Transitoire cérébrale moyenne Artère Occlusion Modèle de l'AVC néonatale chez les rats P10

Résumé

Neonatal stroke is a significant cause of early brain injury requiring a translational model with consistent focal injury patterns and high reproducibility in order to enable study. This study describes the detailed surgical procedure for creating a non-hemorrhagic, unilateral focal ischemia-reperfusion injury in full-term-equivalent rodents.

Résumé

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature and mature brain. Stroke occurs commonly in the perinatal period in humans, and transient ischemia-reperfusion is the most common form of stroke in neonates. The reperfusion phase is a critical component of injury progression, which occurs over a period of days to weeks, and of the endogenous response to injury. This postnatal day 10 (p10) rat model of transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) creates a unilateral, non-hemorrhagic focal ischemia-reperfusion injury that can be utilized to study the mechanisms of focal injury and repair in the full-term-equivalent brain. The injury pattern that is produced by tMCAO is consistent and highly reproducible and can be confirmed with MRI or histological analyses. The severity of injury can be manipulated through changes in occlusion time and other methods that will be discussed.

Introduction

AVC au cours de la période néonatale est une cause importante de décès et d' invalidité, survenant dans moins de 1 à 2 300 naissances vivantes ^1. Cela conduit au développement du système nerveux central modifié et augmentation de la morbidité à long terme, y compris augmentation de l'incidence de l'épilepsie, infirmité motrice cérébrale, un retard mental, et d'autres types de moteur ou d'un dysfonctionnement cognitif. Les effets à long terme de l'AVC précoce font des modèles animaux traductionnelles essentiels pour l'examen des mécanismes de blessures et de réparation dans cette population, y compris les stratégies pour protéger le cerveau lésé ou pour améliorer la réparation.

Différents modèles d'ischémie ont été utilisés pour étudier les lésions cérébrales chez les animaux adultes, et alors que la procédure Rice-Vannucci (modifié Levine) ² est couramment utilisé pour étudier une lésion hypoxique-ischémique dans le cerveau en développement, l' ischémie-reperfusion focale est un mécanisme de blessure distinct causant des blessures focale, avec un noyau blessé et penumbra et intact tissu distant. Les Koizumi ³ et ⁴ Longa modèles ont été développés chez les rats adultes pour obtenir une occlusion de l' artère cérébrale moyenne transitoire par l'artère carotide commune (ACC) et de l' artère carotide externe (ECA), respectivement. Dans les deux modèles, la ligature permanente et cautérisation des branches de l'artère sont importantes pour minimiser les saignements et de rationaliser la procédure chirurgicale, ce qui provoque aussi des effets néfastes sur la capacité de l'animal à se nourrir et de prendre du poids après une blessure. En outre, il existe des mécanismes de blessures distinctes dans le cerveau immature et des modèles spécifiques de blessures observés en conséquence.

Plus récemment, la course photothrombotique (méthode Rose Bengale) ⁵ et ligature MCA permanente ⁶ ont été utilisées pour étudier la course néonatale et adulte. Les deux accidents vasculaires cérébraux photothrombotique et MCA ligature créer des changements permanents dans le flux sanguin cérébral qui se traduisent par un manque de reperfusion. Revascularisation est un élément essentiel du développement et de la progression des lésions focales, avec excitotoxicité accrue, formation de radicaux libres, et la production d'oxyde nitrique conduisant à la mort cellulaire retardée qui implique des cascades de signalisation qui sont distincts de la phase ischémique ^7. Hypoxie-ischémie implique la ligature de la carotide unilatérale permanente suivie par une hypoxie globale, qui diffère aussi de la cause de la lésion hypoxique-ischémique chez l'homme et ne provoque pas un modèle de lésion focale constante, ce qui rend l'étude du noyau blessé et penumbra plus difficile.

Nous avons décrit précédemment un modèle d'ischémie-reperfusion accident vasculaire cérébral non hémorragique chez le rat immature utilisant une occlusion de l' artère cérébrale moyenne transitoire (MCAO) ^{8, 9, 10.} Cette méthode est moins invasive qui accède et obture la MCA à travers l'artère carotide interne sans ligati permanentou cautérisation. Cela fournit un modèle de blessure similaire à la cause la plus fréquente d'accident vasculaire cérébral pendant la période périnatale ^{11, 12.} Ce modèle d'ischémie-reperfusion des résultats de blessures des dommages au striatum ipsilatéral et le cortex pariéto-temporale. Ce modèle de tMCAO permet également le contrôle de la gravité des blessures en faisant varier la durée de l'occlusion. L'examen des voies de signalisation et les changements histologiques dans le noyau et blessé et penumbra dans le tissu non endommagé ipsilatéral et controlatéral peut encore élucider les mécanismes de blessures et de réparation dans le cerveau immature. Cette étude démontrera ce modèle de blessure important pour le développement du cerveau.

Protocole

Toutes les recherches sur les animaux a été approuvé par l'Université de Californie, San Francisco Comité sur la recherche animale et a été réalisée conformément au Guide pour les soins et l' utilisation des animaux de laboratoire (Département américain de la Santé et des Services sociaux, Publication n ° 85-23, 1985 ). Les animaux ont été suivis de près par les vétérinaires de l'UCSF institutionnel de protection des animaux et le Comité d'utilisation (IACUC), accrédité par AAALAC. Une femelle rat Sprague-Dawley avec une litière rassis 8 (10 chiots par portée) a été obtenu. La mère et ses chiots ont reçu la nourriture et ad libitum eau et logés dans un établissement de soins des animaux et contrôlé en température léger avec enrichissement par jour, par protocole IACUC, jusqu'à ce que les chiots étaient 10 jours. Tous les instruments chirurgicaux utilisés dans cette procédure ont été autoclaves pour assurer la stérilité. Stérilité des conseils d'instruments est maintenue tout au long de la chirurgie.

1. cérébrale moyenne Artère Occlusion

1. Peser le chiot et assure qu'il est le poids approprié (19-21 g). Anesthésier le chiot dans 3% d' isoflurane dans 100% de O ₂ et d' assurer qu'il n'y a pas de réponse à un pincement de pied. Maintenir la température de surface de corps entre 35,5 ° C et 37 ° C à l'aide d'un coussin chauffant sous la scène chirurgicale.
2. Fixer l'animal dans une position couchée avec la bande à travers les régions d'épaulement. En utilisant des tampons de coton stérile, nettoyer la zone cervicale antérieure avec une solution de povidone-iode suivi par un tampon de 70% d'éthanol dans de l'eau distillée deux fois, en alternant entre chaque solution pendant quatre tampons totaux.
3. Localement infiltrer bupivacaïne à 0,25% dans le site d'incision prévue. L'utilisation d'un stéréoscope, faire une ligne médiane de 5 à 7 mm antérieure incision cervicale pour exposer l'artère carotide commune (ACC). Placez 2-4 écarteurs pour maintenir la cavité ouverte et l'artère exposée.
4. Localiser l'artère carotide interne (ICA), l'artère occipitale (OA), et l'artère carotide externe (ECA). Toiletter les artères pour obtenir une vue claire. Soyez voitureeful de ne pas perturber le nerf vague.
   NOTE: Pour les petits opérés de manière fictive, la inicision est laissée ouverte et les artères sont exposées, après quoi l'incision est suturée fermée. Le temps de l'anesthésie totale est équivalente à celle de la chirurgie d'occlusion.
5. Coupez 1,5 cm de fil de suture tressé de soie 6-0. La suture défaire les nattes, tirant des brins simples. Assurez-vous que les simples brins sont propres et non effiloché.
   NOTE: Si nécessaire, les extrémités effilochées lisser en plongeant le seul brin dans l'eau stérile et le toilettage du brin avec des pointes de forceps.
6. Tout en maintenant le fil de suture avec une pince de 45 degrés, déplacer la pince dans un mouvement d'arc de balayage pour passer sous la CIA afin que les conseils émergent entre le forceps ICA et OA.
   NOTE: Si la dissection est bien fait, cette étape sera relativement facile. Si l'ICA et l'arthrose se touchent, veillez à ne pas rompre les artères lors de l'utilisation du forceps pour isoler l'ICA. Si le saignement se produit, appliquez une pression sur l'artère avec la pince jusqu'à ce quel'arrêt du saignement. Absorber le sang avec un tampon stérile.
7. Prenez l'extrémité du brin de suture qui est maintenue par la pince et tirez pour que la fin est facile d'accès. Libérer le brin de la pince et la pince arrière de dessous du CIA, en inversant le mouvement de l'étape 1.5 (figure 1A).
8. Attachez un ligatures temporaire autour de l'ICA à la base, le plus proche de l'endroit où il se sépare de la CCA.
   NOTE: Il est important pour attacher le noeud afin que l'extrémité du fil qui sera tiré pour enlever le noeud est assez long (supérieur à 1 mm, inférieure à 3 mm) de saisir facilement avec une pince, tout en assurant qu'il existe un quantité appropriée de fil de suture de l'autre côté du noeud de rétraction.
9. rétracter latéralement avec précaution l'ICA et utiliser un clip pour fixer le fil à l'excès de peau à proximité de la région d'aisselle du côté opposé à l'incision. Assurez-vous que ce brin de rétraction est suffisamment tendu pour arrêter l'écoulement du sang avant de procéder à l'étape suivante, àminimiser le risque de saignement incontrôlé. Notez que l'artère est plat et pâle.
   REMARQUE: Ne pas trop se rétractent, car il peut causer une déchirure partielle ou totale de l'ICA. La rétraction peut être ajusté juste avant de faire l'artériotomie en tirant sur le fil sur le côté opposé à la pince.
10. Utiliser 45 ° forceps pour saisir un autre brin de fil de suture non tressée et la boucle sous et autour de l'ICA, comme à l'étape 1.5. Position de ce volet latéral au fil de rétraction (figure 1B).
    REMARQUE: Cette étape peut également être fait avant la rétraction. En cas de doute sur la qualité de la rétraction, ce nœud peut être très vaguement lié avant l'étape suivante.
11. Couper une mi-chemin artériotomie 0,2 mm entre les ligatures nouent et se dénouent, égarée plus proche de l'égalité ligatures.
    NOTE: Le sang restant dans l'artère liée au décollage peut vider par l'artériotomie mais ne doit pas dépasser 5 pi. Si le saignement persiste, retirez délicatement le fil de rétraction pour augmenter la rétraction, avec soin à unvide d'endommager l'artère de tension excessive.
12. En utilisant une règle métrique, mesurez la suture occlusive et couper la suture avec une allocation supplémentaire de 2-3 mm pour le retrait du dispositif d'occlusion pendant la reperfusion. Tenez le dispositif d'occlusion avec une pince de 45 degrés et l'utilisation de pinces droites pour créer un coude à la longueur appropriée pour atteindre le MCA, marquant un point d'arrêt pour l'avancement.
    REMARQUE: une longueur d'occlusion de 10 mm de l'extrémité de pointe de silicone sur le pli est utilisé pour P10 Sprague-Dawley ou jeunes rats Long Evans dans cette gamme de poids.
13. Utilisation de 45 ° forceps, alimenter le fil de suture d'occlusion de nylon enduit de silicone dans l'artériotomie et de faire avancer le fil de suture à la courbure qui marque la distance prédéterminée de la MCA (Figure 1C). Veiller à ce que l'avancement est lisse; cesser immédiatement l'avancement si la résistance se fait sentir. Au cours de l'avancement, l'objectif de la suture dans une direction qui est parallèle à la CC / CEA, vers la tête.
    NOTE: Si la suture est avancée dorsalement, versla colonne vertébrale de l'animal, il peut courir dans l'artère ptérygo (ZEP). Si la résistance est ressentie après 3-5 mm d'avancement, la suture a frappé la jonction de la ZEP. Arrière de l'obturateur de l'artère jusqu'à ce que la tête de silicone est proche de la artériotomie avant d'ajuster la direction d'avancement. Il ne faut pas supprimer complètement le dispositif d'occlusion de l'artériotomie.
14. Fixer le dispositif d' occlusion en attachant une ligature temporaire, en utilisant le brin de l' étape 1.10 (Figure 1D).
15. Retirez le clip enrouleur. Couper les brins de deux ligatures temporaires de telle sorte que le brin du nœud qui est tiré pour enlever le noeud est facile à saisir avec une pince droite et est plus long que le brin qui est tiré pour serrer le nœud.
    NOTE: Les brins doivent être suffisamment courte pour qu'ils ne s'emmêle pas dans la cavité après fermeture.
16. Retirez les enrouleurs et fermer la cavité à l'aide 6-0 soie tressée pour créer trois à quatre points de suture interrompus.
17. Retirer le chiot deanesthésie et placez-le sur un coussin chauffant dans l'air ambiant. Surveiller le chiot jusqu'à ce qu'il ait repris connaissance suffisante pour maintenir décubitus sternale et veiller à ce qu'il a complètement récupéré avant de le retourner au barrage. Assurez-vous que le chiot maintient une température de surface de corps entre 35,5 ° C et 37 ° C.
18. Au cours de l'occlusion, l'imagerie par résonance magnétique pondérée en diffusion (DW-IRM) sous anesthésie isoflurane peut être utilisé pour vérifier l'induction appropriée de blessure. La figure 2 montre une lésion ischémique en cours détecté par DW-IRM pendant tMCAO ^9.
    REMARQUE: rotation pondérée en diffusion imagerie écho-planar est effectuée 10 à 15 minutes avant la reperfusion. Le cerveau entier est imagé avec série des coupes coronales d'épaisseur de 2 mm à l'aide des paramètres de la séquence d'impulsions suivants: TR / TE = 5000/60 ms, 4 moyennes, champ de vision = 35 mm, matrice de données = 128x128, gradient diffusion durée = 20 ms, séparation = 29,7 ms, amplitude = 70mt / m, et facteur b = 1,045 s / mm ^2.Les animaux présentant un manque d'implication corticale ou atypique lésion ischémique, comme dans le tronc cérébral, sont exclus.

2. revascularisation

REMARQUE: Occlusion est effectuée pendant 3 h pour provoquer une quantité modérée à sévère de blessure impliquant le striatum et le cortex.

1. A environ 2 h et 50 min occlusion suivante de la MCA, anesthésier le chiot dans 3% d' isoflurane dans 100% de O _2. Maintenir une température de surface de corps entre 35,5 ° C et 37 ° C à l'aide d'un coussin chauffant sous la scène chirurgicale.
2. Retirer les sutures interrompues à l'étape 1.16 et localiser la jonction, qui est marquée par deux ligatures et l'extrémité de queue de la suture occlusive.
   REMARQUE: les animaux sont opérés de manière fictive induites et restent sous anesthésie pendant une période de temps équivalente aux animaux occlus. L'incision est à nouveau ouvert et fermé suturée. Pour les animaux opérés de manière fictive, passez à l'étape 2.11.
3. soigneusement untiele noeud le plus latéral lié précédemment à l'étape 1.14 en tirant sur le brin plus long.
   NOTE: En cas de résistance à dénouer le nœud, arrêtez de faire en sorte que le brin correct du noeud est tiré. Si la résistance continue, augmenter le grossissement pour une meilleure vue. Soyez prudent lorsque vous déliement, car il est possible d'endommager l'artère pendant cette étape.
4. Retirer le fil de suture de la cavité.
5. Exactement 3 h après l'occlusion MCA, lentement la suture occlusive de l'artère. Il n'y aura pas de résistance.
   NOTE: Dans la plupart des cas, il n'y aura pas de saignement. Si une petite quantité de saignement se produit, appliquez une pression sur l'artère sur le site artériotomie.
6. Utilisez une pince pour appliquer une pression à l'artériotomie, comme l'étape suivante restaure le flux sanguin ICA pour reperfusion.
7. délier soigneusement le noeud interne en utilisant le même procédé que dans l'étape 2.3.
8. Retirez le fil de suture du corps et appliquer un agent hémostatique à l'artériotomie pour arrêter le saignement.
9. Assurez-vous que le saignement est arrêté.
   NOTE: Retour de la couleur rouge et la forme originale de l'artère confirme que le flux sanguin ICA a été restauré.
10. Retirez les enrouleurs et fermer la cavité avec trois à quatre sutures interrompues de soie 6-0 tressée.
11. Retirer le chiot de l'anesthésie et placez-le sur un coussin chauffant dans l'air ambiant. Surveiller jusqu'à ce qu'il ait repris connaissance suffisante pour maintenir décubitus sternale et assurer le recouvrement intégral avant de le retourner au barrage. Assurez-vous que le chiot maintient une température de surface de corps entre 35,5 ° C et 37 ° C.
12. Inspecter les chiots par jour pendant 5 jours. Recprd leur poids et d'inspecter les sites d'incision près pour la guérison appropriée. Retirer les sutures après 7-14 jours. Blessures post-tMCAO peut être imagée avec l' IRM, éventuellement ^9.
    REMARQUE: Les animaux peuvent perdre jusqu'à 1 g de poids le premier jour, mais retrouvera généralement le poids sans intervention et être dans un même pesert gamme de commandes par jour 4-5. Rarement, un chiot peut perdre du poids excessif ou ont des difficultés d'alimentation, ce qui nécessite un gavage oral se nourrit pendant 2-3 jours.
13. A P21, une blessure peut être évaluée de façon fiable avec des tests de comportement sensori, comme Rotarod ou l'élevage du cylindre. Les tests cognitifs peut être effectuée dès que 4-6 semaines en utilisant des évaluations telles que la reconnaissance nouvelle de l' objet ou le labyrinthe d'eau de Morris ^13.
14. Euthanasier les rats par injection intraperitoneale de Euthasol (50 mg / kg) pour la récolte du cerveau ^{11, 12.}
15. L' analyse histologique pour évaluer le volume de blessure ou de réponse aux interventions peuvent être effectuées avec du violet de crésyle ou coloration H & E (figure 3) ^10.

Résultats

La gravité des blessures causées par tMCAO dépend fortement à la fois le temps d'occlusion et l'expérience du chirurgien. Une occlusion de 90 minutes produit souvent une légère à modérée type de blessure, tandis que 3 h produit une blessure modérée à sévère. La gravité des blessures peut être évaluée par diverses méthodes, y compris l'IRM, histologie, ou des analyses à court ou du comportement à long terme. La figure 2 montre un exemple du DW-IRM réalisée 75 min dans une occlusion de 90 min, ce qui confirme la lésion ischémique impliquant l'hémisphère ipsilatéral. L'imagerie de diffusion démontre une diffusion accrue dans le striatum ipsilatéral et la majorité du cortex ipsilatéral, sans modification controlatérales pendant la phase ischémique aigu. Cela correspond à un niveau modéré de blessure à long terme impliquant à la fois le cortex et la substance grise profonde.

Occlusion des résultats MCAla mort cellulaire qui commence dans le striatum des blessures moins graves et développe une aggravation des blessures corticale et hippocampique des durées d'occlusion et des blessures plus graves. Lors de l' optimisation de la technique chirurgicale, par exemple pour déterminer la longueur d'insertion de suture, l' IRM est fortement recommandée, car elle permet la confirmation du placement de suture appropriée et la visualisation de l' oedème et de la progression des blessures pendant l' occlusion ^{14, 15, 16.} Si l'IRM ne sont pas disponibles, H & E ou coloration violette crésyl sont des méthodes histologiques simples et fiables pour déterminer la morphologie des blessures et peuvent être utilisés aux deux points de temps précoces et tardifs après la tMCAO. La figure 3 montre un modèle de lésion modérée à sévère à l' examen histopathologique suite à une occlusion de 3 h, ce qui démontre la formation de kystes et de volume dans le striatum et le cortex ipsilatéral.

Quantification objective stéréologique de coupes colorées crésyle-violet afin de calculer le rapport entre le volume de l'hémisphère ipsilatéral à controlatéral confirme ipsilatéral une lésion ischémique de reperfusion. Plus précisément, après anesthésie de l'animal avec Euthasol, le cerveau a été récolté par perfusion transcardiaque dans du PBS 0,1 M à 4% de paraformaldehyde. À la suite de postfixation pendant une nuit et équilibration dans 30% de saccharose, le cerveau entier a été sectionné à des intervalles de 50 pm, et chaque section douzième a été sélectionné, monté et coloré avec du violet de crésyle ^10.

Même avec une blessure légère, les changements locomoteurs, comme encerclant et hémiparésie, sont notés au cours de la période d'occlusion. Avec des blessures plus graves, ces changements vont persister après la reperfusion. tests comportementaux supplémentaires peuvent être utilisés pour évaluer la gravité des blessures, y compris les essais d'élevage Rotarod ou cylindre pour la fonction sensori et le labyrinthe d'eau de Morris pourla fonction cognitive ^13.

Figure 1: Surgical images en direct de la procédure tMCAO. (A) Le premier brin de fil de suture est enroulée autour de l'ICA, tel que décrit à l' étape 1.6. (B) Le premier ligatures temporaire est liée et l'ICA est rétracté. Le second brin de fil de suture est enroulée autour de l'ICA, latéralement par rapport au premier brin de fil de suture, tel que décrit à l'étape 1.9. (C) La suture d'occlusion revêtu de silicone est introduit dans le site d'artériotomie, tel que décrit à l' étape 1.12. (D) La seconde ligature temporaire est attaché pour fixer le dispositif d' occlusion en place, comme indiqué à l' étape 1.14. Barre d'échelle = 1 mm.

Figure 2: IRM Au cours OCCLusion Démontre le approprié Unilatérale blessures. Avant vers l'arrière, des tranches d'image coronale du DW-IRM, réalisée au cours d'une occlusion de 90 min, démontrer une diffusion accrue impliquant l'hémisphère ipsilatéral (flèches), ce qui correspond à une lésion ischémique en cours dans la phase aiguë. Reproduit avec la permission de l' AVC ^11. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.

Figure 3: blessures impliquant le striatum Unilatérale et Cortex à 4 semaines suivant tMCAO. Arrière en avant, coronales coupes de cerveau teinté crésyl-violet (chaque 50 um) récoltées à partir P38 animaux montrent des blessures assez graves (les flèches montrent la formation de kystes ipsilatéral et réduit corticale etvolume de striatal) suivant une tMCAO 3 h à P10. Le trou rond sur le côté gauche représente un identifiant de l'hémisphère contralateral. Barre d'échelle = 5 mm. Reproduit avec la permission de Neurobiology of Disease ^12. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.

Discussion

Les étapes critiques au sein du protocole

Tout d' abord, il est important de maintenir la normothermie de l'initiation de l' anesthésie jusqu'à la guérison complète, car il y a des effets connus de l' hypothermie à la fois ¹⁷ et ¹⁸ hyperthermie sur la progression des lésions cérébrales chez les animaux immatures et matures. En second lieu, tout en assurant l'animal et de rétracter l'incision, un positionnement optimal pour surveiller la respiration et de veiller à ce que la trachée est libre de compression est essentiel. En troisième lieu, éviter de serrer ou d'étirement du nerf vague, car cela pourrait provoquer des changements dans la fréquence cardiaque avec la stimulation vagale. En quatrième lieu, parce que la rétraction de l'ICA est nécessaire pour contrôler le saignement pendant la artériotomie, il faut faire attention au degré de tension lors de la rétraction pour éviter d'endommager l'artère. Si l'artère ne se déchire de rétraction, ou s'il y a une mauvaise incision artériotomie, l'animal doit être exclu de l'analyse en raison du risqued'hémorragie et reperfusion pauvres.

Modifications et dépannage

Grâce à l'IRM comme guide, la longueur de suture peut être optimisée pour faire en sorte que la pointe de silicone obture correctement la MCA pour créer l'ischémie focale. Si l'IRM ne sont pas disponibles, les chiots peuvent être euthanasiés avant pour la dissection reperfusion pour visualiser la mise en place de la suture. Ajuster la longueur de suture au besoin. Le poids des petits est fortement corrélé avec les exigences de longueur de suture occlusive. Le temps d'occlusion peut être modifiée pour ajuster le degré de gravité des blessures.

En outre, la forme et la longueur de suture sont critiques. Pour P10 rats Sprague-Dawley et Long Evans pesant 19-21 g, 10 mm est la longueur optimale d'insertion dans notre expérience. En outre l'insertion de la suture occlusive peut provoquer une perforation de la MCA. De plus, la cohérence dans la forme du filament occlusive dans chaque opération se traduira par une plus grande cohérence des blessures pattern ^{19, 20.} Pour cette raison, nous vous recommandons d'utiliser des sutures professionnellement fabriqués spécialement à cet effet. Il est également important de noter que le type de blessure peut varier entre les praticiens en raison des différences apparemment minute dans la technique.

Limites de la technique

L'exécution de cette technique dans un petit développement rongeurs nécessite une expérience significative. Si elle est effectuée correctement, le chirurgien est en mesure de provoquer un type de blessure très cohérente à travers les animaux de différentes tailles et d'atteindre un taux de survie supérieur à 95%. En outre, des outils chirurgicaux appropriés sont essentiels. Les instruments chirurgicaux doivent être bien entretenus pour assurer que tous les conseils de l'instrument se rapproche correctement.

Signification de cette technique par rapport aux méthodes existantes ou alternatives

Bien que l' hypoxie-ischémie, ou le modèle Rice-Vannucci ² , est le plus souvent utilisé pour étudier une lésion hypoxique-ischémique dans le cerveau en développement, il est important de noter que ce modèle de tMCAO est distinct de HI en ce qu'il est l'ischémie focale transitoire sans hypoxie globale, suivie d'une phase de reperfusion lorsque la obstruction est enlevé et la circulation sanguine est rétablie. Cela provoque une blessure plus cohérente et reproductible et est plus clinique translationnelle en provoquant un type de blessure similaire à celle observée en plein terme AVC néonatal. Cela permet à l'étude des modèles de blessures focales et des réponses compensatoires dans le tissu non endommagé.

Les applications futures après la maîtrise de cette technique

Ce modèle est similaire à la cause la plus fréquente d'AVC chez les nouveau - nés humains, un thrombus occlusif transitoire qui se produit au cours de la période périnatale ^{11, 21.} L'étiologie est pas tout à fait claire et est très probablement multifactorielle, mais il est présumé dans la plupart des cas to résulter d'emboles qui passent du placenta ^11. En outre, de nombreux nouveau - nés ayant subi un AVC périnatal présumé présentent souvent une activité plus tard de saisie ou subtile examen neurologique focal Anomalies ^22. Cela rend l'utilisation d'une approche cohérente, modèle de lésion de la traduction pour identifier les mécanismes de progression des blessures et des stratégies thérapeutiques possibles cruciales.

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Isoflourane	Henry Schein	50033	anesthetic, at 3%
Trinocular Surgioscope	World Precision Instruments	PSMT5N
Heating pad	Sunbeam	000731-500-000	low to medium setting
IR Thermometer	Extech Instruments	72-5270
Retraction kit for small animals	Fine Science Tools	18200-20
CermaCut Scissors	Fine Science Tools	14958-09
Dumont #5SF Forceps	Fine Science Tools	112522-00	2x
Dumont #5/45 Forceps	Fine Science Tools	11251-35	2x
B-2 Micro Clamp	Fine Science Tools	00398-02
Forcepts for Clamp Application	Fine Science Tools	00072-14
Micro Vannas Scissors	Fine Science Tools	15000-03	2mm cutting edge
Occlusion Sutures	Doccol	602123PK10	701712PK5Re
Ruler	Fine Science Tools
Hemostatic Agent	Avitene	DVL1010590
6-0 Perma-Hand Silk Reverse CuttingSuture	Ethicon	769G
Euthasol	Virbac	710101	0.22 mL/kg
Cotton Tipped Applicators	Henry Schein	100-9249
Laboratory Tape	VWR	89097-990