Dieses Protokoll identifiziert vier Schlüsselbereiche, um die Methodik zu verbessern und eine zuverlässige Lungentransplantation zu ermöglichen. Die erste ist eine reproduzierbare Manschettentechnik. Zweitens geht es um die genaue und reproduzierbare Identifizierung des vierten Interkostalraums, einen gründlichen Verschluss der Wunde und die anschließende Frage, wie Proben für die Analyse entnommen werden können.
Diese Techniken tragen dazu bei, eine zuverlässige Methode der Lungentransplantation zu entwickeln, um an molekularen Mechanismen zu arbeiten und therapeutische Interventionen zu entwickeln. Beginnen Sie mit der Einrichtung des chirurgischen Geräts, indem Sie das Gerät zur Überwachung der Herzfrequenz/Sauerstoffsättigung einschalten und das Board auf 42 Grad Celsius erwärmen. Schalten Sie außerdem das Beatmungs- und Anästhesiegerät ein, um den Isofluran-Verdampfer vorzuwärmen.
Füllen Sie eine Anästhesiespritze mit 10 Millilitern flüssigem Isofluran und montieren Sie die Spritze auf dem Beatmungs- und Anästhesiegerät. Schalten Sie als Nächstes das Operationsmikroskop ein, wobei die Höhe und der Fokus an die Vorlieben angepasst sind, und starten Sie das Elektrokauterisationsgerät. Bereiten Sie auch die chirurgischen Instrumente vor und legen Sie sie aus.
Bestimmen Sie die richtige Messgröße des Angiokatheters, der zur Herstellung der Manschetten verwendet werden soll, basierend auf dem Körpergewicht der Ratte, indem Sie sich auf Tabelle eins beziehen. Nachdem Sie die Manschetten für die Lungenarterie, die Bronchus und die Lungenvene präpariert haben, legen Sie den Angiokatheter der entsprechenden Größe auf eine sterile Oberfläche unter dem Operationsmikroskop. Schneiden Sie dann den Angiokatheter mit einer chirurgischen Rippenklinge Nr. 11 in einem 90-Grad-Winkel ab, um einen zwei Millimeter langen Manschettenkörper mit einer Breite und Höhe von einem Millimeter an der Oberseite des Manschettenkörpers zu bilden.
Nachdem Sie den Wickel für die Operation vorbereitet haben, machen Sie mit der Schere einen drei bis vier Zentimeter langen Hautschnitt in der Mitte des Halses und präparieren Sie vorsichtig das Unterhautgewebe und die Muskeln mit einer Pinzette. Für die endotracheale Intubation wird eine 4-0-Seidennaht um die Luftröhre gefädelt. Führen Sie dann einen 16-Gauge-Angiokatheter in die Luftröhre ein und binden Sie die Naht mit einem Doppelknoten fest um die Luftröhre, gefolgt von einem einfachen Knoten, um den Angiokatheter an Ort und Stelle zu halten.
Schließen Sie den Angiokatheter an das Beatmungsgerät an, um eine chirurgische Anästhesieebene bei der Ratte mit 1 bis 2 % Isofluran aufrechtzuerhalten. Verwenden Sie die Schere, um eine Laparo-Sternotomie als kombinierten Mittellinien- und Querschnitt durchzuführen. Injizieren Sie dann 1.000 Einheiten pro Kilogramm Heparin mit einer Insulinspritze über die untere Hohlvene (IVC) und warten Sie 10 Minuten für die systemische Zirkulation.
Während die Lunge beatmet wird, schneiden Sie die rechte und linke Ohrmuschel mit einer Mikropräparier-Federschere ab und führen Sie dann einen 18-Gauge-Angiokatheter durch die Lungenarterie ein, um die Lunge mit 20 Millilitern Konservierungslösung in einer Spritze zu spülen, die an 28 Zentimeter Wasser hängt und mit dem Schlauch und dem Angiokatheter verbunden ist. Trennen Sie das Beatmungsgerät vom Endotrachealtubus, um es an eine Fünf-Milliliter-Spritze anzuschließen, die je nach Körpergewicht mit einem geeigneten Luftvolumen gefüllt ist. Nach einer Stunde warmer Ischämie wird der Herz-Lungen-Block mit der Mikropräparierfederschere und Pinzette herausgeschnitten und auf eine sterile, mit eiskaltem PBS angefeuchtete Gaze auf eine sterile Petrischale auf Eis gelegt.
Schneiden Sie den linken Lungenhilabereich vorsichtig mit der Vannas-Tübinger Federschere ab und beschaffen Sie die linke Lungenvene, die Lungenarterie und die Bronchus. Verwenden Sie einen Moskito-Hämostaten, um die Manschettenlasche zu greifen. Nehmen Sie dann das distale Ende der Pulmonalvene, der Pulmonalarterie oder des Bronchus durch den entsprechenden Manschettenkörper und schieben Sie das überschüssige Gewebe um die Manschette herum, bevor Sie es mit 8-0 sichern Nylon-Naht.
Wenn Sie fertig sind, verwenden Sie eine Vannas-Tübingen-Federschere, um das überschüssige Gewebe und die Manschette um den Manschettenkörper herum zu trimmen. Um die Empfängerratte vorzubereiten, zeichnen Sie eine Linie auf der Brust der Ratte von der suprasternalen Kerbe bis zum Processus xiphoideus. Zeichnen Sie in der Mitte dieser Linie eine Linie entlang der linken Seite des Brustkorbs, die die Hälfte des Maßes von der suprasternalen Kerbe bis zum Processus xiphoideus misst.
Mit dem Glasfaserkabel, das mit einer LED-Leuchte aus dem endotrachealen Intubationskit verbunden ist, visualisieren und intubieren Sie den Empfänger mit einem 16-Gauge-Angiokatheter. Sobald die Lunge herausgezogen ist, legen Sie eine sterile Gaze um die linke Lunge, während Sie sie mit einer Dieffenbach-Bulldoggenklemme festhalten, und legen Sie eine Yasargil-Klemme so proximal wie möglich auf den linken Lungenhilabereich an. Wenn die Ratte vorbereitet ist, fahren Sie mit der Lungenvenenanastomose fort, indem Sie eine 7-0-Nylonnaht um die Lungenvene des Empfängers legen.
Schneiden Sie die Lungenvene des Empfängers mit der Vannas-Tübingen-Federschere ein, indem Sie die oberen und unteren Segmentvenen so distal wie möglich quer durchtrennen, und spülen Sie das Blut mit 0,2 Millilitern einer internationalen Einheit pro Milliliter heparinisierter Kochsalzlösung mit einer Insulinspritze aus. Legen Sie die mit einer eiskalten, nassen, sterilen Gaze umwickelte Spenderlunge in die Brusthöhle und führen Sie die gemanschte Lungenvene des Spenders in die Lungenvene des Empfängers ein, bevor Sie die Anastomose mit der vorpositionierten 7-0-Nylonnaht sichern. Bei der Bronchial- oder Bronchus-Anastomose legen Sie eine 7-0-Nylonnaht um den Bronchus des Empfängers, bevor Sie den Bronchus des Empfängers einschneiden, indem Sie die oberen und unteren segmentalen Atemwege so distal wie möglich quer durchschneiden.
Nachdem Sie den Bronchus des Spenders mit Manschetten in den Bronchus des Empfängers eingeführt haben, sichern Sie die Anastomose mit der vorpositionierten 7-0-Nylonnaht. Als nächstes führen Sie die Anastomose der Pulmonalarterien wie zuvor beschrieben durch. Um die Reprofusion und Belüftung der transplantierten Spenderlunge zu ermöglichen, entfernen Sie die Yasargil-Klemme am Hilus und verschließen Sie anschließend den Thorakotomie-Schnitt mit einer 6-0-Nylonnaht.
Entnehmen Sie die BAL-Flüssigkeit nach Belieben aus der nativen oder transplantierten Lunge. Das Nass-Trocken-Gewichtsverhältnis der Lappen wurde berechnet, um das Lungenödem zu messen. Der transplantierte Lappen zeigte im Vergleich zum nativen Lappen des Spenders oder Empfängers eine signifikante Erhöhung des Verhältnisses von Nass- zu Trockengewicht, was auf kein Lungenödem hinweist.
Unserer Meinung nach bestehen die beiden entscheidenden Schritte dieses Verfahrens darin, erstens anatomische Orientierungspunkte genau zu verwenden, um den vierten Interkostalraum zu identifizieren, und zweitens die Manschetten auszuwählen und angemessen zu verwenden, um eine reproduzierbare Cuffing-Technik zu erhalten. Ein sowohl reproduzierbares als auch konsistentes Ratten-Lungentransplantationsmodell ist eine Grundlage für molekulare Untersuchungen zur Ischämiereprofusion und Transplantation im Allgemeinen.
