1. preparación de la muestra de suelo

1. En primer lugar, determinar el contenido de humedad inicial del suelo durante la noche secando de una cantidad conocida de suelo húmedo y pesajes el suelo seco. La ecuación para determinar el contenido de humedad inicial del suelo es:
   
   (Ecuación 1)
   donde:
   MC = contenido de humedad
   W = peso neto
   D = peso seco
2. Calcular la cantidad de agua que debe agregarse a 25 g de suelo para aumentar el contenido de humedad al 10% sobre una base de peso seco.
3. A continuación, añadir que la cantidad de agua a 25 g de suelo.
4. Cubra el envase con envoltura de plástico y perforar la película varias veces con una sonda para permitir la aireación durante la incubación. Fije la película con una banda elástica.
5. Pesar el suelo y envolver, luego incubar la muestra a temperatura ambiente durante una semana.

2. incubación e inoculación de hongos

1. Una vez finalizada la incubación, pesar la muestra de suelo con la goma y el plástico. Calcular la pérdida de peso debido a la pérdida de humedad.
2. Calcular el contenido de humedad de suelo nuevo.
3. A continuación, preparar una dilución al 1/10 serie de los suelos tal como se muestra en la figura 2. Esto resultará en diluciones de 10^-1 (frasco A), 10^-2 (tubo B), 10^-3 (tubo C), 10^-4 (tubo D) y 10^-5 (tubo E) g suelo por suspensiones de mL.
4. Preparación estéril Rose Bengal-estreptomicina placas de agar. El rosa Bengala y la estreptomicina inhiben el crecimiento bacteriano. Para terrenos muy fértiles donde las poblaciones de microbios del suelo son altas, las diluciones solicitadas deben ser mayores, es decir, 10^-3, 10^-4y 10^-5, g de suelo por placa.
5. A cada uno de los 10^-3 placas, Añadir 0,1 mL de dilución tubo 10^-2, y extensión sobre la superficie del agar utilizando una llama de etanol esterilizado separador de vidrio. Porque una cantidad de 0,1 mL es plateada, esto hace que la efectiva dilución 10^-3. Repita estos pasos para todas las diluciones.
6. Incubar las placas a temperatura ambiente durante una semana.

3. Colonia contando y el examen por microscopia

1. Realizar recuentos de colonias en la dilución una y sólo una de cada suelo. Las placas que se cuentan tengan colonias contables discretas. No deben contarse los platos demasiado grandes. Asimismo, no deben contar las placas con menos de 10 colonias. Observar y describir las características culturales de tres colonias diferentes.
2. Preparar montajes de cinta (tape transparente) de presión en las diapositivas para estudio detallado microscopio siguiendo el siguiente procedimiento:
   1. Depositar una gota de lactofenol montaje fluido en el centro de un portaobjetos de vidrio limpio
   2. Corte una tira de cinta de celofán transparente unos 3 cm de largo de la lista acciones. Para evitar contaminar la superficie adhesiva, usar pinzas al manipular la cinta. Una aguja de disección ayudará a liberar la cinta de los fórceps.
   3. El lado adhesivo de la cinta se aplica a la superficie de una colonia de hongo de esporulación. Tenga cuidado para evitar una presión excesiva sobre la cinta o una masa muy densa de hifas y las esporas serán recogidas.
   4. Retire la cinta de contacto con la colonia de hongos y aplicarlo, lado adhesivo hacia abajo, a la gota de líquido de montaje sobre el portaobjetos de cristal. Frote suavemente la cinta con un instrumento liso, plano para burbujas express.
   5. Examinar el cinta montaje microscópico con el objetivo de inmersión de aceite con aceite.
   6. Identificar dos géneros diferentes de hongos usando la clave de identificación de hongos suministrados (figura 4).

Figura 4. Clave de identificación de hongos.