Para comenzar, retire la matriz de la membrana basal descongelada del hielo. Agregue el volumen calculado de la matriz de la membrana basal a las células individuales derivadas de la biopsia gástrica y mezcle suavemente pipeteando hacia arriba y hacia abajo durante aproximadamente 10 segundos. Luego, con una pipeta, transfiera rápidamente 50 alícuotas de microlitros de la matriz y la mezcla celular al centro de los pocillos individuales en una placa de cultivo de tejidos de 24 pocillos.
Cubra el plato inmediatamente y, con un solo movimiento suave, voltee el plato boca abajo. Coloque la placa invertida en una incubadora de cultivo de tejidos a 37 grados Celsius durante 35 minutos para permitir que la matriz de la membrana basal se polimerice. A continuación, añada 500 microlitros de organoide gástrico precalentado a cada pocillo mientras se asegura de que la parte superior de cada cúpula esté completamente sumergida en el medio.
Los organoides son generalmente identificables dentro de los 10 días posteriores a la siembra de células individuales. Para el día 20, son grandes y, por lo general, necesitan ser pasados. El número de organoides corporales y antrales alcanza su punto máximo en el día 10 después de la siembra antes de disminuir, aunque no de manera significativa.
Los organoides generados a partir del tejido de la biopsia del manto mostraron una mayor tasa de crecimiento en comparación con los organoides generados a partir del tejido de la biopsia del cuerpo. En diferentes pacientes, se observó una diversidad de morfología organoide en cualquier cúpula individual. Sin embargo, en promedio, la espasticidad organoide mostró poca variación.
