Tinción de aceite rojo O para visualizar la acumulación de gotas de lípidos intracelulares en células HepG2

Para comenzar el cultivo de cáñamo G2 cultivado durante la noche en DMEM en una placa de seis pocillos. Cultive las células a 37 grados centígrados durante 24 horas. Después de la incubación, agregue dos mililitros de medio de cultivo celular que contenga ácido oleico a cada pocillo.

Incubar las células durante 24 horas a 37 grados centígrados. Al día siguiente, retire el medio de cultivo y lave las células dos veces con PBS. Agregue un mililitro de aceite fijador rojo O a cada pocillo e incube durante 30 minutos.

Deseche el fijador y lave las células dos veces con agua destilada. Agregue un mililitro de isopropanol al 60% a cada pocillo e incube durante 30 segundos. Después de desechar el isopropanol, agregue un mililitro de solución de tinción roja O de aceite recién preparada e incube durante 20 minutos.

Ahora, agregue un mililitro de isopropanol al 60% e incube durante 30 segundos. Lava las celdas cinco veces con agua para eliminar el exceso de tinte. Después de las imágenes microscópicas, observe las células cubiertas con agua destilada en una computadora.

Después de la toma de imágenes, retire el agua de la placa y deje que se seque. Agregue dos mililitros de isopropanol a cada pocillo y agite el plato en un agitador orbital durante 10 minutos. Transfiera 100 microlitros de suspensión celular a una placa de 96 pocillos con 16 pocillos en cada grupo.

En un lector de microplacas a 510 nanómetros, mida la densidad óptica para calcular el contenido de lípidos. En comparación con las células de control, las células Hep G2 tratadas con ácido oleico mostraron una mayor intensidad de tinción roja, lo que indica una mayor formación de gotas de lípidos. Las gotas de lípidos y lípidos en las células de Hep G2 aumentaron con el aumento de las concentraciones de ácido oleico.