Die Studie untersucht die kardioprotektive Wirkung von Munziq auf Myokardperfusionsschäden bei Ratten, insbesondere bei Ratten mit abnormaler Körperflüssigkeit. Unser Ziel ist es, herauszufinden, ob die Munziq-Vorbehandlung die myokardiale Ischämie-Reperfusions-Schädigung mildern, pathologische Veränderungen induzieren, die Herzfunktion schützen und ihre Mechanismen, insbesondere über den NF-Kappa B-Signalweg, erforschen kann. Unsere Forschungsgruppe konzentriert sich auf die Untersuchung von myokardialen Ischämie-Reperfusionsschäden.
Unsere Ergebnisse deuten darauf hin, dass die Hemmung des NF-Kappa-B-Signalwegs die myokardiale Ischämie-Reperfusionsverletzung lindern kann, was die myokardiale Ischämie-Reperfusionsverletzung abschwächen kann, indem sie den NF-kappa B-Signalweg hemmt, was die mitochondriale Funktion und den Myokardstoffwechsel beeinflusst. Unsere Forschung identifiziert Munziq als potenzielles Therapeutikum für myokardiale Ischämie-Reperfusionsschäden und bringt das Feld durch die Erforschung eines naturmedizinischen Ansatzes voran. Diese Entdeckung ist von Bedeutung, da sie auf den NF-Kappa-B-Signalweg abzielt, einen neuartigen Mechanismus für die Behandlung von myokardialen Ischämie-Reperfusionsverletzungen.
Unsere Ergebnisse ebnen den Weg für die weitere klinische Anwendung der traditionellen Medizin im Management von Herz-Kreislauf-Erkrankungen. Zu Beginn halten Sie die Ratten in der abnormalen Körperflüssigkeit (ABF-Gruppe) in einer kontrollierten Umgebung in Klimaboxen und geben Sie normales Futter. Geben Sie den Ratten 21 Tage lang normales Futter, gemischt mit kaltem Trockenfutter, nämlich Gerste und Koriandersamen, um das ABF-Modell zu etablieren.
Unter Verwendung einer intragastrischen Verabreichungstechnik verabreichen Sie den Ratten der Munziq-Gruppe 21 Tage lang fünf Gramm pro Kilogramm Munziq vor einer myokardialen Ischämie-Reperfusionsverletzung oder einer MIRI-Operation. Um das MIRI-Modell zu etablieren, legen Sie die anästhesierte Ratte nach 21 Tagen Vorbehandlung auf einen sterilen Operationstisch. Führen Sie eine Tracheotomie durch, um die beatmungsunterstützte Atmung der Ratte zu ermöglichen.
Waschen Sie vor dem Öffnen der Brust die Operationsstelle mit Seifenwasser, rasieren Sie den Bereich und desinfizieren Sie ihn mit einer Jodlösung. Öffnen Sie anschließend mit einer sterilen Schere, einer Pinzette und einem Retraktor die Brustwand, um das Herz freizulegen und die linke vordere absteigende Arterie zu identifizieren, die auf der Herzoberfläche liegt. Ligattieren Sie die Arterie mit einer 6-0-Naht, um eine regionale Ischämie für 30 Minuten zu induzieren.
Bestätigen Sie den effektiven Verschluss, indem Sie eine blasse Farbe im Myokard beobachten. Nach 30 Minuten die Ligatur lösen und 120 Minuten lang eine Reperfusion einwirken lassen. Bestätigen Sie die Reperfusion des Myokards, wenn es wieder eine leuchtend rote Farbe annimmt.
Verwenden Sie nach der Reperfusion ein Vakuum-Blutentnahmeröhrchen, um ein bis zwei Milliliter Blut aus der Bauchaorta zu entnehmen. Nachdem Sie die Ratte eingeschläfert haben, verwenden Sie eine sterile Zange und eine Schere, um Myokardgewebe aus dem Infarktbereich im linken Ventrikel zu sammeln. Legen Sie das gesammelte Gewebe zur weiteren Analyse in einen sterilen Behälter.
Nachdem Sie ein myokardinfarktes Herz von der MIRI-etablierten Ratte entnommen haben, verwenden Sie eine sterile Schere und eine Klinge, um das Herz horizontal in zwei Hälften entlang des Mittelpunkts der linksventrikulären Längsachse senkrecht zur Herzrichtung zu durchschneiden. Teilen Sie eine Hälfte des apikalen Teils in zwei Teile. Bewahren Sie eine Portion in 4%igem Paraformaldehyd für zwei bis 24 Stunden für die morphologische Untersuchung bei Raumtemperatur auf.
Legen Sie den anderen Teil für ein bis vier Stunden in Glutaraldehyd bei vier Grad Celsius für die Elektronenmikroskopie. Teilen Sie als Nächstes den Basisteil des Herzens, einschließlich der ischämischen und nicht-ischämischen Bereiche, in zwei Teile. Geben Sie eine Portion in ein Kryofläschchen und frieren Sie sie schnell in flüssigem Stickstoff ein.
Bringen Sie das gefrorene Gewebe für molekularbiologische Tests in einen Gefrierschrank bei minus 80 Grad Celsius. Das aus der unteren Hohlvene entnommene Blut wird 10 Minuten lang bei 1.000 g zentrifugiert. Lagern Sie das getrennte Serum in einem Gefrierschrank bei minus 80 Grad Celsius.
Legen Sie die formaldehydfixierten Gewebeschnitte in einen 65 Grad Celsius heißen Inkubator und backen Sie sie 1,5 bis zwei Stunden lang. Tauchen Sie die gebackenen Gewebeabschnitte 10 Minuten lang in Xylol. Tauchen Sie dann die Gewebeabschnitte nacheinander jeweils fünf Minuten lang in wasserfreien Alkohol eins und zwei, gefolgt von 95 %, 90 %, 80 % und 70 % Alkohol und schließlich jeweils fünf Minuten lang in destilliertem Wasser.
Färben Sie die Gewebeschnitte drei Minuten lang mit Hämatoxylin. Führen Sie eine saure Differenzierung durch, indem Sie die Gewebeschnitte ein bis zwei Sekunden lang kurz in eine Salzsäurealkohollösung eintauchen. Beenden Sie die Differenzierung, indem Sie es fünf Minuten lang in Leitungswasser spülen.
Tauchen Sie anschließend die Gewebeabschnitte jeweils drei Minuten lang in destilliertes Wasser und dann in 70 %, 80 %, 90 % und 95 % Alkohol. Nachdem Sie den Abschnitt in wasserfreien Alkohol eins und zwei getaucht haben, färben Sie die Abschnitte eine Minute lang mit 0,5 % Eosin in Ethanol. Spülen Sie nun die Abschnitte mit 95% Ethanol ab, um überschüssige rote Farbe zu entfernen.
Tauchen Sie dann die Abschnitte fünf Minuten lang in wasserfreies Ethanol, gefolgt von einem Eintauchen in die Xylole eins und zwei für jeweils fünf Minuten. Montieren Sie die fleckigen Abschnitte mit neutralem Balsam. Beobachten Sie krankhafte Veränderungen im Gewebe unter dem Mikroskop.
Das Myokardgewebe in der Scheingruppe zeigte eine granuläre und vakuoläre Degeneration, eine begrenzte Infiltration der roten Blutkörperchen und Lymphozyten sowie gelegentliche Gefäßerweiterungen und Stauungen. In der MIRI-Gruppe kam es zu schweren Schädigungen des Myokardgewebes mit ausgedehnter granulärer und vakuolärer Degeneration. Die Myokardschädigung war in der ABF-MIRI-Gruppe im Vergleich zur Kontroll-MIRI-Gruppe besonders schwerwiegend und zeigte verstärkte Anzeichen von Gewebedegeneration und -infiltration.
Myokardzellen, die sowohl in der Kontroll- als auch in der ABF-MIRI-Gruppe mit Munziq behandelt wurden, zeigten eine reduzierte granuläre und vakuoläre Degeneration mit weniger roten Blutkörperchen, Lymphozyteninfiltration und Stauung. Myokardzellen in der Scheingruppe behielten eine intakte Myofibrillenstruktur, eine einheitliche Sarkomerlänge und zahlreiche Mitochondrien bei. In der MIRI-Gruppe zeigten Myokardzellen Schwellungen, unterschiedliche Sarkomerlängen und gestörte Myofilamente mit ausgedehnten mitochondrialen Schäden.
Die Behandlung mit Munziq reduzierte die Schwellung der Myokardzellen und bewahrte die Myofibril-, Sarkomer- und Mitochondrienstruktur, ähnlich wie bei Scheinerkrankungen. Die Serumspiegel von cTn-T, CK-MB und ICAM-1 waren in der ABF-MIRI-Gruppe signifikant höher als in der Kontroll-MIRI-Gruppe. Die Vorbehandlung mit Munziq reduzierte die Spiegel von cTn-T, CK-MB und ICAM-1 sowohl in der ABF- als auch in der Kontroll-MIRI-Gruppe deutlich.
Die ABF-MIRI-Gruppe zeigte im Vergleich zur Kontroll-MIRI-Gruppe erhöhte Malondialdehyd-Spiegel und verringerte Stickoxid-Spiegel im Myokardgewebe. Die Vorbehandlung mit Munziq senkte den Gehalt an Laktatdehydrogenase und Malondialdehyd signifikant und erhöhte gleichzeitig den Stickoxidspiegel im ischämischen Myokard. Die ABF MIRI-Gruppe wies erhöhte Interleukin-1-beta-, Interleukin-sechs- und TNF-alpha-Spiegel auf, insbesondere auf Proteinebene.
Die Vorbehandlung mit Munziq reduzierte die Serum- und mRNA-Spiegel von Interleukin one beta, Interleukin six und TNF alpha, insbesondere bei den Proteinspiegeln im Myokard. Die Marker des NF-kappa-B-Signalwegs waren im MIRI-Gewebe hochreguliert, was auf eine Entzündung hinweist. Die Behandlung mit Munziq verringerte die Expression von Signalwegmarkern, was auf eine verminderte Aktivierung des NF-Kappa-B-Signalwegs hinweist.
