Para comenzar, lave los condensados de estrella C con plantillas de ARN permitiendo que la solución de condensados extraídos se asiente durante al menos cinco minutos. Luego, mientras pipetea desde la parte superior del nivel del líquido para minimizar la eliminación de condensado, extraiga aproximadamente la mitad del volumen del sobrenadante. Añadir el mismo volumen de cloruro sódico 0,3 molar en tris-EDTA para sustituir el sobrenadante eliminado y mezclar mediante pipeteo.
Repita el ciclo de eliminación del sobrenadante y reemplazo del tampón durante un total de tres ciclos. Para la mezcla de transcripción T7, prepare una solución madre de 10 milimolares de DFHBI en dimetilsulfóxido. A continuación, diluir una alícuota hasta una concentración final de 600 micromolares utilizando agua libre de ARNasa y ADNasa.
Descongele los componentes del kit de transcripción con hielo. A continuación, con puntas de pipeta estériles, pipetee los componentes mostrados en un tubo de microcentrífuga esterilizado en autoclave a temperatura ambiente. Mezcle suavemente la solución pipeteando y utilícela inmediatamente para la síntesis de la transcripción de ARN.
Para ello, pipetee 3,3 microlitros de los condensados lavados preparados a partir de estrellas C con plantillas de ARN en una cámara adecuada para la obtención de imágenes de microscopía. Y agregue el volumen total de la mezcla de transcripción recién preparada. Adquiera imágenes de microscopía durante una duración de 18 horas, comenzando inmediatamente después de agregar la mezcla de transcripción a los condensados.
Para la transcripción de aptámeros de ARN, el resultado exitoso fue confirmado por el aumento de la fluorescencia del florigen a lo largo del tiempo a través de la microscopía.
