Name: novel object recognition test for the investigation of learning and memory in mice
Uploaded: 2017-08-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
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Zitiert und zuvor veröffentlichte, vom Autor wurde durch einen Zuschuss aus dem National Institute of Mental Health (MH088480) unterstützt. Der Autor möchte ihrem ehemaligen Mentor, Dr. James O'Donnell für seine Unterstützung bei diesem Projekt danken. Diese Publikation wird durch einen Zuschuss aus dem National Institute of Health (T32 DA007135) unterstützt.

alle Verfahren, die hier durchgeführt wurden vorgelegt und genehmigt von der Animal Care und Ausschuss zu verwenden und nach NIH Richtlinien durchgeführt wurden.
 1. Objektauswahl und Versuchsaufbau <ol><li>Objekte auswählen, die verschieden genug, um leicht durch Mäuse, diskriminiert zu werden, haben aber einen ähnlichen Grad an Komplexität (Textur, Form, Farbe, Musterung und Helligkeit, usw.) zur Minimierung möglicher induzierte Objekt-Einstellung, die die Ergebnisse beeinflussen kann (siehe Ennaceur 2010 für eine umfassende Darstellung der Objekt-Auswahl- 7).
	<ol><li>Test für angeborene Vorliebe und Diskriminierung (siehe Schritte 2 &#38; 3).</li>
		<li>Verwenden von Objekten, die Maus-Größe oder nur geringfügig größer Exploration ( Abbildung 1) zu fördern. Um induzierte Präferenz zu reduzieren, sorgen dafür, dass Mäuse Klettern auf Objekte oder weder Objekt, obwohl Fähigkeit, auf ein Objekt zu klettern kann steigern das Interesse in der Exploration (Zeit verbrachte nur sitzen auf einem Objekt ist nicht Exploration Zeit angerechnet.)</li>
		<li>Müssen mindestens 2 Kopien der einzelnen Objekte. Um mögliche Geruch Hinweise während der Tests zu minimieren, müssen jedoch mindestens 3 jedes Objekt, Duplikate für Training und eine zum testen.</li>
		<li>Verwenden von Objekten aus bruchsicheren Material als Verlust eines Objekts soll während der Experimente beschädigen könnte stören die Kontinuität des Testens und möglicherweise verursachen Schäden oder Verletzungen des Tieres.</li>
		<li>Die Objekte gründlich zu reinigen, vor und zwischen den Einsatz (70 % Vol/Vol Ethanol ist angebracht).</li>
	</ol></li> <li>Den Stress der hellen Beleuchtung zu minimieren, verwenden Sie diffuse, geringe Beleuchtung, mit dem Zentrum des Labyrinths beleuchtet rund 20 Lux. Verwenden Sie eine Temperatur und Feuchtigkeit ähnlich wie normale Wohnverhältnisse. Wenn Mäuse in ein anderes Zimmer für das Experiment von einem Gehäuse Raum verschoben werden, Mäuse zu ihrem neuen Zimmer für mindestens 1 h vor Gebrauch jeden Tag akklimatisieren.</li>
	<li>Griff Mäuse gut vor dem Training. Da der Test stützt sich auf die natürliche Tendenz der Nagetiere zu erforschen Neuheit, reduzieren Sie Stress oder Angst aus handling, das stören mit ihrem Wunsch, die Arena und anschließend die Objekte zu erkunden. Im Idealfall behandeln Mäuse 1 - 2 mal / Tag für mindestens 1 min, 1 bis 2 Wochen vor der Prüfung 15 , 29.</li>
	<li>Für die Hauptarena verwenden eine quadratischen Kammer (ca. 40 x 40 cm x 40 cm) hergestellt aus weiß oder schwarz, porenfreien Kunststoff, im Gegensatz zu der Farbe der Maus. Alternativ verwenden Sie eine Runde Arena Hrsg. speziell, wenn Sie ängstlich Mäuse verwenden, die in den Ecken des quadratischen Arena sitzen kann, eine Runde Arena vorzuziehen, exploratives Verhalten 18 , 30 fördern.
	<ol><li>Am Trainingstag, Platz 2 identische Objekte auf der Diagonalen (d. h. eine in der NW-Ecke und eine in der SE Ecke). Wenn Objekte zu leicht sind und mit der Maus verschoben werden können, befestigen sie auf den Boden. Abnehmbare Kitt Montagearbeiten gut.</li>
		<li>Zum Testen Tag, verwenden die 3 rd-Kopie von jedem Objekt, ein vertrauter Gegenstand und ein neues Objekt auf dasselbe Diagonale als Trainingstag ( Abbildung 2).</li>
		<li>Gegengewicht die Verwendung der einzelnen Objekte, so dass jedes Objekt gleichermaßen als ein vertrauter Gegenstand sowie eine neuartige Objekt verwendet wird. Auch die Lage des neuen Objekts zu jeder der 4 Ecken der Arena ein Gegengewicht. Bitte beachten Sie die Diagonale für welches Tier verwendet wird, so dass die Diagonale verwendet auf den Trainingstag identisch mit dem auf den Testtag für jede Maus verwendet ist.</li>
		<li>Apparat und Objekte entfernen Geruch Signale vor und zwischen den Einsatz (70 % Vol/Vol Ethanol ist geeignet) gründlich reinigen.</li>
	</ol></li> <li>Legen Sie die Kamera direkt über der Vorrichtung für optimale Sicht auf Erkundung. Verwenden Sie nur Software mit Nase-Erkennung für genaue Analyse. Wenn Sie Software verwenden, erfassen Sie ein Hintergrundbild mit den Objekten im Ort vor dem Start. In der Software, stellen Sie den Bereich der Exploration, ca. 2-3 cm um das Objekt herum sein.</li>
	<li>Experimentator Störungen reduzieren, die Studie aufgenommen und später erzielen. Blind den Torschützen zu den experimentellen Bedingungen. Wenn manuell während des Experiments scoring, sicherstellen, dass der Experimentator mehr als 1 Meter von der Arena, und für die Maus nicht sichtbar ist. 
	Hinweis: Die Maus jederzeit verbringt sitzen auf das Objekt ohne aktive Tasthaare fegen oder schnüffeln nicht als Exploration Zeit zählt.</li>
	<li>Definieren Exploration wie bei der Maus &#39; s Lärm ist spitz auf das Objekt und innerhalb von 2-3 cm des Objekts, mit aktiven Tasthaare fegen oder schnüffeln. Zählen Sie nicht jederzeit auf das Objekt ohne Angabe der aktiven Erkundung sitzen.</li>
</ol> 2. Notwendigen Pilot Experimente <ol><li>Testing für induzierte Vorliebe <ol><li>für Gewöhnung, entfernen Sie die Maus aus seinem Hause Käfig und legen Sie es in der Mitte der offenen Arena. Ermöglichen die Maus, um frei für 5 min. erkunden</li>
		<li>Am Trainingstag (T1), legen Sie 2 verschiedene Objekte in gegenüberliegenden Quadranten der Apparate, (d.h., NW und SE Ecken). Entfernen Sie die Maus aus seinem Hause Käfig und legen Sie es in der Mitte der offenen Arena. Ermöglichen freie Erkundung für 10 min.</li>
		<li>Der Diskriminierung-Index berechnen. Wenn es keine induzierte Präferenz gibt, sollte der Diskriminierung Index an oder nahe Null sein. Alle Objekte, die Präferenz sollte nicht verwendet werden, für die ORT.</li>
	</ol></li> <li>Testing für Diskriminierung Fähigkeit <ol><li>für Gewöhnung, Maus aus seinem Hause Käfig entfernen und legen Sie sie in der Mitte der offenen Arena. Ermöglichen die Maus, um frei für 5 min. erkunden</li>
		<li>Auf Trainingseinheit (T1), legen Sie 2 identische Objekte in gegenüberliegenden Quadranten. Platzieren Sie den Mauszeiger in die Mitte der Arena und lassen Sie die Maus zu erkunden für 10 min.</li>
		<li>Auf Testing Session (T2), Platz eins des Objekts während T1 und ein neues Objekt in gegenüberliegenden Quadranten (NW und SE Ecken) verwendet. 60 min nach T1, platzieren Sie den Mauszeiger in die Mitte der Arena und erlauben freie Erkundung für 10 min.</li>
		<li>Der Diskriminierung-Index berechnen. In einem 60 min. Aufbewahrung Intervall sollte der Diskriminierung-Index über 0,25 werden.</li>
	</ol></li></ol> 3. Experimentelle Verfahren <ol><li>Gewöhnung <ol><li>Entfernen Sie die Maus aus seinem Hause Käfig und legen Sie es in der Mitte der offenen, leeren Arena. Können Sie kostenlos Exploration der Arena für 5 Minuten. Sobald der Haus Käfig leer ist, speichern Sie sie für den Einsatz als Holding Käfig am nächsten Tag.</li>
		<li>Am Ende der 5 min, entfernen Sie die Maus, und legen Sie in einem Käfig halten. Die Maus nicht an seinem ursprünglichen Käfig zurück, oder dies kann Auswirkungen auf das Verhalten der übrigen Mäuse getestet werden.</li>
		<li>Reinigen Sie das Gerät zwischen Mäusen mit Ethanol 70 % Vol/Vol. 
		Hinweis: Während der Gewöhnung, Angst-ähnliches Verhalten beurteilt werden kann durch die Berechnung der Zeit, in der Mitte (siehe Prut &#38; Belzung 2003- 31). Dies ist eine nützliche Metrik, wenn man die Länge der Zeit für T1. Höhere Angst Mäuse erfordern eine 10 min-Sitzung, die minimale Exploration-Kriterium zu erreichen.</li>
	</ol></li> <li>Training (T1) <ol><li>legen Sie zwei identische Objekte in gegenüberliegenden Quadranten der Arena (d.h., NE und SW Ecke).</li>
		<li>24 h nach Gewöhnung, entfernen Sie die Maus aus seinem Hause Käfig und legen Sie sie in die Mitte der Arena, gleich weit entfernt von den 2 identische Objekte.</li>
		<li>Erlauben freie Erkundung für ein Minimum von 5 Minuten. Wenn einen Stamm von Mäusen, die bekanntermaßen geringen Bewegungsorgane oder Erkundung Aktivität haben (d.h., die meisten Mäuse nicht erreichen ein Minimum von 20 s Erforschung beider Objekte von 5 min, wie bereits in den Pilotprojekten oder der Literatur), verlängern die Testversion auf 10 min für alle mic e in der Kohorte.</li>
		<li>Am Ende des Versuches, entfernen Sie die Maus und legen Sie in den Käfig halten. Sobald der Haus Käfig leer ist, speichern Sie sie für den Einsatz als Holding-Käfig auf Tests Tag.</li>
		<li>Gründlich zu reinigen, die Geräte und Objekte zwischen Mäusen mit 70 % Vol/Vol Ethanol.</li>
	</ol></li> <li>Testing (T2) <ol><li>platzieren Sie ein Objekt während T1 verwendet (d. h., die vertrauter Gegenstand) und ein neues Objekt in gegenüberliegenden Quadranten der Arena. Verwenden die gleichen Positionen wie verwendet während T1 für jede Maus.</li>
		<li>Bei T1, T2 Intervall wählen, Maus aus seinem Hause Käfig entfernen und legen Sie sie in die Arena Center, gleich weit entfernt von der vertraut und neuartige Objekt. 
		Hinweis: In einem Intervall von 24 h Aufbewahrung die meisten Mäuse werden nicht in der Lage, zwischen dem bekannten und neuartigen Objekt zu unterscheiden (in der Regel -0,2 &#60; d2 &#60; 0,2, im Vergleich zu einer positiven Kontrolle 32). Wenn für nootropische Effekte testen, verwenden Sie diesem Zeitpunkt zur Gedächtnisverbesserung zu untersuchen. Sonde für Gedächtnisstörungen, verwenden Sie ein kürzeres Intervall der Aufbewahrung von überall zwischen 20 min bis 4 h, abhängig von der Sorte der Maus.</li>
		<li>Erlauben freie Erkundung für 10 Minuten. Am Ende des Versuches, entfernen Sie die Maus und legen Sie in den Käfig halten.</li>
	</ol></li> <li>Tor für T1 und T2, die erste 5 min. Die Maus erfüllt nicht die minimale Exploration-Zeit von 20 s für beide Objekte weiterhin erzielte vorbei an 5 min bis total Exploration überschreitet 20 s.</li>
</ol> 4. Analyse der Daten <ol><li>Ausschlusskriterien <ol><li>während beide Training (T1) und Tests (T2), berechnen Sie die Summe Exploration Zeit für beide Objekte für jede Sitzung (e1 und e2). Die meisten Mäuse erreichen sollte eine minimale Exploration insgesamt für beide Objekte von 20 s durch 5 min.</li>
		<li>Verlängern T1 und T2 Zeit auf 10 min für Stämme von Mäusen, die nicht erfüllen dieses minimum Kriterium von 5 min, da während der Pilottests beobachtet und haben geringe Exploration.</li>
		<li>Verhalten der Gäste für 5 min oder über 5 min bis zum Erreichen der 20 s minimum Kriterium.</li>
		<li>Wenn Mäuse nicht Exploration für beide Objekte für T1 oder T2 10 min 20 s mindestens erreichen, von der Analyse, ausschließen, wie verbrachten sie genügend Zeit mit der Erforschung zu lernen/bestätigt werden kann.</li>
	</ol></li> <li>Absolute Vs Relative Analyse Hinweis: verschiedene Formeln für die Analyse und ihre Beziehung zueinander in Tabelle 1 ersichtlich.
	<ol><li>Berechnen e1 als total Exploration Zeitpunkt während des Trainings für 2 identische Objekte, wo a1 und a2 die identische Objekte sind. 
		e1 = a1 + a2</li>
		<li>Calculate e2 als total Exploration Zeit während der Tests für das bekannte Objekt (a) und der Roman (b Objekt). 
		e2 = a + b</li>
		<li>Calculate d1 so einfach Zeit verbrachte erkunden den Roman Objekt minus Zeit verbrachte vertrauten Gegenstand zu erkunden. Die absolute Diskriminierung Maßnahme (d1) berücksichtigt nicht Unterschiede in der Exploration Zeit zwischen Mäusen oder Behandlung Gruppen, obwohl es unter bestimmten Umständen ein empfindlicher Maßnahme 2 sein kann. 
		d1 = b-a</li>
		<li>Berechnen d2 als verbrachte Zeit erkunden das neue Objekt minus der Zeit verbringen die vertraute Objekt geteilt durch Zeit total Exploration. Das am häufigsten verwendete Maß ist ein relative Diskriminierung Wert oft als Diskriminierung Index (d2), die nicht durch Unterschiede in der Exploration Zeit beeinflusst wird. Somit fallen alle Werte zwischen-1 und + 1. 
		d2 = d1/e2</li>
		<li>Berechnen oder die Anerkennung oder Präferenz Index (d3) 3. Dies ist die Zeit, das neue Objekt geteilt durch die gesamte Zeit zu erforschen. Dies bedeutet, dass alle Werte zwischen 0 und 1 liegen werden. Es ist oft mit 100 multipliziert und als Prozentwert. 
		d3 = b/e2 * 100</li>
	</ol></li> <li>Statistische Analyse <ol><li>über die mittlere Diskriminierung Werte für jede Gruppe Speicherleistung mit One-Way ANOVA bestimmen. Zur weiteren Analyse machen zwei-Wege-post Hoc Vergleiche mit den behandelten Vs Fahrzeugzustand und positiven/negativen Kontrollgruppen.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Ennaceur, A., Meliani, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+one-trial+test+for+neurobiological+studies+of+memory+in+rats+III.+Spatial+vs.+non-spatial+working+memory.">A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats III. Spatial vs. non-spatial working memory.</a> Behav. Brain Res. 51 (1), 83-92 (1988).</li><li>Akkerman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Object+recognition+testing:+methodological+considerations+on+exploration+and+discrimination+measures.">Object recognition testing: methodological considerations on exploration and discrimination measures.</a> Behav. 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Brain Res. 236 (1), 16-22 (2013).</li><li>Deacon, R. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Housing,+husbandry+and+handling+of+rodents+for+behavioral+experiments.">Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments.</a> Nat. Protoc. 1 (2), 936-946 (2006).</li><li>&#350;&#305;k, A., van Nieuwehuyzen, P., Prickaerts, J., Blokland, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+different+mouse+strains+in+an+object+recognition+task.">Performance of different mouse strains in an object recognition task.</a> Behav. Brain Res. 147 (1-2), 49-54 (2003).</li><li>Prut, L., Belzung, C., Rabelias, U. F., Psychobiologie, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+open+field+as+a+paradigm+to+measure+the+effects+of+drugs+on+anxiety-like+behaviors+a+review.">The open field as a paradigm to measure the effects of drugs on anxiety-like behaviors a review.</a> Eur. J. Pharmacol. 463, 3-33 (2003).</li><li>Akkerman, S., Prickaerts, J., Steinbusch, H. W. M., Blokland, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Object+recognition+testing:+statistical+considerations.">Object recognition testing: statistical considerations.</a> Behav. Brain Res. 232 (2), 317-322 (2012).</li><li>Balderas, I., Rodriguez-Ortiz, C. J., Bermudez-Rattoni, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrieval+and+reconsolidation+of+object+recognition+memory+are+independent+processes+in+the+perirhinal+cortex.">Retrieval and reconsolidation of object recognition memory are independent processes in the perirhinal cortex.</a> Neuroscience. 253, 398-405 (2013).</li><li>de curtis, M., Pare, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rhinal+cortices:+a+wall+of+inhibition+between+the+neocortex+and+the+hippocampus.">The rhinal cortices: a wall of inhibition between the neocortex and the hippocampus.</a> Prog. Neurobiol. 74 (2), 101-110 (2004).</li><li>Brown, M. W., Barker, G. R. I., Aggleton, J. P., Warburton, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+pharmacological+interventions+indicate+concerning+the+role+of+the+perirhinal+cortex+in+recognition+memory.">What pharmacological interventions indicate concerning the role of the perirhinal cortex in recognition memory.</a> Neuropsychologia. 50 (13), 3122-3140 (2012).</li><li>Moore, S. J., Deshpande, K., Stinnett, G. S., Seasholtz, A. F., Murphy, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+short-term+to+long-term+memory+in+the+novel+object+recognition+paradigm.">Conversion of short-term to long-term memory in the novel object recognition paradigm.</a> Neurobiol. Learn. Mem. 105, 174-185 (2013).</li><li>Suzuki, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anatomy,+physiology+and+functions+of+the+perirhinal+cortex.">The anatomy, physiology and functions of the perirhinal cortex.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 6, 179-186 (1996).</li><li>Wan, H., Aggleton, J. P., Brown, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+contributions+of+the+hippocampus+and+perirhinal+cortex+to+recognition+memory.">Different contributions of the hippocampus and perirhinal cortex to recognition memory.</a> J. Neurosci. 19 (3), 1142-1148 (1999).</li><li>Warburton, E. C., Brown, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Findings+from+animals+concerning+when+interactions+between+perirhinal+cortex,+hippocampus+and+medial+prefrontal+cortex+are+necessary+for+recognition+memory.">Findings from animals concerning when interactions between perirhinal cortex, hippocampus and medial prefrontal cortex are necessary for recognition memory.</a> Neuropsychologia. 48 (8), 2262-2272 (2010).</li></ol>

Der Autor hat nichts preisgeben.

Der ORT ist eine effiziente und flexible Methode für lernen und Gedächtnis bei Mäusen zu studieren. Bei der Einrichtung eines Experiments ist es wichtig, eine Reihe von Variablen zu berücksichtigen, die das Ergebnis beeinflussen können. Die Belastung der Maus wirkt wie in die repräsentativen Ergebnisse diskutiert, beide Exploration Zeit und Retention-Intervall. Eine Abnahme der Exploration Zeit möglicherweise verzerren oder Maske führt zu einer absoluten Diskriminierung Analyse2,</sup...

Das Objekt Anerkennung zu testen (ORT), auch bekannt als die neuartige Objekt Anerkennung Test (NOR), ist ein relativ schnelles und effizientes Mittel für verschiedene Testphasen von lernen und Gedächtnis bei Mäusen. Es wurde ursprünglich von Ennaceur und Delacour 1988 beschrieben und in erster Linie in Ratten1; jedoch wurde es seitdem erfolgreich angepasst für den Einsatz in Mäusen2,3,4,5,6,7. Der Test beruht auf so wenig wie drei Sitzungen: eine Gewöhnung Sitzung, eine Trainingseinheit und ein Test-Session. Training beinhaltet einfach visuelle Erforschung der zwei identische Objekte, während die Testsitzung beinhaltet eines der bereits erkundeten Objekte durch ein neues Objekt zu ersetzen. Weil Nagetiere eine angeborene Vorliebe für die Neuheit haben, verbringen ein Nagetier, das das bekannte Objekt erinnert sich mehr Zeit, erforschen die neuartige Objekt7,8,9.
Der Hauptvorteil von dem ORT gegenüber anderen Nagetier Gedächtnis-Tests ist, dass es stützt sich auf Nagetiere natürliche Neigung zur Erkundung Neuheit8. Daher gibt es keine Notwendigkeit für zahlreiche Schulungen oder einer positiven oder negativen Verstärkung, Verhalten zu motivieren. Dies bedeutet, dass der ORT sehr viel weniger stressig, im Vergleich zu anderen Tests10,11,12,13,14,15, und deutlich erfordert weniger Zeit in Anspruch als andere allgemein Speicher verwendete testet, wie Morris Wasser-Irrgarten oder Barnes Labyrinth, die bis zu einer Woche oder länger dauern kann. Daher ähneln die Bedingungen für den ORT genauer im Studium der menschlichen Kognition, Erhöhung der ökologische Validität des Tests über viele andere Nager Gedächtnis-Tests verwendet. In ähnlicher Weise da ORT eine einfache visuelle Erinnerung Aufgabe ist, wurde es erfolgreich für den Einsatz in zahlreichen Arten, einschließlich Menschen und nichtmenschlichen Primaten, um verschiedene Aspekte der Inter-Spezies des deklarativen Gedächtnisses 2,16 bewerten angepasst ,17. Zu guter Letzt kann der ORT leicht geändert werden untersuchen verschiedene Phasen von lernen und Gedächtnis (d.h., Erfassung, Konsolidierung oder Rückruf), verschiedene Arten von Speicher (z.B. räumliche Gedächtnis) zu beurteilen, oder verschiedene Aufbewahrung bewerten Abständen (d.h. kurzfristigen Vs Langzeitgedächtnis).
Die Vielseitigkeit der ORT bietet eine Plattform für unzählige Anwendungen. Studien können pharmakologische Wirkstoffe zu stören oder zu verbessern Speicher verwenden. Variation der Zeit der Medikamentengabe vor oder nach dem Training oder vor dem Test kann Hinweis auf die zugrunde liegenden neuronalen Mechanismen gestört oder erweiterte Speicher6,18,19, 20. in ähnlicher Weise kann optogenetische Technologie werden verwendet bei diesen gleichen verschiedenen Zeitpunkten der neuronalen Aktivierung/Hemmung betrachten, die zu den verschiedenen Phasen von lernen und Gedächtnis beiträgt. Der ORT eignet sich auch für die Beurteilung der Unterschiede bei transgenen Tieren, Läsion Studien oder Neurodegenerative Modelle oder Alterung Studien21,22,23,24, 25 , 26 , 27 , 28. die Zeit zwischen Training und Tests, bekannt als die Aufbewahrung Intervall kann geändert werden, um diese Änderungen auf kurz- und langfristige Speicher26zu beurteilen. Letztlich den ORT eignet sich als ein Werkzeug, um pharmakologische, genetische und neurologische Veränderungen, lernen und Gedächtnis zu studieren, oder diese Tools können verwendet werden, um die Grundlagen von lernen und Gedächtnis in den ORT.

<table><tbody><tr><td>Open Field Box</td><td>Panlab/Harvard Apparatus</td><td>LE800SC</td><td>Available in grey, white, or black</td></tr><tr><td>ANY-maze</td><td>Stoelting Co.</td><td>60000</td><td>Behavior tracking system</td></tr><tr><td>EthoVisionXT 12</td><td>Noldus</td><td></td><td>Behavior tracking system; requires 3 point tracking</td></tr><tr><td>Video Camera</td><td>Any</td><td></td><td>Video camera should be mounted directly overhead of the apparatus</td></tr><tr><td>70% Ethanol&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-4</td><td>Prior to starting testing and in between trials, each object should be carefully cleaned. The floor and walls of the apparatus should also be cleaned.&amp;nbsp;</td></tr></tbody></table>

novel object recognition test for the investigation of learning and memory in mice

Die Objekt-Anerkennung-Test (ORT) ist ein häufig verwendete behavioral Assay für die Untersuchung verschiedener Aspekte von lernen und Gedächtnis bei Mäusen. Der ORT ist ziemlich einfach und kann über 3 Tage abgeschlossen werden: Gewöhnung Day, Training Day und Testtag. Während des Trainings darf die Maus 2 identische Objekte zu erkunden. Am Testtag ist eines der Schulungsobjekte mit einem neuartigen Objekt ersetzt. Da Mäuse eine angeborene Vorliebe für die Neuheit, haben wenn die Maus das bekannte Objekt erkennt, verbringen sie die meiste Zeit auf das neue Objekt. Aufgrund dieser angeborene Vorliebe gibt es keine Notwendigkeit für positive oder negative Verstärkung oder lange Trainingspläne. Darüber hinaus kann der ORT auch für zahlreiche Anwendungen geändert werden. Die Aufbewahrung Intervall kann verkürzt um Kurzzeitgedächtnis zu untersuchen, oder Langzeitgedächtnis Sonde verlängert. Pharmakologische Intervention mehrmals vor dem Training, nach dem Training oder vor dem Rückruf einsetzbar bei verschiedene Phasen des Lernens (d.h., Erwerb, früh oder spät Konsolidierung oder Rückruf) zu untersuchen. Insgesamt, der ORT ist ein relativ niedrig-Stress, effiziente Test für Speicher in Mäusen und eignet sich für die Erkennung von neuropsychologischen Veränderungen nach pharmakologischen, biologischen oder genetischen Manipulationen.

Ein allgemeiner Versuchsaufbau für den ORT ist in Abbildung 2dargestellt. Auf Gewöhnung Tag (T0) Mäuse liegen in der leeren Arena für 5 min. 24 Stunden später, Mäuse sind zurück in die Kammer mit 2 identische Objekte platziert und erlaubt, frei für bis zu 10 min (T1) zu erkunden. Auf Tests Tag (T2), sind die Mäuse wieder platziert in der Arena, aber mit einem vertraut und eine neuartige Objekt, und erlaubt für bis zu 10 Minuten zu erkunden. Die Aufb...

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Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice

Die Objekt-Anerkennung-Test (ORT) ist eine einfache und effiziente Assays für die Bewertung von lernen und Gedächtnis bei Mäusen. Die Methodik wird nachfolgend beschrieben.

Neuartige Objekt Anerkennung Test zur Untersuchung von lernen und Gedächtnis bei Mäusen

The object recognition test (ORT) is a commonly used behavioral assay for the investigation of various aspects of learning and memory in mice. The ORT is ...

novel-object-recognition-test-for-investigation-learning-memory

Research

JoVE Journal

Behavior

72.2K Aufrufe.  Icahn School of Medicine at Mount Sinai. Die Objekt-Anerkennung-Test (ORT) ist eine einfache und effiziente Assays für die Bewertung von lernen und Gedächtnis bei Mäusen. Die Methodik wird nachfolgend beschrieben.

Serie: Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice

Study Motor Skill Learning by Single-pellet Reaching Tasks in Mice

Reaching for and retrieving objects require precise and coordinated motor movements in the forelimb. When mice are repeatedly trained to grasp and retrieve food rewards positioned at a specific location, their motor performance (defined as accuracy and speed) improves progressively over time, and plateaus after persistent training. Once such reaching skill is mastered, its further maintenance does not require constant practice. Here we introduce a single-pellet reaching task to study the acquisition and maintenance of skilled forelimb movements in mice. In this video, we first describe the behaviors of mice that are commonly encountered in this learning and memory paradigm, and then discuss how to categorize these behaviors and quantify the observed results. Combined with mouse genetics, this paradigm can be utilized as a behavioral platform to explore the anatomical underpinnings, physiological properties, and molecular mechanisms of learning and memory.

Persistent practice improves the precision of coordinated movements.&#160;Here we introduce a single-pellet reaching task, which is designed to assess the learning and memory of forelimb skill in mice.&#160;

Studie Motorik Lernen durch Einzel-Pellet Erreichen Aufgaben in Mäuse

Reaching for and retrieving objects require precise and coordinated motor movements in the forelimb. When mice are repeatedly trained to grasp and ...

Forschung

Verhalten

Novel Object Exploration as a Potential Assay for Higher Order Repetitive Behaviors in Mice

Restricted, repetitive behaviors (RRBs) are a core feature of autism spectrum disorder (ASD) and disrupt the lives of affected individuals. RRBs are commonly split into lower-order and higher-order components, with lower order RRBs consisting of motor stereotypies and higher order RRBs consisting of perseverative and sequencing behaviors. Higher order RRBs are challenging to model in mice. Current assays for RRBs in mice focus primarily on the lower order components, making basic biomedical research into potential treatments or interventions for higher-order RRBs difficult. Here we describe a new assay, novel object exploration. This assay uses a basic open-field arena with four novel objects placed around the perimeter. The test mouse is allowed to freely explore the arena and the order in which the mouse investigates the novel objects is recorded. From these data, patterned sequences of exploration can be identified, as can the most preferred object for each mouse. The representative data shared here and past results using the novel object exploration assay illustrate that inbred mouse strains do demonstrate different behavior in this assay and that strains with elevated lower order RRBs also show elevated patterned behavior. As such, the novel object exploration assay appears to possess good face validity for higher order RRBs in humans and may be a valuable assay for future studies investigating novel therapeutics for ASD.

Higher order restricted, repetitive behaviors (RRBs) disrupt the lives of affected individuals. These behaviors are challenging to model in rodents, making basic biomedical research into potential treatments or interventions for RRBs difficult. Here we describe novel object exploration as a potential assay for higher order RRBs in mice.

Novel Object Exploration als Potential Assay für höherer Ordnung Repetitive Verhalten bei Mäusen

Restricted, repetitive behaviors (RRBs) are a core feature of autism spectrum disorder (ASD) and disrupt the lives of affected individuals.  RRBs are ...

T-maze Forced Alternation and Left-right Discrimination Tasks for Assessing Working and Reference Memory in Mice

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in rodents. In our laboratory, we evaluated the two types of memory in more than 30 strains of genetically engineered mice using the automated version of this apparatus. Here, we present the modified T-maze apparatus operated by a computer with a video-tracking system and our protocols in a movie format. The T-maze apparatus consists of runways partitioned off by sliding doors that can automatically open downward, each with a start box, a T-shaped alley, two boxes with automatic pellet dispensers at one side of the box, and two L-shaped alleys. Each L-shaped alley is connected to the start box so that mice can return to the start box, which excludes the effects of experimenter handling on mouse behavior. This apparatus also has an advantage that in vivo microdialysis, in vivo electrophysiology, and optogenetics techniques can be performed during T-maze performance because the doors are designed to go down into the floor. In this movie article, we describe T-maze tasks using the automated apparatus and the T-maze performance of &alpha;-CaMKII+/- mice, which are reported to show working memory deficits in the eight-arm radial maze task. Our data indicated that &alpha;-CaMKII+/- mice showed a working memory deficit, but no impairment of reference memory, and are consistent with previous findings using the eight-arm radial maze task, which supports the validity of our protocol. In addition, our data indicate that mutants tended to exhibit reversal learning deficits, suggesting that &alpha;-CaMKII deficiency causes reduced behavioral flexibility. Thus, the T-maze test using the modified automatic apparatus is useful for assessing working and reference memory and behavioral flexibility in mice.

This article presents the protocol of T-maze tests using a modified automated apparatus for assessing the learning and memory functions in mice.

T-Labyrinth Erzwungener Wechsel und die Links-Rechts-Discrimination Aufgaben für die Beurteilung der Arbeitsbedingungen und Referenz-Gedächtnis bei Mäusen

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in ...

Neurowissenschaften

Novel Object Recognition and Object Location Behavioral Testing in Mice on a Budget

Ethologically relevant behavioral testing is a critical component of any study that uses mouse models to study the cognitive effects of various physiological or pathological changes. The object location task (OLT) and the novel object recognition task (NORT) are two effective behavioral tasks commonly used to reveal the function and relative health of specific brain regions involved in memory. While both of these tests exploit the inherent preference of mice for the novelty to reveal memory for previously encountered objects, the OLT primarily evaluates spatial learning, which relies heavily on hippocampal activity. The NORT, in contrast, evaluates non-spatial learning of object identity, which relies on multiple brain regions. Both tasks require an open-field-testing arena, objects with equivalent intrinsic value to mice, appropriate environmental cues, and video recording equipment and the software. Commercially available systems, while convenient, can be costly. This manuscript details a simple, cost-effective method for building the arenas and setting up the equipment necessary to perform the OLT and NORT. Furthermore, the manuscript describes an efficient testing protocol that incorporates both OLT and NORT and provides typical methods for data acquisition and analysis, as well as representative results. Successful completion of these tests can provide valuable insight into the memory function of various mouse model systems and appraise the underlying neural regions that support these functions.

Here we provide a protocol which includes comprehensive instructions for the economical establishment of murine object location and novel object recognition behavioral testing, including the design, cost, and construction of required equipment as well as execution of behavioral testing, data collection, and analysis.

Neuartige Objekterkennung und Objektposition Verhaltens Tests bei Mäusen mit kleinem Budget

Ethologically relevant behavioral testing is a critical component of any study that uses mouse models to study the cognitive effects of various ...

A Behavioral Test Battery for the Repeated Assessment of Motor Skills, Mood, and Cognition in Mice

Pharmacological and toxicological studies in neurodegeneration require comprehensive behavioral analysis in mice because motor dysfunctions and dysfunctions in mood and cognition are common and often shared symptoms in neurodegenerative diseases. Shown here is a behavioral test battery for motor, mood, and cognition, which can be repeatedly tested in a longitudinal study. This battery assesses the overall behavioral phenotype in mice by examining each domain of behavior with at least two independent well-accepted tests (i.e., open-field test and rotarod test for motor function, social interaction test, elevated plus maze test, and forced swim test for emotional function, and Morris water maze test and novel object recognition test for cognitive function). Therefore, this sensitive and comprehensive test battery is a powerful tool for the study of behavioral alternation in neurodegeneration.

A comprehensive behavioral test battery of motor skills, mood&#8212;including social interaction, depression, and anxiety&#8212;and cognition is designed for the repeated assessment of neurodegeneration-related behavioral changes in mice.

Eine Verhaltenstherapie Testbatterie für die wiederholte Beurteilung der Motorik, Stimmung und Kognition bei Mäusen

Pharmacological and toxicological studies in neurodegeneration require comprehensive behavioral analysis in mice because motor dysfunctions and ...

Assessment of Memory Function in Pilocarpine-induced Epileptic Mice

Cognitive impairment is one of the most common comorbidities in temporal lobe epilepsy. To recapitulate epilepsy-associated cognitive decline in an animal model of epilepsy, we generated pilocarpine-treated chronic epileptic mice. We present a protocol for three different behavioral tests using these epileptic mice: novel object location (NL), novel object recognition (NO), and pattern separation (PS) tests to evaluate learning and memory for places, objects, and contexts, respectively. We explain how to set the behavioral apparatus and provide experimental procedures for the NL, NO, and PS tests following an open field test that measures the animals&#8217; basal locomotor activities. We also describe the technical advantages of the NL, NO, and PS tests with respect to other behavioral tests for assessing memory function in epileptic mice. Finally, we discuss possible causes and solutions for epileptic mice failing to make 30 s of good contact with the objects during the familiarization sessions, which is a critical step for successful memory tests. Thus, this protocol provides detailed information about how to assess epilepsy-associated memory impairments using mice. The NL, NO, and PS tests are simple, efficient assays that are appropriate for the evaluation of different kinds of memory in epileptic mice.

This article presents experimental procedures for assessing memory impairments in pilocarpine-induced epileptic mice. This protocol can be used to study the pathophysiologic mechanisms of epilepsy-associated cognitive decline, which is one of the most common comorbidities in epilepsy.

Beurteilung der Gedächtnisfunktion bei Pilocarpin-induzierten epileptischen Mäusen

Cognitive impairment is one of the most common comorbidities in temporal lobe epilepsy. To recapitulate epilepsy-associated cognitive decline in an animal ...

Simultaneous Monitoring of Wireless Electrophysiology and Memory Behavioral Test as a Tool to Study Hippocampal Neurogenesis

Brainwaves amplitude obtained from electroencephalography (EEG) has been well-recognized as a basis for cognitive capacity, memory, and learning on animals and humans. Adult neurogenesis mechanism is also linked to memory and learning improvement. Traditionally, researchers used to assess learning and memory parameters in rodent models by behavioral tasks. Therefore, the simultaneous monitoring of behavioral changes and EEG is particularly interesting in correlating data between brain activity and task-related behaviors. However, most of the equipment required to perform both studies are either complex, expensive, or uses a wired setup network that hinders the natural animals&#8217; movement. In this study, EEG was recorded with a wireless electrophysiology device along with the execution of a novel object recognition task (NORT). The animal&#8217;s behavior was monitored simultaneously by a video tracking system. Both recordings were analyzed offline by their timestamps which were synched to link EEG signals with the animal&#8217;s actions. Subjects consist of adult Wistar rats after medium-term environmental enrichment treatment. Six skull screw electrodes were fixed in pairs on both hemispheres over frontal, central, and parietal regions and were referenced to an electrode located posterior of the nasal bone. NORT protocol consists of exposing the animal to two identical objects for 10 min. After 2 h and 24 h, one of the objects was replaced with a novel one. Exploration time for each object was monitored by a behavioral tracking software (BTS) and EEG data recording. The analysis of the EEG synced with behavioral data consists of estimations of alpha and beta relative band power and comparisons between novel object recognition versus familiar object exploration, between three experimental stages. In this manuscript, we have discussed electrodes manufacturing process, epidural electrodes implantation surgery, environmental enrichment protocol, NORT protocol, BTS setup, EEG &#8211; BTS coupling for simultaneous monitoring in real-time, and EEG data analysis based on automatic events detection.

The protocol presented here provides information on the simultaneous electroencephalography (EEG) and behavioral assessment in real-time. We have discussed all steps involved in this protocol as an attractive solution for researchers in many fields of neuroscience, particularly in learning and memory areas.

Simultane Überwachung der drahtlosen Elektrophysiologie und des Gedächtnisverhaltenstests als Werkzeug zur Untersuchung der Neurogenese des Hippocampus

Brainwaves amplitude obtained from electroencephalography (EEG) has been well-recognized as a basis for cognitive capacity, memory, and learning on ...

A Within-Subject Experimental Design using an Object Location Task in Rats

Object place recognition is a prominent method used to investigate spatial memory in rodents. This object place recognition memory forms the basis of the object location task. This paper provides an extensive protocol to guide the establishment of an object location task with the option of up to four repetitions using the same cohort of rats. Both weak and strong encoding protocols can be used to study short- and long-term spatial memories of varying strength and to enable the implementation of relevant memory-inhibiting or -enhancing manipulations. In addition, repetition of the test with the counterbalancing presented here allows the combination of results from two or more tests for within-subject comparison to reduce variability between rats. This method helps to increase statistical power and is strongly recommended, particularly when running experiments that produce high variation in individual behavior. This directly refines the study by increasing the data obtained from each animal and reducing the overall number of animals needed.&#160;Finally, implementation of the repeated object location task increases the efficiency of studies that involve surgical procedures by saving time and labor.

This protocol provides detailed steps for an object location task with four repetitions using the same cohort of rats. Weak and strong encoding can produce short- and long-term memories. The flexibility of the protocol with repetition can be beneficial for studies involving surgical operations by saving time and labor.

Ein experimentelles Design innerhalb des Subjekts mit einer Objektortungsaufgabe in Ratten

Object place recognition is a prominent method used to investigate spatial memory in rodents. This object place recognition memory forms the basis of the ...

Assessment of Spontaneous Alternation, Novel Object Recognition and Limb Clasping in Transgenic Mouse Models of Amyloid-&#946; and Tau Neuropathology

Here we describe a staged, behavioral testing approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional motor behaviors in transgenic mouse models of &#946;-amyloidosis and tauopathy. The paradigm includes tests for spontaneous alternation in a Y-maze, novel object recognition, and limb clasping. These tests were selected because they: 1) interrogate function of cognitive or motor domains and the correlate neural circuitry relevant to the human disease state, 2) have clearly defined endpoints, 3) have easily implementable quality control checks, 4) can be run in a moderate throughput format, and 5) require little intervention by the investigator. These methods are designed for investigators looking to screen compounds for activity in short-term and working memory tasks, or functional motor behaviors associated with Alzheimer's disease mouse models. The methods described here use behavioral tests that engage a number of different brain regions including hippocampus and various cortical areas. Investigators that desire cognitive tests that specifically assess cognition mediated by a single brain region could use these techniques to supplement other behavioral tests.

Described here is a staged, behavioral screening approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional motor behaviors in transgenic mouse models of &#946;-amyloidosis and tauopathy. These methods are optimized to screen compounds for activity in short-term and working memory tasks.

Assessment of Spontane Alternation, neuartige Objekterkennung und Gliedmaßenverkürzung in transgenen Mausmodellen der Amyloid-β- und Tau-Neuropathologie

Here we describe a staged, behavioral testing approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional ...

Medizin

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and parenting. Importantly, mice can be trained to associate novel odors with specific behavioral responses to provide insight into olfactory circuit function. This protocol details the procedure for training mice on a Go/No-Go operant learning task. In this approach, mice are trained on hundreds of automated trials daily for 2&#8211;4 weeks and can then be tested on novel Go/No-Go odor pairs to assess olfactory discrimination, or be used for studies on how odor learning alters the structure or function of the olfactory circuit. Additionally, the mouse olfactory bulb (OB) features ongoing integration of adult-born neurons. Interestingly, olfactory learning increases both the survival and synaptic connections of these adult-born neurons. Therefore, this protocol can be combined with other biochemical, electrophysiological, and imaging techniques to study learning and activity-dependent factors that mediate neuronal survival and plasticity.

Here, we train mice on an associative learning task to test odor discrimination. This protocol also allows for studies on learning-induced structural changes in the brain.