Una batería de pruebas de comportamiento para la evaluación repetida de la motricidad, humor y cognición en ratones

Resumen

Una batería de pruebas de comportamiento integral de las habilidades motoras, estado de ánimo, incluyendo la interacción social, depresión y ansiedad — y cognición está diseñada para la evaluación repetida de cambios de comportamiento relacionados con la neurodegeneración en ratones.

Resumen

Estudios farmacológicos y toxicológicos en neurodegeneración requieren análisis integral del comportamiento en los ratones debido a trastornos motores y trastornos de ánimo y la cognición son comunes y compartieron a menudo los síntomas en enfermedades neurodegenerativas. Se muestra aquí es una batería de pruebas de comportamiento para el motor, estado de ánimo y la cognición, que puede ser repetidamente probada en un estudio longitudinal. Esta batería evalúa el fenotipo general comportamiento en ratones mediante el examen de cada dominio de la conducta con al menos dos pruebas bien aceptados independiente (es decir, prueba de campo abierto y prueba del rotarod para motricidad, prueba de interacción social, elevado más prueba del laberinto, y prueba de nado forzado para función emocional y prueba de laberinto de agua de Morris y prueba de reconocimiento de objeto nuevo para la función cognitiva). Por lo tanto, esta batería de pruebas sensibles e integral es una poderosa herramienta para el estudio del comportamiento alternancia en neurodegeneración.

Introducción

Enfermedades neurodegenerativas presentó síntomas conductuales devastadoras, incluyendo deterioro cognitivo, disfunciones del estado de ánimo tales como ansiedad y depresión o de disfunción del motor¹. La patogenia de diversos tipos de enfermedades neurodegenerativas es claro². Estudios acumulativos indican que factores genéticos y ambientales pueden tanto contribuir a la patogenesia de las enfermedades neurodegenerativas. Identificar el factor de riesgo de la neurodegeneración requiere de análisis de conducta. Aunque cada tipo de enfermedad neurodegenerativa tiene su síntoma conductual de la firma (por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer [AD] se presenta con deterioro cognitivo y la enfermedad de Parkinson [EP] con disfunción motora). Con la progresión de la enfermedad, los pacientes manifiestan comorbilidad de diferentes anormalidades del comportamiento³. Por ejemplo, pacientes con EA muestran síntomas de la disfunción del estado de ánimo en la etapa avanzada^4,5. Pacientes con EP pueden progresar a demencia relacionada con el PD y desarrollar deterioro cognitivo⁶. Basado en estas características, el análisis del comportamiento en modelos de neurodegeneración suele ser amplia y repetida.

Para lograr este objetivo, una batería que contiene pruebas de comportamiento clásicas y ampliamente utilizadas con excelente validez fue diseñada para análisis de comportamiento en el motor, el estado de ánimo y la cognición. La función motora puede comprobarse por la prueba de campo abierto^7,8 y la aceleración rotarod. Disfunción del estado de ánimo, incluyendo la disfunción social, depresión y ansiedad, se ven más comúnmente en neurodegenerativas enfermedades⁵. Por lo tanto, esta batería incluye una interacción social sociabilidad⁹, el elevado más prueba de laberinto para ansiedad¹⁰y la prueba de nado forzado para depresión¹¹. Deterioro cognitivo es uno de los síntomas más característicos en enfermedades neurodegenerativas, como AD y demencia lobar de frontotemporal¹². Dominios cognitivos, memoria a corto plazo como memoria episódica, son susceptibles a la neurodegeneración^13,14,15. Por lo tanto, la prueba del laberinto de agua Morris para el aprendizaje espacial y memoria¹⁶ y la prueba de reconocimiento de objeto novedoso para la memoria a corto plazo¹⁷ están incluidos en la batería. Estas pruebas son compatibles entre sí. El orden de las pruebas fue diseñado para maximizar la habituación y a minimizar la interferencia, para aumentar la compatibilidad de la batería. Puesto que cada función es probado por los menos dos pruebas independientes que son diferentes en principio y de método, pueden validarse aún más los resultados de cada prueba. Por otra parte, se destacan los protocolos de pruebas para prueba repetida, facilita el estudio longitudinal del desarrollo de enfermedades neurodegenerativas. Por lo tanto, esta batería de pruebas de comportamiento estudia diferentes subdominios de cambios en el comportamiento vistos en las distintas etapas de la neurodegeneración y costando un número mínimo de animales. Esta batería ha sido utilizada en un estudio longitudinal que evaluó los cambios del comportamiento en adultos (3 meses de edad) machos C57BL/6N ratones jóvenes después de la exposición respiratoria a nanopartículas de sílice, un peligro ocupacional que es un factor de riesgo potencial de neurodegeneración¹⁸. Sin embargo, otras cepas o modelos, como de ratones y manipulados genéticamente ratones, pueden comportarse de forma diferente que los jóvenes ratones C57BL/6N. Por lo tanto, cuidado puede ser necesario usar esta batería en estos ratones.

Protocolo

Todos los métodos aquí descritos han sido aprobados por la Comisión sobre la utilización de animales viven en la enseñanza y la investigación (CULATR), la Universidad de Hong Kong.

1. general protocolo

Nota: Esta sección se basa en diácono¹⁹.

1. Configuración del comportamiento de la sala
   1. Deshacerse de estimulación/distracción sin relación, incluyendo la luz directa sobre el aparato experimental, olor, ruido y otros animales irrelevantes, en la sala de comportamiento (que debe ser unos 10 m² con ajustable iluminación y, preferiblemente, tener un antesala).
      Nota: Puesto que el ratón es un animal nocturno, iluminación bajo 15 lux en la prueba de campo abierto, novela objeto reconocimiento test y test de interacción social podrían reducir al mínimo el interferencia de la luz, estrés y ayuda el ratón para centrarse en la prueba.
   2. Ajustar la cámara para al menos 1,5 m sobre el piso, asegurándose que esté fuera de la vista del ratón prueba de grabación de video.
2. Vivienda y habituación
   1. Casa del grupo los ratones en una unidad de animales bajo observación (por ejemplo, alojamiento en grupo no más de cuatro ratones adultos).
      Nota: Aquí, se utilizaron ratones C57BL/6N machos 3 meses de edad y alojados en una jaula 1144B. Descartar los ratones enfermos, heridos o grandes esfuerzos. Experiencias de hambre, sed o maltratando pueden afectar el funcionamiento del ratón.
   2. Organizar para que el controlador del mismo animal para llevar a cabo todas las pruebas de comportamiento, para disminuir la variabilidad. Efectuar el transporte, manipulación y experimento durante el ciclo de luz de 7:00 a 19:00 Si es posible, coloque todos lo otros manejo, tales como la administración de cualquier droga, toxina (por ejemplo, la instilación intranasal de nanopartículas de sílice) o limpieza de la jaula, después de la prueba.
   3. Cambiarle las jaulas con números aleatorios a ciegas al experimentador antes de cada experimento. Habituar los ratones para el medio ambiente experimental en la sala de comportamiento durante 15 a 30 minutos en sus jaulas hogar. Mantener las jaulas de la casa en la sala de comportamiento durante todo el experimento.
   4. Antes de comenzar el experimento, puso un ratón C57BL/6N no experimental en el aparato para que la condición experimental para el primer ratón es el mismo que el resto. Luego, limpie el aparato como sigue: eliminar la orina y las heces con una toalla de papel limpia, limpiar el dispositivo experimental con agua del grifo y luego, el olor dejado por el ratón de limpiar el aparato con una toalla de papel ligeramente rociada con etanol al 70%.
   5. Para minimizar la distracción causada por el experimentador, pedir el experimentador para salir de la sala de comportamiento durante la grabación de vídeo, o permanecer detrás de la cortina durante el test de laberinto de agua de Morris.
3. Arreglo de prueba de comportamiento
   1. Organizar la prueba de comportamiento en el orden como se muestra en la figura 1A. Plan para realizar las pruebas espaciadas por 24 horas, excepto el elevado más prueba del laberinto.
      Nota: Puesto que el proceso requiere hasta 2 semanas, simplificar la batería eligiendo entre pruebas similares antes de la aplicación en un estudio agudo o a corto plazo.
      PRECAUCIÓN: La prueba de campo abierto 2 días asegura correcta habituación para la prueba de reconocimiento de objeto nuevo. Prueba el test de natación forzada dura ya que puede causar estrés en ratones C57BL/6N.

2. BehavioralTest protocolo

1. Prueba de campo abierto^8,18,19,20
   1. Realizar la prueba de campo abierto en una (longitud [L]) de 60 cm x 60 cm (anchura [W]) x 40 cm (altura [H]) no transparentes blanco plástico de la arena.
      Nota: Utilizando múltiples arenas puede aumentar el rendimiento de la prueba.
   2. Iniciar la grabación de la cámara y poner suavemente el ratón cerca de la mitad de una pared de la arena, frente a esa misma pared. Registrar el comportamiento del ratón durante 10 minutos antes de regresar a la jaula del hogar. Limpie el aparato tal como se describe en el paso 1.2.4.
      Nota: El punto de partida en la prueba de campo abierto también puede ser el centro de la arena. Ser coherente entre los ratones.
   3. Repita hasta que todos los ratones fin del protocolo. Contrarrestar la prueba orden entre grupos.
   4. Realizar el análisis de datos como sigue.
      1. La arena se dividen en cuatro cuadrados por cuatro cuadrados (cuadrícula imaginaria) en la pantalla del ordenador. Para evaluar la función del aparato locomotor, contar el número de líneas por el ratón en la arena¹⁹.
         Nota: La definición de "cruzar una línea" es cuando se cruzan dos extremidades traseras. Esta definición también se aplica a la elevado más la prueba del laberinto.
      2. Medir el tiempo pasado en la zona central como un indicador de ansiedad. El área central es las cuatro plazas en el centro de la arena.
         Nota: Parámetros adicionales, como la crianza (ambas patas delanteras del suelo, con las patas delanteras contra una pared o de pie), la latencia a la primera parte posterior y la preparación y congelación indican la emocionalidad del ratón.
      3. Como alternativa, utiliza un software de seguimiento, como se describe en detalle por Seibenhener Wooten⁸para medir la distancia recorrida, la velocidad y el tiempo empleado en la zona centro.
2. Aceleración rotarod prueba¹⁸
   1. Llevar a cabo el día 3 entrenamiento de la aceleración rotarod prueba antes de cualquier tratamiento de drogas o toxina, modelado, Inicio de la enfermedad y la función de motor de prueba para 1 día, según lo previsto en la figura 1A.
      Nota: El ratón recibe tres ensayos por día durante el entrenamiento y pruebas. Cada ensayo se inicia con la rotación de la barra y termina con la caída del ratón.
   2. Coloque el aparato de rotarod en el Banco en la sala de comportamiento. Evitar la iluminación directa al equipo. Programar el equipo a partir de 4 rpm y acelerar a 40 rpm en 5 minutos.
   3. En cada ensayo, ponga el ratón sobre la barra estática, mirando hacia la pared de la máquina. Iniciar el dispositivo cuando el ratón está colocado. Detener el dispositivo una vez que el ratón caiga y registre el tiempo el ratón en la barra. Inmediatamente repetir para otro dos ensayos antes de regresar el ratón a la jaula del hogar.
   4. Repita el procedimiento en los otros ratones.
   5. Medir el tiempo promedio en la barra de tres ensayos durante la prueba para estimar la función motora.
      Nota: El tiempo promedio en la barra durante el tercer día de entrenamiento es la base de la función motora.
3. Test de interacción social¹⁸
   1. Para la prueba de interacción social, utilizar un espacio de campo abierto con dos compartimientos transparentes idénticos (8 cm [L] x 6 cm [W] x 12 cm [H]) con los agujeros en la superficie y un nuevo ratón (Ayudante) que es un coespecíficos juvenil del mismo sexo que no ha tenido ningún contacto anterior con el ratón de tema. Figura 1B muestra el esquema del procedimiento. Limpiar la arena y los compartimientos como se describe en el paso 1.2.4.
      Nota: El nuevo ratón no puede ser un compañero littermate o la jaula del ratón tema. Está ubicado en grupo y saludable. Habituar el ratón de nuevo a la sala de comportamiento durante 15 a 30 minutos como se describe en el paso 1.2.3.
   2. Colocar por separado las dos cámaras en medio de dos paredes opuestas de la arena. Introducir el ratón del tema en la arena como se describe en el paso 2.1.2 como se muestra en la figura 1B, para una exploración de 3 minutos. Volver el ratón sujeto a la estructura de inicio y eliminar orina o heces en la arena.
   3. Poner la ayuda en una de las cámaras. Reintroducir el ratón de tema a la arena y grabar durante 3 minutos después, vuelta ambos ratones a cada una de sus propias jaulas hogar. Repita el procedimiento con los otros ratones de tema como se describió anteriormente.
      Nota: El lado de la ayudante de contrapeso o asignarlo aleatoriamente dentro del grupo.
   4. En el video, estimar el parámetro que describe la actividad de interacción social de los ratones como t_helper/t_vacía, que significa la proporción de tiempo interactuando con la cámara auxiliar (t_helper) y el vacío uno (t_vacía), o utilizar el reconocimiento índice t_helper/ (t_helper + t_vacío).
      Nota: Una interacción entre el ratón del sujeto y la cámara se define como cuando la nariz del ratón está dentro de 2 cm de la cámara y apuntando hacia él.
4. Elevado más prueba de laberinto ¹⁰
   1. Realizar el elevado además de laberinto prueba el mismo día después de que todos los ratones son probados en la prueba de campo abierto. Limpie el aparato tal como se describe en el paso 1.2.4.
      Nota: La configuración de la elevación además de laberinto es un "+"-forma. Tiene dos brazos abiertos (30 cm x 5 cm x 0.5 cm) frente a la unos a otros y es perpendicular a dos brazos cerrados (30 x 5 x 16 cm) con una plataforma de centro (5 cm x 5 cm x 0.5 cm). El laberinto es elevado a 40 cm del suelo.
   2. Coloque el ratón en la intersección de los brazos abiertos y cerrados, hacia el brazo abierto que está enfrente del experimentador (figura 1). Registrar el comportamiento durante 5 minutos antes de regresar el ratón a la jaula del hogar. Repita hasta que todos los ratones son probados.
      Nota: Entrar en el laberinto con su cara en el brazo abierto podría aumentar la exploración del ratón del brazo abierto.
   3. Medir el tiempo el ratón en los brazos abiertos (t_abierto) y en los brazos cerrados (t_cierre) basados en el video: t_abra/t de_cierre indica el nivel de ansiedad.
5. Prueba de nado forzado¹¹
   1. El aparato de la prueba de nado forzado es un tanque cilíndrico de 30 cm de altura y 20 cm de diámetro. Llene el tanque hasta 15 cm de alto con agua del grifo a temperatura ambiente (23-25 ° C).
      Nota: Utilice agua fresca para cada ratón.
   2. Iniciar la grabación de vídeo y suavemente ponga el ratón en el agua, en el centro del aparato. Registro el video de 6 min antes de colocar el ratón en su jaula casera bajo luz infrarroja.
      Nota: No toque el ratón lo sumergimos o torciendo su cola.
   3. Medir el tiempo de inmovilidad en lo últimos 5 min del video grabado. Movilidad significa cualquier movimiento distintos de los necesarios para equilibrar el cuerpo y mantener la cabeza sobre el agua.
6. Reconocimiento de objeto novedoso test^17,18
   1. Establecer la prueba de reconocimiento de objetos nuevos con 2 días de habituación, 1 día de familiarización y 1 día de la prueba (figura 1); cada sesión es de 10 min por ratón, y el intervalo de intercesión es 24 h.
      Nota: La habituación con la prueba de campo abierto se realiza como se describe en la sección 2.1. El ratón interactúa con dos objetos idénticos (objetos viejos) de familiarización. En la prueba, el ratón interactúa con uno de los objetos antiguos y un nuevo objeto, ambos colocan en el mismo lugar que los objetos de familiarización. El aparato de la prueba de reconocimiento de objeto novedoso incluye un espacio de campo abierto y dos conjuntos de objetos. Cada conjunto contiene dos objetos idénticos (objetos A y A y B y B). Objetos A y B son similares en tamaño pero diferente en textura (papel de plástico de vidrio), forma (redonda/litro) y color (brillantes/oscuros). Los objetos deben ser lo suficientemente grande como para que el ratón explorar dentro de 10 min y sin olor. El tamaño adecuado para adultos ratones C57BL/6N es 8 cm de altura y 5 cm ancho/in de diámetro.
   2. Marque las posiciones de los dos objetos en la familiarización y la prueba, que son 5 cm de lado y 7 cm de la parte superior de la arena.
      Nota: Marque la posición en la noche antes de la familiarización para evitar el olor de la pistola.
   3. En la familiarización, el ratón interactúa con un conjunto de objetos idénticos. Limpiar la arena y los objetos como se describe en el paso 1.2.4 antes de colocar el ratón en la arena, hacia el centro de la pared como se muestra en la figura 1. Récord de 10 minutos antes de regresar el ratón a la jaula del hogar. Repita hasta que todos los ratones son terminados y volver todas las jaulas a la unidad animal.
      Nota: Contrarrestar los objetos utilizados en la familiarización del grupo para disminuir el sesgo (por ejemplo, ratones Nº 1 y 2 explorar objetos A y A y ratones Nº 3 y 4 explorar objetos B & B; de esta manera, el nuevo objeto es objeto B para ratones no. 1 y 2 y objeto A para los ratones. 3 y 4).
   4. Realice la prueba de 24 h después de la familiarización. Utilice el mismo procedimiento en cuanto a la familiarización, excepto reemplazar uno de los objetos con uno de otro conjunto (figura 1). Repita hasta que todos los ratones han realizado la prueba y, después, volver a las jaulas a la unidad animal.
      Nota: Contrapeso del lado del nuevo objeto en el grupo para disminuir el sesgo (por ejemplo, introducir ratones Nº 1 y 3 objetos A y B y ratones no. 2 y 4 a B y A los objetos). De esta manera, el objeto de la novela muestra a la derecha para ratones no. 1 y 4 y en el lado izquierdo para ratones no. 2 y 3. Aquí, el lado izquierdo es el lado izquierdo del experimentador frente a la arena.
   5. Medir el tiempo que cada ratón interactúa con los nuevos objetos (t_nuevo) y viejo (t_viejo) por separado, de las imágenes en la fase de prueba. Una interacción entre el animal y el objeto se describe en la nota siguiente paso 2.3.4. Calcular la memoria del ratón como la preferencia por la novela objeto = t_nuevo/t_viejo; o t_nuevo/ (_nuevo t + t_viejo).
      Nota: t_nuevo/t_viejo es igual a 1 o t_nuevo/ (_nuevo t + t_viejo) es igual a 0.5 significa que el ratón no tiene ninguna preferencia para el objeto nuevo (es decir, deterioro de la memoria). El tiempo de interactuar con objetos en la familiarización puede servir como control del experimento. El tiempo total que indica la actividad de exploración del ratón, y sugiere t_izquierda/t_derecha diagonal espacial.
7. ¹⁶ de la prueba del laberinto acuático de Morris
   1. Configurar el aparato como se indica a continuación.
      1. Poner el laberinto de agua, un estanque circular (de 120 cm de diámetro y 60 cm de profundidad), en el centro de una sala de comportamiento y marque la posición del laberinto para asegurar que la posición sigue siendo la misma durante todo el experimento.
      2. El laberinto se dividen en cuatro cuadrantes imaginarios iguales. Cuelgue las claves visuales (p. ej., círculo, cuadrado, triángulo y Pentágono) en el centro de cada cuadrante, 130 cm sobre el piso y la pared del laberinto 53 cm.
         Nota: El laberinto y la señal deben permanecer en la misma posición durante la prueba entera, así el ratón puede formar memoria espacial precisa.
      3. Colocar una plataforma de 25 cm de la pared, en el centro del cuarto cuadrante y marque la posición. La plataforma para el ratón es de 10 cm de diámetro.
         Nota: La posición y el diámetro de la plataforma de determinan la dificultad de la tarea. El más cercano es a la pared del laberinto, o cuanto mayor sea la plataforma, más fácil la tarea.
      4. El laberinto de agua se llenan de agua (con una temperatura de 23 a 25 ° C, de color en blanco y opaco por leche en polvo, alimento, polvo de blanquear) hasta el nivel del agua es superior a la plataforma 1 cm. Traer los ratones en la habitación comportamiento durante 15 a 30 min de la habituación como se muestra en el paso 1.2.3 y encienda la luz infrarroja por encima de las jaulas, que se utilizará para secar los ratones.
         Nota: Cubra la parte superior de la plataforma con tela blanca y la red para que el ratón puede subir fácilmente a él. Asegúrese de que no hay ninguna iluminación directa sobre el agua.
   2. Llevar a cabo la fase de entrenamiento como sigue.
      1. La fase de entrenamiento tarda 5 días, cuatro ensayos por día. Semi-aleatoriamente organizar los puntos de partida cada día según lo demostrado en la literatura¹⁶. Este esfuerzo evita que el ratón establecer la memoria asociativa, que es la forma más común de "hacer trampa" en la prueba.
      2. Al principio de cada ensayo, iniciar la grabación de vídeo y suavemente ponga el ratón en el laberinto.
         Nota: No soltar el ratón en el tanque o tuerza la cola, que puede causar desorientación y tensión extra.
      3. Pedir el experimentador a permanecer fuera de la vista del ratón y volver a llevar el ratón a su jaula casera cuando cualquiera de los siguientes ocurre: () el mouse no puedo localizar la plataforma dentro de 60 s; (ii) el ratón encuentra la plataforma dentro de 60 s y se mantiene en ella por 10 s. En circunstancia (i), pedir el experimentador al colocar el ratón en la plataforma y deje que se quedan para 10 s.
         Nota: Punto (ii) significa que el ratón correctamente situada la plataforma.
      4. Parar el vídeo y volver a poner el ratón en la jaula casera bajo luz infrarroja.
         Nota: Mantener la temperatura corporal de los ratones es fundamental para su desempeño porque hipotermia hace hincapié en ratones y puede afectar las siguientes pruebas.
      5. Repita el procedimiento con otro ratón.
      6. Registro la latencia de escape, que es la duración del período que pasa el ratón en el laberinto, de entrar en el laberinto hasta el momento con éxito basado en el video, localiza la plataforma. Si el ratón no puede encontrar la plataforma o se queda allí por menos de 10 s de 60 s, la latencia de escape cuenta como 60 s. diagrama la curva de aprendizaje contra los días de entrenamiento con la latencia de escape promedio por día.
         Nota: La latencia de escape no incluye los 10 s pasar en la plataforma.
   3. Realizar la fase de prueba como sigue.
      1. En el sexto día de la prueba del laberinto de agua de Morris, configurar el aparato como se describe en paso 2.7.1., tomar una foto del laberinto para registrar la posición de la plataforma y luego retire la plataforma del tanque.
      2. Iniciar el grabación de vídeo y suavemente ponga el ratón en el laberinto en el cuadrante diagonalmente opuesto al cuadrante blanco.
      3. Pedir el experimentador a permanecer fuera de la vista del ratón durante la grabación de vídeo de 1 minuto. Después, tienen el experimentador tome el ratón por el laberinto y poner de nuevo en la jaula del hogar.
      4. Usar la imagen tomada en el paso 2.7.3.1. como referencia para medir la duración de la travesía de cualquier plataforma. Tiempo de duración que el ratón se queda en el cuadrante de destino (_destinode t), según el video. El tiempo total es t_total. Medir la preferencia por el cuadrante blanco como /t de_destino de t_total.

Resultados

Esta batería de pruebas conductuales fue diseñada para el análisis del comportamiento integral y válido de motor, el estado de ánimo y la cognición, que comúnmente son afectadas en la neurodegeneración⁵. Hemos aplicado esta batería para estudiar los cambios conductuales en ratones C57BL/6N adultos jóvenes después de la exposición respiratoria a nanopartículas de sílice para 1 mes y 2 meses¹⁸. Los resultados revelaron que ratone...

Discusión

Análisis del comportamiento de los ratones son fundamental para la investigación de la neurodegeneración. Mientras que la función cognitiva es a menudo más susceptibles de dominio del comportamiento afectado en enfermedades neurodegenerativas, disfunción del estado de ánimo, como depresión y ansiedad, es a menudo comorbid. Por otra parte, la función motora afecta a menudo la interpretación de los resultados en algunas pruebas, como la prueba de reconocimiento de objetos nuevos, la elevada plus prueba de laberin...

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
chambers in social interaction test	home made		(8 cm (L) x 6 cm (W) x 12 cm (H)), transparant with holes, plastic
cylindrical tanks used in forced swimming test	home made		30 cm height, 20 cm diameters, glass
elevated plus maze	home made		open arms (30 cm x 5 cm x 0.5 cm) ,closed arms (30 cm x 5 cm x 16 cm), center platform (5 cm x 5 cm x 0.5 cm), 40 cm tall. Plastic, nontransparant
IITC Roto-Rod Apparatus	IITC life science Inc.	755, series 8
open field arena	home made		60 cm (L) x 60 cm (W) x 40 cm (H), plastic, nontransparant
water maze	home made		120 cm in diameter, 60 cm deep, steel