El modelo de rata 6-hidroxidopamina de la enfermedad de Parkinson

Resumen

El modelo de 6-hidroxidopamina (6-OHDA) se ha utilizado durante décadas para avanzar en la comprensión de la enfermedad de Parkinson. En este protocolo, demostramos cómo realizar lesiones nigrostriatales unilaterales en la rata inyectando 6-OHDA en el haz medial del cerebro anterior, evaluar los déficits motores y predecir lesiones utilizando la prueba de paso.

Resumen

Los síntomas motores de la enfermedad de Parkinson (EP) -bradicinesia, acinesia y temblor en reposo- son consecuencias de la neurodegeneración de las neuronas dopaminérgicas en la sustancia negra pars compacta (SNc) y el déficit estriatal dopaminérgico. Los modelos animales se han utilizado ampliamente para simular la patología humana en el laboratorio. Los roedores son los modelos animales más utilizados para la EP debido a su facilidad de manejo y mantenimiento. Además, la anatomía y los mecanismos moleculares, celulares y farmacológicos de la EP son similares en roedores y humanos. La infusión de la neurotoxina, 6-hidroxidopamina (6-OHDA), en un haz medial del cerebro anterior (MFB) de ratas reproduce la destrucción severa de las neuronas dopaminérgicas y simula los síntomas de la EP. Este protocolo demuestra cómo realizar la microinyección unilateral de 6-OHDA en el MFB en un modelo de rata de EP y muestra los déficits motores inducidos por 6-OHDA y las lesiones dopaminérgicas predichas a través de la prueba de paso. El 6-OHDA causa un deterioro significativo en el número de pasos realizados con la extremidad anterior contralateral.

Introducción

Las principales características neuropatológicas de la EP son la neurodegeneración progresiva crónica de las neuronas dopaminérgicas en la sustancia negra pars compacta (SNc) y la presencia de cuerpos de Lewy que contienen proteína α-sinucleína1. A medida que las neuronas dopaminérgicas SNc proyectan sus axones en el cuerpo estriado a través de la vía nigrostriatal, la neurodegeneración de neuronas en SNc da como resultado un déficit dopaminérgico en el cuerpo estriado2. La ausencia de dopamina en el cuerpo estriado provoca un desequilibrio en las actividades de las vías de control motor directo e indirecto, responsable ....

Protocolo

Todos los procedimientos con animales siguieron los principios éticos del Consejo Nacional para el Control de la Experimentación Animal (CONCEA) y la Ley Arouca (Ley 11.794/2008) y fueron aprobados por el comité de ética local (CEUA-FFCLRP/USP (18.5.35.59.5).

1. Preparación de medicamentos

1. Anestesia con ketamina/xilazina
   NOTA: La dosis de ketamina utilizada es de 70 mg/kg, y la dosis de xilazina es de 10 mg/kg.
   1. Para preparar 1 ml de anestésico con ketamina 100 mg/ml de solución y xilazina 20 mg/ml de solución, combine 0,35 ml de solución de ketamina, 0,25 ml de solución de xilazina y 0,4 ml de solución ....

Resultados

Evaluación de la lesión dopaminérgica
La prueba escalonada permite la evaluación de la acinesia del miembro anterior contralateral a la lesión y la selección de animales con una posible lesión de la vía nigrostriatal inducida por infusión de 6-OHDA (Figura 1). La comparación de la realización de la prueba de paso de extremidad anterior contralateral antes de la cirugía y 2 semanas y 4 semanas después de la cirugía reveló interacción (_F2,74 = 93,.......

Discusión

En este trabajo se describe un protocolo para la realización de cirugía para la microinfusión unilateral de 6-OHDA en el MFB, capaz de causar lesiones robustas en las neuronas de la vía nigrostriatal y generar acinesia en el animal. También se describe el protocolo para realizar la prueba de paso, una prueba fácilmente aplicable y no invasiva que se puede utilizar para demostrar el éxito de las lesiones y evaluar la acinesia de las extremidades anteriores. Como se presenta en los resultados representativos, los an.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
6-OHDA	Sigma Aldrich	H4381	https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/h4381?lang=pt&region=BR&cm_sp=Insite-_-caSrpResults_srpRecs_srpModel _6-ohda-_-srpRecs3-1
70% Alcohol
Ascorbic acid	Sigma Aldrich	795437	https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/795437?lang=pt&region=BR&gclid= Cj0KCQjw4cOEBhDMARIsAA3XD RipyOnxOxkKAm3J1PxvIsvw09 _kfaS2jYcD9E5OyuHYr4n89kO 6yicaAot6EALw_wcB
Cotton
Drill or tap
Gauze
Hamilton syringe 50 uL	Hamilton	80539	https://www.hamiltoncompany.com/laboratory-products/syringes/80539
Imipramine	Alfa Aeser	J63723	https://www.alfa.com/pt/catalog/J63723/
Infusion pump	Insight	EFF-311	https://insightltda.com.br/produto/eff-311-bomba-de-infusao-2-seringas/
Ketamine (Dopalen)	Ceva		https://www.ceva.com.br/Produtos/Lista-de-Produtos/DOPALEN
Machine for trichotomy
Meloxicam (Maxicam 2%  Ourofino)	Ourofino		https://terrazoo.com.br/produto/maxicam-injetavel-2-50ml-ouro-fino/
Metal Disposal
Paper towels
Pentabiotic	Zoetis		https://www.zoetis.com.br/pentabiotico-veterinario.aspx
Plastic waste garbage can
Poly-antibiotic	Pentabiotic (Wealth)
Povidone-iodine
Scalpel and blades
Scissors
Scraper
Stereotaxic apparatus	Insight	EFF-331	https://insightltda.com.br/produto/eff-331-estereotaxico-1-torre/
Sterile saline solution
Swabs
Temperature probe
Timer
Tweezers
Xylazine (Anasedan)	Ceva		https://www.ceva.com.br/Produtos/Lista-de-Produtos/ANASEDAN