Después de anestesiar al ratón, pellizque suavemente una de las patas del ratón para comprobar si el ratón está adecuadamente anestesiado. Administrar gotas de solución oftálmica de tropicamida al 1% para dilatar los ojos del ratón y esperar 30 segundos. Luego, para reducir el movimiento ocular y el parpadeo, aplique gotas de clorhidrato de proparacaína al 0,5% en ambos ojos, seguidas de gotas de gel lubricante para los ojos y coloque el mouse sobre una almohadilla de agua caliente.
Prepare una mezcla de colorante que contenga un volumen igual de verde de indocianina, o ICG, y colorante de fluoresceína. Inyecte 250 microlitros de la mezcla a través de una inyección intraperitoneal en el cuadrante inferior izquierdo cerca de las patas traseras del ratón, colocándolo paralelo a la piel para evitar la perforación del órgano. Retraiga con cuidado el émbolo, asegurándose de que no haya sangre en la tapa de la jeringa.
Proceda inyectando gradualmente el tinte a un ritmo constante. A continuación, coloque el mouse en la almohadilla térmica de la plataforma de imágenes. Ajuste la posición del cuerpo del ratón en un ángulo de 45 grados con respecto a la cámara e incline suavemente la cabeza ligeramente hacia abajo.
Limpie delicadamente el ojo que se va a fotografiar con un hisopo de algodón para eliminar la capa de gotas o geles lubricantes para los ojos. Pase la cámara hacia el ojo del ratón y seleccione el canal FA en el módulo de adquisición. Coloque la cabeza del ratón de modo que el nervio óptico quede centrado en la pantalla, evitando la necesidad de inclinar el oftalmoscopio de barrido láser.
Ahora, cambie al canal ICGA en el módulo de adquisición. Una vez que el ojo ocupe toda la pantalla en el software de imágenes, gire el botón negro redondo en el módulo de adquisición para ajustar la sensibilidad de la imagen. Utilice la perilla del oftalmoscopio para ajustar el enfoque.
A continuación, presione el botón negro redondo en el módulo de adquisición para normalizar la imagen. Después de la normalización, haga clic en el botón ADQUIRIR en el panel de la pantalla táctil para guardar la imagen. Cambie al canal FA utilizando el módulo de adquisición y ajuste tanto la sensibilidad como el enfoque de cada imagen como se muestra anteriormente para capturar la fuga de la neovascularización coroidea o la lesión de NVC.
A continuación, capture imágenes de la fase inicial de ICGA y FA tres o cuatro minutos después de la inyección. Una vez capturadas todas las imágenes necesarias, aplique un gel, lubricante o ungüento en el ojo del ratón. La NVC capilar domina las lesiones de NVC en ratones jóvenes.
Por el contrario, los ratones viejos exhiben NVC arteriolar, caracterizada por vasos de gran calibre, asas vasculares y conexiones anastomóticas. Tanto los ratones jóvenes como los viejos muestran una clara visibilidad de la vasculatura de la retina en FA.In las imágenes de ICGA de ratones jóvenes, la vasculatura de la retina no es visible y los vasos coroideos aparecen difuminados. En las imágenes del ICGA de ratones viejos, se puede observar una vasculatura parcial de la retina mientras que los vasos coroideos aparecen descoloridos.
La NVC arteriolar en ratones viejos exhibe un tamaño de CNV más grande y una fuga significativamente mayor en comparación con la NVC capilar en ratones jóvenes.
