Indução de Morte Cerebral em Camundongos Usando Monitoramento e Ventilação intra-arterial da pressão arterial via traqueostomia

Embora a doação após a morte cerebral do doador seja a principal fonte de transplante de órgãos sólidos, a perda irreversível da função cerebral induz alterações fisioterícias que levam a uma resposta inflamatória sistêmica. Este modelo murino de indução de morte cerebral permite o uso de uma grande variedade de ferramentas analíticas e modelos de nocaute para estudar os caminhos da regulação da morte cerebral. Para cateterismo arterial após confirmar a falta de resposta ao reflexo do pedal e remover os pelos abdominais superiores, desinfetar a pele exposta com 70% de etanol e usar uma tesoura dissecando para fazer uma incisão midline na pele.

Usando fórceps, disseque as glândulas submandibulares e o tecido muscular do pescoço e separe os tecidos para expor a artéria carótida comum. Coloque três 8-0 ligaduras de seda sob a artéria carótida comum direita e colocar um grampo na ligadura proximal. Traga tensão na artéria para que o fluxo seja suspenso e feche a ligadura mais distal.

Insira um cateter arterial de 26 bitolas através de um pequeno orifício de pele pré-formado no aspecto craniano da incisão. Aperte o cateter com os fórceps se o lúmen for muito grande para reduzir o fluxo de fundo e fixar o cateter com todas as três suturas, em seguida, use um único monofilamento 5-0 não possível para fixar o cateter à pele perto do orifício da pele pré-formado. Para realizar uma traqueostomia, use fórceps para dissecar a musculatura pré-traqueal e colocar dois 8-0 ligaduras de seda sob a traqueia.

Insira o tubo de ventilação entre duas cartilagens traqueais para evitar ventilação unilateral e fixe o tubo com ambas as ligaduras preparadas, em seguida, feche a pele com uma sutura de corrida nãoabsorbável de 6-0 monofilament e ventile o rato com uma frequência de 150 por minuto e um volume de maré de 200 microliters. Para induzir a morte cerebral no animal experimental, organize o camundongo na posição propensa e, segurando a pele com fórceps, use uma tesoura cirúrgica para remover a pele do crânio. Perfurar um furo de pinça de um milímetro perimedialmente acima do córtex parietal esquerdo e usar fórceps contundentes para penetrar na ponte de tecido final do crânio.

Depois de remover quaisquer bordas afiadas, insira um cateter de balão pré-preenchido com soro fisiológico com todo o ar evacuado. Quando o cateter estiver inteiramente dentro da cavidade craniana, use uma bomba de seringa para começar a inflar o cateter a aproximadamente 0,1 milímetros por minuto durante um período de 10 a 15 minutos. Quando a morte cerebral ocorrer, pare a inflação do cateter de balão e coloque um cobertor de aquecimento sobre o rato para evitar hipotermia.

Após a morte cerebral ter sido confirmada, monitore e documente a pressão arterial regularmente, infundindo 100 microlitres de soro fisiológico a cada 30 minutos para estabilizar a pressão arterial do animal. Após quatro horas de morte cerebral, exclua qualquer animal sem bater corações e colher os órgãos e tecidos de interesse do rato de acordo com os protocolos padrão. Após a indução de morte cerebral, a pressão arterial apresenta um pico hipertensivo inicial seguido de uma fase hipotensiva prolongada.

Outra observação bem estabelecida é que a indução de morte cerebral leva à ativação do sistema imunológico. De fato, após quatro horas de morte cerebral neste modelo, uma regulação específica de órgãos de marcadores imunológicos é observada no nível mRNA. Após um período predefinido de morte cerebral, os órgãos podem ser colhidos para sua análise direta ou para posterior transplante de órgãos.

Este modelo permitirá estudos aprofundados sobre a influência da lesão induzida pela morte cerebral e já revelou novos insights sobre a ativação complementar e migração de leucócitos.