Generieren eines murinen orthotopen metastasierendem Brustkrebs Krebs Modells und Durchführung von murinen radikale Mastektomie

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich Brustkrebs zu beantworten, wie man die Progression und Behandlung von menschlichem Brustkrebs in einem Mausmodell nachahmt. Der Hauptvorteil dieses Maus-Brustkrebsmodells ist, dass es eine hohe Tumorigeneserate nach orthotopischer Implantation und eine niedrige lokale Rezidivrate nach Mastektomie hat. Beginnen Sie mit der Bestätigung eines Mangels an Reaktion auf Zehenkneifen in einer anästhesierten weiblichen Maus und kleben Sie die Gliedmaßen des Tieres auf ein chirurgisches Brett.

Mit sterilen Wattestäbchen sterilisieren Sie den operationsfreien Bereich mit Chlorhexidin, Jod und 75% Ethanol. Und machen Sie einen Fünf-Millimeter-Hautschnitt in der Mitte der vorderen Brustwand. Heben Sie als nächstes die rechte Seite der Haut neben dem Schnitt an und verwenden Sie eine sterile Mikrodissektionsschere, um die Haut von der Brustwand zu lösen.

Invertieren Sie die Haut, um das richtige Brustfettpad Nummer zwei freizulegen, und verwenden Sie eine Ein-Milliliter-Insulinspritze, die mit einer 28,5-Spur-Nadel ausgestattet ist, um sorgfältig 20 Mikroliter Krebszellsuspension durch die Wunde in das Fettpolster zu injizieren. Halten Sie die Nadel fünf Sekunden lang im Fettpolster, damit sich die gelatinöse Krebszellproteinmischung vor dem Entfernen der Nadel verfestigen und den Schnitt mit sterilen 5-0 nicht resorbierbaren Nähten schließen kann. Dann legen Sie das Tier in einen sauberen Käfig mit Überwachung bis zur vollen Recumbency.

Um die Mastektomie acht Tage nach der Krebsimpfung durchzuführen, bereiten Sie die Maus auf eine Operation vor, wie gerade gezeigt, und machen Sie einen Fünf-Millimeter-Hautschnitt zwei Millimeter links von der chirurgischen Narbe aus der Krebszellimpfung. Erweitern Sie den Schnitt in Richtung der Wurzel des Vorderbeins, um den Tumor zu entfernen, und die Haut, einschließlich der chirurgischen Narbe, und die Läsion in Kontakt mit dem Tumor, und das axilläre Lymphknotenbecken, in dem typischerweise keine sichtbaren Lymphknoten zum Zeitpunkt der Mastektomie vorhanden sind. Dann schließen Sie die Hautdefekte mit sterilen 5-0 nicht resorbierbaren Nähten in Form eines Y.Und bringen Sie das Tier in seinen Käfig mit Überwachung bis zur vollen Amtsinhaberschaft zurück.

Für Lungenmetastasen Quantifizierung 21 Tage nach der Impfung injizieren 150 Milligramm pro Kilogramm D-Luciferin IP 15 Minuten vor der Euthanasie. Und verwenden Sie gekrümmte Mayo-Schere, um die Haut und Peritoneum in der Mitte des Bauches zu öffnen. Drücken Sie die Leber nach unten, bis das Zwerchfell visualisiert werden kann, und schneiden Sie das Zwerchfell und die bilateralen Rippen von Caudad zu Cephalad.

Drehen Sie die vordere Thoraxwand, um die Lunge freizulegen, und heben Sie die Lunge an, um die Thorax-Ösophagus zu identifizieren, die wie eine Schnur aussieht, die die Lunge mit der Wirbelsäule verbindet. Schneiden Sie die Speiseröhre mit einer Mikrodissektionsschere und ziehen Sie die bilaterale Lunge und das Herz mit Zangen in Richtung Caudad. Dann schneiden Sie die Luftröhre und die Hauptgefäße an der Cephalade an die Lungenspitze und legen Sie die Lunge in eine 10-Zentimeter-Petrischale für biolumineszierende Bildgebung.

Verwenden Sie die Schere, um das Herz aus dem Lungengewebe zu entfernen. Ab etwa acht Tagen nach der Impfung von Brustkrebszellen ist die Biolumineszenz in der Lunge tiefer und kleiner als in der primären Läsion, die die primäre Tumorbelastung bei lebenden Mäusen widerspiegelt. Die Messung der Tumorgröße mit Sätteln ermöglicht die Abschätzung des Tumorvolumens vor Ort.

Dieses Mastektomie-Modell ermöglicht auch die serielle überwachung der metastasierenden Tumorbelastung, ohne die Tiere einschläfern zu müssen. Die Tumorbelastung der Lungenmetastasen kann auch durch Ex-vivo-Bildgebung quantifiziert werden, aber die Einschränkung ist, dass die Mäuse eingeschläfert werden müssen. Das Überleben der Maus nach der chirurgischen Behandlung kann auch als übersetzbarer klinischer Endpunkt überwacht werden.

Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet des Brustkrebses, nicht nur die Entwicklung neuer Medikamente, sondern auch die Brustkrebsforschung im Allgemeinen zu erforschen.