O Programa de Pesquisa Científica e Desenvolvimento Tecnológico da Cidade de Baise (20224128) apoiou este trabalho. Os autores agradecem ao Dr. Dev Sooranna, do Imperial College London e YMUN, pela edição do manuscrito. YYX e ZYW contribuíram igualmente para este estudo.

Efeitos terapêuticos das pílulas Xiaoyao na osteoporose pós-menopausa em camundongos

Os autores declaram não haver conflito de interesses.

Segundo as estatísticas, a osteoporose causa 1,5 milhão de fraturas a cada ano nos Estados Unidos, e a grande maioria delas ocorre em mulheres na pós-menopausa27. Com o aumento do envelhecimento da população, prevê-se que a maioria das futuras fraturas de quadril do mundo ocorrerá na Ásia e que, até 2050, o número total delas em todo o mundo chegará a 8,2 milhões28. O custo de prevenir fraturas é quase igual ao de tratá-las, e o uso de medicamentos inevitavelm...

A Organização Mundial da Saúde (OMS) define a osteoporose (PO) como uma doença caracterizada pela diminuição da massa óssea e deterioração da microarquitetura do tecido ósseo, levando a um aumento da fragilidade óssea e, portanto, a um aumento do risco de fratura1. O significado clínico da osteoporose é que ela pode levar a fraturas, que estão associadas a alta mortalidade, morbidade e custos econômicos2. A osteoporose pós-menopausa (PMOP) é causada por uma diminuição nos níveis de estrogênio em mulheres após a menopausa, o que leva a um aumento na atividade dos osteoclastos, resultando em perda óssea e destruição da microestrutura óssea. Isso geralmente causa osteoporose com sério impacto na saúde3. As terapias atuais para PMOP incluem terapia de reposição de estrogênio, bifosfonatos e paratormônio, mas podem ter graus variados de efeitos adversos, adesão insuficiente a longo prazo e altos custos4. Portanto, a fitoterapia acessível é uma alternativa viável para uma grande proporção da população.
As pílulas Xiaoyao estão incluídas na FarmacopeiaChinesa 5 e contêm oito componentes à base de plantas, incluindo Chai Hu, Angelica sinensis, Paeonia lactiflora branca, Atractylodes macrocephala, Poria cocos, Menthae Herba, alcaçuz e gengibre fresco. Todas essas ervas são conhecidas por serem eficazes na desintoxicação do fígado e no fortalecimento do baço, na nutrição do sangue e na regulação do ciclo menstrual, e a mistura também tem sido usada para tratara depressão. No entanto, o papel das pílulas Xiaoyao na osteoporose não é claro.
Estudos iniciais sugeriram que a inflamação pode levar à perda óssea7 e que o declínio da densidade óssea associado a esse processo pode ser acelerado pela menopausa. Além disso, existe uma forte relação entre o desenvolvimento de osteoporose e inflamação. O fator inflamatório, interleucina-17 (IL-17), é um fator pró-inflamatório secretado pelas células Th17, um subconjunto de linfócitos T CD4+. Essas células estão associadas a várias condições inflamatórias crônicas e desempenham um papel importante no desenvolvimento da destruição óssea na artrite reumatoide8. Além disso, a IL-17 estimula o ativador do receptor ligante do fator nuclear κ B (RANKL), que regula a osteoclastogênese, levando a uma maior reabsorção óssea do que a formação óssea9. A IL-17 estimula a expressão de outras citocinas osteoclastogênicas, como TNFα, IL-1, IL-6 e IL-8. Tem a capacidade de sinergizar com outros fatores inflamatórios, tornando-se um importante efetor inflamatório10.
Estudos também mostraram uma ligação entre as pílulas Xiaoyao e a inflamação. Shi et al.11 e Fang et al.12 confirmaram recentemente que as pílulas Xiaoyao podem reduzir os níveis de IL-6 e TNF-α, respectivamente. Em outro estudo de esteato-hepatite associada ao metabolismo, foi relatado que as pílulas Xiaoyao poderiam regular positivamente a expressão de ácido propiônico, que por sua vez inibe a expressão de TNF-α e exerce um efeito anti-inflamatório13. No entanto, no momento, não se sabe se as pílulas Xiaoyao podem regular o desenvolvimento de PMOM mediando uma resposta inflamatória através da IL-17, que foi o objetivo deste estudo.
Este estudo previu a interseção dos alvos das pílulas Xiaoyao e genes relacionados à osteoporose por meio de farmacologia de rede e análise de bioinformática e analisou os genes de interseção para interações proteicas, GO e KEGG. Com base nos resultados previstos, pode-se observar a expressão de Act1 e IL-6, que são proteínas-chave na via de sinalização da IL-17 14,15, bem como os marcadores de remodelação óssea fosfatase alcalina (ALP) e colágeno tipo I (COL-1), para observar a eficácia terapêutica das pílulas Xiaoyao no modelo de camundongos PMOM.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>1ml Sampler</td>
			<td>Guangxi Beilunhe Medical Industrial Group Co.</td>
			<td>JYQ001</td>
			<td>For anesthesia in mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4%polyformaldehyde</td>
			<td>Beijing Solarbio Science &#38; Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>P1110</td>
			<td>For tissue fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 absorbable suture (angled needle)</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co.</td>
			<td>HZX-06</td>
			<td>For postoperative suturing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent cotton ball</td>
			<td>Winner</td>
			<td>MIANQIU-500g</td>
			<td>For sterilization and hemostasis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive slides</td>
			<td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co.</td>
			<td>188105</td>
			<td>For tissue sectioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amobarbital</td>
			<td>Sigma Aldrich (Shanghai) Trading Co.</td>
			<td>A-020-1ML</td>
			<td>For anesthesia in mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluing Solution</td>
			<td>Beijing Solarbio Science &#38; Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1866</td>
			<td>Blue coloration of the nuclei of cells after the action of hematoxylin differentiation solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.</td>
			<td>(SCXK 2033-0063)</td>
			<td>For use in animal experiments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon steel surgical blades</td>
			<td>Premier Medical Equipment Co.</td>
			<td>SP239</td>
			<td>For mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CIKS/TRAF3IP2 Rabbit pAb</td>
			<td>BIOSS ANTIBODIES</td>
			<td>bs-6202R</td>
			<td>Binds to Act1 in tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cole&#39;s Hematoxylin Solution (For Conventional Stain)</td>
			<td>Beijing Solarbio Science &#38; Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1140</td>
			<td>For staining paraffin sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type I Polyclonal antibody</td>
			<td>proteintech</td>
			<td>14695-1-AP</td>
			<td>Binds to COL-1 in tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB Substrate kit,20x</td>
			<td>Beijing Solarbio Science &#38; Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>DA1010</td>
			<td>For tissue color development</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable surgical sheet 50*60CM</td>
			<td>Nanchang Xuhui Medical Equipment Co.</td>
			<td>SP4529777</td>
			<td>For mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA decalcification solution (pH 7.2)</td>
			<td>Beijing Solarbio Science &#38; Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>E1171-500ml</td>
			<td>For tissue decalcification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enhanced Endogenous Peroxidase Bloching Buffer</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0100B</td>
			<td>Sequestration of tissue or cellular endogenous peroxidases</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Environmentally friendly dewaxing clear liquid</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1128-1L</td>
			<td>For dewaxing paraffin sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl Alcohol</td>
			<td>CHRON CHEMICALS</td>
			<td>64-17-5 (CAS)</td>
			<td>For dehydration of paraffin sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>General Purpose Antibody Diluent</td>
			<td>Epizyme Biotech</td>
			<td>PS119L</td>
			<td>For antibody dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin Differentiation Solution</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1039-500ML</td>
			<td>For differentiation after hematoxylin staining and removal of excessively bound and non-specifically adsorbed dye from tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin Eosin (HE) Staining Kit</td>
			<td>Beijing Solarbio Science &#38; Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1120-3*100ml</td>
			<td>For tissue staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High quality stainless steel surgical knife handle</td>
			<td>Premier Medical Equipment Co.</td>
			<td>SP0088</td>
			<td>For mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP-conjugated Affinipure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)</td>
			<td>proteintech</td>
			<td>SA00001-2</td>
			<td>Binds to primary antibody and amplifies signal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-17A Polyclonal antibody</td>
			<td>proteintech</td>
			<td>13082-1-AP</td>
			<td>Binds to IL-17 in tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-6 Polyclonal antibody</td>
			<td>proteintech</td>
			<td>21865-1-AP</td>
			<td>Binds to IL-6 in tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immunohistochemistry pen</td>
			<td>Beijing Zhongshan Jinqiao Biotechnology Co.</td>
			<td>ZLI-9305 (YA0310)</td>
			<td>For drawing circles in immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical surgical suture Non-absorbent (ball) 5-0 3.5m</td>
			<td>Yangzhou Yuanlikang Medical Equipment Co.</td>
			<td>FHX-5-2</td>
			<td>For postoperative suturing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Suture Needles Angle Needles 4*10 3/8</td>
			<td>Chaohu Binxiong Medical Equipment Co.</td>
			<td>FHZ612-4</td>
			<td>For postoperative suturing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral Balsam</td>
			<td>Beijing Solarbio Science &#38; Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G8590</td>
			<td>As a slice sealer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS(1X)</td>
			<td>Shenzhen Mohong Technology Co.,Ltd</td>
			<td>B0015</td>
			<td>Buffer for slide washing and partial solution dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein Free Rapid Blocking Buffer (1X)</td>
			<td>Epizyme Biotech</td>
			<td>PS108P</td>
			<td>Avoiding non-specific binding of proteins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Anti-Bone Alkaline Phosphatase antibody</td>
			<td>BIOSS ANTIBODIES</td>
			<td>bs-6292R</td>
			<td>Binds to alkaline phosphatase in tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Affiliated Hospital Youjiang Medical University For Nationalities</td>
			<td>LHN500</td>
			<td>For animals by gavage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaving/Electric clippers</td>
			<td>HANGZHOU HUAYUAN PET PRODUCTS CO., LTD.</td>
			<td>DTJ-002</td>
			<td>For shaving mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Medical Needle Holder 14cm Coarse Needle</td>
			<td>Premier Medical Equipment Co.</td>
			<td>SP784</td>
			<td>For mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Ophthalmic Forceps 10.5cm Curved (No Hook)</td>
			<td>Zhuoyouyue</td>
			<td>YKNWW-10.5</td>
			<td>For mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Ophthalmic Scissors/Surgical Scissors 10CM Straight Tip</td>
			<td>Premier Medical Equipment Co.</td>
			<td>ZYJD-10-ZJ</td>
			<td>For mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Tip Gastric Needle 12 Gauge 55mm Elbow</td>
			<td></td>
			<td>GWJ-12-55W</td>
			<td>For use in mice by gavage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-EDTA Antigen Repair Fluid (50x)</td>
			<td>proteintech</td>
			<td>PR30002</td>
			<td>For antigen repair of paraffin sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wooden dissecting board 25*16cm</td>
			<td></td>
			<td>JP16*24</td>
			<td>For mouse surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xiaoyao pills</td>
			<td>Jiuzhitang Co.,Ltd.</td>
			<td>YPG-041</td>
			<td>For animal drug delivery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Others</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R 4.3.1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Data processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoscape3.9.1</td>
			<td>National Resource for Network Biology</td>
			<td></td>
			<td>Building a regulatory network for traditional Chinese medicine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ 1.54f</td>
			<td>National Institutes of Health</td>
			<td></td>
			<td>Image processing for immunohistochemistry results</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop 24.0.0</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td>For image combination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphpadPrism 9.5</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td></td>
			<td>Statistical analysis of data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cellsens Dimension</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td></td>
			<td>For slicing and photographing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OLYMPUS BX53</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td></td>
			<td>For HE staining and immunohistochemical section photography</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

studies on the anti-inflammatory effect of xiaoyao pills in the treatment of postmenopausal osteoporosis in mice

A osteoporose é uma doença metabólica comum em mulheres idosas e na pós-menopausa, sem sintomas óbvios durante seus estágios iniciais. Nos últimos estágios dessa condição, os pacientes são propensos a fraturas, o que pode afetar seriamente sua saúde e qualidade de vida. O aumento mundial da expectativa de vida tornou a osteoporose uma preocupação global. As pílulas Xiaoyao foram anteriormente usado no tratamento da depressão. Além disso, a droga parecia ter atividade semelhante ao estrogênio, que afetou a expressão de ALP, um marcador precoce específico de osteoblastos, e COL-1, um componente importante da matriz extracelular óssea. As pílulas Xiaoyao foram avaliadas quanto aos seus efeitos na osteoporose pós-menopausa (PMOM) em camundongos. As informações de destino de cada componente herbal das pílulas Xiaoyao foram acessadas por meio do banco de dados de Farmacologia de Sistemas de Medicina Tradicional Chinesa (TCMSP). Informações de GeneCards, OMIM, PharmGkb, TTD, DrugBank e outros sites foram usadas para construir a rede regulatória do complexo fitoterápico por meio da rede Cytoscape e String para avaliar as interações proteicas. Os camundongos foram ovariectomizados e tratados com altas e baixas doses de pílulas Xiaoyao e estes foram comparados aos controles. Seus sintomas foram avaliados por imunocitoquímica dos tecidos ósseos. Os resultados sugeriram que as pílulas Xiaoyao tiveram a capacidade de aliviar os sintomas de PMOM em camundongos ovariectomizados através da via de sinalização IL-17. Este medicamento tem o potencial de se tornar um novo agente terapêutico para o tratamento da osteoporose.

The World Health Organization (WHO) defines osteoporosis (OP) as a disease characterized by a decrease in bone mass and deterioration of the microarchitecture of bone tissue, leading to an increase in bone brittleness and, thus an increased risk of fracture1. The clinical significance of osteoporosis is that it can lead to fractures, which are associated with high mortality, morbidity, and economic costs2. Postmenopausal osteoporosis (PMOP) is caused by a decrease in estrogen levels in women after menopause, which leads to an increase in osteoclast activity, resulting in bone loss and destruction of bone microstructure. This often causes osteoporosis with a serious impact on health3. Current therapies for PMOP include estrogen replacement therapy, bisphosphonates, and parathyroid hormone, but they can have varying degrees of adverse effects, insufficient long-term compliance, and high costs4. Therefore, affordable herbal medicine is a viable alternative for a large proportion of the population.
Xiaoyao pills are included in the Chinese Pharmacopoeia5, and these contain eight herbal components, including Chai Hu, Angelica sinensis, White paeonia lactiflora, Atractylodes macrocephala, Poria cocos, Menthae Herba, licorice, and fresh ginger. All these herbs are known to be effective in detoxifying the liver and strengthening the spleen, nourishing the blood, and regulating the menstrual cycle, and the mixture has also been used for treating depression6. However, the role of Xiaoyao pills in osteoporosis is unclear.
Early studies have suggested that inflammation can lead to bone loss7, and that the decline in bone density associated with this process may be accelerated by menopause. In addition, there is a strong relationship between the development of osteoporosis and inflammation. The inflammatory factor, interleukin-17 (IL-17), is a pro-inflammatory factor secreted by Th17 cells, a subset of CD4+ T lymphocytes. These cells are associated with several chronic inflammatory conditions, and they play an important role in the development of bone destruction in rheumatoid arthritis8. Additionally, IL-17 stimulates nuclear factor-&#954; B ligand receptor activator (RANKL), which regulates osteoclastogenesis, leading to greater bone resorption than bone formation9. IL-17 stimulates the expression of other osteoclastogenic cytokines such as TNF&#945;, IL-1, IL-6, and IL-8. It has the ability to synergize with other inflammatory factors, making it an important inflammatory effector10.
Studies have also shown a&#160;link between Xiaoyao pills and inflammation. Shi et al.11 and Fang et al.12 have recently confirmed that Xiaoyao pills can reduce the levels of IL-6 and TNF-&#945;, respectively. In another study of metabolism-associated steatohepatitis, it was reported that Xiaoyao pills could upregulate the expression of propionic acid, which in turn inhibits the expression of TNF-&#945; and exerts an anti-inflammatory effect13. However, at present, it is not known whether Xiaoyao pills can regulate the development of PMOM by mediating an inflammatory response through IL-17, which was the aim of this study.
This study predicted the intersection of the targets of Xiaoyao pills and osteoporosis-related genes through network pharmacology and bioinformatics analysis and analyzed the intersecting genes for protein interactions, GO, and KEGG. Based on the predicted results, the expression of Act1 and IL-6, which are key proteins in the IL-17 signaling pathway, can be observed14,15, as well as the bone turnover markers alkaline phosphatase (ALP) and collagen type I (COL-1), to observe the therapeutic efficacy of the Xiaoyao pills in the PMOM mice model.

Autor em destaque: Integrando a medicina tradicional chinesa com farmacologia e genômica modernas para avaliar a osteoporose pós-menopausa em camundongos 

Estudos sobre o efeito anti-inflamatório das pílulas Xiaoyao no tratamento da osteoporose pós-menopausa em camundongos

Ingredientes ativos e alvos de ação das pílulas Xiaoyao Ao pesquisar o banco de dados TCMSP e a triagem de acordo com os critérios de biodisponibilidade oral (OB) ≥ 30% e propriedades semelhantes a medicamentos (DL) ≥ 0,18, 125 ingredientes ativos foram encontrados nas pílulas Xiaoyao. Entre eles, os ingredientes 6, 4, 9, 13, 2, 6, 83 e 2 eram de Paeonia lactiflora branca, Atractylodes macrocephala, Menthae herba, Chaihu, Angelica sinensis, Poria cocos<...

A osteoporose pós-menopausa tornou-se um problema de saúde pública global. O objetivo deste estudo é explorar os efeitos terapêuticos e os mecanismos relacionados das pílulas Xiaoyao da medicina tradicional chinesa nessa condição.

Osteoporosis is a common metabolic disease of elderly and postmenopausal women, with no obvious symptoms during its early stages. In the latter stages of ...

studies-on-anti-inflammatory-effect-xiaoyao-pills-treatment

Research

JoVE Journal

Biology

Studies on the Anti-Inflammatory Effect of Xiaoyao Pills in The Treatment of Postmenopausal Osteoporosis in Mice

291 visualizações.  Youjiang Medical University for Nationalities. O escopo deste estudo foi o efeito terapêutico da medicina chinesa, pílulas Xiaoyao em camundongos com osteoporose pós-menopausa. Neste estudo, queríamos confirmar se as pílulas Xiaoyao poderiam exercer um efeito terapêutico e o mecanismo específico. Neste estudo, combinamos a medicina tradicional chinesa com a farmacologia e genômica modernas, e a bioinformática da artrite para afirmar nosso Analise o que vimos mostrará ao seu par.Também pr...

Vídeo: Autor em destaque: Integrando a medicina tradicional chinesa com farmacologia e genômica modernas para avaliar a osteoporose pós-menopausa em camundongos 

Osteoporosis is a common metabolic disease of elderly and postmenopausal women, with no obvious symptoms during its early stages. In the latter stages of this condition, the patients are prone to fractures, and this can seriously affect their health and quality of life. The worldwide increase in life expectancy has made osteoporosis a global concern. The Xiaoyao pills were previously 
used in the treatment of depression. In addition, the drug appeared to have estrogen-like activity, which affected the expression of ALP, an early osteoblast-specific marker, and COL-1, a major component of bone extracellular matrix. Xiaoyao pills were assessed for their effects on postmenopausal osteoporosis (PMOM) in mice. The target information of each herbal component of Xiaoyao pills was accessed through the Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology (TCMSP) database. Information from GeneCards, OMIM, PharmGkb, TTD, DrugBank, and other websites was used to construct the regulatory network of the herbal complex through Cytoscape and String network to assess the protein interactions. Mice were ovariectomized, and treated with high and low doses of Xiaoyao pills and these were compared to controls. Their symptoms were assessed by immunocytochemistry of bone tissues. The results suggested that Xiaoyao pills had the ability to alleviate the symptoms of PMOM in ovariectomized mice through the IL-17 signaling pathway. This drug has the potential to become a novel therapeutic agent for the treatment of osteoporosis.

Postmenopausal osteoporosis has become a global public health problem. The aim of this study is to explore the therapeutic effects and related mechanisms of the traditional Chinese medicine Xiaoyao pills on this condition.