Para comenzar, prepare bloques de cera de ratones sacrificados inyectados con píldoras Xiaoyao. Corta los bloques de cera en secciones continuas de seis micrómetros de grosor y hornea las rodajas a 70 a 72 grados centígrados durante 30 a 60 minutos. Transfiera las rodajas a la solución desparafinadora durante ocho minutos, luego deshidrate dos veces en etanol anhidro al 75% durante cinco minutos cada una antes de enjuagar en PBS durante cinco minutos.
Ahora realice la reparación de alta presión con EDTA durante 15 minutos. Después de enjuagar con PBS, agregue gota a gota un 3% de peróxido de hidrógeno al tejido e incube durante 10 minutos. Lave el pañuelo tres veces con PBS durante cinco minutos cada una.
Con una pluma de inmunohistoquímica, dibuje un círculo alrededor del tejido. Después de lavar el tejido con PBS, tiñir durante la noche en una solución de anticuerpos primarios. Al día siguiente, enjuague el pañuelo tres veces durante cinco minutos cada una en PBS.
Agregue gota a gota el anticuerpo secundario e incube durante 60 minutos. Después de enjuagar con PBS, incubar el tejido en una solución lista para usar DAB durante tres a cinco minutos. Ahora tiñe el tejido con hematoxilina durante tres minutos.
Nuevamente, enjuague el tejido con PBS antes de colocarlo en una solución de diferenciación durante 10 segundos. Después de enjuagar PBS, agregue la solución de retorno durante 10 segundos. Finalmente, realice un tratamiento con etanol anhidro al 75% durante cinco minutos y selle el portaobjetos con resina neutra.
La tinción con hematoxilina-eosina mostró trabéculas muy dispuestas en ratones simulados, mientras que los ratones OVX mostraron cambios osteoporóticos típicos con trabéculas escasas y cavidades medulares agrandadas. La comparación de la micro TC mostró una malla trabecular incompleta y un adelgazamiento de la corteza ósea en ratones OVX en comparación con ratones simulados. Después de la intervención farmacológica, la tinción con hematoxilina-eosina mostró una estructura de trabéculas restaurada y una cavidad medular reducida en comparación con el grupo OVX.
Los índices de imagen mostraron menos trabéculas fracturadas y una reticulación restaurada en el grupo de píldoras Xiaoyao de dosis altas en comparación con el grupo OVX. Los resultados de la inmunohistoquímica mostraron un aumento de la fosfatasa alcalina y el colágeno tipo uno y una disminución de la interleucina 17, ACT1 e interleucina 6 en el grupo de fármacos.
