Para comenzar, equilibre el kit de triglicéridos totales a temperatura ambiente durante 20 minutos. Recoja el sobrenadante de las células de Hep G2 cultivadas durante la noche y centrifugue a 1.570 G durante 10 minutos. Establezca el estándar y pruebe los pozos de muestra.
Agregue 50 microlitros de ácido oleico a los pocillos etiquetados estándar. Además de los pocillos en blanco y estándar, agregue 10 microlitros de cultivo celular a los pocillos de muestra. A continuación, añada 40 microlitros de diluyente de muestra a cada pocillo.
Ahora agregue 100 microlitros de anticuerpo de detección, rábano picante peroxidasa a cada pocillo. Sellar con una membrana de placa e incubar a 37 grados centígrados en un horno de temperatura constante. Después de una hora, deseche el sobrenadante y séquelo en papel sin polvo.
Agregue solución de lavado a cada pocillo e incube a temperatura ambiente durante un minuto. Ahora, agregue 50 microlitros de sustrato A y 50 microlitros de sustrato B a cada pocillo. Mezclar suavemente e incubar durante 15 minutos a 37 grados centígrados.
Agregue 50 microlitros de solución de terminación y, en 15 minutos, mida la densidad óptica a 450 nanómetros. Trace la concentración del patrón a lo largo del eje x y el valor de absorbancia correspondiente a lo largo del eje Y. Realice una regresión lineal y derive la ecuación de la curva para calcular el valor de concentración de cada muestra.
En comparación con el grupo de control, el tratamiento de las células Hep G2 con concentraciones variables de ácido oleico resultó en un aumento significativo en el contenido total de triglicéridos del sobrenadante celular.
