Переходная средней мозговой артерии Окклюзия Модель неонатальной инсульта в P10 Крысы

Резюме

Neonatal stroke is a significant cause of early brain injury requiring a translational model with consistent focal injury patterns and high reproducibility in order to enable study. This study describes the detailed surgical procedure for creating a non-hemorrhagic, unilateral focal ischemia-reperfusion injury in full-term-equivalent rodents.

Аннотация

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature and mature brain. Stroke occurs commonly in the perinatal period in humans, and transient ischemia-reperfusion is the most common form of stroke in neonates. The reperfusion phase is a critical component of injury progression, which occurs over a period of days to weeks, and of the endogenous response to injury. This postnatal day 10 (p10) rat model of transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) creates a unilateral, non-hemorrhagic focal ischemia-reperfusion injury that can be utilized to study the mechanisms of focal injury and repair in the full-term-equivalent brain. The injury pattern that is produced by tMCAO is consistent and highly reproducible and can be confirmed with MRI or histological analyses. The severity of injury can be manipulated through changes in occlusion time and other methods that will be discussed.

Введение

Инсульт в неонатальный период является одной из основных причин смерти и инвалидности, происходящий в целых 1 в 2300 живорожденных ^1. Это приводит к развитию измененном центральной нервной системы и увеличение долгосрочной заболеваемости, в том числе рост заболеваемости эпилепсией, церебральным параличом, умственной отсталости и других типов двигателя или когнитивной дисфункции. На протяжении всей жизни последствия раннего инсульта делает поступательные модели животных необходимы для изучения механизмов повреждения и восстановления в этой группе населения, включая стратегии защиты травмированного мозга или для улучшения ремонта.

Различные модели ишемии были использованы для изучения повреждения головного мозга у взрослых животных, и в то время как Райс-Vannucci (Modified Levine) ² процедуры обычно используется для изучения гипоксический-ишемического повреждения в развивающемся мозге, очаговая ишемия-реперфузия является отчетливым механизмом повреждения в результате чего фокусных травм, с травмированным сердечником и Penumbra и неповрежденная удаленная ткань. Модели Коидзуми ³ и ⁴ Лонга были развиты у взрослых крыс , чтобы достичь переходных окклюзия средней мозговой артерии с помощью общей сонной артерии (ССА) и наружную сонную артерию (ECA), соответственно. В обеих моделях, постоянная перевязка и прижигание ветвей артерии важны свести к минимуму кровотечения и оптимизировать хирургическую процедуру, которая также вызывает неблагоприятное воздействие на способности животной кормить и набрать вес после повреждения. Кроме того, существуют различные механизмы травмы в незрелом мозге и специфические модели травмы видели в результате.

Совсем недавно, Фототромботический инсульт (метод Rose-Bengal) ⁵ и постоянный MCA перевязка ⁶ были использованы для изучения новорожденного и взрослого инсульта. Оба Фототромботические инсульт и MCA перевязки создают постоянные изменения в мозговом кровотоке, которые приводят к отсутствию reperfusион. Реперфузия является важным компонентом развития и прогрессирования очагового повреждения, с повышенной эксайтотоксичностью, образованием свободных радикалов, а также продукциями оксида азота , ведущих к замедленной гибели клеток , что включает в себя каскады, которые отличаются от ишемической фазы ⁷ сигнализации. Гипоксия-ишемия предполагает постоянную перевязку односторонний сонной следует глобальной гипоксия, которая также отличается от причины гипоксический-ишемического повреждения в организме человека и не вызывает последовательную фокусную картину травмы, что делает изучение травмированного ядра и полутени более сложной.

Ранее мы описали не-геморрагическую инсульт модель ишемии-реперфузия в незрелых крысах с использованием переходной окклюзии средней мозговой артерии (МСАО) ^{8, 9, 10.} Это менее инвазивный метод, который получает доступ и закупоривает MCA через внутреннюю сонную артерию без постоянного ligatiили прижигание. Это обеспечивает модель травмы , аналогичную наиболее распространенной причиной инсульта в перинатальном периоде ^{11, 12.} Это ишемия реперфузии модель результатов травмы в ущерб ипсилатеральной стриатуме и теменно-височной коры. Эта модель tMCAO также позволяет контролировать тяжести травмы путем изменения длительности окклюзии. Исследование сигнальных путей и гистологических изменений в травмированном ядре и полутени и в неповрежденной ипсилатеральной и контралатеральной ткани может дополнительно пролить свет на механизмах повреждения и восстановления в незрелом мозге. Это исследование продемонстрирует эту важную модель повреждения для развивающегося мозга.

протокол

Все исследования на животных было одобрены в Университете Калифорнии, Сан - Франциско , Комитет по исследованиям животных и были проведены в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных (Департамент здравоохранения и социальных служб, публикации № 85-23, 1985 ). Животные были под пристальным наблюдением ветеринаров институциональному животных по уходу и использованию комитета UCSF (IACUC), аккредитованной AAALAC. была получена Одна самка Спрэг Dawley крыс с 8 суточными подстилки (10 щенков в помете). Мать и ее щенков получали пищу и воду вволю и размещены в температурно и легких под контролем средства по уходу за животными с ежедневным обогащении, в соответствии с протоколом IACUC, пока щенкам не было 10 дней. Все хирургические инструменты, используемые в этой процедуре автоклавируют для обеспечения стерильности. Стерильность инструментов кончиков сохраняется в течение операции.

1. средней мозговой артерии Окклюзия

1. Взвесьте щенка и ensurе, что это правильный вес (19-21 г). Обезболить детеныш в 3% изофлуране в 100% O ₂ и убедитесь , что нет ответа на ноги крайнего случай. Поддерживать температуру поверхности тела между 35,5 ° C и 37 ° C с использованием грелки под хирургической стадией.
2. Зафиксируйте животное в положении лежа на спине с лентой через плечо регионов. Используя стерильные ватные тампоны, тампон передней шейки матки области с повидоном-йодом раствором с последующим тампоном 70% этанола в дважды дистиллированной воде, чередуя каждый раствор в течение четырех тампонов общих.
3. Локально пропитать 0,25% бупивакаина в запланированном месте разреза. Используя стереоскоп, чтобы срединный от 5 до 7 мм передней шейки матки разрез, чтобы обнажить общей сонной артерии (CCA). Поместите 2-4 преднатяжителями держать полость открытой и артерия подвергаются.
4. Расположить внутренней сонной артерии (ВСА), затылочной артерии (ОА) и внешнюю сонную артерию (ECA). Ухаживать артерии, чтобы получить четкое представление. Будь автомобильeful не беспокоить блуждающий нерв.
   Примечание: Для ложнооперированными щенков, то inicision остается открытым, и артерии подвергаются, после чего разрез зашивают. Общее время анестезии эквивалентна операции прикуса.
5. Вырезать 1,5 см от 6-0 шелковой нити в оплетке шовного. Расплетите шов, вытаскивая одиночные нити. Убедитесь в том, что отдельные пряди аккуратно и не изношены.
   Примечание: При необходимости сгладить потертые концы путем погружения одной цепи в стерильной воде и уходе нити с Forcep кончиками.
6. Удерживая шовную нить с 45-градусными щипцами, переместите пинцет в движении широкой дуги, чтобы идти под ВСА, так что Forcep советы возникают между ICA и ОА.
   Примечание: Если рассечение сделано хорошо, то этот шаг будет относительно легко. Если ICA и OA трогательны, будьте осторожны, чтобы не разорвать артерии при использовании щипцов для изоляции ICA. Если происходит кровотечение, оказать давление на артерию с помощью пинцета, покакровотечение останавливается. Поглощенная кровь стерильного тампона.
7. Захватите конец шовной нити, которая проводится с помощью пинцета и вытянуть его так, чтобы конец легко получить доступ. Отпустите прядь от щипцов и обратно щипцы из - под ВСА, реверсивное движение на шаге 1.5 (фиг.1А).
8. Свяжите временную лигатуру вокруг ICA на базе, ближе всего туда, где она отделяется от ССА.
   Примечание: Очень важно, чтобы связать узел так, чтобы конец нити, которая будет выдернуть, чтобы удалить узел достаточно долго (более 1 мм, менее 3 мм), легко понять, с пинцетом, обеспечивая при этом, что есть соответствующее количество шовного нити на другой стороне узла для втягивания.
9. Осторожно отведите ICA в боковом направлении и использовать зажим для крепления нити к избытков кожи вблизи области подмышечной впадине на стороне, противоположной разреза. Убедитесь в том, что эта втягивании нить достаточно тугая, чтобы остановить приток крови, прежде чем перейти к следующему шагу, чтобыминимизировать риск неконтролируемого кровотечения. Заметим, что артерии является плоским и бледным.
   Примечание: Не более-ретракции, так как это может привести к частичной или полной слезу ВСА. Втягивании можно отрегулировать так, прежде чем сделать артериотомию, потянув за нити на сторону, противоположный клип.
10. Используйте 45 ° пинцета, чтобы захватить другое unbraided шовной нити и петлю ее под и вокруг ВСА, как на этапе 1.5. Позиция эта цепь латеральнее отвода нити (рис 1B).
    Примечание: Этот шаг также может быть сделан до втягивания. Если вы не уверены в качестве ретракции, этот узел может быть очень слабо связаны перед следующей стадией.
11. Вырезать 0,2 мм артериотомия посередине между связанными и несвязанных лигатур, заблудших ближе к привязанной лигатуры.
    Примечание: Кровь остающийся в привязанной-офф артерии может опустошить через артериотомии, но не должна превышать 5 мкл. Если кровотечение продолжается, осторожно вытяните втягивание нить, чтобы увеличить втягивание, с осторожностью кнедействительное повреждение артерии от чрезмерного натяжения.
12. Использование метрической линейки, измерение окклюзионного шва и разрезать шов с дополнительным припуском 2-3 мм для удаления окклюдера во время реперфузии. Держи окклюдер с 45-градусным пинцетом и использовать прямые щипцы, чтобы создать изгиб на соответствующих длины, чтобы достичь MCA, маркировку точки остановки для продвижения.
    Примечание: 10 мм Длина окклюзии от конца наконечника к силиконовому изгибу используется для Р10 Sprague Dawley или Long Evans крысят в этом диапазоне веса.
13. Используя 45 ° щипцов, кормить с силиконовым покрытием нейлона окклюзия шов в артериотомии и продвигать шов на изгиб , который отмечает предварительно определенное расстояние до MCA (рис 1C). Убедитесь в том, что продвижение чувствует себя гладкой; немедленно прекратить продвижение, если ощущается сопротивление. Во время продвижения, цель шовного материала в направлении, которое параллельно CC / ECA, по направлению к голове.
    Примечание: Если шовный материал продвигается по спинке, по отношению кпозвоночник животного, он может работать в крылонебной артерию (ОТ). Если ощущается сопротивление после 3-5 мм продвижения, шовный материал попал в PTA соединение. Назад окклюдер из артерии, пока силикон голова не находится рядом с артериотомией перед настройкой направления продвижения. Не нужно полностью удалить окклюдер из артериотомии.
14. Закрепить окклюдер, связывая временную лигатуру, используя нить с шага 1.10 (рис 1D).
15. Удалите втягивающий клип. Обрежьте нити обоего временных лигатур, так что нить узла, который вытягивается, чтобы удалить узел легко понять с прямым пинцетом и длиннее, чем нити, которая вытягивается, чтобы затянуть узел.
    Примечание: Пряди должны быть достаточно короткой, чтобы они не запутываются в полости после закрытия.
16. Удалите преднатяжитель и закрыть полость с использованием 6-0 плетеных шелков создать три-четыре узловые швы.
17. Извлеките щенка изанестезии и поместите его на грелку в комнатном воздухе. Монитор щенка, пока он не пришел в сознание достаточного для поддержания грудины лежачее и убедиться, что она полностью восстановилась до возвращения его к плотине. Убедитесь, что щенок поддерживает температуру поверхности тела между 35,5 ° C и 37 ° C.
18. Во время окклюзии, диффузионно-взвешенной магнитно-резонансная томография (DW-МРТ) под наркозом изофлуран может быть использована для проверки соответствующей индукции травмы. Рисунок 2 демонстрирует постоянное ишемическое повреждение , обнаруженное DW-МРТ в течение tMCAO ^9.
    Примечание: диффузионно-взвешенных спин-эхо планарной визуализации выполняется 10-15 мин до реперфузии. Весь мозг изображается с последовательными 2 мм толщиной корональных секций с использованием следующих параметров импульсной последовательности: TR / TE = 5000/60 мс, 4 средние, поле зрения = 35 мм, матрица данных = 128х128, диффузия длительности градиента = 20 мс, разделение = 29,7 мс, амплитуда = 70mT / м, и б-фактор = 1.045 сек / мм ^2.Животные, демонстрирующие отсутствие кортикального участия или атипичной ишемического повреждения, например, в стволе мозга, исключается.

2. реперфузии

Примечание: окклюзия осуществляется в течение 3 ч, чтобы вызвать умеренное до тяжелого количества травм с участием стриатума и коры головного мозга.

1. При приблизительно 2 ч и 50 мин после окклюзии МСА, анестезия щенка в 3% изофлуране в 100% O _2. Поддерживать температуру поверхности тела между 35,5 ° C и 37 ° C с использованием грелки под хирургической стадией.
2. Удалите узловыми швами с шагом 1.16 и найти стык, который отмечен двумя лигатурами и хвостовой конец окклюзионного шва.
   Примечание: ложнооперированные животные индуцируются и остаются под анестезией в течение периода времени, эквивалентного к закупоренным животным. Разрез вновь открыт и зашивают. Для ложнооперированных животных, перейдите к шагу 2.11.
3. Осторожно развязатьнаиболее боковой узел, ранее привязанный в шаге 1.14, потянув за длинную цепь.
   Примечание: Если есть сопротивление в развязывать узел, остановитесь, чтобы обеспечить правильную нить узла тянута. Если сопротивление продолжается, увеличить масштаб для лучшего просмотра. Будьте осторожны, когда развязывая, как можно повредить артерию во время этого шага.
4. Удалите шовную нить из полости.
5. Ровно в 3 ч после окклюзии MCA, медленно обратно окклюзионного шовный из артерии. Там не будет никакого сопротивления.
   Примечание: В большинстве случаев не будет никакого кровотечения. Если небольшое количество кровотечения происходит, оказать давление на артерию в месте артериотомии.
6. Используйте пинцет, чтобы оказать давление на артериотомию, как следующий шаг восстанавливает ICA кровотока для реперфузии.
7. Тщательно отвязать медиальной узел, используя тот же метод, что и в шаге 2.3.
8. Удалите шовную нить из тела и нанесите кровоостанавливающее средство на артериотомию, чтобы остановить кровотечение.
9. Убедитесь в том, что кровотечение прекратилось.
   Примечание: Возвращение оригинальной формы артерии и красного цвета подтверждает, что ICA кровоток был восстановлен.
10. Удалите преднатяжителями и закрыть полость с тремя-четырьмя узловыми швами 6-0 плетеный шелк.
11. Удалить щенка от наркоза и поместите его на грелку в комнатном воздухе. Контролировать его, пока он не пришел в сознание достаточного для поддержания грудины лежачее и обеспечить полное восстановление перед его возвращением к плотине. Убедитесь, что щенок поддерживает температуру поверхности тела между 35,5 ° C и 37 ° C.
12. Проверьте щенок ежедневно в течение 5 дней. Recprd их весов и внимательно осмотрите насечки сайтов для соответствующего лечения. Удалить швы после 7-14 дней. Травмы после tMCAO могут быть отображены с МРТ, при необходимости ^9.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Животные могут потерять до 1 г веса в первый день, но, как правило, восстановить вес без вмешательства и быть в таком же весет диапазон для управления по дням 4-5. Редко, щенок может потерять избыточный вес или имеет проблемы вскармливания, требующие желудочный зонд питается в течение 2-3 дней.
13. На P21, травма может быть надежно оценена с сенсорно поведенческих тестов, таких как Rotarod или цилиндра выращивания. Когнитивная тестирование может быть выполнено уже через 4-6 - недельного возраста с использованием оценок , таких как распознавания новых объектов или водном лабиринте Морриса ^13.
14. Эвтаназии крыс путем внутрибрюшинной инъекции Euthasol (50 мг / кг) для сбора урожая мозга ^{11, 12.}
15. Гистологический анализ для оценки объем травмы или ответ на вмешательство может быть выполнен крезиловыми фиолетовым или H & E окрашивания (рисунок 3) ^10.

Результаты

Тяжесть вреда, причиненного tMCAO сильно зависит как от времени прикуса и опыта хирурга. 90-мин окклюзия часто приводит к легкой до умеренной шаблон травмы, в то время как 3 ч приводят к умеренной до тяжелой травмы. Тяжесть травмы может быть оценена с помощью различных методов, включая МРТ, гистологию, или кратко- или долгосрочные поведенческие анализы. Рисунок 2 показывает пример DW-МРТ проводили 75 мин в 90-минутной окклюзии, подтверждающие ишемического повреждения с участием ипсилатерального полушария. Диффузия взвешенное изображение демонстрирует повышенную диффузию в ипсилатеральной стриатуме и большинстве ипсилатеральной коры, без контралатеральных изменений, во время острой ишемической фазы. Это коррелирует с умеренным уровнем долгосрочной травмы с участием как коры головного мозга и глубокое серое вещество.

Закупорка результатов MCA вгибель клеток, которая начинается в стриатуме для менее тяжелых травм и развивается ухудшением кортикальной и гиппокамп травмы в течение более длительного времени прикуса и более тяжелых травм. Во время оптимизации хирургической техники, такие , как определение длины вставки шовного, МРТ настоятельно рекомендуется, так как она позволяет для подтверждения правильного размещения шовного и визуализации отека и прогрессирования повреждения при окклюзии ^{14, 15, 16.} Если МРТ не доступен, H & E или крезиловое фиолетовое окрашивание простые и надежные гистологические методы определения морфологии травмы и может быть использован в обеих ранних и поздние временных точках после tMCAO. Рисунок 3 демонстрирует умеренный до тяжелой травмы рисунка на гистопатологическом исследовании следующей 3 ч окклюзии, демонстрируя образование кист и объем в ипсилатеральной стриатуме и коре головного мозга.

Несмещенного стереологические Количественные секций Cresyl-фиолетово-окрашенная, чтобы вычислить отношение ипсилатеральных к контралатеральному полусферический объему ипсилатерального подтверждает повреждение ишемических-реперфузионного. В частности, после анестезии животного с Euthasol, мозг собирали путем транскардиальной перфузией в 0,1 М PBS с 4% параформальдегидом. После ночи и вторичная фиксация уравновешивания в 30% сахарозы, весь мозг был разрезают с интервалом 50 мкм, а каждый двенадцатый участок был выбран, установлен и окрашивали крезиловым фиолетовым ^10.

Даже при легкой травме, изменения опорно-двигательного аппарата, таких как кружения и неврозы, отмечаются в период прикуса. При более тяжелых травмах, эти изменения будут сохраняться после реперфузии. Дополнительное тестирование поведенческое может быть использовано для оценки тяжести травмы, в то числе Rotarod или цилиндр тестирования для выращивания функции сенсомоторной и водного лабиринта Морриса длякогнитивной функции ^13.

Рисунок 1: Живые Хирургические Образа процедуры tMCAO. (А) Первый шовный нить петлей вокруг ВСА, как подробно описано в шаге 1.6. (Б) первая временная лигатура привязана и МКА втягиваются. Второй шов нить петли вокруг ВСА, сбоку от первой шовной нити, как описано в шаге 1.9. (C) с силиконовым покрытием окклюзии шовным подаются в сайт артериотомии, как описано в шаге 1.12. (D) вторая временная лигатура привязана к фиксации окклюдера на месте, как описано в шаге 1.14. Шкала бар = 1 мм.

Рисунок 2: МРТ Во время Occlusion Демонстрирует Соответствующую Односторонний травму. Спереди назад, корональные изображения срезы DW-МРТ, выполненные в течение 90 мин окклюзии а, демонстрирует повышенную диффузию с участием ипсилатерального полушария (стрелка), что согласуется с текущим ишемическим повреждением в острой фазе. Печатается с разрешения Stroke ^11. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 3: Односторонний Травма Вовлечение стриатуме и Cortex через 4 недели после tMCAO. Задние к переднему, крезили-фиолетово-окрашенный корональные срезы головного мозга (каждые 50 мкм) собирают из р38 животных демонстрируют достаточно серьезные травмы (стрелки показывают образование ипсилатеральных кист и снижение кортикального иОбъем полосатой) после 3 ч tMCAO на Р10. Круглое отверстие на левой стороне представляет собой идентификатор контралатеральной полушарии. Шкала бар = 5 мм. Печатается с разрешения нейробиологии ¹² заболеваний. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Обсуждение

Критические шаги в рамках протокола

Во- первых, это очень важно для поддержания нормотермию от начала анестезии до полного выздоровления, поскольку существуют известные эффекты как гипотермии ¹⁷ и гипертермии ¹⁸ на прогрессирование повреждения мозга в обоих незрелых и зрелых животных. Во-вторых, при обеспечении животных и втягивания надрез, оптимальное положение для контроля дыхания и гарантировать, что трахея свободен от сжатия имеет важное значение. В-третьих, во избежание сдавливания или растяжения блуждающего нерва, так как это может привести к изменению частоты сердечных сокращений с стимуляции блуждающего нерва. В-четвертых, потому что втягивание МКА необходимо контролировать кровотечение во время артериотомии, внимание должно быть уделено степени натяжения при отводе, чтобы избежать повреждения артерии. Если артерия действительно оторвать от втягивания, или если есть плохая артериотомия надрез, животное должно быть исключено из анализа из-за рисккровотечения и плохой реперфузии.

Модификации и устранение неисправностей

Использование МРТ в качестве руководства, длина шва может быть оптимизирована для обеспечения того, чтобы кончик силикона правильно закупоривает MCA для создания фокусной ишемии. Если МРТ не доступна, щенки могут быть умерщвлены перед тем реперфузии для рассечения визуализировать размещение шовного материала. Отрегулируйте длину шва по мере необходимости. Вес щенка высоко коррелирует с требованиями длинами поглощающего шовных. Время закупорки может быть изменено, чтобы регулировать степень тяжести травмы.

Кроме того, форма и длина шва имеют решающее значение. Для P10 Sprague-Dawley и Long Evans крыс весом 19-21 г, 10 мм оптимальная длина вставки в нашем опыте. Дальнейшее введение окклюзионного шва может привести к перфорации MCA. Кроме того, последовательность в форме окклюзионного нити в каждой операции приведет к повышенной консистенции травмы рattern ^{19, 20.} По этой причине мы рекомендуем использовать профессионально изготовленные швами для этой конкретной цели. Важно также отметить, что модель травмы могут отличаться между специалистами-практиками из-за, казалось бы малейшие различия в технике.

Ограничения техники

Выполнение этой техники в небольшом, развитии грызуна требует значительного опыта. Если выполнено правильно, хирург может вызвать очень систематический травматизм в животных разных размеров и достичь коэффициента выживаемости более чем на 95%. Кроме того, соответствующие хирургические инструменты имеют важное значение. Хирургические инструменты должны быть в хорошем состоянии, чтобы гарантировать, что все советы инструмента аппроксимировать правильно.

Значение этого метода в отношении существующих или альтернативных методов

В то время как гипоксия-ишемия, или рисовый Vannucci модель ² , наиболее часто используется для изучения гипоксически-ишемическое повреждение в развивающемся мозге, важно отметить, что эта модель tMCAO отличается от HI в том, что преходяще фокальной ишемией без глобальной гипоксии, с последующей фазой реперфузии, когда обструкция удаляется и кровоток восстанавливается. Это приводит к более последовательным и воспроизводимым травмам и более клинический поступательным, вызывая картину травмы, сходную с наблюдаемым в доношенном новорожденном инсульте. Это позволяет изучать фокусные модели травматизма и компенсаторные реакции в неповрежденной ткани.

Будущие приложения после освоения этой техники

Эта модель аналогична наиболее распространенная причина инсульта у человека, новорожденных переходный окклюзионный тромб , которое происходит в перинатальный период ^{11, 21.} Этиология не совсем понятно, и, скорее всего, многофакторный, но предполагается, в большинстве случаев то результате эмболии , проходящей из плаценты ^11. Кроме того, многие новорожденные с предполагаемым перинатальным инсультом часто присутствуют с более поздней эпилептической активностью или тонким фокальным неврологическим экзаменом аномалия ^22. Это делает использование последовательной, поступательной модели повреждения для выявления механизмов прогрессирования повреждения и возможных терапевтических стратегий имеет решающее значение.

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Isoflourane	Henry Schein	50033	anesthetic, at 3%
Trinocular Surgioscope	World Precision Instruments	PSMT5N
Heating pad	Sunbeam	000731-500-000	low to medium setting
IR Thermometer	Extech Instruments	72-5270
Retraction kit for small animals	Fine Science Tools	18200-20
CermaCut Scissors	Fine Science Tools	14958-09
Dumont #5SF Forceps	Fine Science Tools	112522-00	2x
Dumont #5/45 Forceps	Fine Science Tools	11251-35	2x
B-2 Micro Clamp	Fine Science Tools	00398-02
Forcepts for Clamp Application	Fine Science Tools	00072-14
Micro Vannas Scissors	Fine Science Tools	15000-03	2mm cutting edge
Occlusion Sutures	Doccol	602123PK10	701712PK5Re
Ruler	Fine Science Tools
Hemostatic Agent	Avitene	DVL1010590
6-0 Perma-Hand Silk Reverse CuttingSuture	Ethicon	769G
Euthasol	Virbac	710101	0.22 mL/kg
Cotton Tipped Applicators	Henry Schein	100-9249
Laboratory Tape	VWR	89097-990