JH möchte seiner Anerkennung und danken Mentor, Freund und ehemaliger Manager Valerie Berry für uns zuerst dieses Modell unterrichten; und Gary Woodnutt, der uns die Grundlagen gelehrt und inspiriert unser Engagement auf dem Gebiet der antibakteriellen PK / PD. Alle Autoren wünschen David Payne für seine Unterstützung und Anerkennung für unsere Wissenschaft zu danken. Wir möchten , dass unsere früheren In - vivo - Mikrobiologie Kollegen zu erkennen , die auf den Körper von Daten beigetragen , diese Verfahren erzeugt mit, vor allem Pete DeMarsh, Rob Straub, Roni Seite und Nerissa Simon. Schließlich danken wir unseren in vitro Mikrobiologie Kollegen für ihre Unterstützung, insbesondere für die Bereitstellung aller MHK wir (Lynn McCloskey, Josh Westen und Sharon Min) verlangen; und für unsere klinischen Mikrobiologie-Team, die kompetente Beratung und Unterstützung (Linda Miller, Nicole Scangarella-Oman und Deborah Butler) zur Verfügung stellt.

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	<li>Eagle, H., Fleischman, R., Levy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous'+vs.+'discontinuous'+therapy+with+penicillin:+the+effect+of+the+interval+between+injections+on+therapeutic+efficacy.">Continuous' vs. 'discontinuous' therapy with penicillin: the effect of the interval between injections on therapeutic efficacy.</a> N Engl J Med. 248 (12), 481-488 (1953).</li><li>Eagle, H., Fleischman, R., Musselman, A. 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J., Elefante, P., Zalacain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+PDF+Inhibitor+GSK1322322+Against+Abscess+Infections+Caused+by+MRSA+Using+a+Computer-Controlled+Infusion+System+to+Recreate+Human+PK+Profiles+in+Rats.">Efficacy of PDF Inhibitor GSK1322322 Against Abscess Infections Caused by MRSA Using a Computer-Controlled Infusion System to Recreate Human PK Profiles in Rats.</a> , (2010).</li><li>Hoover, J., Mininger, C., Rittenhouse, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GSK2251052,+a+novel+LeuRS+inhibitor,+is+effective+against+multi-drug+resistant+Pseudomonas+aeruginosa+in+a+mouse+pneumonia+model.">GSK2251052, a novel LeuRS inhibitor, is effective against multi-drug resistant Pseudomonas aeruginosa in a mouse pneumonia model.</a> Proceedings of the 52nd Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2012).</li><li>Hoover, J., Mininger, C., Novick, S., Rittenhouse, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+GSK2140944+against+Streptococcus+pneumoniae+in+a+non-neutropenic+mouse+lung+infection+model.">Efficacy of GSK2140944 against Streptococcus pneumoniae in a non-neutropenic mouse lung infection model.</a> Proceedings of the 53rd Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2013).</li><li>Hoover, J. 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Die Autoren sind alle Mitarbeiter von Glaxosmithkline Pharmaceuticals und eigene Aktien des Unternehmens innerhalb des Unternehmens bezahlt.

Für einen optimalen Erfolg in diesem Infektionsmodell reproduzieren, sollten die folgenden zusätzlichen Vorschläge berücksichtigt werden. 3 mal in vivo vor der Verwendung in einer Studie - Virulenz neuer Isolate können durch Passagierung 2 verbessert werden. Gefrorene Bakterien Bestände sollten immer von einem primären in vivo abgeleitetes Quelle mit möglichst wenigen Passagen wie möglich von der ursprünglichen hergestellt werden und erneutes Gefrieren oder Wiederverwendung von aufgetauten Lager wird abgeraten. kürzlich durchgeführten klinischen Isolaten von Patienten mit Lungenentzündung erholt Verwendung und / oder Kulturen in der logarithmischen Wachstumsphase der Vorbereitung können auch Etablierung der Infektion zu verbessern. Eine fünffache Verdünnung in den Agar (zB 2 mL Kochsalzsuspension zugesetzt 8 ml Agar) kann anstelle von verwendet werden zehnfach das bakterielle Inokulum zu erhöhen und das Inokulum Volumen eingestellt werden kann , von der Größe des Tieres basiert (beispiels 200 &amp; mgr; l / Tier wird in der Regel in 250 g Ratten geimpft). Bevor die Salzbakteriensuspension in die zum HinzufügenAgar ( das heißt bei dem Schritt 2.3) kann die Bakteriendichte durch visuelle Inspektion vorausgesagt oder geschätzt werden, MacFarland Standard oder Messungen der optischen Dichte. Es ist hilfreich , vertraut zu werden mit den in - vitro - Wachstumseigenschaften für jede der Durchführung in vivo - Experimenten vor isolieren. Konsistenz in Wachstum und Handhabung ermöglicht, die genaueste Abschätzung der Bakteriendichte für jeden gegebenen isolieren. Standard mikrobiologische Verfahren, die von denen beschrieben wird, wie beispielsweise alternative Medien und Gewebe Homogenisatoren unterscheiden, können geeignet verwendet werden zur Herstellung von Inokula und Bakterien aus infizierten Geweben aufzählt. Es wird dringend vor dem Experiment der Agar den Tag vorzubereiten oder zu schmelzen empfohlen und speichern Sie es über Nacht in einem separaten Wasserbad auf 50 ° C eingestellt. Dies wird den Prozess vereinfachen und Schutz gegen die Agar zum Zeitpunkt der Infektion zu heiß. Eine Temperatur von 41 bis 42 ° C erreicht, eine gute Balance zwischen der Wartung desning der Agar in flüssigem Zustand ohne kurzfristige Überleben der Bakterien für zu heiß. Als mögliche Alternative zu Nähragar wurde noble Agar wurde in einigen Versuchen erfolgreich eingesetzt. Ein Rohr aus Agar Inokulum in der Regel ausreichend für eine gesamte Experiment (und empfohlen wird), sondern mehrere Rohre können zum Infizieren einer großen Anzahl von Tieren hergestellt werden (beispielsweise mehr als 60) , oder wenn das infizierende Vorgang dauert länger als 30 - 45 min Wenn mehrere Inokulum Rohre erforderlich sind, fügen die Salzbakteriensuspension in jedes Röhrchen Agar, wie es benötigt wird. Dies reduziert das Risiko, dass bakterielle Überleben und / oder Eignung wird durch verlängerte Exposition gegenüber einer erhöhten Temperatur vor der Inokulation berührt. Es sollte beachtet werden, dass die Verwendung mehrerer Inokulum Rohre auch zusätzliche Randomisierung Tierverfahren erfordern. Wann immer möglich, infizieren alle Tiere aus dem gleichen Inokulumzubereitung. Es wird empfohlen, die Größe der Experimente auf dem aktuellen Stand der Kenntnisse im Umgang mit dem te zuzuschneidenchnique. Ein erfahrener Wissenschaftler kann ein Tier in weniger als 30 s intubieren und impfen und impfen bis 5 - 6 Tiere pro Charge (dh mit einer Spritze voller Agar Inokulum). Für diejenigen, die Technik zu lernen, ist die Geschwindigkeit wichtig wie die Agar beginnt zu verfestigen; jedoch eine genaue Platzierung des Inokulums ist wichtiger. Beginnen Sie mit 1 oder 2 Tiere pro Charge, und erhöhen so die Technik vertrauter wird. Die Tiere auch weiterhin während der Intubation zu atmen; Somit hängt die Zeitfenster für die Inokulation ab, wie schnell sich das Tier erholt sich von Isofluran, die etwa 2 sein sollte - 3 min. Tiere, die während des Prozesses erwecken können wieder narkotisiert und ein zweites Mal versucht, aber es wird nicht empfohlen, so wiederholt zu tun. Erfolgreiche Impfung beim ersten Versuch wird in fast 100% der Tiere zu erwarten, wenn Fähigkeits erreicht wird. Beachten Sie, dass es einfacher ist, die Technik unter Verwendung von Ratten zu erlernen zuerst; Mäuse sind empfindlicher und je kleiner zuls sind anfälliger mit verfestigten Agar zur Verstopfung, wenn nicht schnell manipuliert. Vorwärmen Spritzen, Schläuche und Kochsalzlösung sowie die Intubation Gerät an einem warmen (nicht heißen) Oberfläche, wie ein Heizkissen auf niedriger Einstellung zu halten, helfen Verfestigung des Agar verhindern kann. Wenn die Technik lernen, ist es auch hilfreich, die richtige Platzierung des Inokulums zu praktizieren unter Verwendung eines dunkel gefärbten Farbstoff (wie konzentrierte Methylenblau) anstelle der Bakteriensuspension in Agar. Führen Sie das Verfahren wie beschrieben, aber einschläfern das Tier unmittelbar nach der Inokulation des Farbstoffs (nicht erlaubt, das Tier zwischen Anästhesie und Euthanasie zu erholen). Sezieren, um zu bestimmen, wo der Farbstoff angeordnet ist, und entsprechend anpassen Technik. Der primäre Endpunkt in diesem Modell ist CFU aus infizierten Lunge. Überleben ist kein guter Indikator für die bakterielle Belastung und ist keine empfohlene Endpunkt. Für Wirksamkeitsstudien ist die vorgeschlagene N 5 - 6 Tiere pro Gruppe, wie dies predicte istd ≥1 log 10 CFU Unterschiede zwischen den Gruppen mit mindestens 90% Leistung zu erfassen. Tiere können in Gruppen angesteckt werden, so dass Käfiggenossen zusammen bleiben, oder eine wahre Randomisierung Prozess verfolgt werden kann. Beachten Sie, dass, wenn Gruppen von Käfig zugeordnet sind, sollten die Gruppen mit den am Ende der Studie Wachstumskontrollen in einer zufälligen Sequenz infiziert werden zuletzt infiziert (um die bakterielle Überlebens bestätigen / Fitness wurde nicht durch die Länge der Zeit einer erhöhten Temperatur ausgesetzt betroffen im Wasserbad). Keine Daten censoring Methoden sollten notwendig sein, und keine sind, mit Ausnahme der unmittelbaren Entfernung von jedem Tier zu empfehlen, die offensichtlich falsch inokuliert zu Beginn der Studie (vor der Einleitung irgendwelcher Behandlungen) gewesen ist. Tiere , die vor dem Ende der Studie eingeschläfert werden sollte , es sei denn für den Ausschluss eines triftigen Grundes im Datensatz abgetastet und die Ergebnisse einbezogen werden prospektiv identifiziert (dh ein Ereignis in keinem Zusammenhang mit der Infektion oder Behandlung). Drug Verschleppung kann affeinige Proben ect und ist eine wichtige Überlegung für alle in vivo Infektionsmodellen. Wenn eine Verbindung häufig gegeben ist, in der Nähe der Zeit der Euthanasie oder hat eine lange Halbwertszeit, kann es bei einer ausreichend hohen Konzentration im Gewebe Homogenat vorhanden sein , um weiterhin Bakterien ex vivo während der bakteriellen Enumerationsprozess (Verdünnung und Plattierung des Tötens die Proben oder auf den Agarplatten während der Inkubation über Nacht). Um dem vorzubeugen, Aktivkohle und / oder ein Additiv, das das aktive Molekül abbaut, ohne die Bakterienzellen schädigen können vor der Homogenisierung zu der Probe gegeben werden. Andere Verfahren umfassen die Proben Zentrifugieren der Mehrheit der aktiven Verbindung zu entfernen (die im Überstand bleiben soll) und unterschiedliche Verdünnungs Verwendung und Plattieren Schemata ausreichend den Wirkstoff in eine nicht-inhibitorische Konzentration verdünnen. Wie in Abbildung 2, dieses Modell durch die i gezeigten Beispielen belegt erfolgreichnduces Lungeninfektionen bei Nagetieren mit einem breiten Spektrum von Organismen einschließlich derer, die in anderen Modellen (zB H. influenzae) nicht gut wachsen. Diese Infektionen sind konsistent und reproduzierbar, was die Wahrscheinlichkeit reduziert wird, die Experimente benötigen aufgrund der Modellversagen wiederholt werden und / oder eine schlechte Leistung mit einem gegebenen Isolat. Obwohl die Tiere immunokompetenten sind, sind sie nicht in der Lage, die Infektion zu schnell zu lösen, wenn überhaupt. Dies ermöglicht eine größere Flexibilität bei der Studie der Länge, wie viele Isolate eine tragfähige Infektion durch mindestens 96 h, ohne die Notwendigkeit halten für wiederholte Injektionen Neutropenie zu halten. Der potenzielle Nutzen des Studierens antibakterieller Wirksamkeit bei Immun Tieren wurde 20 zuvor angemerkt, 21, und es gibt Hinweise , dass für einige Verbindungen (zB oxazolidinones), Daten aus nicht neutropenischen Nagetiere genauer die Exposition des Menschen Ziele vorhersagen kann , verglichen mit denen gemacht neutropenische 5. Der Mehrzweck-Verwendbarkeit von ter Modell ist in den Figuren gezeigt , 3 und 4 und den Tabellen 1 und 2. Diese Studien sind Teil einer großen Sammlung von veröffentlichten und nicht veröffentlichten Daten , die mit diesem Modell generiert wurde , um Lead - Optimierung Anstrengungen 16, 17, 22-24, zum Vergleich unterstützen und die Bestätigung der vorgeschlagenen menschlichen Dosierungsschemata 19, 25-29 und für PK / PD - Charakterisierung 18, 30-32 .Während dieses Modell zunächst komplexer ist , mit der intranasalen Inhalation Methode zur Durchführung verglichen, gibt es viele Vorteile , wie oben beschrieben. Mit etwas Übung und Routine zu verwenden, sollten die Techniken unkompliziert geworden auszuführen. Es kann in einigen Studien festgestellt werden, dass die bakterielle Belastung zu Beginn der Studie, dass niedriger war als in der Regel in anderen Lungeninfektionsmodellen gezielt. Dies ist zum großen Teil auf die gewünschte Verdünnung in Agar und das kleine Volumen Herausforderung, insbesondere bei Mäusen. Es sollte jedoch auch beachtet werden,dass das Bakterienwachstum wurde in allen Fällen gesehen, selbst wenn die anfängliche Belastung relativ gering war. Die Zielbasisbakterienbelastung ist 6 bis 6,5 log 10 KBE / Lunge (6,8 bis 7,3 log 10 KBE / g Gewebe bei Mäusen nach durchschnittlichen Lungengewichte) , die in menschlichen Patienten mit einer schweren Lungenentzündung 33 geschätzt Dichten entspricht. Eine höhere Basislast kann durch weitere Konzentration der Bakterieninokulum oder durch Verzögerung der Beginn der Verabreichung der Verbindung zu ermöglichen, zusätzliche Bakterienwachstum erreicht werden kann; aber zu viel der Herausforderung zunehmender Belastung kann zu abnorm schwere und akute Erkrankung führen (dh Tod in weniger als 24 h), die für alle antibakterieller Therapien refraktär ist unabhängig von der Anfälligkeit. Obwohl das Inokulum anfangs vorzugsweise in die linke Lunge des Tieres gelegt wird, breitet sich die Infektion im Allgemeinen überall in beiden Lungen. Progressives Lungenerkrankung, die Verbreitung der Bakterien auf andere Organe und eventuelle Morbidität ist oft observed mit S. pneumoniae, K. pneumoniae und P. aeruginosa. Von Interesse sind Infektionen mit H. influenzae und A. baumannii in der Regel mehr enthalten und nur selten in der vorgeschriebenen bakteriellen Inokula zum Tod führen. Die Ergebnisse zur Wirksamkeit von diesem Modell erhalten haben , gut korreliert mit in - vitro - Empfindlichkeit Profile sowie definierte PK / PD - Ziele. Kürzungen bei der bakteriellen Belastung sind für die Isolate als anfällig für den Agenten getestet, während die als resistent zeigen keine Veränderung oder Bakterienwachstum über dem Ausgangswert 16, 17, 19, 24-29 routinemäßig beobachtet. Studien an Ratten Auswertung zwei Chinolone und ein Makrolid dieses Modell 32 haben gezeigt , dass die PK / PD - Ziel für eine 10 Reduktion der S. pneumoniae Vergleich zum Ausgangswert mit dem in neutropenischen Mäusen bestimmt Ziel korreliert log 1-erforderlich und, was noch wichtiger ist , mit klinische Ziele für die Gemeinschaft erworbenen bakteriellen pneumonia 6, 7, 34, 35. Gepotidacin, ein neuartiger Mechanismus Antibiotikum, wurde gegen mehrere S. pneumoniae getestet und eine ähnliche PK / PD - Ziel , die für eine 1-log 10 Reduktion in diesem Modell Lungeninfektion 31 , wie es für ein Modell 1-log 10 Reduzierung der neutropenische Oberschenkel erforderlich 36 , wenn Lungenpenetration wurde berücksichtigt ( die Daten - Datei) übernommen. In ähnlicher Weise waren die PK / PD - Ziele bestimmt in Mäusen für GSK2251052 gegen P. aeruginosa konsistent für Stase, 1- und 2-log 10 Reduktion der CFU zwischen diesem Lungenmodell 30 und dem neutropenische Oberschenkel - Infektionsmodell bei Lungen Penetration 37 betrachtet wurde, 38 . Die Korrelation mit einer Neutropenie-Modell Lungeninfektion unter Verwendung von intranasalen Impfung war schlecht; jedoch GSK2251052 nicht produzieren mehr als eine statische Reaktion in dieser Studie 38. Dies kann auf die höhere bakterielle Inokulum zurückzuführen sein, die 8 log 10 KBE / Maus war im Vergleich mit 6 log <sub&gt; 10 KBE / Maus in die neutropenische Oberschenkel 37 und intratracheale Intubation 30 Modelle. Sammlung von Daten, wie dies ist kritisch für Benchmark, da es einen direkten Vergleich mit bestehenden Modellen und Korrelation mit klinischen Daten erlaubt die translatorische Vorhersagefähigkeit zu bewerten. Mehr weit verbreitete Verwendung des Modells Lungeninfektion intratracheale Intubation wird für diese Art von Analysen zusätzlicher Daten. Es gibt einige Einschränkungen dieser immunokompetente Pneumonie-Modell. Erstens ist es nicht gut geeignet Entstehung von spontanen Resistenz gegen die Bewertung, da die hohe allgemein bakterielle Inokulum für solche Studien führt zu streng einer Infektion erforderlich. Nach Versuchen, bakterielle Belastungen von 7 oder 8 log 10 CFU zu Beginn der Studie zu erreichen, hat eine schnelle Morbidität beobachtet (dh Tiere , immer moribund in weniger als 24 h) trotz sorgfältigem Waschen der Inokula vorbestehenden Toxine (Daten - Datei) zu entfernen. Eskann möglich sein, dieses Problem zu überwinden, indem sie größere Nagetiere verwenden. Ratten, besonders schwerer Ratten (&gt; 250 g), scheinen besser höher Inokula zu tolerieren als mit Mäusen verglichen, und kann für diese Art von Untersuchungen geeignet sein. Eine zweite Einschränkung ist, dass die Verwendung von Agar als infektions Enhancer ausschließen kann das Modell zur Bewertung bestimmter Host mit: Pathogen-Interaktionen. Es wird angenommen, daß der Agar ein geschütztes Brennpunkt liefert, bis Infektion vollständig innerhalb der Lunge festgestellt wird. Es ist möglich, den Impfstoff in Kochsalzlösung statt Agar liefern zu helfen, dieses Problem zu überwinden; jedoch ist zu beachten, dass dies nur eine Infektion mit einigen Isolaten produziert. Drittens gibt es eine steile Lernkurve in der Technik vertraut zu machen erforderlich. Das Verfahren kann empfindlich, vor allem bei Mäusen sein. Es ist leicht, die Metallkanüle in die Speiseröhre fälschlicherweise zu platzieren, und eine übermäßige Kraft auf Einstich entweder der Speiseröhre oder der Luftröhre führen. Eine sorgfältige Platzierung des Inokulums ist aucherforderlich oder Tiere können entweder nicht erholen oder nicht ausreichend angesteckt werden. Doch mit Geduld und Ausdauer kann man sehr beherrschen und die Technik schnell durchführen, flüssig und präzise. Durch das Entfernen der Anforderung für Neutropenie, zunehmende Robustheit und Reproduzierbarkeit, so dass die Ermittler mehr Krankheitserreger und Isolate zu untersuchen, die Flexibilität der experimentellen Design zu verbessern und eine anspruchsvolle Infektion Pharmakodynamik für eine Lungenentzündung zu charakterisieren, diese immunokompetente Modell Lungeninfektion fügt einen wesentlichen Wert auf die Antibiotika-Entdeckung Gemeinschaft. Die verstärkte Nutzung dieses Modells durch zusätzliche Ermittler wird dazu beitragen, die notwendige Benchmarking sorgen dafür breitere Akzeptanz zu gewinnen und weiterhin unterstützende Informationen für eine angemessene Interpretation bieten.

Die Bewertung der Wirksamkeit von Wirkstoffkandidaten in Tiermodellen der Infektion ist ein wichtiger Bestandteil des antibakteriellen Wirkstoff-Forschung. In vivo liefern Wirksamkeitsstudien wichtige Daten für die Entscheidungsfindung über die Spanne der Entdeckung Bemühungen, aus Aufklären Struktur-Aktivitäts - Beziehungen (SAR) und Blei chemischen Serie durch pharmakokinetische-pharmakodynamische Bestimmung Optimierung (PK / PD) Eigenschaften von Verbindungen und die Wahl der Dosis Unterstützung für klinische Entwicklung und Zulassung. Zahlreiche Tierinfektionsmodellen sind für diese Zwecke in der Literatur beschrieben. Eines der am häufigsten und am weitesten verbreiteten Modelle ist die neutropenischen Maus Oberschenkelinfektion, die von Eagle 1, 2 und später erweitert durch Vogelman und Craig 3, 4 Pionierarbeit geleistet wurde. Dieses Modell wurde für die Unterstützung Bestimmung der bakteriellen Anfälligkeit Grenzwerte und für die Bereitstellung von PK / PD-Ziele von unschätzbarem Wert menschlichen Dosierung zu führen. Es gibt viele Prüfungples , wo die Vorhersagefähigkeit dieses Modells hat 4-7 bewährt. Allerdings ist einer der Nachteile des Oberschenkels Infektionsmodell ist das Fehlen von direkter Bedeutung für Lungeninfektionen. Es gibt jetzt eine stärkere Betonung der Ort der Infektion in Tiermodellen an den Ort der Infektion beim Menschen entspricht; und somit zu untersuchen Verbindungen zur Behandlung von Lungenentzündung, ist es ideal, eine Lungeninfektionsmodell in Tieren zu verwenden. Mehrere Verfahren zur Lungeninfektionen bei Labortieren induziert wurden für die antibakterielle Wirksamkeit Studien einschließlich intranasale Inhalation, Aspiration über den Mund - Rachen - Route, Aerosolexposition und chirurgische intratracheale Inokulation 8 beschrieben und verwendet. In vielen Fällen müssen die Tiere (vor allem Mäuse) erste neutropenische gemacht werden, um eine stabile Lungeninfektion zu erreichen. Trotz dieser stark immungeschwächten Zustand, die Anzahl der bakteriellen Pathogenen und Stämme, die tragfähige Infektionen bei Nagern zu produzieren istbegrenzt. Zum Beispiel kann es schwierig sein , erfolgreich Haemophilus influenzae oder Acinetobacter baumannii in Pneumonie Modellen 9, 10, und noch mehr virulenten Pathogenen wie Streptococcus pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa und Klebsiella pneumoniae, kann pose 11-13 Herausforderungen zu etablieren. Im Jahr 1991 beschrieb Smith ein Modell Lungeninfektion bei Immun entwöhnten Ratten , bei denen eine Infektion durch Einträufeln Bakterien direkt in die Lunge über eine einfache nicht - chirurgischen intratracheale Intubation Verfahren 14 hergestellt wurde. Berry et al. später geändert , um die Verfahren für Mäuse 15 zu infizieren. Unter Verwendung eines Agar-basierten Impfstoff, diese Impfung Technik induziert robuste Lungeninfektionen in immunokompetente Ratten und Mäuse mit S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa und A. baumannii. Es ist offen für ein breites Spektrum von Isolaten, einschließlich der Beherbergung verschiedene widerance Determinanten und solche, die nicht über eine tragfähige Infektion durch andere Impfung Wege produzieren. Es ermöglicht auch die Wirksamkeit bei immunokompetente Tieren bestimmt werden, eine Bedingung, die für Patientengruppen relevanter ist als die traditionellen neutropenische Mausmodell ist, das nicht stark immungeschwächten sind. Die Konsistenz und Zuverlässigkeit dieses Modells auf mehrere Krankheitserreger und Isolate macht es für antibakterielle Wirksamkeit Studien gut geeignet.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>TSA II Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>4321261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chocolate II Agar</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>4321267</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BBL Brain Heart Infusion Broth Modified</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>299070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BBL Trypticase Soy Broth with 20% Glycerol</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>297808</td>
			<td>storage media for frozen stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inoculating loop</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>251586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride, USP</td>
			<td>Baxter Healthcare Corporation</td>
			<td>NDC 0338-0048-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Difco Nutrient Agar</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>213000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 ml free standing centrifuge tube with cap</td>
			<td>EverGreen Scientific</td>
			<td>222-3530-G80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Polypropylene Conical Tube 30 x115mm</td>
			<td>Falcon, a Corning Brand</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14 ml Polypropylene Round-Bottom Tube 17 x 100mm</td>
			<td>Falcon, a Corning Brand</td>
			<td>352059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guide Tool</td>
			<td>Intek Services Ltd</td>
			<td>GT01</td>
			<td>custom-made metal cannula for rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90&#39; Portex tubing</td>
			<td>SAI</td>
			<td>POR-080-100</td>
			<td>plastic cannula for rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml TB syringe slip tip</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle 25G x 5/8</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal feeding needle - straight 20x3&#34; 2-1/4</td>
			<td>Popper and Sons, Inc</td>
			<td>7903</td>
			<td>used to create metal cannula for mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intramedic polyethylene tubing</td>
			<td>Clay Adams brand - Becton Dickinson and Company</td>
			<td>427401</td>
			<td>plastic cannula for mouse&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75 TN 5.0ul syringe 26s/2&#34;/2</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>87930</td>
			<td>HPLC glass injection syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyrex tube, culture 25x150 screwcap with rubber liner</td>
			<td>Corning</td>
			<td>9825-25</td>
			<td>to autoclave/store metal cannulae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% isopropyl alcohol</td>
			<td>Vi-Jon (Swan)</td>
			<td>NDC 0869-0810-43</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Piramal Healthcare</td>
			<td>NDC 66794-013-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stomacher&#160;</td>
			<td>Seward</td>
			<td>Stomacher80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stomacher 80 classic bags</td>
			<td>Seward</td>
			<td>BA6040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Assay plate, 96 well, round bottom</td>
			<td>Costar, Corning Inc</td>
			<td>3795</td>
			<td>optional, for serial diluting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Omni Plates</td>
			<td>Hardy</td>
			<td>#A127</td>
			<td>optional, rectangular blood plates</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a robust pneumonia model in immunocompetent rodents to evaluate antibacterial efficacy against s. pneumoniae, h. influenzae, k. pneumoniae, p. aeruginosa or a. baumannii

Wirksamkeit von Kandidatenantibakterielle Behandlungen müssen in Tiermodellen der Infektion als Teil der Entdeckung und Entwicklung von Verfahren, vorzugsweise in Modellen gezeigt werden, die die beabsichtigte klinische Indikation nachahmen. Ein Verfahren zum Induzieren robust Lungeninfektionen bei immunkompetenten Ratten und Mäusen beschrieben , die durch S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae oder A. baumannii zur Bewertung von Behandlungen in einem Modell der schweren Lungenentzündung verursacht werden können. Die Tiere werden betäubt und ein Agar-basierten Impfstoff wird tief in die Lunge über nicht-chirurgische intratracheale Intubation hinterlegt. Die sich ergebende Infektion ist konsistent reproduzierbar und stabil für mindestens 48 h und bis zu 96 h für die meisten Isolate. Studien mit vermarktet Antibakterika haben eine gute Korrelation zwischen in vivo - Wirksamkeit unter Beweis gestellt und in - vitro - Empfindlichkeit und Übereinstimmung zwischen Pharmakokinetik / Pharmakodynamik Ziele bestimmtin diesem Modell und klinisch akzeptierten Ziele beobachtet. Obwohl es eine anfängliche Zeitaufwand, wenn die Technik Lernen, kann es schnell und effizient durchgeführt werden, sobald Eignungs erreicht wird. Die Vorteile des Modells gehören Beseitigung der neutropenische Anforderung, erhöhte Robustheit und Reproduzierbarkeit, die Fähigkeit, mehr Krankheitserreger und isoliert, eine verbesserte Flexibilität in Studiendesign und Einrichtung einer herausfordernden Infektion in einem immunkompetenten Wirts zu studieren.

Die Werkzeuge erforderlich, die Ausrichtung des Tieres, und die Tiefe der Intubation sind in Abbildung 1 dargestellt. ist auch ein repräsentatives Beispiel der Kolonien auf eine Agar-Platte nach serieller Verdünnung und dreifach Plattieren einer Lungenhomogenat Probe gezeigt. Eine Erhöhung der bakteriellen Belastung von mehreren log 10 CFU über dem Ausgangswert steuert , ist typischerweise in infizierten Lunge für die meisten bakteriellen Isolate, auch bei 96 h nach der Infektion beobachtet, und die Variabilität zwischen den Tieren niedrig ist (Abbildung 2). Für einige H. influenzae, kann es wenig Wachstum; Allerdings beginnen die Infektion sollte nicht selbst beheben innerhalb eines 48 oder 96 h Zeitperiode (2B). Diese Lungeninfektionsmodell kann bei der Optimierung von Blei chemischen Serie verwendet werden SAR zu unterstützen, wie 16 in Figur 3 für repräsentative Verbindungen von zwei unterschiedlichen Serien gezeigt, 17. Es bietet eine konsistente und reproduzierbare erfüllthod für PK / PD in immunokompetente Tiere Bewertung und verwendet wurde , dass der freie Arzneimittel Fläche unter der Konzentrations-Zeit - Kurve über die minimale Hemmkonzentration (fAUC / MIC) mit Wirksamkeit eines neuartigen Polypeptid Deformylase (PDF) Inhibitor gegen S. pneumoniae korreliert , um zu bestimmen und H. influenzae (Abbildung 4). Zusätzlich von der fAUC / MIC Ziele für Stase und eine 1-log Reduktion in CFU 10 Baseline - Kontrollen in 11 S. pneumoniae und H. influenzae 5 Isolaten (Tabelle 1) 18 bestimmt. Die Kopplung dieser Infektionsmodell mit einem Arzneimittelabgabesystem menschlichen pharmakokinetischen Profile in Ratten neu schafft ein leistungsfähiges Werkzeug für die menschliche Dosierungsschemata vor der klinischen Studien zu bewerten. Ein Beispiel hierfür ist in Tabelle 2 zusammengefasst , die zeigt , dass eine Extended-Release - Formulierung von Amoxicillin-Clavulanat effektiver als bestehende Dosierungsschemata für Organismen mit eleva warted MIC - Werte 19. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/55068/55068fig1.jpg" /> Abbildung 1: Nonsurgical Intratracheale Intubation. Die Werkzeuge werden für Intubation die Ratte (A) und der Maus (B) gezeigt. Einmal betäubt, sollte das Tier positioniert werden , wie in C gezeigt, mit dem Kopf nach rechts und Schwanz nach links , wenn die Person , die Technik der Durchführung ist Rechtshänder. Stellen Sie den linken Zeigefinger sanft auf den Hals zu helfen, die Trachealringe zur Bestätigung der korrekten Kanülenplatzierung abtasten. Das Inokulum sollte tief in die linke Lunge platziert werden, wie in der ventralen Ansicht eines Rattenlunge (D) gezeigt ist . Die Kolonien wachsen auf Agar nach Reihenverdünnung und Plattierung einer Probe sollte gezeigt , dass in E ähnlich erscheinen. 1D Copyright © Gill Smith [Labortiere, Band 25 (1991), G. Smith, Aeinfache , nicht-chirurgische Methode der intrabronchiale Instillation für die Einrichtung von Atemwegsinfektionen bei der Ratte, Seiten 46-49] 14. Abdruck mit freundlicher Genehmigung. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55068/55068fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55068/55068fig1large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/55068/55068fig2.jpg" /> Abbildung 2: Repräsentative Beispiele für Bakterienwachstum in den Lungen infizierter Tiere. Mittelwert ± Standardabweichung CFU Daten von N = 5 Tiere / Gruppe wird für verschiedene Isolate von S. pneumoniae (A) gezeigt, H. influenzae (B), P. aeruginosa (C), K. pneumoniae (D) und A. baumannii (E). Der erste Balken jedes Paares (hellgrau) ist das Basis bacterial Belastung bei 1 oder 2 h nach der Infektion, während die zweite Bar ist der End-of-Studie Wachstumskontrolle erfolgt nach 48 Stunden nach der Infektion (dunkelgrau) oder 96 h nach der Infektion (schwarz). Keine Daten Zensierung Methoden angewendet wurden; Somit sind diese Ergebnisse von Daten aus allen 5 Tieren pro Gruppe. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55068/55068fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55068/55068fig2large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/55068/55068fig3.jpg" /> Abbildung 3: Die Wirksamkeit von verschiedenen chemischen Serie während der Leitstrukturoptimierung auswerten. Lung Infektion Modelle, die beschriebenen Techniken wurden verwendet, um Struktur-Aktivitäts-Beziehungen im Rahmen der abacterial Typ IIA Topoisomerase-Programm zu erkunden. Viel versprechende Verbindungen 7 und 1 wurden gegen ausgewertet quinolone anfälligen (A) 16 oder Chinolon-resistente(B) 17 Isolate von S. pneumoniae sind. Jedes Symbol steht für CFU aus der Lunge von einer Ratte bestimmt mit Linien, die die Gruppe Mittelwert und Standardabweichung. Untere Grenze (LLQ) betrug 1,7 log 10 KBE / Lunge. Verbindungen wurden gewogen (56 oder 112 mg reines Molekül frei parent), in 9 ml sterilem Wasser gelöst, verdünnt 3 mL in 3 mL Wasser (1: 1) und durch orale Gabe von 1 ml / 125 g Ratte zweimal täglich verabreicht ( 6 - 7 h auseinander) für 2 Tage, beginnend bei 1 h nach der Infektion. Nicht-behandelten Kontrollen (NTC) wurden bei 1 h nach der Infektion für die Basislinie abgetastet oder mit Kochsalzlösung behandelt, und am Ende der Studie (48 h) zum Wachstumskontrollen abgetastet. 3A nachgedruckt von Bioorganische &amp; Medicinal Chemistry Letters, Band 21, TJ Miles et al, Roman cyclohexyl-Amide als potente antibakterielle Mittel Targeting bakterielle Typ IIA topoisomerases, Seiten 7483 -. 7488, Copyright (2011) 16, mit Genehmigung von Elsevier.3B nachgedruckt von Bioorganische &amp; Medicinal Chemistry Letters, Band 26, TJ Miles et al, Roman tricyclics (zB GSK945237) als potente Inhibitoren von bakteriellen Typ IIA topoisomerases, Seiten 2464 -. 2469, Copyright (2016) 17, mit Genehmigung von Elsevier. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55068/55068fig3large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55068/55068fig3large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Abbildung 4" src="/files/ftp_upload/55068/55068fig4.jpg" /> Abbildung 4: PK / PD - Charakterisierung eines neuen PDF - Inhibitor. Emax - Modelle wurden unter Verwendung erstellt Wirksamkeitsdaten in immunkompetenten Mäusen Dosis im Bereich in der Lunge infiziert mit Isolaten von S. pneumoniae (A) oder H. influenzae (B) PK / PD Ziele für einen neuen PDF - Inhibitor 18 zu bestimmen. Kreisestellen die mittlere bakterielle Belastung von 4 bis 5 Mäuse / Gruppe mit unterschiedlichen Dosen der Verbindung behandelt. Die Analysen wurden durchgeführt, um korrelieren Wirksamkeit mit frei Medikament 24 h AUC (offene Kreise) oder AUC / MIC (gefüllte Kreise). Nachdruck mit freundlicher Genehmigung, Copyright © Amerikanischen Gesellschaft für Mikrobiologie, [Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Band 60, 2016, Seiten 180-189] 18. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55068/55068fig4large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier</a> , um <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55068/55068fig4large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"> Stase </td><td colspan="2"> 1-log 10 Reduzierung </td><td></td></tr><tr><td> Organismus </td><td> MIC (ug / ml) </td><td> R 2 für Linie fit (%) </td><td> fAUC </td><td> fAUC / MIC </td><td> fAUC </td><td> fAUC / MIC </td><td> Max Tötung (log 10 Reduktion) </td></tr><tr><td> S. pneumoniae </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10127 </td><td> 0,25 </td><td> 99,9 </td><td> 2.0 </td><td> 8.1 </td><td> 3.6 </td><td> 14.4 </td><td> 2.8 </td></tr><tr><td> 1316009S </td><td> 0,25 </td><td> 96,1 </td><td> 6.5 </td><td> 26.0 </td><td> 15.1 </td><td> 60.3 </td><td> 1.8 </td></tr><tr><td> ATCC10813 </td><td> 0,5 </td><td> 100 </td><td> 8.4 </td><td> 16.9 </td><td> 22.2 </td><td> 44.5 </td><td> 1.2 </td></tr><tr><td> 1307007S </td><td> 1 </td&gt; <td> 95,8 </td><td> 16.1 </td><td> 16.1 </td><td> 20.1 </td><td> 20.1 </td><td> 2.7 </td></tr><tr><td> ATCC6303 </td><td> 1 </td><td> 99,8 </td><td> 19.8 </td><td> 19.8 </td><td> 24.8 </td><td> 24.8 </td><td> 2.8 </td></tr><tr><td> 1629 </td><td> 2 </td><td> 100 </td><td> 15.8 </td><td> 7.9 </td><td> 21.2 </td><td> 10.6 </td><td> 2.4 </td></tr><tr><td> 298443 </td><td> 2 </td><td> 99,9 </td><td> 26.5 </td><td> 13.2 </td><td> 31.0 </td><td> 15.5 </td><td> 2.3 </td></tr><tr><td> 336808 </td><td> 2 </td><td> 86 </td><td> 8.2 </td><td> 4.2 </td><td> 19.0 </td><td> 9.5 </td><td> 2.6 </td></tr><tr><td> 338860 </td><td> 2 </td><td> 99.5 </td><td> 2.9 </td><td> 1.5 </td><td> 6.7 </td><td> 3.4 </td><td> 2.8 </td></tr><tr><td> &amp; #160; 340449 </td><td> 2 </td><td> 94,6 </td><td> 8.0 </td><td> 4.0 </td><td> 14.9 </td><td> 7.4 </td><td> 2.1 </td></tr><tr><td> L11259 </td><td> 2 </td><td> 100 </td><td> 7.1 </td><td> 3.5 </td><td> 9.0 </td><td> 4.5 </td><td> 2.0 </td></tr><tr><td> Mittelwert ± SD </td><td> NA ein </td><td> N / A </td><td> 11,0 ± 7,5 </td><td> 11,0 ± 7,9 </td><td> 17,0 ± 8,2 </td><td> 19,5 ± 17,8 </td><td> 2,3 ± 0,5 </td></tr><tr><td> Median </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 8.2 </td><td> 8.1 </td><td> 19.0 </td><td> 14.4 </td><td> 2.4 </td></tr><tr><td> H. influenzae </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 1998-100-126H </td><td> 1 </td><td> 99,7 </td><td> 7.3 </td><td> 7.3 </td><td> 13.4 </td><td> 13.4 </td><td> 2.9 </td></tr><tr><td> 503-008H </td><td> 1 </td><td> 99,8 </td><td> 7.1 </td><td> 7.1 </td><td> 13.9 </td><td> 13.9 </td><td> 2.7 </td></tr><tr><td> 08003H </td><td> 2 </td><td> 99,9 </td><td> 14.5 </td><td> 7.2 </td><td> 16.7 </td><td> 8.3 </td><td> 2.7 </td></tr><tr><td> H128 </td><td> 2 </td><td> 96,6 </td><td> 15.3 </td><td> 7.6 </td><td> 26.0 </td><td> 13.0 </td><td> 2.7 </td></tr><tr><td> 19001H </td><td> 4 </td><td> 91.9 </td><td> 14.8 </td><td> 3.7 </td><td> 37.3 </td><td> 9.3 </td><td> 3.0 </td></tr><tr><td> Mittelwert ± SD </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 11,8 ± 4,2 </td><td> 6,6 ± 1,6 </td><td> 21,5 ± 10,2 </td><td> 11,6 ± 2,6 </td><td> 2,8 ± 0,1 </td></tr><tr><td> Median </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 14.5 </td><td> 7.2 </td><td> 16.7 </td><td> 13.0 </td><td> 2.7 </td></tr><tr><td> ein NA, nicht anwendbar. </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabelle 1: PK / PD - Targets zur Herstellung eines neuen PDF - Inhibitor gegen S. pneumoniae und H. influenzae - Isolaten. Frei Arzneimittel AUC und die AUC / MIC Ziele für Stase und eine 1-log 10 Reduktion der CFU von der Basislinie wurden für 11 S. pneumoniae bestimmt und 5 H. influenzae in immunokompetente Mäusen in der Lunge infiziert und mit Verbindung 18 behandelt. Die data wurde verwendet, wählen Sie die menschliche Dosen für die klinische Entwicklung zu helfen. Diese Tabelle wurde mit freundlicher Genehmigung, Copyright © Amerikanischen Gesellschaft für Mikrobiologie angepasst und neu aufgelegt, [Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Band 60, 2016, Seiten 180-189] 18. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td rowspan="2"> Behandlungsgruppe ein </td><td colspan="8"> Mittlere log 10 S. pneumoniae (KBE / Lunge) b ± SD für Stamm (AMX / CA MIC): </td></tr><tr><td> 05010S (2 ug / ml) </td><td> 16001S c (4 ug / ml) </td><td> 16001S (4 ug / ml) </td><td> 30005S (4 ug / ml) </td><td> 20009S (4 ug / ml) </td><td> 05003S (8 &amp; mgr; g / mL) </td><td> 404053 (8 &amp; mgr; g / mL) </td><td> 47003S (8 &amp; mgr; g / mL) </td></tr><tr><td> Steuern </strong&gt; </td><td> 7,3 ± 0,4 </td><td> 7,0 ± 0,8 </td><td> 5,7 ± 1,2 </td><td> 7,1 ± 0,7 </td><td> 7,1 ± 0,4 </td><td> 6,4 ± 0,6 </td><td> 6,8 ± 0,4 </td><td> 6,0 ± 0,3 </td></tr><tr><td> AMX / CA </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2.000 / 125 mg zweimal täglich (Verhältnis 16: 1) </td><td> ≤ 1,7 ** </td><td> 2,8 ± 1,2 ** </td><td> 2,2 ± 0,8 ** </td><td> 2,3 ± 0,9 ** </td><td> 2,5 ± 0,9 ** </td><td> 2,0 ± 0,9 ** </td><td> 3,8 ± 1,4 ** </td><td> 1,8 ± 0,2 ** </td></tr><tr><td> 1.000 / 125 mg tid (Verhältnis 8: 1) </td><td> NT </td><td> NT </td><td> 2,8 ± 0,5 ** </td><td> 2,7 ± 1,3 ** </td><td> 3,3 ± 0,9 ** </td><td> 4,9 ± 0,5 ** </td><td> 6,6 ± 1,3 </td><td> 4,7 ± 0,7 ** </td></tr><tr> &lt;td&gt; 875/125 mg tid (Verhältnis 7: 1) </td><td> NT </td><td> NT </td><td> 3,0 ± 1,3 * </td><td> 2,1 ± 0,7 ** </td><td> 3,2 ± 0,4 ** </td><td> 5,2 ± 0,9 * </td><td> 6,4 ± 0,6 </td><td> 4,9 ± 0,4 ** </td></tr><tr><td> 875/125 mg zweimal täglich (Verhältnis 7: 1) </td><td> NT </td><td> NT </td><td> 4,5 ± 1,2 * </td><td> 5,6 ± 1,3 * </td><td> 5,2 ± 0,7 ** </td><td> 6,3 ± 0,7 </td><td> 6,4 ± 0,7 </td><td> 5,5 ± 0,4 </td></tr><tr><td> 500/125 mg tid (Verhältnis 4: 1) </td><td> 3,1 ± 1,3 ** </td><td> 4,5 ± 0,9 ** </td><td> NT </td><td> NT </td><td> NT </td><td> NT </td><td> NT </td><td> NT </td></tr><tr><td> Azithromycin, 1000/500 mg od </td><td> NT </td><td> NT </td><td> NT </td><td> 5,8 ± 2,0 </td><td> 7,1 ± 0,9 </td><td> 3,1 ± 1,0 ** </td><td> 6,6 ± 0,4 </td><td> 6.07; 0,6 </td></tr><tr><td> Levofloxacin, 500 mg od </td><td> NT </td><td> NT </td><td> 4,2 ± 0,8 * </td><td> 5,7 ± 0,8 * </td><td> 4,9 ± 0,8 ** </td><td> 3,0 ± 1,3 ** </td><td> 3,5 ± 0,2 ** </td><td> 3,9 ± 0,8 ** </td></tr><tr><td rowspan="2"> Behandlungsgruppe d </td><td colspan="8"> Die mittlere log 10 H. influenzae (KBE / Lunge) ± SD für Stamm: </td></tr><tr><td colspan="4"> H128 (β-Lactamase - positiv) </td><td colspan="4"> Chesterfieldsofa (β-Lactamase - negativ, Ampicillin - resistente) </td></tr><tr><td> Steuern </td><td colspan="4"> 6,4 ± 0,6 </td><td colspan="4"> 6,7 ± 0,6 </td></tr><tr><td> AMX / CA </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2.000 / 125 mg zweimal täglich (Verhältnis 16: 1) </td><td colspan="4"> 2,0 ± 0,7 ** </td><td colspan="4"> 3,1 ± 0,9 ** </td></tr><tr><td> 1.000 / 125 mg tid (Verhältnis 8: 1) </td><td colspan="4"> 2,1 ± 1,0 ** </td><td colspan="4"> 3,6 ± 1,1 ** </td></tr><tr><td> 875/125 mg tid (Verhältnis 7: 1) </td><td colspan="4"> 2,8 ± 1,3 ** </td><td colspan="4"> 3,8 ± 1,3 ** </td></tr><tr><td> 875/125 mg zweimal täglich (Verhältnis 7: 1) </td><td colspan="4"> 2,0 ± 0,8 ** </td><td colspan="4"> 5,1 ± 1,1 ** </td></tr><tr><td> Azithromycin, 1000/500 mg od </td><td colspan="4"> 3,2 ± 1,7 * </td><td colspan="4"> 5,8 ± 1,1 </td></tr><tr><td> Levofloxacin, 500 mg od </td><td colspan="4"> ≤ 1,7 ** </td><td colspan="4"> ≤ 1,7 ** </td></tr><tr><td colspan="9"> ein AMX / CA, Amoxicillin-Clavulanat; Gebot, zweimal täglich; tid., dreimal pro Tag; od, einmal pro Tag. </td></tr><tr><td colspan="9"> b Die Nachweisgrenze lag bei &lt;1,7; * Signifikant verschieden von der Kontrolle (P ≤ 0,05); ** Signifikant verschieden von der Kontrolle (P ≤ 0,01); NT, nicht getestet. </td></tr><tr><td colspan="9"> C - Stamm 16001S wurde in zwei getrennten Experimenten getestet. </td></tr><tr><td colspan="9"> d Amoxicillin-Clavulanat 500/125 mg (4: 1) dreimal am Tag nicht gegen die H. influenzae - Stämmen getestet. </td></tr></tbody></table> Tabelle 2: Wirksamkeit von Recreated Humanplasma Belichtungsprofile für unterschiedliche Amoxicillin / Clavulanate Dosierungen. Erzeugten Daten in immunokompetente Ratten in der Lunge infiziert mit Isolaten von S. pneumoniae oder H. influenzae dieses Modell gezeigt , dass eine verbesserte Formulierung von Amoxicillin-Clavulanat (2000/125 mg zweimal täglich) war wirksamer als Standard - Dosierungen gegenüber Isolaten mit erhöhten Empfindlichkeit in vitro 19. Diese Tabelle wurde mit freundlicher Genehmigung, Copyright © Amerikanischen Gesellschaft für Mikrobiologie angepasst und neu aufgelegt, [Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Band 49, 2005, Seiten 908-915] 19.

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A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

A method for establishing lung infections in immunocompetent rodents is described. With proficiency, this method can be performed quickly and easily to induce stable infection with many isolates of S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae and A. baumannii.

A Robust Pneumonia Modell in intaktem Immunsystem Nagetiere zur Bewertung antibakterieller Wirksamkeit gegen<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. influenzae</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; oder<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

14.5K Aufrufe.  GlaxoSmithKline. A method for establishing lung infections in immunocompetent rodents is described. With proficiency, this method can be performed quickly and easily to induce stable infection with many isolates of S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae and A. baumannii.

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Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of infection with influenza virus alone. Instead, most individuals are thought to have succumbed to a secondary bacterial infection, predominately caused by the bacterium Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). The synergistic relationship between infections caused by influenza virus and the pneumococcus has subsequently been observed during the 1957 Asian influenza virus pandemic, as well as during seasonal outbreaks of the virus (reviewed in 1, 2). Here, we describe a protocol used to investigate the mechanism(s) that may be involved in increased morbidity as a result of concurrent influenza A virus and S. pneumoniae infection. We have developed an infant murine model to reliably and reproducibly demonstrate the effects of influenza virus infection of mice colonised with S. pneumoniae. Using this protocol, we have provided the first insight into the kinetics of pneumococcal transmission between co-housed, neonatal mice using in vivo imaging 3.

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

A concurrent infection with influenza A virus is one of the factors implicated in the induction of invasive pneumococcal disease during asymptomatic Streptococcus pneumoniae carriage. Here we describe a mixed infection method using infant mice to investigate the synergism between these two respiratory pathogens.

Mit Bioluminescent Imaging, um Synergie von Untersuchen Streptococcus pneumoniae Und Influenza A Virus in Infant Mäuse

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not representative of the behavior, status or phenotype of single cells. Due to this new insight the number of single cell studies rises continuously (for recent reviews see 1,2,3). However, many of the single cell techniques applied do not allow monitoring the development and behavior of one specific single cell in time (e.g. flow cytometry or standard microscopy).
Here, we provide a detailed description of a microscopy method used in several recent studies 4, 5, 6, 7, which allows following and recording (fluorescence of) individual bacterial cells of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae through growth and division for many generations. The resulting movies can be used to construct phylogenetic lineage trees by tracing back the history of a single cell within a population that originated from one common ancestor. This time-lapse fluorescence microscopy method cannot only be used to investigate growth, division and differentiation of individual cells, but also to analyze the effect of cell history and ancestry on specific cellular behavior. Furthermore, time-lapse microscopy is ideally suited to examine gene expression dynamics and protein localization during the bacterial cell cycle. The method explains how to prepare the bacterial cells and construct the microscope slide to enable the outgrowth of single cells into a microcolony. In short, single cells are spotted on a semi-solid surface consisting of growth medium supplemented with agarose on which they grow and divide under a fluorescence microscope within a temperature controlled environmental chamber. Images are captured at specific intervals and are later analyzed using the open source software ImageJ.

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

This protocol provides a step-by-step procedure to monitor single cell behavior of different bacteria in time using automated fluorescence time-lapse microscopy. Furthermore, we provide guidelines how to analyze the microscopy images.

Live Cell Imaging von Bacillus subtilis Und Streptococcus pneumoniae Verwendung von Automated Zeitraffer-Mikroskopie

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

There is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from cystic fibrosis (CF) patients. Existing methods rely on single or a few isolates grown aerobically and planktonically. Predetermined cut-offs are used to define whether the bacteria are sensitive or resistant to any given antibiotic1. However, during chronic lung infections in CF, P. aeruginosa populations exist in biofilms and there is evidence that the environment is largely microaerophilic2. The stark difference in conditions between bacteria in the lung and those during diagnostic testing has called into question the reliability and even relevance of these tests3.
 Artificial sputum medium (ASM) is a culture medium containing the components of CF patient sputum, including amino acids, mucin and free DNA. P. aeruginosa growth in ASM mimics growth during CF infections, with the formation of self-aggregating biofilm structures and population divergence4,5,6. The aim of this study was to develop a microtitre-plate assay to study antimicrobial susceptibility of P. aeruginosa based on growth in ASM, which is applicable to both microaerophilic and aerobic conditions.
 An ASM assay was developed in a microtitre plate format. P. aeruginosa biofilms were allowed to develop for 3 days prior to incubation with antimicrobial agents at different concentrations for 24 hours. After biofilm disruption, cell viability was measured by staining with resazurin. This assay was used to ascertain the sessile cell minimum inhibitory concentration (SMIC) of tobramycin for 15 different P. aeruginosa isolates under aerobic and microaerophilic conditions and SMIC values were compared to those obtained with standard broth growth. Whilst there was some evidence for increased MIC values for isolates grown in ASM when compared to their planktonic counterparts, the biggest differences were found with bacteria tested in microaerophilic conditions, which showed a much increased resistance up to a &gt;128 fold, towards tobramycin in the ASM system when compared to assays carried out in aerobic conditions.
 The lack of association between current susceptibility testing methods and clinical outcome has questioned the validity of current methods3. Several in vitro models have been used previously to study P. aeruginosa biofilms7, 8. However, these methods rely on surface attached biofilms, whereas the ASM biofilms resemble those observed in the CF lung9 . In addition, reduced oxygen concentration in the mucus has been shown to alter the behavior of P. aeruginosa2 and affect antibiotic susceptibility10. Therefore using ASM under microaerophilic conditions may provide a more realistic environment in which to study antimicrobial susceptibility.

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Current diagnostic antimicrobial susceptibility testing relies on the planktonic growth of isolates in nutrient rich, aerobic conditions. Here, we employ an alternative artificial sputum medium to study antimicrobial susceptibility of Pseudomonas aeruginosa biofilms under both aerobic and microaerophilic conditions more representative of the cystic fibrosis lung.

Einsatz von künstlichen Sputum Mittlere bis antibiotische Wirkung gegen die getestet<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; AGB in einen engeren Bezug zu den Mukoviszidose-Lunge

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing the mucosal surface of the nasopharynx, where it can reside, multiply and eventually overcome host defences to invade to other tissues of the host. Establishment of an infection in the normally lower respiratory tract results in pneumonia. Alternatively, the bacteria can disseminate into the bloodstream causing bacteraemia, which is associated with high mortality rates2, or else lead directly to the development of pneumococcal meningitis. Understanding the kinetics of, and immune responses to, nasopharyngeal colonization is an important aspect of S. pneumoniae infection models.
Our mouse model of intranasal colonization is adapted from human models3 and has been used by multiple research groups in the study of host-pathogen responses in the nasopharynx4-7. In the first part of the model, we use a clinical isolate of S. pneumoniae to establish a self-limiting bacterial colonization that is similar to carriage events in human adults. The procedure detailed herein involves preparation of a bacterial inoculum, followed by the establishment of a colonization event through delivery of the inoculum via an intranasal route of administration. Resident macrophages are the predominant cell type in the nasopharynx during the steady state. Typically, there are few lymphocytes present in uninfected mice8, however mucosal colonization will lead to low- to high-grade inflammation (depending on the virulence of the bacterial species and strain) that will result in an immune response and the subsequent recruitment of host immune cells. These cells can be isolated by a lavage of the tracheal contents through the nares, and correlated to the density of colonization bacteria to better understand the kinetics of the infection.

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Colonization of the murine nasopharynx with Streptococcus pneumoniae and the subsequent extraction of adherent or recruited cells is described. This technique involves flushing the nasopharynx and collection of the fluid through the nares and is adaptable for various readouts, including differential cell quantification and analysis of mRNA expression in situ.

Charakterisierung von Entzündungsreaktionen während der intranasalen Kolonisation mit Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact cellular functions, including energetics and signal transductions. While both fluorescent and electrophysiological methods, including electrode usage and patch-clamping, have been well developed for measuring these events in eukaryotic cells, methodology for measuring similar events in microorganisms have proven more challenging to develop given their small size in combination with the more complex outer surface of bacteria shielding the membrane. During our studies of death-initiation in Streptococcus pneumoniae (pneumococcus), we wanted to elucidate the role of membrane events, including changes in polarity, integrity, and intracellular ion concentrations. Searching the literature, we found that very few studies exist. Other investigators had monitored radioisotope uptake or equilibrium to measure ion fluxes and membrane potential and a limited number of studies, mostly in Gram-negative organisms, had seen some success using carbocyanine or oxonol fluorescent dyes to measure membrane potential, or loading bacteria with cell-permeant acetoxymethyl (AM) ester versions of ion-sensitive fluorescent indicator dyes. We therefore established and optimized protocols for measuring membrane potential, rupture, and ion-transport in the Gram-positive organism S. pneumoniae. We developed protocols using the bis-oxonol dye DiBAC4(3) and the cell-impermeant dye propidium iodide to measure membrane depolarization and rupture, respectively, as well as methods to optimally load the pneumococci with the AM esters of the ratiometric dyes Fura-2, PBFI, and BCECF to detect changes in intracellular concentrations of Ca2+, K+, and H+, respectively, using a fluorescence-detection plate reader. These protocols are the first of their kind for the pneumococcus and the majority of these dyes have not been used in any other bacterial species. Though our protocols have been optimized for S. pneumoniae, we believe these approaches should form an excellent starting-point for similar studies in other bacterial species.

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Unlike that seen for eukaryotes, there is a paucity of studies that detail membrane depolarization and ion concentration changes in bacteria, primarily as their small size makes conventional methods of measurement difficult. Here, we detail protocols for monitoring such events in the significant Gram-positive pathogen Streptococcus pneumoniae utilizing fluorescence techniques.

Überwachen von Änderungen in Membran-Polarity, Membrane Integrity und intrazelluläre Ionenkonzentrationen in<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Verwenden von Fluoreszenzfarbstoffen

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal epidemiology, capsular serotyping can provide useful information for vaccine efficacy and impact studies.&#160;The Quellung reaction is the gold standard method for pneumococcal capsular serotyping. The method involves testing a pneumococcal cell suspension with pooled and specific antisera directed against the capsular polysaccharide. The antigen-antibody reactions are observed microscopically. The protocol has three main steps: 1) preparation of a bacterial cell suspension, 2) mixing of cells and antisera on a glass slide, and 3) reading the Quellung reaction using a microscope. The Quellung reaction is reasonably simple to perform and can be applied wherever a suitable microscope and antisera are available.

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

The Quellung reaction is the gold standard technique for serotyping Streptococcus pneumoniae. This technique utilizes a microscope and specific pneumococcal antisera and is commonly used in reference and research laboratories worldwide.

Kapsel Serotypisierung von<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Verwenden der Quellung Reaktion

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major cause of morbidity and mortality world-wide. Current vaccines target the pneumococcal capsule, and there are over 90 capsular serotypes. Serotyping pneumococcal isolates is therefore important for assessing the impact of vaccination programs and for epidemiological purposes. The World Health Organization has recommended latex agglutination as an alternative method to the &#8216;gold standard&#8217; Quellung test for serotyping pneumococci. Latex agglutination is a relatively simple, quick and inexpensive method; and is therefore suitable for resource-poor settings as well as laboratories with high-volume workloads. Latex agglutination reagents can be prepared in-house utilizing commercially-sourced antibodies that are passively attached to latex particles. This manuscript describes a method of production and quality control of latex agglutination reagents, and details a sequential testing approach which is time- and cost-effective. 
This method of production and quality control may also be suitable for other testing purposes.

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Latex agglutination testing is a simple, rapid and inexpensive method for serotyping Streptococcus pneumoniae, and has also been widely applied in diagnostic microbiology. This manuscript describes the in-house production of latex agglutination reagents, quality control procedures and the application of this technique to pneumococcal serotyping.

Kapsel Serotypisierung<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Durch Latexagglutination

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

Image-based Flow Cytometry Technique to Evaluate Changes in Granulocyte Function In Vitro

Granulocytes play a key role in the body&#8217;s innate immune response to bacterial and viral infections. While methods exist to measure granulocyte function, in general these are limited in terms of the information they can provide. For example, most existing assays merely provide a percentage of how many granulocytes are activated following a single, fixed length incubation. Complicating matters, most assays focus on only one aspect of function due to limitations in detection technology. This report demonstrates a technique for simultaneous measurement of granulocyte phagocytosis of bacteria and oxidative burst. By measuring both of these functions at the same time, three unique phenotypes of activated granulocytes were identified: 1) Low Activation (minimal phagocytosis, no oxidative burst), 2) Moderate Activation (moderate phagocytosis, some oxidative burst, but no co-localization of the two functional events), and 3) High Activation (high phagocytosis, high oxidative burst, co-localization of phagocytosis and oxidative burst). A fourth population that consisted of inactivated granulocytes was also identified. Using assay incubations of 10, 20, and 40-min the effect of assay incubation duration on the redistribution of activated granulocyte phenotypes was assessed. A fourth incubation was completed on ice as a control. By using serial time incubations, the assay may be able to able to detect how a treatment spatially affects granulocyte function. All samples were measured using an image-based flow cytometer equipped with a quantitative imaging (QI) option, autosampler, and multiple lasers (488, 642, and 785 nm).

Image-based Flow Cytometry Technique to Evaluate Changes in Granulocyte Function In Vitro

This method demonstrates a technique for assessing granulocyte function by simultaneously measuring phagocytosis of bacteria and oxidative burst. Image-based flow cytometry allowed for the identification of three distinct subsets of activated granulocytes that all differed in their relative functional capacity.

Bildbasierte Durchflusszytometrie Technik zur Veränderung der Granulozyten-Funktion auswerten<em&gt; In-vitro-</em

Granulocytes play a key role in the body&#8217;s innate immune response to bacterial and viral infections. While methods exist to measure granulocyte ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We demonstrate the procedure for preparing H. influenzae inoculum, intra-tracheal instillation of H. influenzae into the lung, collection of broncho-alveolar lavage fluid (BALF), analysis of immune cells in the BALF, and RNA isolation for differential gene expression analysis. This procedure can be used to study the lung inflammatory response to any bacteria, virus or fungi. Direct tracheal instillation is mostly preferred over intranasal or aerosol inhalation procedures because it more efficiently delivers the bacterial inoculum into the lower respiratory tract with less ambiguity.

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

We demonstrate the procedure for intra-tracheal inoculation of Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. This is a very useful tool to study signaling pathways that regulate airway inflammation in mouse models.

Intratracheale Verabreichung von<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; In Mausmodelle zur Untersuchung Atemwegsentzündung

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

A High-throughput Compatible Assay to Evaluate Drug Efficacy against Macrophage Passaged Mycobacterium tuberculosis

The early drug development process for anti-tuberculosis drugs is hindered by the inefficient translation of compounds with in vitro activity to effectiveness in the clinical setting. This is likely due to a lack of consideration for the physiologically relevant cellular penetration barriers that exist in the infected host. We recently established an alternative infection model that generates large macrophage aggregate structures containing densely packed M. tuberculosis (Mtb) at its core, which was suitable for drug susceptibility testing. This infection model is inexpensive, rapid, and most importantly BSL-2 compatible. Here, we describe the experimental procedures to generate Mtb/macrophage aggregate structures that would produce macrophage-passaged Mtb for drug susceptibility testing. In particular, we demonstrate how this infection system could be directly adapted to the 96-well plate format showing throughput capability for the screening of compound libraries against Mtb. Overall, this assay is a valuable addition to the currently available Mtb drug discovery toolbox due to its simplicity, cost effectiveness, and scalability.

A High-throughput Compatible Assay to Evaluate Drug Efficacy against Macrophage Passaged Mycobacterium tuberculosis

New models and assays that would improve the early drug development process for next-generation anti-tuberculosis drugs are highly desirable. Here, we describe a quick, inexpensive, and BSL-2 compatible assay to evaluate drug efficacy against Mycobacterium tuberculosis that can be easily adapted for high-throughput screening.

A Robust Pneumonia Modell in intaktem Immunsystem Nagetiere zur Bewertung antibakterieller Wirksamkeit gegen

Zusammenfassung

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Kapitel in diesem Video

Mit Bioluminescent Imaging, um Synergie von Untersuchen Streptococcus pneumoniae Und Influenza A Virus in Infant Mäuse

Live Cell Imaging von Bacillus subtilis Und Streptococcus pneumoniae Verwendung von Automated Zeitraffer-Mikroskopie

Einsatz von künstlichen Sputum Mittlere bis antibiotische Wirkung gegen die getestet

Charakterisierung von Entzündungsreaktionen während der intranasalen Kolonisation mit Streptococcus pneumoniae

Überwachen von Änderungen in Membran-Polarity, Membrane Integrity und intrazelluläre Ionenkonzentrationen in

Kapsel Serotypisierung von

Kapsel Serotypisierung

Bildbasierte Durchflusszytometrie Technik zur Veränderung der Granulozyten-Funktion auswerten

Intratracheale Verabreichung von

Ein Hochdurchsatz-Assay unterstützte Wirksamkeit von Medikamenten gegen Makrophagen agierten zur Bewertung