Para comenzar, obtenga la fórmula previamente preparada y el portaobjetos de muestra de tejido de cáncer de pulmón fijado e incluido en parafina. Incubarlo a 65 grados centígrados durante cinco minutos. Realice la deshidratación sumergiendo el portaobjetos en xileno, seguido de soluciones de etanol de concentraciones decrecientes.
A continuación, sumerja los portaobjetos en agua esterilizada tres veces durante un minuto cada una. Para la recuperación de antígenos, coloque el portaobjetos en una caja de tinción y reparación. Llénelo con una solución de trabajo tampón de reparación de antígenos inmunohistoquímicos de pH seis o nueve.
Cubra la caja con una tapa y caliéntela en un horno microondas durante ocho minutos al 100% de potencia. A continuación, enfríe el portaobjetos a temperatura ambiente. Cubra el tejido con una solución de bloqueo y luego incube en una cámara humidificada a temperatura ambiente durante 10 minutos.
Después de retirar la solución de bloqueo, cubra el portaobjetos con la solución de trabajo de anticuerpos primarios y colóquelo en una cámara humidificada. Luego incubar esta cámara durante una hora a 37 grados centígrados. A continuación, lave el portaobjetos con una solución de trabajo tampón de lavado durante dos minutos.
Agregue peroxidasa de rábano picante polimérico directamente gota a gota en el portaobjetos e incube durante 15 minutos a temperatura ambiente. Después de lavar el portaobjetos, agregue la solución de trabajo de fluoróforos directamente gota a gota sobre el portaobjetos e incube durante 10 minutos a temperatura ambiente. Una vez que el portaobjetos esté lavado, dale un tratamiento de microondas como se demostró anteriormente.
Cuando el portaobjetos se enfríe a temperatura ambiente, lávelo tres veces con agua destilada doble durante un minuto cada una. A continuación, sumerja el portaobjetos en la solución de trabajo del tampón de lavado durante dos minutos y realice la incubación de anticuerpos, la peroxidasa de rábano picante y la adición de fluoróforos como se demuestra. Para la tinción nuclear celular, cubra el portaobjetos con una solución de trabajo DAPI e incube en una cámara humidificada durante cinco minutos a temperatura ambiente.
A continuación, lave los portaobjetos con agua bidestilada tres veces, de un minuto cada una. Retire las gotas de agua del portaobjetos. Agregue de 10 a 20 microlitros de extintor antifluorescente al portaobjetos y séllelo con una cubierta de vidrio de microscopio.
