Obwohl die Spende nach dem Tod des Spenders die Hauptquelle für eine Festorgantransplantation ist, führt der irreversible Verlust der Gehirnfunktion zu pathophysiologischen Veränderungen, die zu einer systemischen Entzündungsreaktion führen. Dieses murine Modell der Hirntod-Induktion ermöglicht die Verwendung einer Vielzahl von Analysewerkzeugen und Knockout-Modellen, um die Wege der Hirn-Tod-Regulierung zu untersuchen. Zur arteriellen Katheterisierung nach Bestätigung einer mangelnden Reaktion auf Pedalreflex und Entfernung der oberen Bauchhaare, desinfizieren Sie die exponierte Haut mit 70% Ethanol und verwenden Sie eine Sezierendereine, um einen Mittellinienschnitt in der Haut zu machen.
Mit Zangen, stumpf sezieren die submandibulären Drüsen und Hals Muskelgewebe und trennen Sie das Gewebe, um die gemeinsame Halsschlagader zu belichten. Platz drei 8-0 Seidenligaturen unter der rechten gemeinsamen Halsschlagader und legen Sie eine Klemme auf die proximale Ligatur. Bringen Sie Spannung in die Arterie, so dass der Fluss ausgesetzt wird und schließen Sie die distale Ligatur.
Legen Sie einen 26-Spur-Arterienkatheter durch ein kleines vorgeformtes Hautloch auf dem Schädelaspekt des Schnitts ein. Drücken Sie den Katheter mit der Zange, wenn das Lumen zu groß ist, um den Rückfluss zu reduzieren und den Katheter mit allen drei Nähten zu sichern, und verwenden Sie dann ein einzelnes 5-0 Monofilament, das nicht resorbierbar ist, um den Katheter in der Nähe des vorgeformten Hautlochs an der Haut zu befestigen. Um eine Tracheostomie durchzuführen, verwenden Sie Zangen, um die prätracheale Muskulatur stumpf zu sezieren und zwei 8-0 Seidenligaturen unter der Luftröhre.
Legen Sie das Lüftungsrohr zwischen zwei Trachealknorpeln ein, um eine einseitige Belüftung zu vermeiden, und sichern Sie das Rohr mit beiden vorbereiteten Ligaturen, schließen Sie dann die Haut mit einer 6-0 Monofilament-nicht-resorbierbaren Laufnaht und belüften Sie die Maus mit einer Frequenz von 150 pro Minute und einem Gezeitenvolumen von 200 Mikrolitern. Um den Hirntod im Versuchstier zu induzieren, ordnen Sie die Maus in die anfällige Position und verwenden Sie die Chirurgische Schere, um die Haut aus dem Schädel zu entfernen. Bohren Sie eine Ein-Millimeter-Sättelbohrung perimedial über dem linken parietalen Kortex und verwenden Sie stumpfe Zangen, um die letzte Gewebebrücke des Schädels zu durchdringen.
Nach dem Entfernen von scharfen Kanten, legen Sie einen Ballonkatheter mit Saline vorgefüllt mit der gesamten Luft evakuiert. Wenn sich der Katheter vollständig innerhalb der Schädelhöhle befindet, verwenden Sie eine Spritzenpumpe, um den Katheter über einen Zeitraum von 10 bis 15 Minuten mit dem Aufblasen des Katheters mit etwa 0,1 Millimetern pro Minute zu beginnen. Wenn der Hirntod eintritt, stoppen Sie die Inflation des Ballonkatheters und legen Sie eine Heizdecke über die Maus, um Unterkühlung zu vermeiden.
Nach der Bestätigung des Hirntodes, überwachen und dokumentieren Sie den Blutdruck regelmäßig, indem Sie alle 30 Minuten 100 Mikroliter Kochchen Kochchen einstecken, um den Blutdruck des Tieres zu stabilisieren. Schließen Sie nach vier Stunden Hirntod alle Tiere aus, ohne Herzen zu schlagen, und ernten Sie die Mausorgane und Gewebe von Interesse nach Standardprotokollen. Nach der Hirntod-Induktion weist der Blutdruck einen anfänglichen hypertensiven Höhepunkt auf, gefolgt von einer längeren blutdrucksenkenden Phase.
Eine weitere etablierte Beobachtung ist, dass die Induktion des Gehirns zur Aktivierung des Immunsystems führt. Tatsächlich wird nach vier Stunden Hirntod in diesem Modell eine organspezifische Upregulation von Immunmarkern auf mRNA-Ebene beobachtet. Nach einer vordefinierten Zeit des Hirntods können die Organe für ihre direkte Analyse oder für die anschließende Organtransplantation geerntet werden.
Dieses Modell wird eingehende Studien über den Einfluss von Hirntod-induzierten Verletzungen ermöglichen und hat bereits neue Erkenntnisse zur Komplementaktivierung und Leukozytenmigration ergeben.
