Para comenzar, etiquete dos tubos de 14 mililitros como A y B, un tubo de centrífuga de 15 mililitros como C y un tubo de centrífuga de 15 mililitros como desecho. Después de centrifugar toda la sangre, recoja y agregue un mililitro de la capa leucitaria preparada al tubo A. Agregue 60 microlitros de EDTA 0.1 molar al tubo A. Luego agite el tubo de perlas magnéticas durante 30 segundos. Para encender el instrumento PBMC automatizado, encienda la alimentación en la parte frontal del instrumento.
En la pantalla de inicio del instrumento, seleccione perfil y elija el protocolo deseado. A continuación, introduzca el volumen inicial y repita el procedimiento para cada muestra. Seleccione todos los cuadrantes que utilizarán el mismo kit de reactivos.
A continuación, cargue los consumibles etiquetados, las puntas de filtro y el contenedor de búfer en cada cuadrante del carrusel del instrumento como se indica en la pantalla del instrumento PBMC automatizado. Una vez completada la carga, retire las tapas de los consumibles y reactivos y seleccione ejecutar en la pantalla del instrumento. Una vez finalizada la ejecución, seleccione descargar y eliminar muestras del carrusel del instrumento.
Transfiera 500 microlitros de las células a un recipiente de muestra para obtener un recuento de células sin dilución. Al comparar el método automatizado basado en perlas con el método manual, no se identificaron diferencias significativas en la viabilidad celular ni en el recuento total de células. El método manual procesó ocho muestras en 43 minutos, mientras que el método automatizado tardó 57 minutos, incluidos 35 minutos de procesamiento sin intervención.
La viabilidad celular media fue superior al 90% para las PBMC procesadas en cinco días y superior al 75% para las procesadas en 10 días. Los rendimientos medios de PBMC disminuyeron en un 50% después de cinco días en comparación con las muestras procesadas dentro de las 24 horas.
