Trabajo citado y publicado previamente por el autor fue apoyado por una subvención del Instituto Nacional de Salud Mental (MH088480). El autor desea agradecer a su antiguo mentor, el Dr. James O'Donnell por su apoyo en este proyecto. Esta publicación es apoyada por una subvención del Instituto Nacional de salud (T32 DA007135).

aquí se realizan todos los procedimientos fueron sometidos a y aprobado por el cuidado Animal y Use Comité y se llevaron a cabo siguiendo las directrices NIH.
 1. selección de objetos y disposición Experimental <ol><li>seleccionar los objetos que son suficientemente diferentes como para ser fácilmente discriminados por los ratones, pero tienen un grado similar de complejidad (textura, forma, patrones de color y brillo, etc.) con el fin de minimizar cualquier potencial inducida por preferencia de objeto que puede sesgar los resultados (véase Ennaceur 2010 para una descripción comprensiva del objeto opción 7).
	<ol><li>Prueba de preferencia innata y discriminación (ver pasos 2 &#38; 3).</li>
		<li>Objetos de uso que son tamaño de ratón o sólo ligeramente más grande para alentar la exploración ( figura 1). Para reducir la preferencia inducida, asegurar que los ratones son capaces de subir ni objeto, u objetos aunque habilidad para escalar un objeto puede aumentar el interés en la exploración (tiempo gastado sentado solo en un objeto no cuenta hacia el tiempo de exploración)</li>
		<li>Tener al menos 2 copias de cada objeto. Sin embargo, para minimizar posibles señales de olor durante la prueba, tener al menos 3 de cada objeto, duplicados para el entrenamiento y de prueba.</li>
		<li>Uso objetos de material irrompible, como la pérdida de un objeto debidos a daño durante la experimentación podrían interferir en la continuidad de la prueba y potencialmente causar daños o lesiones a los animales.</li>
		<li>Limpie los objetos antes y entre uso (etanol al 70% vol/vol es apropiado).</li>
	</ol></li> <li>Para minimizar el estrés de iluminación brillante, utilice iluminación difusa, baja, con el centro del laberinto iluminado alrededor de 20 lux. Utilice una temperatura y humedad similar a las condiciones de vivienda habitual. Si los ratones son trasladados de una sala de la vivienda a otra habitación para el experimento, aclimatar ratones a su nueva habitación durante al menos 1 h antes de su uso cada día.</li>
	<li>Manija ratones bien antes del entrenamiento. Porque la prueba se basa en la tendencia natural de los roedores para explorar novedad, reducir cualquier estrés o ansiedad de manejo que puede interferir con su deseo de explorar el campo y posteriormente, los objetos. Lo ideal es manejar ratones 1 - 2 veces / día durante al menos 1 minuto, 1 a 2 semanas antes de la prueba 15 , 29.</li>
	<li>Para la arena principal, utilice una cámara cuadrada (aproximadamente 40 cm x 40 cm x 40 cm) de blanco o negro, plástico no poroso, en contraste con el color del ratón. Como alternativa, utilizar un ed. arena redonda específicamente, al usar ratones ansiosos que pueden sentarse en las esquinas de un cuadrado arena, un estadio redondo puede ser preferible a conducta exploratoria 18 , 30.
	<ol><li>En día de entrenamiento, colocar objetos idénticos 2 en la diagonal (es decir, uno en la esquina de NW y uno en la esquina SE). Si los objetos son demasiado ligeros y el ratón se pueden mover, fijarlos al suelo. Extraíble obras masilla de montaje bien.</li>
		<li>Para día de la prueba, utilice la copia de 3 rd de cada objeto para colocar un objeto familiar y un nuevo objeto en la misma diagonal como el día de entrenamiento ( figura 2).</li>
		<li>Contrarrestar el uso de cada conjunto de objetos de modo que cada objeto se utiliza igualmente como un objeto familiar y como un objeto nuevo. Además, contrarrestar la ubicación del objeto nuevo para cada una de las 4 esquinas de la arena. Asegúrese de tener en cuenta que diagonal se utiliza para que animal para que la diagonal en la jornada de formación es la misma que la utilizada en el día de la prueba, para cada ratón.</li>
		<li>Limpie bien el aparato y objetos para quitar señales de olor antes y entre uso (etanol al 70% vol/vol es apropiado).</li>
	</ol></li> <li>Coloque la cámara directamente arriba del aparato para la visión óptima de la exploración. Sólo hay que usar el software con detección de punto de la nariz para análisis preciso. Si utiliza el software, captura una imagen de fondo con los objetos en su lugar antes de comenzar. En el software, configurar el área de exploración para ser aproximadamente 2-3 cm alrededor del objeto.</li>
	<li>Para reducir la interferencia del experimentador, grabar la prueba y anotar más tarde. Ciego el scorer a las condiciones experimentales. Si anota manualmente durante el experimento, asegúrese de que el experimentador es más de 1 metro de la arena y no es visible al ratón. 
	Nota: Cualquier momento el ratón pasa sobre el objeto sin activo vibrissae barriendo o sniffing no cuenta como tiempo de exploración.</li>
	Exploración de la <li>definir como cuando el ratón &#39; ruido s está apuntando hacia el objeto y dentro de 2-3 cm del objeto, con activo vibrissae barriendo o inhalación. No se tienen en cuenta cualquier momento sentado en el objeto sin la indicación de exploración activa.</li>
</ol> 2. Necesarios experimentos piloto <ol><li>pruebas de preferencia inducida <ol><li>para la habituación, quitar el ratón de su jaula casera y coloque en el centro de la arena abierta. Permitir que el ratón para explorar libremente por 5 min</li>
		<li>En día de entrenamiento (T1), colocar 2 objetos diferentes en cuadrantes opuestos del aparato, (es decir, NW y esquinas SE). Quitar el ratón de su jaula casera y coloque en el centro de la arena abierta. Permite la exploración libre durante 10 minutos</li>
		<li>Calcular el índice de discriminación. Si no hay ninguna preferencia inducida, el índice de discriminación debe ser en o cerca de cero. Los objetos que muestran preferencia no deberían utilizarse para ORT.</li>
	</ol></li> <li>Pruebas de capacidad de discriminación <ol><li>para la habituación, quitar el ratón de su jaula casa y colocarlo en medio de la arena abierta. Permitir que el ratón para explorar libremente por 5 min</li>
		<li>En la sesión de entrenamiento (T1), colocar objetos idénticos 2 en cuadrantes opuestos. Coloque el ratón en el centro de la arena y permitir que el ratón para explorar durante 10 minutos</li>
		<li>En pruebas de período de sesiones (T2), coloque uno del objeto utilizado durante T1 y un nuevo objeto en cuadrantes opuestos (es decir, esquinas SE y NW). Sesenta minutos después de la T1, coloque el ratón en el centro de la arena y permite la exploración libre durante 10 minutos</li>
		<li>Calcular el índice de discriminación. En un intervalo de retención de 60 min, el índice de discriminación debe estar por encima de 0.25.</li>
	</ol></li></ol> 3. Procedimiento experimental <ol><li><ol><li>la habituación quitar el ratón de su jaula casera y coloque en el centro de la arena abierta, vacía. Permita la libre exploración de la arena durante 5 minutos. Una vez vacía la jaula casera, guardarlo para su uso como una jaula de tenencia al día siguiente.</li>
		<li>Al final de 5 minutos, quite el ratón y coloque en una jaula de tenencia. No devuelva el ratón a su jaula original, o esto puede afectar el comportamiento de los ratones restantes a probarse.</li>
		<li>Limpie bien el aparato entre ratones con etanol al 70% vol/vol. 
		Nota: Durante la habituación, ansiedad-como comportamiento puede evaluarse calculando el tiempo de permanencia en el centro (ver Prut &#38; Belzung 2003 31). Esto es una medida útil cuando se considera la longitud de tiempo de T1. Ratones de ansiedad más altos pueden requerir una sesión de 10 minutos para alcanzar el criterio de exploración mínimo.</li>
	</ol></li> <li>Formación (T1) <ol><li>colocar dos objetos idénticos en cuadrantes opuestos de la arena (es decir, NE esquina y SW).</li>
		<li>24 h después de la habituación, quitar el ratón de su jaula casera y coloque en el centro de la arena, equidistante de los objetos idénticos 2.</li>
		<li>Permite la exploración libre de un mínimo de 5 minutos. Si se utiliza una cepa de ratones que se sabe que tienen baja actividad locomotor o exploración, (es decir, la mayoría de ratones no alcanzan un mínimo de 20 exploración de s de ambos objetos por 5 min, como se observa en las experiencias piloto o la literatura), extender la prueba a 10 min para todos mic e en la cohorte de.</li>
		<li>Al final de la prueba, quite el ratón y colocar en la jaula de tenencia. Una vez vacía la jaula casera, guardarlo para su uso como la jaula de retención en la prueba día.</li>
		<li>Limpie bien el aparato y objetos entre ratones con etanol al 70% vol/vol.</li>
	</ol></li> <li>Pruebas (T2) <ol><li>Coloque un objeto que se utiliza durante T1 (es decir, el objeto familiar) y un nuevo objeto en cuadrantes opuestos de la arena. Utilizar los mismos lugares utilizados durante T1 para cada ratón.</li>
		<li>En el T1 T2 intervalo de elección, quitar el ratón de su jaula casa y colóquelo en el ámbito del centro, equidistante de los objetos familiares y la novela. 
		Nota: En un intervalo de retención de 24 horas, la mayoría ratones no será capaces de discriminar entre el objeto conocido y novedoso (generalmente -0.2 &#60; d2 &#60; 0.2, en comparación con un positivo control de 32). Si probando efectos Nootrópicos, utilice este momento para sonda para mejorar la memoria. Para probar para los déficits de memoria, utilice un intervalo de retención más corto de cualquier lugar entre 20 minutos a 4 horas, dependiendo de la cepa de ratón.</li>
		<li>Permite la exploración libre durante 10 minutos. Al final de la prueba, quite el ratón y colocar en la jaula de tenencia.</li>
	</ol></li> <li>Tanto para T1 como T2, anotar los primeros 5 minutos. Si el ratón no cumple con el tiempo de exploración mínimo de 20 s para ambos objetos, continuar anotando más allá de 5 minutos hasta la exploración total sea superior a 20 s.</li>
</ol> 4. Análisis de datos <ol><li>Criterios de exclusión <ol><li>durante entrenamiento (T1) y pruebas (T2), calcular el tiempo total de exploración para ambos objetos para cada sesión (e1 y e2). Más ratones deben alcanzar una mínima exploración total para ambos objetos de 20 s por 5 minutos</li>
		<li>Extender T1 y T2 tiempo de 10 min para las cepas de ratones que tienen bajo exploración y no cumplen con este criterio mínimo por 5 minutos, según lo observado durante la prueba piloto.</li>
		<li>Puntuación comportamiento durante 5 minutos o más allá de 5 minutos hasta alcanzar el criterio mínimo de 20 s.</li>
		<li>Si los ratones no alcanzan un mínimo de s 20 de exploración para ambos objetos para T1 o T2 en 10 min, excluir de análisis, no se puede confirmar que pasaban bastante tiempo explorando para aprender/discriminar.</li>
	</ol></li> <li>Vs absolutas relativa análisis Nota: fórmulas diferentes para el análisis y su relación con otros pueden verse en la tabla 1.
	E1 <ol><li>calcular el tiempo total de exploración durante el entrenamiento para 2 objetos idénticos, donde a1 y a2 son los objetos idénticos. 
		e1 = a1 + a2</li>
		E2 <li>calcular el tiempo total de exploración durante la prueba para el objeto conocido (a) y la novela de objeto (b). 
		e2 = a + b</li>
		Objeto de <li>calcular d1 como simplemente el tiempo explorando la novela menos tiempo dedicado a explorar el objeto familiar. La medida de discriminación absoluta (d1) no toma en cuenta las diferencias en el tiempo de exploración entre ratones o tratamiento de grupos, aunque en ciertas circunstancias, puede ser una medida más sensible de 2. 
		d1 = b-a</li>
		<li>Calcula d2 como el tiempo de explorar el nuevo objeto menos el tiempo dedicado a explorar el objeto familiar dividido por el tiempo total de exploración. La medida más comúnmente usada es un valor de discriminación relativa referido a menudo como el índice de discriminación (d2), que no es influenciado por las diferencias en el tiempo de exploración. Esto significa que todos los valores caen entre -1 y + 1. 
		d2 = d1/e2</li>
		<li>o bien, calcular el reconocimiento o preferencia índice (d3) 3. Este es el tiempo de explorar el nuevo objeto dividido por el tiempo total. Esto significa que todos los valores caen entre 0 y 1. A menudo es multiplicado por 100 y utiliza como valor porcentual. 
		d3 = e2/b * 100</li>
	</ol></li> <li>Análisis estadístico <ol><li>utilizando los valores de discriminación promedio para cada grupo, determinar el rendimiento de la memoria usando ANOVA unidireccional. Para su posterior análisis, hacer comparaciones post hoc de dos vías con los grupos control positivo/negativo y estado del vehículo tratado vs.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Ennaceur, A., Meliani, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+one-trial+test+for+neurobiological+studies+of+memory+in+rats+III.+Spatial+vs.+non-spatial+working+memory.">A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats III. Spatial vs. non-spatial working memory.</a> Behav. Brain Res. 51 (1), 83-92 (1988).</li><li>Akkerman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Object+recognition+testing:+methodological+considerations+on+exploration+and+discrimination+measures.">Object recognition testing: methodological considerations on exploration and discrimination measures.</a> Behav. 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J., Bermudez-Rattoni, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrieval+and+reconsolidation+of+object+recognition+memory+are+independent+processes+in+the+perirhinal+cortex.">Retrieval and reconsolidation of object recognition memory are independent processes in the perirhinal cortex.</a> Neuroscience. 253, 398-405 (2013).</li><li>de curtis, M., Pare, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rhinal+cortices:+a+wall+of+inhibition+between+the+neocortex+and+the+hippocampus.">The rhinal cortices: a wall of inhibition between the neocortex and the hippocampus.</a> Prog. Neurobiol. 74 (2), 101-110 (2004).</li><li>Brown, M. W., Barker, G. R. I., Aggleton, J. P., Warburton, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+pharmacological+interventions+indicate+concerning+the+role+of+the+perirhinal+cortex+in+recognition+memory.">What pharmacological interventions indicate concerning the role of the perirhinal cortex in recognition memory.</a> Neuropsychologia. 50 (13), 3122-3140 (2012).</li><li>Moore, S. J., Deshpande, K., Stinnett, G. S., Seasholtz, A. F., Murphy, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+short-term+to+long-term+memory+in+the+novel+object+recognition+paradigm.">Conversion of short-term to long-term memory in the novel object recognition paradigm.</a> Neurobiol. Learn. Mem. 105, 174-185 (2013).</li><li>Suzuki, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anatomy,+physiology+and+functions+of+the+perirhinal+cortex.">The anatomy, physiology and functions of the perirhinal cortex.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 6, 179-186 (1996).</li><li>Wan, H., Aggleton, J. P., Brown, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+contributions+of+the+hippocampus+and+perirhinal+cortex+to+recognition+memory.">Different contributions of the hippocampus and perirhinal cortex to recognition memory.</a> J. Neurosci. 19 (3), 1142-1148 (1999).</li><li>Warburton, E. C., Brown, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Findings+from+animals+concerning+when+interactions+between+perirhinal+cortex,+hippocampus+and+medial+prefrontal+cortex+are+necessary+for+recognition+memory.">Findings from animals concerning when interactions between perirhinal cortex, hippocampus and medial prefrontal cortex are necessary for recognition memory.</a> Neuropsychologia. 48 (8), 2262-2272 (2010).</li></ol>

El autor no tiene nada que revelar.

La ORT es un método eficaz y flexible para el estudio de aprendizaje y la memoria en ratones. Cuando se configura un experimento, es importante considerar una serie de variables que pueden afectar el resultado. Como en los resultados representativos, la cepa de ratón afectará tanto intervalo de retención y tiempo de exploración. Una disminución en el tiempo de exploración puede sesgar o máscara resulta en una discriminación absoluta análisis2,3,</s...

La prueba de reconocimiento de objeto (ORT), también conocido como la prueba del reconocimiento de la novela objeto (ni), es un medio relativamente rápido y eficiente para probar diferentes fases de aprendizaje y memoria en ratones. Originalmente fue descrito por Ennaceur y Delacour en 1988 y utilizado principalmente en ratas1; sin embargo, desde entonces, ha sido exitosamente adaptado para uso en ratones2,3,4,5,6,7. La prueba se basa en tan sólo tres sesiones: sesión de una habituación, un entrenamiento y una prueba de sesión. Formación implica simplemente exploración visual de dos objetos idénticos, mientras que la sesión de la prueba consiste en sustituir uno de los objetos previamente explorados con un objeto nuevo. Porque los roedores tienen una preferencia innata por la novedad, un roedor que recuerda el objeto familiar pasa más tiempo explorando la novela objeto de8,7,9.
La principal ventaja de la ORT sobre otras pruebas de memoria de roedores es que se basa en la propensión natural de los roedores para explorar novedad8. Por lo tanto, no hay numerosas sesiones de entrenamiento o cualquier refuerzo positivo o negativo para motivar el comportamiento. Esto significa que la ORT es mucho menos estresante, con respecto a otras pruebas10,11,12,13,14,15y requiere a la significativamente menos tiempo para ejecutar que comúnmente emplean memoria pruebas, como el laberinto acuático de Morris o el laberinto de Barnes, que puede tardar hasta una semana o más. En consecuencia, las condiciones de la ORT más de cerca se asemejan a los utilizados en el estudio de la cognición humana, incrementar la validez ecológica de la prueba sobre muchas otras pruebas de memoria de roedores. Del mismo modo, porque ORT es una tarea de memoria visual simple, ha sido exitosamente adaptado para uso en numerosas especies, incluyendo seres humanos y primates no humanos, para evaluar diferentes aspectos de entre las especies de la memoria declarativa 2,16 ,17. Por último, la ORT puede modificarse fácilmente para examinar diferentes fases del aprendizaje y la memoria (es decir, adquisición, consolidación o recuperación), para evaluar diferentes tipos de memoria (e.g., memoria espacial), o para evaluar la retención de diferentes intervalos (es decir, a corto plazo memoria a largo plazo vs ).
La versatilidad de la ORT proporciona una plataforma para aplicaciones de investigación innumerables. Estudios pueden hacer uso de agentes farmacológicos para alterar o mejorar la memoria. Variando el tiempo de administración antes o después del entrenamiento o antes de la prueba puede insinúan neural subyacente mecanismos que conducen a interrumpen o mayor memoria6,18,19, 20. de manera similar, la tecnología de optogenetic puede ser utilizado en estos mismo varios puntos de tiempo para mirar la activación/inhibición neural que contribuye a las distintas fases del aprendizaje y la memoria. La tro también es apropiado para evaluar diferencias en animales transgénicos, en los estudios de la lesión, o en modelos neurodegenerativos o en envejecimiento estudios21,22,23,24, 25 , 26 , 27 , 28. el tiempo entre la formación y de prueba, conocido como el intervalo de retención, puede modificarse para evaluar cualquiera de estos cambios en la memoria de corto y largo plazo26. En última instancia, la ORT puede utilizarse como una herramienta para el estudio de cambios farmacológicos, genéticos y neurológicos en el aprendizaje y la memoria, o pueden utilizar estas herramientas para el estudio de la base del aprendizaje y la memoria en la ORT.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="805">
	<tbody>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Open Field Box</td>
			<td style="width:71px;">Panlab/Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">LE800SC</td>
			<td style="width:399px;">Available in grey, white, or black</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">ANY-maze</td>
			<td style="width:71px;">Stoelting Co.</td>
			<td style="width:119px;">60000</td>
			<td style="width:399px;">Behavior tracking system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">EthoVisionXT 12</td>
			<td style="width:71px;">Noldus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:399px;">Behavior tracking system; requires 3 point tracking</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Video Camera</td>
			<td style="width:71px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:399px;">Video camera should be mounted directly overhead of the apparatus</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">70% Ethanol&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP2818-4</td>
			<td style="width:399px;">Prior to starting testing and in between trials, each object should be carefully cleaned. The floor and walls of the apparatus should also be cleaned.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

novel object recognition test for the investigation of learning and memory in mice

La prueba de reconocimiento de objeto (ORT) es un ensayo de comportamiento utilizado para la investigación de diversos aspectos del aprendizaje y la memoria en ratones. La ORT es bastante simple y puede completarse en 3 días: día de habituación, jornada de formación y pruebas. Durante el entrenamiento, el ratón está permitido explorar 2 objetos idénticos. En el día del examen, uno de los objetos de formación se sustituye por un nuevo objeto. Porque los ratones tienen una preferencia innata por la novedad, si el ratón reconoce el objeto familiar, pasará la mayor parte de su tiempo en el nuevo objeto. Debido a esta preferencia innata, no hay necesidad de refuerzo positivo o negativo o largos calendarios de formación. Además, también puede modificarse la ORT para numerosas aplicaciones. El intervalo de retención puede ser acortado para examinar la memoria a corto plazo, o alargado para sonda de memoria a largo plazo. Intervención farmacológica puede utilizarse en varias veces antes del entrenamiento, después del entrenamiento o antes de la llamada a investigar diferentes fases del aprendizaje (es decir, adquisición, consolidación temprana o tardía o memoria). En general, la ORT es una prueba relativamente poco estrés, eficiente para la memoria en ratones y es apropiada para la detección de cambios neuropsicológicos tras manipulaciones farmacológicas, biológicas o genéticas.

Una configuración experimental general de la ORT se muestra en la figura 2. En la habituación ratones día (T0) se colocan en el terreno vacío por 5 min 24 horas más tarde, ratones se colocan en el compartimiento con 2 objetos idénticos y permitió explorar libremente hasta 10 minutos (T1). En la prueba el día (T2), los ratones nuevamente se colocan en la arena, pero con un objeto familiar y un nuevo objeto y permite explorar hasta 10 minutos. El interv...

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Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice

La prueba de reconocimiento de objeto (ORT) es un ensayo sencillo y eficaz para evaluar el aprendizaje y la memoria en ratones. La metodología se describe a continuación.

Prueba de reconocimiento de objeto novedoso para la investigación del aprendizaje y la memoria en ratones

The object recognition test (ORT) is a commonly used behavioral assay for the investigation of various aspects of learning and memory in mice. The ORT is ...

novel-object-recognition-test-for-investigation-learning-memory

Research

JoVE Journal

Behavior

71.7K vistas.  Icahn School of Medicine at Mount Sinai. La prueba de reconocimiento de objeto (ORT) es un ensayo sencillo y eficaz para evaluar el aprendizaje y la memoria en ratones. La metodología se describe a continuación.

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The Successive Alleys Test of Anxiety in Mice and Rats

The plus-maze was derived from the early work of Montgomery. He observed that rats tended to avoid the open arms of a maze, preferring the enclosed ones. Handley, Mithani and File et al. performed the first studies on the plus-maze design we use today, and in 1987 Lister published a design for use with mice. 
Time spent on, and entries into, the open arms are an index of anxiety; the lower these indices, the more anxious the mouse is. Alternatively, a mouse that spends most of its time in the closed arms is classed as anxious. 
One of the problems of the plus-maze is that, while time spent on, and entries into, the open arms is a fairly unambiguous measure of anxiety, time in the central area is more difficult to interpret, although time spent here has been classified as &#x201C;decision making&#x201D;. In many tests central area time is a considerable part of the total test time.
Shepherd et al. produced an ingenious design to eliminate the central area, which they called the &#x201C;zero maze&#x201D;. However, although used by several groups, it has never been as widely adopted as the plus-maze. 
In the present article I describe a modification of the plus-maze design that not only eliminates the central area but also incorporates elements from other anxiety tests, such as the light-dark box and emergence tests. It is a linear series of four alleys, each having increasing anxiogenic properties. It has given similar results to the plus-maze in general. Although it may not be more sensitive than the plus-maze (more data is needed before a firm conclusion can be reached on this point), it provides a useful confirmation of plus-maze results which would be useful when, for example, only a single example of a mutant mouse was available, as, for example, in ENU-based mutagenesis programs.

The plus-maze measures anxiety-like behaviour in rodents. There are two opposite closed and two opposite open arms; anxious rodents avoid the open arms. The central area is neither completely open nor closed, so time spent here is ambiguous and difficult to interpret. Here a modification of the plus-maze protocol eliminating this area is described.

Los callejones de prueba sucesiva de ansiedad en ratones y ratas

The plus-maze was derived from the early work of Montgomery. He observed that rats tended to avoid the open arms of a maze, preferring the enclosed ones.  ...

Investigación

Comportamiento

The Double-H Maze: A Robust Behavioral Test for Learning and Memory in Rodents

Spatial cognition research in rodents typically employs the use of maze tasks, whose attributes vary from one maze to the next. These tasks vary by their behavioral flexibility and required memory duration, the number of goals and pathways, and also the overall task complexity. A confounding feature in many of these tasks is the lack of control over the strategy employed by the rodents to reach the goal, e.g., allocentric (declarative-like) or egocentric (procedural) based strategies. The double-H maze is a novel water-escape memory task that addresses this issue, by allowing the experimenter to direct the type of strategy learned during the training period. The double-H maze is a transparent device, which consists of a central alleyway with three arms protruding on both sides, along with an escape platform submerged at the extremity of one of these arms.
Rats can be trained using an allocentric strategy by alternating the start position in the maze in an unpredictable manner (see protocol 1; &#167;4.7), thus requiring them to learn the location of the platform based on the available allothetic cues. Alternatively, an egocentric learning strategy (protocol 2; &#167;4.8) can be employed by releasing the rats from the same position during each trial, until they learn the procedural pattern required to reach the goal. This task has been proven to allow for the formation of stable memory traces.
Memory can be probed following the training period in a misleading probe trial, in which the starting position for the rats alternates. Following an egocentric learning paradigm, rats typically resort to an allocentric-based strategy, but only when their initial view on the extra-maze cues differs markedly from their original position. This task is ideally suited to explore the effects of drugs/perturbations on allocentric/egocentric memory performance, as well as the interactions between these two memory systems.

The goal of this protocol is to investigate spatial cognition in rodents. The double-H water maze is a novel test, which is particularly useful to elucidate the different components of learning, consolidation and memory, as well as the interplay of memory systems.

El Doble-H Maze: Una prueba del comportamiento robusto para el Aprendizaje y la Memoria en roedores

Spatial cognition research in rodents typically employs the use of maze tasks, whose attributes vary from one maze to the next. These tasks vary by their ...

Morris Water Maze Test: Optimization for Mouse Strain and Testing Environment

The Morris water maze (MWM) is a commonly used task to assess hippocampal-dependent spatial learning and memory in transgenic mouse models of disease, including neurocognitive disorders such as Alzheimer&#8217;s disease. However, the background strain of the mouse model used can have a substantial effect on the observed behavioral phenotype, with some strains exhibiting superior learning ability relative to others. To ensure differences between transgene negative and transgene positive mice can be detected, identification of a training procedure sensitive to the background strain is essential. Failure to tailor the MWM protocol to the background strain of the mouse model may lead to under- or over- training, thereby masking group differences in probe trials. Here, a MWM protocol tailored for use with the F1 FVB/N x 129S6 background is described. This is a frequently used background strain to study the age-dependent effects of mutant P301L tau (rTg(TauP301L)4510 mice) on the memory deficits associated with Alzheimer&#8217;s disease. Also described is a strategy to re-optimize, as dictated by the particular testing environment utilized.

This manuscript describes a Morris water maze (MWM) protocol tailored for use with a commonly used mouse model of Alzheimer's disease. The MWM is widely used in transgenic mouse models. Implementation of a procedure sensitive to the background strain of the mouse model is essential for detecting group differences.

Morris Water Maze Prueba: Optimización de ratón Colar y entorno de pruebas

 The Morris water maze (MWM) is a commonly used task to assess hippocampal-dependent spatial learning and memory in transgenic mouse models of disease, ...

Novel Object Exploration as a Potential Assay for Higher Order Repetitive Behaviors in Mice

Restricted, repetitive behaviors (RRBs) are a core feature of autism spectrum disorder (ASD) and disrupt the lives of affected individuals. RRBs are commonly split into lower-order and higher-order components, with lower order RRBs consisting of motor stereotypies and higher order RRBs consisting of perseverative and sequencing behaviors. Higher order RRBs are challenging to model in mice. Current assays for RRBs in mice focus primarily on the lower order components, making basic biomedical research into potential treatments or interventions for higher-order RRBs difficult. Here we describe a new assay, novel object exploration. This assay uses a basic open-field arena with four novel objects placed around the perimeter. The test mouse is allowed to freely explore the arena and the order in which the mouse investigates the novel objects is recorded. From these data, patterned sequences of exploration can be identified, as can the most preferred object for each mouse. The representative data shared here and past results using the novel object exploration assay illustrate that inbred mouse strains do demonstrate different behavior in this assay and that strains with elevated lower order RRBs also show elevated patterned behavior. As such, the novel object exploration assay appears to possess good face validity for higher order RRBs in humans and may be a valuable assay for future studies investigating novel therapeutics for ASD.

Higher order restricted, repetitive behaviors (RRBs) disrupt the lives of affected individuals. These behaviors are challenging to model in rodents, making basic biomedical research into potential treatments or interventions for RRBs difficult. Here we describe novel object exploration as a potential assay for higher order RRBs in mice.

Exploración de objetos novela como un ensayo de potencial de mayor orden repetitivo Comportamientos en ratones

Restricted, repetitive behaviors (RRBs) are a core feature of autism spectrum disorder (ASD) and disrupt the lives of affected individuals.  RRBs are ...

The 4 Mountains Test: A Short Test of Spatial Memory with High Sensitivity for the Diagnosis of Pre-dementia Alzheimer's Disease

This protocol describes the administration of the 4 Mountains Test (4MT), a short test of spatial memory, in which memory for the topographical layout of four mountains within a computer-generated landscape is tested using a delayed match-to-sample paradigm. Allocentric spatial memory is assessed by altering the viewpoint, colors and textures between the initially presented and target images.
Allocentric spatial memory is a key function of the hippocampus, one of the earliest brain regions to be affected in Alzheimer&#39;s disease (AD) and impairment of hippocampal function predates the onset of dementia. It was hypothesized that performance on the 4MT would aid the diagnosis of predementia AD, which manifests clinically as Mild Cognitive Impairment (MCI).
The 4MT was applied to patients with MCI, stratified further based on cerebrospinal fluid (CSF) AD biomarker status (10 MCI biomarker positive, 9 MCI biomarker negative), and with mild AD dementia, as well as healthy controls. Comparator tests included tests of episodic memory and attention widely accepted as sensitive measures of early AD. Behavioral data were correlated with quantitative MRI measures of the hippocampus, precuneus and posterior cingulate gyrus.
4MT scores were significantly different between the two MCI groups (p = 0.001), with a test score of &#8804;8/15 associated with 100% sensitivity and 78% specificity for the classification of MCI with positive AD biomarkers, i.e., predementia AD. 4MT test scores correlated with hippocampal volume (r = 0.42) and cortical thickness of the precuneus (r = 0.55).
In conclusion, the 4MT is effective in identifying the early stages of AD. The short duration, easy application and scoring, and favorable psychometric properties of the 4MT fulfil the need for a simple but accurate diagnostic test for predementia AD.

This article describes the 4 Mountains Test (4MT), a hippocampus-dependent test of working allocentric spatial memory. The hippocampus is affected early in Alzheimer's disease (AD) and this article outlines the 4MT methodology and results of patient testing, which demonstrates the value of the 4MT in the diagnosis of pre-dementia AD.

El 4 Montañas de prueba: una prueba corta de la memoria espacial con alta sensibilidad para el diagnóstico de pre-demencia Enfermedad de Alzheimer

This protocol describes the administration of the 4 Mountains Test (4MT), a short test of spatial memory, in which memory for the topographical layout of ...

A Real-world What-Where-When Memory Test

Episodic memory is a complex memory system which allows recall and mental re-experience of previous episodes from one&#39;s own life. Real-life episodic memories are about events in their spatiotemporal context and are typically visuospatial, rather than verbal. Yet often, tests of episodic memory use verbal material to be recalled (word lists, stories). The Real-World What-Where-When memory test requires participants to hide a total of 16 different objects in 16 different locations over two temporal occasions, 2 h apart. Another two hours later, they are then asked to recall which objects (What) they had hidden in which locations (Where) and on which of the two occasions (When). In addition to counting the number of correctly recalled complete what-where-when combinations, this task can also be used to test real-world spatial memory and object memory. This task is sensitive to normal cognitive aging, and correlates well with performance on other episodic memory tasks, while at the same time providing more ecological validity and being cheap and easy to run.

A Real-world What-Where-When Memory Test

The Real-World What-Where-When memory test is a novel episodic memory test, in which participants need to recall which objects have been hidden in which locations on which of two distinct occasions. It is easy to run and is sensitive to normal cognitive aging.

Un mundo real<em&gt; Qué-Dónde-Cuando</em&gt; Prueba de memoria

Episodic memory is a complex memory system which allows recall and mental re-experience of previous episodes from one&#39;s own life. Real-life episodic ...

The (Spatial) Memory Game: Testing the Relationship Between Spatial Language, Object Knowledge, and Spatial Cognition

The memory game paradigm is a behavioral procedure to explore the relationship between language, spatial memory, and object knowledge. Using two different versions of the paradigm, spatial language use and memory for object location are tested under different, experimentally manipulated conditions. This allows us to tease apart proposed models explaining the influence of object knowledge on spatial language (e.g., spatial demonstratives), and spatial memory, as well as understanding the parameters that affect demonstrative choice and spatial memory more broadly. Key to the development of the method was the need to collect data on language use (e.g., spatial demonstratives: &#34;this/that&#34;) and spatial memory data under strictly controlled conditions, while retaining a degree of ecological validity. The language version (section 3.1) of the memory game tests how conditions affect language use. Participants refer verbally to objects placed at different locations (e.g., using spatial demonstratives: &#34;this/that red circle&#34;). Different parameters can be experimentally manipulated: the distance from the participant, the position of a conspecific, and for example whether the participant owns, knows, or sees the object while referring to it. The same parameters can be manipulated in the memory version of the memory game (section 3.2). This version tests the effects of the different conditions on object-location memory. Following object placement, participants get 10 seconds to memorize the object&#39;s location. After the object and location cues are removed, participants verbally direct the experimenter to move a stick to indicate where the object was. The difference between the memorized and the actual location shows the direction and strength of the memory error, allowing comparisons between the influences of the respective parameters.

The Spatial Memory Game: Testing the Relationship Between Spatial Language, Object Knowledge, and Spatial Cognition

We present a protocol to explore the relationship between spatial language production, spatial memory, and object knowledge. The procedure allows experimental manipulation of, and control over, conditions of object knowledge, language at instruction, and physical location, thus teasing apart cognitive and linguistic models describing interactions between these variables.

El juego de memoria (espacial): Prueba de la relación entre el lenguaje espacial, objeto de conocimiento y cognición espacial

The memory game paradigm is a behavioral procedure to explore the relationship between language, spatial memory, and object knowledge. Using two different ...

A Behavioral Assay for Investigating the Role of Spatial Memory During Instinctive Defense in Mice

Evolution has selected a repertoire of defensive behaviors that are essential for survival across all animal species. These behaviors are often stereotyped actions elicited in response to innately aversive sensory stimuli, but their success requires enough flexibility for adapting to different spatial environments, which can change rapidly. Here, we describe a behavioral assay to evaluate the influence of learned spatial knowledge on defensive behaviors in mice. We have adapted the widely used Barnes maze spatial memory assay to investigate how mice navigate to a shelter during escape responses to innately aversive sensory stimuli in a novel environment, and how they adapt to acute changes in the environment. This new assay is an ethological paradigm that does not require training and exploits the natural exploration patterns and navigation strategies in mice. We propose that the set of protocols described here are a powerful means of studying goal-directed behaviors and stimulus-triggered navigation, which should be of interest to both the fields of instinctive behaviors and spatial memory.

This protocol describes a behavioral assay, based on the Barnes maze test, to study how instinctive defensive actions are modified by the knowledge of spatial environment.

Un ensayo conductual para investigar el papel de la memoria espacial durante defensa instintiva en ratones

Evolution has selected a repertoire of defensive behaviors that are essential for survival across all animal species. These behaviors are often ...

Novel Object Recognition and Object Location Behavioral Testing in Mice on a Budget

Ethologically relevant behavioral testing is a critical component of any study that uses mouse models to study the cognitive effects of various physiological or pathological changes. The object location task (OLT) and the novel object recognition task (NORT) are two effective behavioral tasks commonly used to reveal the function and relative health of specific brain regions involved in memory. While both of these tests exploit the inherent preference of mice for the novelty to reveal memory for previously encountered objects, the OLT primarily evaluates spatial learning, which relies heavily on hippocampal activity. The NORT, in contrast, evaluates non-spatial learning of object identity, which relies on multiple brain regions. Both tasks require an open-field-testing arena, objects with equivalent intrinsic value to mice, appropriate environmental cues, and video recording equipment and the software. Commercially available systems, while convenient, can be costly. This manuscript details a simple, cost-effective method for building the arenas and setting up the equipment necessary to perform the OLT and NORT. Furthermore, the manuscript describes an efficient testing protocol that incorporates both OLT and NORT and provides typical methods for data acquisition and analysis, as well as representative results. Successful completion of these tests can provide valuable insight into the memory function of various mouse model systems and appraise the underlying neural regions that support these functions.

Here we provide a protocol which includes comprehensive instructions for the economical establishment of murine object location and novel object recognition behavioral testing, including the design, cost, and construction of required equipment as well as execution of behavioral testing, data collection, and analysis.

Reconocimiento de objetos nuevos y ubicación del objeto conductual en ratones en un presupuesto

Ethologically relevant behavioral testing is a critical component of any study that uses mouse models to study the cognitive effects of various ...

Defining the Role Of Language in Infants' Object Categorization with Eye-tracking Paradigms

Assessing infant category learning is a challenging but vital aspect of studying infant cognition. By employing a familiarization-test paradigm, we straightforwardly measure infants&#8217; success in learning a novel category while relying only on their looking behavior. Moreover, the paradigm can directly measure the impact of different auditory signals on the infant categorization across a range of ages. For instance, we assessed how 2-year-olds learn categories in a variety of labeling environments: in our task, 2-year-olds successfully learned categories when all exemplars were labeled&#160;or the first two exemplars were labeled, but they failed to categorize when no exemplars were labeled or only the final two exemplars were labeled. To determine infants&#8217; success in such tasks, researchers can examine both the overall preference displayed by infants in each condition and infants&#8217; pattern of looking over the course of the test phase, using an eye-tracker to provide fine-grained time-course data. Thus, we present a powerful paradigm for identifying the role of language, or any auditory signal, in infants&#8217; object category learning.

Here we present a protocol for familiarization-test paradigms which provide a direct test of infant categorization and help to define the role of language in early category learning.

Definir el papel del lenguaje en objeto categorización los bebés con paradigmas de Eye-tracking

Assessing infant category learning is a challenging but vital aspect of studying infant cognition. By employing a familiarization-test paradigm, we ...