Transitoria de la arteria cerebral media oclusión Modelo de accidente cerebrovascular neonatal en ratas P10

Resumen

Neonatal stroke is a significant cause of early brain injury requiring a translational model with consistent focal injury patterns and high reproducibility in order to enable study. This study describes the detailed surgical procedure for creating a non-hemorrhagic, unilateral focal ischemia-reperfusion injury in full-term-equivalent rodents.

Resumen

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature and mature brain. Stroke occurs commonly in the perinatal period in humans, and transient ischemia-reperfusion is the most common form of stroke in neonates. The reperfusion phase is a critical component of injury progression, which occurs over a period of days to weeks, and of the endogenous response to injury. This postnatal day 10 (p10) rat model of transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) creates a unilateral, non-hemorrhagic focal ischemia-reperfusion injury that can be utilized to study the mechanisms of focal injury and repair in the full-term-equivalent brain. The injury pattern that is produced by tMCAO is consistent and highly reproducible and can be confirmed with MRI or histological analyses. The severity of injury can be manipulated through changes in occlusion time and other methods that will be discussed.

Introducción

Accidente cerebrovascular durante el período neonatal es una causa importante de muerte y discapacidad, se produce en hasta 1 de cada 2.300 nacidos vivos ^1. Esto conduce a la alteración del desarrollo del sistema nervioso central y aumenta la morbilidad a largo plazo, incluyendo el aumento de la incidencia de la epilepsia, retraso mental parálisis cerebral, y otros tipos de motor o la disfunción cognitiva. Los efectos de por vida de un derrame cerebral a principios hacen modelos animales de traslación esencial para el examen de los mecanismos de lesión y reparación en esta población, incluyendo estrategias para proteger el cerebro lesionado o para potenciar la reparación.

Diferentes modelos de isquemia se han utilizado para estudiar la lesión cerebral en los animales adultos, y mientras el arroz-Vannucci (Modificado Levine) ² procedimiento se utiliza comúnmente para estudiar lesión hipóxico-isquémica en el cerebro en desarrollo, focal isquemia-reperfusión es un mecanismo distinto de la lesión causando lesiones focales, con un núcleo y penu lesionadambra y el tejido no lesionado remoto. Los modelos Koizumi ³ y ⁴ Longa se desarrollaron en ratas adultas para lograr oclusión de la arteria cerebral media transitoria a través de la arteria carótida común (CCA) y la arteria carótida externa (ACE), respectivamente. En ambos modelos, la ligadura permanente y cauterización de ramas de la arteria son importantes para minimizar el sangrado y para simplificar el procedimiento quirúrgico, que también causa efectos adversos sobre la capacidad del animal para alimentar y para aumentar de peso después de una lesión. Además, hay mecanismos de lesión distintas en el cerebro inmaduro y los patrones específicos de lesión visto como resultado.

Más recientemente, el accidente cerebrovascular photothrombotic (prueba Rosa Bengala-) ⁵ y la ligadura de MCA permanente ⁶ se han utilizado para estudiar derrame cerebral neonatal y adulto. Tanto accidente cerebrovascular photothrombotic y la ligadura de MCA crear cambios permanentes en el flujo sanguíneo cerebral que dan lugar a una falta de reperfusion. La reperfusión es un componente crítico del desarrollo y la progresión de la lesión focal, con un aumento de la excitotoxicidad, formación de radicales libres, y la producción de óxido nítrico que conduce a la célula retardada muerte que implica las cascadas que son distintas de la fase isquémica ⁷ de señalización. Hipoxiaisquemia implica la ligadura de la carótida unilateral permanente seguido de hipoxia global, que también difiere de la causa del daño hipóxico-isquémica en el ser humano y no causa un patrón de lesión focal constante, por lo que el estudio del núcleo lesionado y penumbra más difícil.

Hemos descrito previamente un modelo de accidente cerebrovascular por isquemia-reperfusión no hemorrágico en la rata inmadura usando oclusión de la arteria cerebral media transitoria (MCAO) ^{8, 9, 10.} Este es un método menos invasivo que accede y ocluye la MCA a través de la arteria carótida interna sin ligati permanenteo cauterización. Esto proporciona un modelo de lesión similar a la causa más común de accidente cerebrovascular en el período perinatal ^{11, 12.} Este modelo de isquemia-reperfusión de lesión resulta en daños en el cuerpo estriado ipsilateral y la corteza parieto-temporal. Este modelo de tMCAO también permite el control sobre la gravedad de la lesión mediante la variación de la duración de la oclusión. El examen de las vías de señalización y los cambios histológicos en el núcleo lesionado y penumbra y en el tejido ipsilateral y contralateral ileso puede aclarar aún más los mecanismos de la lesión y la reparación en el cerebro inmaduro. Este estudio demostrará este modelo de lesión importante para el cerebro en desarrollo.

Protocolo

Toda la investigación animal fue aprobado por la Universidad de California, San Francisco Comité de Investigación Animal y se llevó a cabo de conformidad con la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (Departamento de Salud y Servicios Humanos, Publicación No. 85-23, 1985 EE.UU. ). Los animales fueron seguidos de cerca por los veterinarios del Comité Institucional Animal UCSF Cuidado y Uso (IACUC), acreditado por AAALAC. Se obtuvo una hembra Sprague-Dawley con un 8 días de edad camada (10 crías por camada). La madre y sus crías se les dio comida y agua ad libitum y se alojaron en una instalación de cuidado de los animales de la temperatura y controlado por la luz con el enriquecimiento de todos los días, de acuerdo al protocolo de IACUC, hasta que los cachorros fueron 10 días de edad. Todos los instrumentos quirúrgicos utilizados en este procedimiento se trataron en autoclave para asegurar la esterilidad. Esterilidad de puntas del instrumento se mantiene durante toda la cirugía.

1. Medio oclusión de la arteria cerebral

1. Pesar el cachorro y garantie que es el peso adecuado (19-21 g). Anestesiar al cachorro en 3% de isoflurano en 100% O ₂ y asegurarse de que no hay respuesta a una pizca pie. Mantener la temperatura de superficie corporal entre 35,5 ° C y 37 ° C con el uso de una almohadilla de calefacción bajo el escenario quirúrgico.
2. Asegurar el animal en posición supina con cinta a través de las regiones de los hombros. El uso de bastoncillos de algodón estériles, limpie el área cervical anterior con una solución de povidona-yodo seguido por un hisopo de 70% de etanol en agua bidestilada, alternando entre cada solución durante cuatro hisopos totales.
3. Localmente infiltrarse bupivacaína al 0,25% en el lugar de la incisión planeada. El uso de un estereoscopio, hacer una línea media incisión cervical 5 a 7 mm anterior para exponer la arteria carótida común (CCA). Coloque 2-4 retractores para mantener la cavidad abierta y la arteria expuesta.
4. Localizar la arteria carótida interna (ICA), arteria occipital (OA), y la arteria carótida externa (ACE). El novio de las arterias para obtener una visión clara. Ser autoeful no perturbar el nervio vago.
   NOTA: Para cachorros con operación simulada, el inicision se deja abierta y las arterias están expuestos, después de lo cual la incisión se sutura cerrado. El tiempo total de la anestesia es equivalente a la de la cirugía de la oclusión.
5. Cortar 1,5 cm de seda 6-0 hilo de sutura trenzado. Destrenzar la sutura, sacando hebras individuales. Asegúrese de que las cadenas individuales están ordenadas y no deshilachado.
   NOTA: Si es necesario, smoothe los extremos deshilachados por inmersión de la cadena sencilla en agua estéril y el aseo la hebra con puntas de fórceps.
6. Mientras sostiene el hilo de sutura con una pinza de 45 grados, mover las pinzas en un movimiento de arco de barrido a pasar por debajo de la ICA para que las puntas de fórceps surgen entre el ICA y OA.
   NOTA: Si la disección se hace bien, este paso será relativamente fácil. Si la ACI y la OA se tocan, tenga cuidado de no romper las arterias cuando el uso de los fórceps para aislar el ICA. Si se produce sangrado, aplicar presión a la arteria con las pinzas hastael sangrado se detiene. Absorber la sangre con una gasa estéril.
7. Tome el extremo del hilo de sutura que es retenido por la pinza y tire de ella para que el extremo es de fácil acceso. Soltar la hebra a partir de los fórceps y una copia de las pinzas de debajo de la ICA, invirtiendo el movimiento en el paso 1.5 (Figura 1A).
8. Atar una ligadura temporal alrededor de la ACI en la base, más cercano a donde se separa de la CCA.
   NOTA: Es importante para atar el nudo para que el extremo de la hebra que se sacó para eliminar el nudo es lo suficientemente largo (superior a 1 mm, de menos de 3 mm) para agarrar fácilmente con fórceps, garantizando al mismo tiempo que existe una cantidad apropiada de hilo de sutura en el otro lado del nudo para la retracción.
9. retraer con cuidado la ICA lateralmente y utilizar un clip para asegurar la hebra para el exceso de piel cerca de la región axila en el lado opuesto de la incisión. Asegúrese de que este hilo de retracción es lo suficientemente tenso para detener el flujo de sangre antes de proceder a la siguiente etapa, aminimizar el riesgo de hemorragia no controlada. Observe que la arteria es plana y pálido.
   NOTA: No se exceda en retracción, ya que puede causar una rotura parcial o total de la ACI. La retracción puede ajustarse justo antes de hacer la arteriotomía tirando de la hebra en el lado opuesto al clip.
10. Usar 45 ° pinzas para agarrar otra hebra de sutura sin trenzar y el bucle por debajo y alrededor de la ICA, como en el paso 1.5. Posición esta hebra lateral a la cadena de retracción (Figura 1B).
    NOTA: Este paso también se puede hacer antes de la retracción. Si no está seguro acerca de la calidad de la retracción, este nudo puede ser muy libremente atado antes del siguiente paso.
11. Cortar una mitad de camino arteriotomía 0,2 mm entre las ligaduras atadas y no vinculadas, errar más cerca de la ligadura atado.
    NOTA: La sangre restante en la arteria atado-off puede vaciar a través de la arteriotomía, pero no debe exceder de 5 l. Si el sangrado continúa, tire con cuidado de la hebra de retracción para aumentar la retracción, con la atención a unavoid dañar la arteria de la tensión excesiva.
12. Usando una regla métrica, medir la sutura oclusiva y cortar la sutura con una asignación adicional de 2-3 mm para la eliminación del oclusor durante la reperfusión. Mantenga el oclusor con pinzas de 45 grados y el uso de fórceps rectas para crear una curva en la longitud apropiada para alcanzar el MCA, marcando un punto de parada para el adelanto.
    NOTA: A 10 mm de longitud de la oclusión desde el extremo de la punta de silicona a la curva se usa para P10 Sprague Dawley o Long Evans crías de rata en este rango de peso.
13. El uso de 45 ° fórceps, alimentar la sutura oclusión nylon recubierto de silicona en la arteriotomía y avanzar la sutura a la curva que marca la distancia predeterminada a la MCA (Figura 1C). Asegurar que el avance se siente suave; parar inmediatamente avance si se sienta resistencia. Durante el avance, el objetivo de la sutura en una dirección que es paralela a la CC / ECA, hacia la cabeza.
    NOTA: Si la sutura dorsal es avanzada, haciala columna vertebral del animal, que se puede ejecutar en la arteria pterigopalatina (PTA). Si la resistencia se sentía después de 3-5 mm de avance, la sutura ha afectado a la unión PTA. Copia del oclusor fuera de la arteria hasta que la cabeza de silicona es cerca de la arteriotomía antes de ajustar la dirección de avance. No es necesario eliminar por completo el oclusor de la arteriotomía.
14. Asegurar el oclusor atando una ligadura temporal, usando la hebra de la etapa 1.10 (Figura 1D).
15. Retire el clip retractor. Recortar las hebras de las dos ligaduras temporales de manera que la hebra del nudo que se tira para retirar el nudo es fácil de agarrar con pinzas rectas y es más larga que la hebra que se tira para apretar el nudo.
    NOTA: Los hilos deben ser lo suficientemente corto para que no se enreden en la cavidad después del cierre.
16. Eliminar los retractores y cerrar la cavidad usando 6-0 seda trenzada para crear tres a cuatro suturas interrumpidas.
17. Retire el cachorro deanestesia y lo coloca sobre una almohadilla de calentamiento en aire ambiente. Supervisar el cachorro hasta que se haya recuperado la suficiente conciencia para mantener decúbito esternal y asegúrese de que se ha recuperado completamente antes de volver a la presa. Asegúrese de que el cachorro mantiene una temperatura de la superficie corporal entre 35,5 ° C y 37 ° C.
18. Durante la oclusión, la resonancia magnética de difusión ponderada (DW-MRI) bajo anestesia con isoflurano se puede utilizar para verificar la inducción apropiada de la lesión. La Figura 2 demuestra la lesión isquémica en curso detectada por DW-MRI durante tMCAO ^9.
    NOTA: giro imagen planar eco ponderada-Diffusion se lleva a cabo de 10-15 minutos antes de la reperfusión. todo el cerebro se forma la imagen con 2 mm de espesor secciones coronales en serie usando los siguientes ajustes de la secuencia de impulsos: TR / TE = 5.000 / 60 ms, 4 promedios, campo de visión = 35 mm, matriz de datos = 128x128, duración gradiente de difusión = 20 ms, separación = 29,7 ms, amplitud = 70mt / m, y b-factor = 1.045 s / ^mm2.Animales que presentan una falta de implicación cortical o lesión isquémica atípico, tal como en el tronco cerebral, están excluidos.

2. La reperfusión

NOTA: La oclusión se lleva a cabo durante 3 h para producir una cantidad de moderada a grave de lesión que involucra el cuerpo estriado y la corteza.

1. En aproximadamente 2 h y 50 min después de la oclusión de la MCA, anestesiar el cachorro en 3% de isoflurano en 100% O _2. Mantener una temperatura de superficie corporal entre 35,5 ° C y 37 ° C con el uso de una almohadilla de calefacción bajo el escenario quirúrgico.
2. Retire las suturas interrumpidas desde el paso 1.16 y localizar la unión, que está marcado por las dos ligaduras y el extremo de cola de la sutura oclusiva.
   NOTA: los animales con operación simulada se inducen y permanecen bajo anestesia durante un período de tiempo equivalente a los animales ocluidos. La incisión se abre una vez más y se sutura cerrado. Para los animales con operación simulada, continúe con el paso 2,11.
3. Con cuidado, desateel nudo más lateral previamente atado en el paso 1.14 tirando de la cadena más larga.
   NOTA: Si hay resistencia en desatar el nudo, deja de asegurar que la hebra correcta del nudo se está tirando. Si la resistencia continúa, aumentar la ampliación para una mejor visión. Tenga cuidado cuando la desvinculación, ya que es posible dañar la arteria durante este paso.
4. Retire el hilo de sutura de la cavidad.
5. Exactamente a 3 h después de la oclusión de la ACM, lentamente la sutura oclusiva de la arteria. No habrá ninguna resistencia.
   NOTA: En la mayoría de los casos, no habrá sangrado. Si se produce una pequeña cantidad de sangrado, aplicar presión a la arteria en el sitio arteriotomía.
6. El uso de fórceps para aplicar presión a la arteriotomía, como el siguiente paso restablece el flujo sanguíneo ICA para la reperfusión.
7. Cuidadosamente desatar el nudo medial usando el mismo método que en el paso 2.3.
8. Retire el hilo de sutura desde el cuerpo y aplicar un agente hemostático a la arteriotomía para detener el sangrado.
9. Asegúrese de que el sangrado se detenga.
   NOTA: El Retorno forma original de la arteria y el rojo confirma que el flujo sanguíneo ICA ha sido restaurada.
10. Eliminar los retractores y cerrar la cavidad con tres a cuatro suturas interrumpidas de 6-0 seda trenzada.
11. Retire el cachorro de la anestesia y colocarlo sobre una almohadilla térmica en el aire de la habitación. Monitorear hasta que se haya recuperado el conocimiento suficiente para mantener decúbito esternal y garantizar la plena recuperación antes de devolverla a la presa. Asegúrese de que el cachorro mantiene una temperatura de la superficie corporal entre 35,5 ° C y 37 ° C.
12. Inspeccionar las crías al día durante 5 días. Recprd sus pesos e inspeccionar los sitios de incisión de cerca para la curación adecuada. Retire las suturas después de 7-14 días. Lesiones post-tMCAO se pueden obtener imágenes con resonancia magnética, si se desea ^9.
    NOTA: Los animales pueden perder hasta 1 g de peso en el primer día, pero normalmente recuperar el peso sin la intervención y estar dentro de un similares sopesart rango a los controles por día 4-5. En raras ocasiones, un cachorro puede perder el exceso de peso o tienen dificultades para alimentarse, lo que requiere de una sonda oral alimenta durante 2-3 días.
13. En P21, lesión se puede evaluar de manera fiable con las pruebas de comportamiento sensoriomotoras, tales como rotarod o la cría de cilindro. Las pruebas cognitivas se puede realizar tan pronto como 4-6 semanas de edad usando evaluaciones tales como el reconocimiento de objetos novedosos o el laberinto de agua de Morris ^13.
14. La eutanasia a las ratas por inyección intraperitoneal de Euthasol (50 mg / kg) para la cosecha cerebro ^{11, 12.}
15. El análisis histológico para evaluar el volumen de lesión o respuesta a las intervenciones pueden llevarse a cabo con violeta de cresilo o tinción H & E (Figura 3) ^10.

Resultados

La gravedad de la lesión causada por tMCAO es altamente dependiente de tanto el tiempo de oclusión y la experiencia del cirujano. Una oclusión de 90 min a menudo produce una leve a moderada patrón de lesión, mientras que 3 h produce una lesión de moderada a severa. Gravedad de la lesión puede ser evaluada mediante una variedad de métodos, incluyendo MRI, histología, o análisis de comportamiento a corto o largo plazo. La figura 2 muestra un ejemplo de la DW-MRI realizó 75 min en una oclusión de 90 minutos, lo que confirma la lesión isquémica que implica el hemisferio ipsilateral. formación de imágenes ponderado Difusión demuestra el aumento de la difusión en el cuerpo estriado ipsilateral y la mayoría de la corteza ipsilateral, sin cambios contralaterales, durante la fase isquémica aguda. Esto se correlaciona con un nivel moderado de lesión a largo plazo, que incluye tanto el córtex y la sustancia gris profunda.

La oclusión de la MCA en los resultadosla muerte celular que se inicia en el cuerpo estriado de lesión menos grave y se desarrolla empeoramiento lesión cortical y del hipocampo para tiempos de oclusión más largos y lesión más grave. Durante la optimización de la técnica quirúrgica, tales como la determinación de la longitud de inserción de sutura, MRI es muy recomendable, ya que permite la confirmación de la colocación de sutura adecuada y visualización de edema y la progresión de lesiones durante la oclusión ^{14, 15, 16.} Si la RM no está disponible, H & E o coloración violeta de cresilo son métodos histológicos sencillo y fiable para determinar la morfología de la lesión y se pueden utilizar en ambos puntos temporales tempranos y tardíos después de la tMCAO. La Figura 3 demuestra un patrón de lesión de moderada a grave en el examen histopatológico tras un 3 h oclusión, lo que demuestra la formación de quistes y el volumen en el cuerpo estriado ipsilateral y la corteza.

Imparcial cuantificación estereológico de secciones de cresilo-violeta-manchado para calcular la relación de ipsilateral a volumen hemisférico contralateral confirma la lesión isquémica-reperfusión ipsilateral. Específicamente, después de anestesiar al animal con Euthasol, el cerebro se cosechó mediante perfusión transcardíaca en 0,1 M PBS con 4% de paraformaldehído. Después de post-fijación durante la noche y el equilibrio en sacarosa al 30%, todo el cerebro se seccionó a 50 m intervalos, y fue seleccionado cada sección duodécima, montado, y se tiñó con violeta de cresilo ^10.

Incluso con lesiones leves, cambios del aparato locomotor, tales como circular y hemiparesia, se observan durante el período de oclusión. Con lesiones más graves, estos cambios persistirán después de la reperfusión. las pruebas de comportamiento adicional se puede utilizar para evaluar la gravedad de la lesión, incluyendo rotarod o cilindro pruebas de cría para la función sensomotora y el laberinto de agua de Morris parala función cognitiva ^13.

Figura 1: Imágenes quirúrgicos en vivo de la Procedimiento tMCAO. (A) La primera hebra de sutura se enrolla alrededor de la ICA, como se detalla en el paso 1.6. (B) La primera ligadura temporal está ligada y la ICA se retrae. El segundo hilo de sutura se enrolla alrededor de la ACI, lateral a la primera hebra de sutura, como se detalla en el paso 1.9. (C) La sutura oclusión revestido de silicona se introduce en el sitio de arteriotomía, como se detalla en el paso 1,12. (D) La segunda ligadura temporal está ligada a asegurar el oclusor en su lugar, como se detalla en el paso 1,14. Barra de escala = 1 mm.

Figura 2: MRI Durante OCCLderrame demuestra la adecuada Lesión unilateral. Anterior a posterior, cortes de imagen coronal de la DW-MRI, realizados durante una oclusión 90 min, demostrar una mayor difusión que implica el hemisferio ipsilateral (flechas), que es coherente con la lesión isquémica en curso en la fase aguda. Reproducido con permiso del ictus ^11. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 3: Lesión unilateral Involucrar el cuerpo estriado y la corteza a las 4 semanas siguientes tMCAO. Posterior a anterior, cresil-violeta-manchado secciones cerebrales coronales (cada uno 50 mM) cosechado de P38 animales demuestran lesión bastante grave (las flechas muestran la formación de quistes ipsilateral y redujeron cortical yvolumen estriatal) después de un 3 h tMCAO en P10. El orificio redondo en el lado izquierdo representa un identificador hemisferio contralateral. Barra de escala = 5 mm. Reproducido con permiso del Neurobiología del ¹² de Enfermedades. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Discusión

Los pasos críticos en el protocolo

En primer lugar, es importante para mantener la normotermia desde la iniciación de la anestesia hasta la recuperación completa, ya que hay efectos tanto de la hipotermia y la hipertermia ^{17 18} en la progresión de la lesión cerebral en animales inmaduros y maduros a conocer. En segundo lugar, asegurando al mismo tiempo el animal y retraer la incisión, un posicionamiento óptimo de monitor de respiración y para garantizar que la tráquea está libre de compresión es esencial. En tercer lugar, evitar apretar o estirar el nervio vago, ya que esto puede causar cambios en la frecuencia cardíaca con la estimulación vagal. En cuarto lugar, debido a la retracción de la ICA es necesario para controlar el sangrado durante la arteriotomía, se debe prestar atención al grado de tensión durante la retracción para evitar dañar la arteria. Si la arteria no lágrima de retracción, o si hay una mala incisión arteriotomía, el animal debe ser excluido del análisis debido al riesgode la hemorragia y la mala reperfusión.

Modificaciones y solución de problemas

El uso de MRI como una guía, la longitud de la sutura puede ser optimizada para asegurar que la punta de silicona ocluye correctamente la MCA para crear la isquemia focal. Si la RM no está disponible, las crías pueden ser sacrificados antes de la reperfusión para la disección para visualizar la colocación de la sutura. Ajustar la longitud de sutura según sea necesario. El peso de las crías altamente correlaciona con los requisitos de longitud de oclusión de sutura. El tiempo de oclusión se puede modificar para ajustar el grado de gravedad de la lesión.

Además, la forma de la sutura y la longitud son críticos. Para P10 ratas Sprague-Dawley y Long Evans que pesaban 19-21 g, 10 mm es la longitud óptima de la inserción en nuestra experiencia. Además la inserción de la sutura oclusiva puede resultar en la perforación de la MCA. Además, la consistencia en la forma del filamento de oclusión en cada cirugía resultará en un aumento de la consistencia de la lesión pattern ^{19, 20.} Por esta razón, se recomienda el uso de suturas fabricadas profesionalmente para este propósito específico. También es importante tener en cuenta que el patrón de lesión puede diferir entre los profesionales debido a las diferencias aparentemente hora en la técnica.

Limitaciones de la técnica

La realización de esta técnica en una pequeña, el desarrollo de roedores requiere experiencia significativa. Si se realiza correctamente, el cirujano es capaz de provocar un patrón de lesión muy consistente a través de animales de diferentes tamaños y alcanzar una tasa de supervivencia mayor que 95%. Además, las herramientas quirúrgicas adecuadas son esenciales. Los instrumentos quirúrgicos deben estar bien mantenidos para asegurar que todas las puntas de los instrumentos se aproximan adecuadamente.

Importancia de esta técnica con respecto a los métodos existentes o alternativos

Mientras que la hipoxia-isquemia, o el Rice-Vannucci modelo ² , se utiliza más comúnmente para estudiar la lesión hipóxico-isquémica en el cerebro en desarrollo, es importante tener en cuenta que este modelo de tMCAO es distinta de HI en que existe una isquemia focal transitoria y sin hipoxia global, seguida de una fase de reperfusión cuando el se elimina la obstrucción y el flujo sanguíneo se restaura. Esto causa una lesión más consistente y reproducible y es más clínicamente de traslación haciendo que un patrón de lesión similar a la observada en el ictus neonatal a término. Esto permite el estudio de los patrones de lesiones focales y respuestas compensatorias en el tejido sano.

Las aplicaciones futuras después de dominar esta técnica

Este modelo es similar a la causa más común de accidente cerebrovascular en los neonatos humanos, un trombo oclusivo transitorio que se produce durante el período perinatal ^{11, 21.} La etiología no está del todo claro y es más probable multifactorial, pero se presume en la mayoría de los casos to ser el resultado de émbolos que pasan de la placenta ^11. Además, muchos recién nacidos con accidente cerebrovascular perinatal presunta menudo se presentan con la actividad convulsiva tarde o examen neurológico focal sutiles anormalidades ^22. Esto hace que el uso de un modelo de lesión consistente, traslacional para identificar los mecanismos de progresión de lesiones y posibles estrategias terapéuticas cruciales.

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Isoflourane	Henry Schein	50033	anesthetic, at 3%
Trinocular Surgioscope	World Precision Instruments	PSMT5N
Heating pad	Sunbeam	000731-500-000	low to medium setting
IR Thermometer	Extech Instruments	72-5270
Retraction kit for small animals	Fine Science Tools	18200-20
CermaCut Scissors	Fine Science Tools	14958-09
Dumont #5SF Forceps	Fine Science Tools	112522-00	2x
Dumont #5/45 Forceps	Fine Science Tools	11251-35	2x
B-2 Micro Clamp	Fine Science Tools	00398-02
Forcepts for Clamp Application	Fine Science Tools	00072-14
Micro Vannas Scissors	Fine Science Tools	15000-03	2mm cutting edge
Occlusion Sutures	Doccol	602123PK10	701712PK5Re
Ruler	Fine Science Tools
Hemostatic Agent	Avitene	DVL1010590
6-0 Perma-Hand Silk Reverse CuttingSuture	Ethicon	769G
Euthasol	Virbac	710101	0.22 mL/kg
Cotton Tipped Applicators	Henry Schein	100-9249
Laboratory Tape	VWR	89097-990