Beurteilung der Gedächtnisfunktion bei Pilocarpin-induzierten epileptischen Mäusen

Kognitive Beeinträchtigung ist eine der häufigsten Komorbiditäten bei der temporalen Lappenepilepsie. Wir werden ein Protokoll vorstellen, das beschreibt, wie Gedächtnisstörungen mit einem Mausmodell der chronischen Epilepsie bewertet werden können. Neuartige Objektposition, neuartige Objekterkennung und Mustertrennungstest sind einfache und kurze Essen, die die Tiere minimal belasten können.

Es macht diesen Test optimal für die Bewertung der Gedächtnisfunktion bei epileptischen Mäusen, ohne zusätzliche Auslöser für einen spontanen wiederkehrenden Anfall. Zunächst können Sie die Tiere mindestens 30 Minuten lang in ihren heimischen Käfigen an das schwache Licht anklimatisieren. Bereiten Sie ein offenes Feld vor.

Am ersten Tag der Gewöhnung, Ort und Lichtmessgerät in der Mitte des offenen Feldkastens. Und stellen Sie die Beleuchtungsstärke auf 60 Lux ein. Um die Motoraktivität jeder Maus auszuwerten, verwenden Sie die Video-Tracking-Software für das Tierverhalten.

Sobald die Video-Tracking-Software geöffnet ist, kalibrieren Sie die Größe des offenen Feldfeldes. Legen Sie dann vorsichtig eine experimentelle Maus in den offenen Feldkasten mit Blick auf die Wand. Öffnen Sie das Smart-Programm, klicken Sie auf Angepasst und Akzeptieren.

Klicken Sie auf Bildquelle. Nachdem Sie die installierte Kamera ausgewählt haben, drücken Sie die Set-Taste. Passen Sie die Kameraauflösung an und drücken Sie die Taste "Akzeptieren".

Ziehen Sie nach unserem Kalibrierungsklick die Computermaus, um die Boxgröße anzupassen. Und füllen Sie die innere Box Größe. Klicken Sie auf Zonendefinition, um die Größe der einzelnen Kontrollkästchen zu speichern und anzupassen, und klicken Sie dann auf Speichern.

Die rote Box ist der Tracked-Bereich, so dass es in die innere Box-Größe passt, während die rosa Box passt die Kontur. Drücken Sie die Erkennungseinstellung. Klicken Sie auf Snapshot, und drücken Sie Test starten, um zu überprüfen, ob ein bestimmter Bereich nachverfolgt wird, und legen Sie dann den Test stoppen und dann "Akzeptieren" vor.

Klicken Sie auf Zeiteinstellungen. Legen Sie nach Auswahl der voreingestellten Zeit die Latenzzeit auf drei Sekunden Erfassungszeit auf 15 Minuten fest, und drücken Sie Akzeptieren. Drücken Sie Subjects, um den Codenamen festzulegen.

Klicken Sie auf Scheduler, um die vorhandenen Details zu löschen und den Codenamen, der in Denantragstellern geändert wurde, auf Sitzung 1 zu ziehen. Klicken Sie auf Datenerfassung. Klicken Sie auf die Schaltfläche Aufzeichnen und auf Start.

Legen Sie die Maus in die Box und verfolgen Sie sie für 15 Minuten. Nach 15 Minuten Aufnahme kehren Sie die Maus in ihren heimischen Käfig zurück. Stellen Sie das helle Licht wieder her.

Klicken Sie auf Datenerfassung. Und klicken Sie dann auf Active Analysis Drag code name Sham in das Fenster daneben. Klicken Sie auf die Schaltfläche "Berichtsdefinitionen".

Klicken Sie auf Neue Berichtsdefinitionen, dann Zusammenfassungsbericht und drücken Sie Akzeptieren. Klicken Sie in Zone auf Betreffname und Entfernung, und senden Sie ihn an die Seite. Drücken Sie dann die Schaltfläche Akzeptieren.

Klicken Sie auf das rote Häkchen und klicken Sie auf Analysieren. Überprüfen Sie die Ergebnisse. Wiederholen Sie am zweiten Tag und am dritten Tag die Gewöhnungssitzungen.

Am vierten Tag führen Sie die Einarbeitungssitzung durch. Platzieren Sie jede Maus im abgesetzten Licht drei Minuten lang im leeren offenen Feld. Nach dieser kurzen Gewöhnung bringen Sie das Tier in seinen heimischen Käfig zurück.

Legen Sie zwei identische Objekte, Gummipuppen, in die offene Feldarena, fünf Zentimeter von den angrenzenden Wänden entfernt. Beheben Sie die Objekte mit doppelseitigem Klebeband. Führen Sie die experimentelle Maus in den offenen Feldkasten ein, der der Wand am weitesten von den Objekten zugewandt ist.

Erlauben Sie eine kostenlose Erkundung für 20 Minuten und messen Sie manuell die Zeit, die für die Erkundung beider Objekte mit zwei Stoppfeldern aufgewendet wird. Quantifizieren Sie nicht als Sondierungszeit, irgendwelche Verhaltensweisen, in denen die Tierschnarbe nicht auf das Objekt zeigen. Sobald die Maus die minimale Erkundungszeit von 30 Sekunden erreicht hat, beenden Sie für die beiden Objekte die F1-Sitzung und übertragen Sie die Maus in ihren Heimatkäfig.

Wenn die Maus die Objekte innerhalb der 20 Minuten 30 Sekunden lang nicht untersuchen kann, entfernen Sie die Maus aus dem geöffneten Feldfeld, und schließen Sie sie von weiteren Sitzungen aus. Führen Sie am fünften Tag die neue Testsitzung für den Objektstandort durch. Übertragen Sie die Maus für drei Minuten in den offenen Feldbereich zur Reha.

Dann kehren Sie es in seinen heimischen Käfig zurück. Bewegen Sie ein Objekt in die diagonale Position, und platzieren Sie die experimentelle Maus mit Blick auf die Wand des offenen Feldfeldes. Erlauben Sie 10 Minuten kostenlose Erkundung und Aufnahme mit einem Video-Tracking-System.

Messen Sie die Zeit, die für die Erkundung jedes Objekts mit zwei Stoppfeldern aufgewendet wird. Als nächstes übertragen Sie die Maus in ihren Heimischen Käfig, indem Sie den Schwanz greifen. Drei Tage lang die Maus mit freiem Zugang zu Essen und Wasser ruhen lassen.

Am neunten Tag führen Sie eine 15-minütige Gewöhnungssitzung für eine Maus durch. Am 10. Tag führen Sie die kurze Reha-Sitzung für drei Minuten durch. Dann geben Sie es vorübergehend in seinen heimischen Käfig zurück.

Legen Sie zwei identische Objekte, 50 Milliliter Kunststoffrohre gefüllt mit 40 Milliliter Wasser, in das offene Feld, fünf Zentimeter von den angrenzenden Wänden entfernt. Führen Sie die experimentelle Maus in das offene Feldfeld ein und zeigen Sie die Wand am weitesten von den Objekten. Da die Maus den beiden verschiedenen Objekten im NO Test ausgesetzt wird, einem 50 Milliliter Kunststoffrohr gefüllt mit 40 Milliliter Wasser, und einem Glas Coplin Gläser Glas.

Gegengewicht das Objekt während der Eingewöhnungssitzung, indem zwei identische Objekte, Glas Coplin Gläser Gläser, für die Hälfte der Tiere in der Gruppe. Dann mit zwei verschiedenen Objekten, ermöglichen freie Erkundung für 20 Minuten und manuell messen Sie die Zeit, die für die Erkundung beider Objekte mit zwei Stoppfeldern verbracht. Sobald die Maus die minimale Ablaufzeit von 30 Sekunden für beide Objekte erreicht hat, beenden Sie die Einarbeitungssitzung.

Führen Sie am nächsten Tag die neuartige Objekterkennungstestsitzung durch. Übertragen Sie die Maus zunächst für drei Minuten auf das offene Feld, um sich zu rehabilitieren, und kehren Sie sie dann in ihren heimischen Käfig zurück. In fünf Zentimetern Entfernung von den angrenzenden Wänden, ersetzen Sie das Rohr mit einem Glas Coplin Gläser Glas, so dass die Mäuse zu einem Rohr und ein Glas Coplin Gläser Glas ausgesetzt werden.

Für die Hälfte der Tiere, die während der ersten Einarbeitungssitzung Gläsern aus Glas glasiert wurden, ersetzen Sie das Glas Coplin Glas glas durch ein 50 Milliliter Plastikrohr, das mit 40 Milliliter wassergefüllt ist. Damit die Mäuse einem Rohr und einem Glas Coplin Glas glasiert werden. Erlauben Sie 10 Minuten kostenlose Erkundung während der Aufnahme mit einem Video-Tracking-System.

Dann schnappen Sie sich den Schwanz der experimentellen Maus und übertragen Sie ihn in ihren Heimischenkäfig. Drei Tage lang und lassen Sie die Maus mit freiem Zugang zu Essen und Wasser ruhen. Öffnen Sie für die NL-Analyse das Startprogramm Customized and Accept.

Klicken Sie auf Bildquelle. Nachdem Sie die installierte Kamera ausgewählt haben, drücken Sie die Set-Taste. Nur die Kameraauflösung und drücken Sie Akzeptieren.

Klicken Sie auf Die Schaltfläche Videos Ordner öffnen, um das gespeicherte Video zu öffnen. Sehen Sie sich das gespeicherte Video 10 Minuten lang ab dem Zeitpunkt an, zu dem die Maus eintritt, und messen Sie die Zeit, die für die Erkundung jedes Objekts aufgewendet wird. Am 15. Tag wurde die erste Einarbeitungssitzung für den PS-Test durchgeführt.

Das ist für die Maus auf das offene Feld Bereich für die Rehabitulierung, für drei Minuten. Platzieren Sie die Bodenplatte mit dem breiten Raster und zwei identischen Objekten. Kunststoff-T-Flaschen gefüllt mit 50 Milliliter Wasser, in der offenen Feldbox.

Dann führte die experimentelle Maus in den offenen Feldkasten mit Blick auf die Wand am weitesten von den Objekten. Lassen Sie eine kostenlose Erkundung für 20 Minuten. Und messen Sie manuell die Zeit, die sie mit dem Erkunden beider Objekte verbringen, indem Sie zwei Stoppfelder verwenden.

Sobald die Maus die minimale Erkundungszeit von 30 Sekunden für beide Objekte erreicht hat, stoppen Sie die erste Einarbeitungssitzung und übertragen Sie das Tier in seinen Heimischenkäfig. Um den Objekt- und Mustertrennungstest für die Hälfte der Tiere auszugleichen, platzieren Sie die Bodenplatte mit dem breiten Gitter und zwei identischen Objekten, Glasflaschen für das Gegenausgleichsexperiment in der offenen Feldbox. Führen Sie dann die experimentelle Maus in die offene Feldbox ein und lassen Sie eine kostenlose Erkundung für 20 Minuten zu.

Sobald die Maus die minimale Erkundungszeit von 30 Sekunden für die beiden Objekte erreicht hat, stoppen Sie die erste Einarbeitungssitzung und übertragen Sie das Tier in seinen Heimischenkäfig. Am nächsten Tag, übertragen Sie die Maus auf das Feld Bereich für die Reha für drei Minuten. Und dann zurück in seinen heimischen Käfig.

Als nächstes führen Sie die zweite Eingewöhnungssitzung mit zwei Glasflaschen auf dem schmalen Gitterboden durch. Für die Ausgleichsexperimente führen Sie die zweite Einarbeitungssitzung mit zwei t-Kolben durch, die mit Wasser auf schmalem Gitterboden gefüllt sind. Führen Sie am nächsten Tag die Mustertrennungstestsitzung durch.

Übertragen Sie die Maus drei Minuten lang in den offenen Feldbereich ohne Objekt zur Rehabilitierung. Und dann zurück in seinen heimischen Käfig. Als nächstes legen Sie den mit Wasser und einer Glasflasche gefüllten T-Kolben auf den schmalen Gitterboden.

Machen Sie die T-Flaschen mit Wasser gefüllt, in neuartigen Objekt. Für Ausgleichsexperimente legen Sie jedes Objekt auf den schmalen Gitterboden, um die Glasflasche in diesem Fall zu einem neuartigen Objekt zu machen. Dann für die experimentelle Maus auf das offene Feld für 10 Minuten zu erkunden.

Erlauben Sie 10 Minuten kostenlose Erkundung und Aufzeichnung mit einem Video-Tracking-System. Schnappen Sie sich den Schwanz der Versuchsmaus und übertragen Sie ihn in ihren Heimischenkäfig. Messen Sie die Zeit, die für die Erkundung jedes Objekts aufgewendet wird, mit zwei Stoppfeldern.

Und berechnen Sie das Diskriminierungsverhältnis, das der Differenz der Zeit entspricht, die zwischen dem romanischen Objekt und dem vertrauten Objekt geteilt wird, geteilt durch die Gesamtzeit, die die beiden Objekte untersucht. Sechs Wochen nach der Einführung von Pilokarin induzierte akute Anfälle. Mäuse werden dem neuartigen Objektortungstest unterzogen.

Neuartiger Objekterkennungstest und Mustertrennungstest. In dieser Reihenfolge durch drei Tägige Ruhezeiten zwischen den Tests getrennt. Es wurde bestätigt, dass es keine signifikante Präferenz zwischen den beiden gemeinsam präsentierten Objekten gab.

Die epileptischen Mäuse zeigten eine signifikante Reduktion des Diskriminierungsverhältnisses in den drei Tests im Vergleich zu Sham-Kontrollen. Nachweis einer Beeinträchtigung des räumlichen Gedächtnisses. Die Messung der motorischen Aktivität zeigte einen signifikanten Anstieg bei epileptischen Tieren.

Während die Motivation, die Objekte zu erforschen, zwischen Schein- und epileptischen Tieren vergleichbar war. Schließlich wurde der Tod der Hippocampus-Zellnachlagnacheinem nach einem Pilokarin-induzierten Status epilepticus mittels kristallvioletter Färbung ausgewertet, um den anfallinduzierten neuronalen Schaden zu bestätigen. Die mit Pilokarin behandelten Tiere demonstrierten pyknotische Zellen im und im CA3-Unterfeld des Hippocampus, im Gegensatz zu den Sham-Kontrollen.

Count up in NO und PS-Test ist entscheidend, um inhärente Verzerrungen zu reduzieren, die in diesem gerätespezifischen Objekt möglich sind. Darüber hinaus zeigen chronische epileptische Mäuse offene erhöhte Angst, die mehrere Gewöhnungsschritte für genug Anerkennung Nation zu den experimentellen Einstellungen erfordert. Zeitänderungen wie die Anzahl oder die Position der Objekte in unserem Protokoll können die Speichertests bereitstellen.

Was nützlich sein kann, um komplexe Mechanismen der Epilepsie im Zusammenhang mit kognitiven Rückgang zu erarbeiten. Nachdem Sie sich dieses Video angeschaut haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie verschiedene Aspekte der Gedächtnisstörung bei Epilepsie bewerten können.