Untersuchung der Pyroptose mittels Durchflusszytometrie

Das Ziel unseres Forschungsteams ist es, herauszufinden, ob Vogelzellen eine ähnliche Pyroptose durchlaufen wie Säugetierzellen. Darüber hinaus ist es unser Ziel, die Pyroptose mit genaueren und einfacheren Mitteln zu bestimmen. Viele Gene bei Vogelarten unterscheiden sich erheblich von denen bei Säugetieren, was es schwierig macht, Reagenzien, die üblicherweise in Säugetierzellstudien verwendet werden, für die Erforschung des Zelltods von Vögeln zu verwenden.

Daher ist die Erforschung des Zelltods von Vögeln viel schwieriger als die an menschlichen oder murinen Zellen. Wir nutzen die charakteristischen Plasmamembranporen in pyroptotischen Zellen, die von Gasdermin-N-terminalen Fragmenten gebildet werden, um eine durchflusszytometrisch basierte Strategie zur Bestimmung der Pyroptose zu entwickeln. Mit diesem neuartigen Ansatz konnten wir das Auftreten von infektiöser, durch Schleimbeutelkrankheit induzierter Pyroptose in Vogelzellen beobachten.

Im Gegensatz zu früheren Methoden wie Western Blot oder AFM-Analyse ist unser Protokoll in der Lage, den Prozentsatz pyroptotischer Zellen anhand von zwei Parametern gleichzeitig genau zu quantifizieren, der Porenbildung der Plasmamembran und dem Plasmamembranbruch, was die Unterscheidung von Zellen mit Pyroptose von anderen Formen des Zelltods erleichtert.