Die In-vitro-Maßnahme ist eine geeignete Maßnahme zur Inspektion der Auflösung von Lösungen fester chinesischer Medizin, die die Auswirkungen des Arzneimittelzerfalls und das Auflösungsverhalten sowie den Wirkstoffgehalt berücksichtigen. Die Detektion von Multi-Index-Komponenten kann den neutralen Einfluss und die Auflösungsdifferenz verschiedener Komponenten besser widerspiegeln. Das Verfahren wird von Quinyun Du demonstriert, einem außergewöhnlichen Studenten aus meinem Labor.
Bereiten Sie zunächst die Stammlösung der Referenzsubstanz vor, indem Sie 10,6 Milligramm Salidrocide, 5,24 Milligramm Gallussäure und 5,21 Milligramm Ethylgallussäure separat auf einer elektronischen Analysenwaage wiegen. Dann geben Sie sie einzeln in einen Fünf-Milliliter-Messkolben. Fügen Sie dann Methanol in HPLC-Qualität hinzu, um es aufzulösen, und verdünnen Sie es auf fünf Milliliter.
Zum Schluss gut schütteln, um die Stammlösung der Referenzsubstanz mit Massenkonzentrationen von 2,120, 1,048 bzw. 1,042 Milligramm pro Milliliter zu erhalten. Zur Herstellung der Testprobenlösung werden 2,8 Gramm Rhodiola-Granulat mit 10 Millilitern Methanol in HPLC-Qualität 30 Minuten lang mit einer Ultraschallreinigungsmaschine extrahiert. Filtern Sie es dann mit einem 0,22-Mikrometer-Filter für den Test der Anpassungsfähigkeit des Systems.
Stellen Sie dann eine gemischte Referenzlösung her, die 0,590 Milligramm pro Milliliter Salidrocide, 2,030 Milligramm pro Milliliter Gallussäure und 1,930 Milligramm pro Milliliter Ethylgallat enthält. Um den theoretischen Gehalt jeder charakteristischen Komponente von Rhodiola-Granulat zu erhalten, geben Sie 2,8 g Rhodiola-Granulat in einen 500-Milliliter-Kegelkolben. Fügen Sie 200 Milliliter Reinstwasser hinzu und extrahieren Sie es 60 Minuten lang mit Ultraschall.
Filtern Sie es dann mit einem 0,22-Mikrometer-Filter. Nachdem Sie den Inhalt der Testlösung bestimmt haben, stellen Sie die chromatographischen Bedingungen für die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie wie im Manuskript beschrieben ein. Um die lineare Beziehung zu untersuchen, verdünnen Sie die Referenzstammlösungen von Gallussäure und Ethylgallat und die Referenzstammlösungen von Salidroczid, um die Gradientenkonzentrationslösung zum Zeichnen einer Standardkurve zu erhalten.
Dann injizieren Sie sechsmal täglich 10 Mikroliter der gemischten Referenzlösung in das HPLC-System und lassen Sie die Proben unter den gleichen HPLC-Bedingungen laufen, während Sie die Peakfläche jeder Merkmalskomponente aufzeichnen. Als nächstes injizieren Sie 10 Mikroliter der vorbereiteten Probenlösung und bestimmen Sie die Peakflächen der HPLC gemäß den chromatographischen Bedingungen in verschiedenen Zeitintervallen. Nehmen Sie sechs Proben derselben Charge von Rhodiola-Granulat, um die zuvor gezeigte Testprobenlösung herzustellen, und injizieren Sie 10 Mikroliter jeder Probe in das HPLC-System.
Führen Sie die Proben wie zuvor gezeigt aus, um die Reproduzierbarkeit zu bestimmen. Nachdem sechs Portionen derselben Charge von Rhodiola-Granulat für die Testlösung hergestellt wurden, werden etwa 50% des Referenzsubstrats jeder Indexkomponente zugegeben. Führen Sie diese Proben im HPLC-System aus, wie zuvor gezeigt, um die im Manuskript beschriebene Wiederfindungsrate zu berechnen.
Um den Auflösungstest durchzuführen, geben Sie 100 Milliliter Reinstwasser in den Auflösungsbecher des Arzneimittelauflösungsgeräts und halten Sie die Temperatur bei 37 Grad Celsius mit einer Drehzahl von 100 U / min. Als nächstes geben Sie 2,8 Gramm Rhodiola-Granulat in einen Auflösungsbecher und beginnen Sie sofort mit der Aufzeichnung der Auflösungsdauer. Sammeln Sie insgesamt einen Milliliter der Probe mit einem Injektor in verschiedenen Zeitintervallen und füllen Sie das Volumen im Auflösungsbecher sofort mit einem Auflösungsmedium bei gleicher Temperatur auf.
Füllen Sie die gesammelten Proben sofort durch eine 0,22 Mikrometer mikroporöse Membran und entnehmen Sie das anschließende Filtrat. Nachdem Sie den Inhalt jeder Komponente zu jedem Zeitpunkt durch HPLC bestimmt haben, berechnen Sie die Auflösung jedes Zeitpunkts und die kumulative Auflösung, wie im Manuskript beschrieben. Das Chromatogramm der Probe und die Referenzlösung wurden erhalten.
Drei verschiedene Peaks, die Gallussäure, Salidrozid und Ethylgallat entsprechen, zeigen, dass der Elutionsgradient eine gute Auflösung für die drei Indexkomponenten in Rhodiola-Granulaten hatte. Die Auflösungskurven jeder Komponente zeigen, dass die kumulative Auflösung von Gallussäure nach einer Minute über 80% betrug. Bei Salidrazid und Ethylgallussäure lag sie nach fünf Minuten bei über 65 %.
Die kumulative Auflösung jeder Indexkomponente nahm jedoch nach 30 Minuten ab. Bei der Anpassung des Verdünnungsproblems der Standardkurve gemäß dem Vorexperiment der Probenbehandlung müssen die Proben schnell entnommen werden, um zu vermeiden, dass sie einen speziellen Zeitpunkt für die Entnahme verpassen.
