Comience esterilizando la piel del ratón con etanol al 80% y transfiriendo el ratón a una campana de bioseguridad estéril. Para aislar los explantes del núcleo del tendón de la cola, use un bisturí para cortar la cola en su base. Luego, agarra la punta de la cola con unas pinzas y muévela para romper la piel.
Tire suavemente de las pinzas para exponer los explantes del núcleo del tendón. Coloque los explantes del núcleo del tendón en un medio de cultivo estándar y sepárelos de la cola con una hoja de bisturí fresca. A continuación, para aislar los fibroblastos tendinosos, haz una incisión transversal en el centro del pie del ratón con un bisturí.
Desde cada extremo de esta incisión, haga un corte perpendicular a lo largo de los lados de las patas traseras hasta las caderas. Luego, use pinzas para fijar el colgajo de piel en el pie y retire la piel que cubre los músculos de la pantorrilla. Separe el tendón de Aquiles del hueso calcáneo con una hoja de bisturí nueva.
Fija el extremo suelto con unas pinzas y separa el otro extremo del músculo gastrocnemio. Transfiera el tendón a PBS y elimine el tejido muscular restante. Luego, transfiera el tendón al medio de digestión.
A continuación, utiliza unas tijeras para cortar la articulación de la cadera y separar las patas traseras del cuerpo. Lave las patas traseras en PBS frío. Retire los músculos con el bisturí y colóquelos en una placa de Petri con hielo.
Mientras la placa de Petri está en hielo, pica el tejido muscular en trozos más pequeños que un cubo de milímetro. Transfiera el tejido muscular picado a los medios de digestión. Después de eliminar los tejidos musculares sobrantes, lave los huesos sobrantes en PBS frío.
Coloque los huesos en PBS fresco y frío y retire gradualmente las epífisis para exponer la médula ósea. Equipe una jeringa con una aguja de inyección de 0,4 por 25 milímetros y llénela con 10 mililitros de medio de cultivo de macrófagos. Sostenga cada hueso sobre un tubo de plástico de 50 mililitros e inserte la aguja a aproximadamente un milímetro de profundidad en la médula ósea desde la parte superior.
Enjuague la médula ósea vaciando la jeringa.
