell vaccines for cancer immunotherapy.</a> Annu Rev Med. 50, 507-529 (1999).</li><li>Salem, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+dendritic+cells+for+Peptide-based+vaccination+in+cancer+immunotherapy.">The use of dendritic cells for Peptide-based vaccination in cancer immunotherapy.</a> Methods Mol Biol. 1139, 479-503 (2014).</li><li>Timmerman, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Idiotype-pulsed+dendritic+cell+vaccination+for+B-cell+lymphoma:+clinical+and+immune+responses+in+35+patients.">Idiotype-pulsed dendritic cell vaccination for B-cell lymphoma: clinical and immune responses in 35 patients.</a> Blood. 99 (5), 1517-1526 (2002).</li><li>Berthold, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+monocytes+by+Ficoll+density+gradient+centrifugation.">Isolation of human monocytes by Ficoll density gradient centrifugation.</a> Blut. 43 (6), 367-371 (1981).</li><li>Houthuys, E., Movahedi, K., De Baetselier, P., Van Ginderachter, J. A., Brouckaert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+the+isolation+and+purification+of+mouse+peripheral+blood+monocytes.">A method for the isolation and purification of mouse peripheral blood monocytes.</a> Journal Of Immunological Methods. 359 (1-2), 1-10 (2010).</li><li>Seeger, F. H., Tonn, T., Krzossok, N., Zeiher, A. M., Dimmeler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+isolation+procedures+matter:+a+comparison+of+different+isolation+protocols+of+bone+marrow+mononuclear+cells+used+for+cell+therapy+in+patients+with+acute+myocardial+infarction.">Cell isolation procedures matter: a comparison of different isolation protocols of bone marrow mononuclear cells used for cell therapy in patients with acute myocardial infarction.</a> European Heart Journal. 28 (6), 766-772 (2007).</li><li>Auffray, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CX3CR1++CD115++CD135++common+macrophage/DC+precursors+and+the+role+of+CX3CR1+in+their+response+to+inflammation.">CX3CR1+ CD115+ CD135+ common macrophage/DC precursors and the role of CX3CR1 in their response to inflammation.</a> The Journal Of Experimental Medicine. 206 (3), 595-606 (2009).</li><li>Francke, A., Herold, J., Weinert, S., Strasser, R. H., Braun-Dullaeus, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+mature+murine+monocytes+from+heterogeneous+bone+marrow+and+description+of+their+properties.">Generation of mature murine monocytes from heterogeneous bone marrow and description of their properties.</a> J. Histochem. Cytochem. 59 (9), 813-825 (2011).</li><li>Sneider, E. B., Nowicki, P. T., Messina, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+medicine+in+the+treatment+of+peripheral+arterial+disease.">Regenerative medicine in the treatment of peripheral arterial disease.</a> Journal Of Cellular Biochemistry. 108 (4), 753-761 (2009).</li><li>Van Royen, N., Piek, J. J., Schaper, W., Fulton, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+review+of+clinical+arteriogenesis+research.">A critical review of clinical arteriogenesis research.</a> J Am Coll Cardiol. 55 (1), 17-25 (2009).</li><li>Lawall, H., Bramlage, P., Amann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+peripheral+arterial+disease+using+stem+and+progenitor+cell+therapy.">Treatment of peripheral arterial disease using stem and progenitor cell therapy.</a> J Vasc Surg. 53 (2), 445-453 (2011).</li><li>Herold, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetanus+toxoid-pulsed+monocyte+vaccination+for+augmentation+of+collateral+vessel+growth.">Tetanus toxoid-pulsed monocyte vaccination for augmentation of collateral vessel growth.</a> Journal of the American Heart Association. 3 (2), e000611 (2014).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

Wir beschreiben ein einfaches und kostengünstiges Verfahren, um große Mengen an murine Monozyten aus Knochenmark zu isolieren. Im Vergleich zu anderen Protokollen mit dem peripheren Blut, die Monozyten Ausbeuten 5 von 1,4 x10 6 zu erhalten, werden wir in der Lage, höhere Ausbeuten an 11 x 10 6 ± 3 x 10 6 Monozyten aus einer Spendermaus erhalten. Wenn angesichts Herausforderungen mit diesem Verfahren ist es wichtig, die Möglichkeit einer Verunr...

The isolation of monocytes is important and critical for many in vitro and in vivo studies. These cells are targets for diseases such as peripheral arterial disease, coronary heart disease, or other ischemic diseases, since collateral vessel growth is strongly driven by local inflammation. Inflammatory responses include endothelial activation and local recruitment of leukocytes, mainly monocytes, which then mature to macrophages and create a highly arteriogenic environment by secreting multiple growth factors to induce the remodeling of an arteriole into a functional collateral artery1-3. Monocytes also mature to dendritic cells, which are frequently used for immunological studies4,5 and cancer research6,7.
Problematic in the approach for monocyte isolation from peripheral blood8 is the high number of donor animals needed to produce a sufficient amount of monocytes for most analyses. Former protocols describe methods such as density gradient centrifugation and cell depletion via MACS9 when isolating monocytes; however, these techniques can alter the characteristics and functionality of monocytes which can lead to difficulties in interpretation10,11. Moreover, these methods are difficult and can reduce experimental reproducibility.
Our aim with this protocol is to provide a simple and cost effective method to generate large amounts of bone marrow-derived monocytes. Due to the high cell yield of 11 x 106 &#177; 3 x 106 cells obtained by this protocol, we can substantially reduce the number of mice required during the isolation of bone marrow-derived monocytes. The procedure can be completed within a minimal amount of time, and without using expensive and complicated techniques as referenced above. Here, we extract monocytes from native bone marrow suspension of donor mice, cultivate the suspension on ultralow attachment plates, and supplement the solution with 20 ng/ml M-CFS. On day 5 of incubation, cells are harvested and characterized to confirm functional and phenotypic properties.
For experiments in the field of arteriogenesis, intravenous transplantation of these bone marrow-derived monocytes into mice is an effective method of systemic drug delivery, which can be combined with femoral artery ligation in common peripheral arterial disease models.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-well-ultra-low-attachment plate</td>
			<td>Corning Incorporated, NY, USA</td>
			<td></td>
			<td>6-well-ultra-low-attachment plate, with cap, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8- 12 week old, male, balb/c mice&#160;</td>
			<td>Charles River, Sulzfeld, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well-plate</td>
			<td>Greiner bio one GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue dead cell stain</td>
			<td>Life technologies GmbH, Darmstadt, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumine</td>
			<td>GE Healthcare, Freiburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Fraction V, pH 7,0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Canules</td>
			<td>B. Braun, Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>28G, 30G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD115</td>
			<td>eBioscience, San Diego, USA</td>
			<td>12-1152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b</td>
			<td>eBioscience, San Diego, USA</td>
			<td>53-0112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture dish</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>With cap, steril</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter GmbH, Krefeld, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Allegra&#174; X-15R centrifuge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td>Veet, Mannheim, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfection agent</td>
			<td>Sch&#252;lke&#38;Mayr GmbH, Norderstedt, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Kodan Tinktur forte</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable scalpel No.10&#160;</td>
			<td>Feather safety razor Co.Ltd, Osaka, Japan&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 96%&#160;</td>
			<td>Otto Fischar GmbH und Co KG, Saarbr&#252;cken, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extraction unit Pipetus</td>
			<td>Hirschmann Laborger&#228;te GmbH &#38; Co.KG, Eberstadt, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F4/80</td>
			<td>AbD Serotec, D&#252;sseldorf, Germany</td>
			<td>MCA497APC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS buffer&#160;</td>
			<td>Manufactured by our group with single components</td>
			<td></td>
			<td>PBS, 0,5% BSA, 0,1% NaN3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS device</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company, Franklyn Lakes, New Jersey, USA</td>
			<td></td>
			<td>BD FACS Canto II</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS tubes&#160;&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company, Franklyn Lakes, New Jersey, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#174; pipette</td>
			<td>Becton Dickenson Labware, NY, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal calf serum</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>Rubis, Stabio, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves</td>
			<td>R&#246;sner-Matby Meditrade GmbH, Kiefersfelden, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gr1</td>
			<td>eBioscience, San Diego, USA</td>
			<td>53-5931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating plate&#160;</td>
			<td>Labotect GmbH, G&#246;ttingen, Germany&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Hot Plate 062</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Ewald Innovationstechnik GmbH, Bad Nenndorf, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Incu safe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluran</td>
			<td>Baxter Deutschland GmbH, Unterschlei&#223;heim, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Carl Zeiss SMT GmbH, Oberkochen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Axiovert 40 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Macrophage-Colony Stimulating Factor</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td><a href="http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/srp3110?lang=de&amp;region=DE">SRP3110&#160;</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mechanical shaker</td>
			<td>IKA, Staufen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>ms2 minishaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium 199</td>
			<td>PAA Laboratories GmbH, Pasching, Austria</td>
			<td></td>
			<td>Warm in 37 &#176;C water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro test tubes</td>
			<td>Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microbiological work bench</td>
			<td>Thermo Electron, LED GmbH, Langenselbold, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Hera safe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monocyte wash buffer&#160;</td>
			<td>Manufactured by our group with single components</td>
			<td></td>
			<td>PBS, 0,5% BSA, 2mM EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse restrainer</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Berlin Chemie AG, Berlin, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaN3 (sodium acide)</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neubauer counting chamber</td>
			<td>Paul Marienfeld GmbH und Co.KG, Lauda-K&#246;nigshofen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon cellsieve</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company, Franklyn Lakes, New Jersey, USA</td>
			<td></td>
			<td>Cell strainer, 70 &#181;m mesh size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Life technologies GmbH, Darmstadt, Germany</td>
			<td></td>
			<td>pH 7.4, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td>10&#181;L/100&#181;L/200&#181;L/1000&#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetting heads</td>
			<td>Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Cellstar 5 ml, 10 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction unit</td>
			<td>Integra bioscience, Fernwald, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Vacusafe comfort</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Word Precision Instruments, Inc., Sarasota, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>B. Braun, Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>1mL Omnifix&#174; -F insuline syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubes with cap</td>
			<td>Greiner bio one GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>15mL/50mL Cellstar tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warm water bath</td>
			<td>Julabo Labortechnik GmbH, Seelbach, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Julabo SW22</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and intravenous injection of murine bone marrow derived monocytes

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of various fields in biomedical science. The method described below is a simple and effective way to isolate murine monocytes from heterogeneous bone marrow.
Bone marrow from the femur and tibia of Balb/c mice is harvested by flushing with phosphate buffered saline (PBS). Cell suspension is supplemented with macrophage-colony stimulating factor (M-CSF) and cultured on ultra-low attachment surfaces to avoid adhesion-triggered differentiation of monocytes. The properties and differentiation of monocytes are characterized at various intervals. Fluorescence activated cell sorting (FACS), with markers like CD11b, CD115, and F4/80, is used for phenotyping. At the end of cultivation, the suspension consists of 45%&#177; 12% monocytes. By removing adhesive macrophages, the purity can be raised up to 86%&#177; 6%. After the isolation, monocytes can be utilized in various ways, and one of the most effective and common methods for in vivo delivery is intravenous tail vein injection. 
This technique of isolation and application is important for mouse model studies, especially in the fields of inflammation or immunology. Monocytes can also be used therapeutically in mouse disease models.

Das aus dem Knochenmark der Maus extrahiert Zelllösung besteht aus verschiedenen Zelltypen. Die wichtigsten Zelltypen sind Lymphozyten, Granulozyten und Monozyten. Zelltypen können durch Grße und Granularität, die in Abbildung 1 für native Suspensionen und Zellen nach 5 Tagen der Differenzierung geerntet gezeigt wird geschätzt werden. Beachten Sie die Verschiebung zelluläre Zusammensetzung während der Kultivierung. Jedoch muss eine genaue Klassifizierung der Bevölkerung auf die markante Express...

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Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

Here we present a protocol that generates large amounts of murine monocytes from heterogeneous bone marrow for translational applications. In comparison to others, this new method helps reduce the number of sacrificed animals and lowers costs by avoiding expensive methods such as high gradient magnetic cell separation (MACS).

Isolierung und intravenöse Injektion von Maus-Knochenmark stammenden Monozyten

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

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Immunology and Infection

23.3K Aufrufe.  Otto von Guericke University Magdeburg. Here we present a protocol that generates large amounts of murine monocytes from heterogeneous bone marrow for translational applications. In comparison to others, this new method helps reduce the number of sacrificed animals and lowers costs by avoiding expensive methods such as high gradient magnetic cell separation (MACS).