Inoculación in vivo de patógenos del cancro del tallo en hojas de álamo para probar la resistencia a la enfermedad del cancro

Para comenzar, prepare el cultivo de hongos para el patógeno del cancro y el material de álamo para la inoculación de hojas. Para hojas pequeñas, inocule dos cubos cuadrados de micelio fúngico previamente preparados y cubos de PDA en la superficie superior de las hojas quintas a séptimas superiores de los clones de álamo. Asegúrese de que el micelio mire hacia las hojas y que los sitios de inoculación estén ubicados en el centro de las medias hojas.

Inocular cuatro cubos cuadrados de micelio fúngico y cuatro cubos de PDA en la superficie superior de las hojas quintas a séptimas superiores de las hojas grandes de álamo. A continuación, envuelve las hojas inoculadas con cinta adhesiva transparente. Presione suavemente la cinta para que se adhiera a las hojas, evitando el movimiento y la pérdida de agua de los cubos de micelio durante el experimento.

A continuación, con una aguja de jeringa de cinco mililitros, perfore las hojas y los cubos de micelio en cinco sitios hasta que la aguja penetre en los cubos desde la superficie superior a la inferior de las hojas de álamo. Coloca un sitio de perforación en el centro y los otros cuatro de uno a dos milímetros cerca de los cuatro vértices de los cubos. Inspeccione las hojas inoculadas dentro de los tres días para detectar cambios de ubicación o pérdida de agua de los inoculantes de micelio.

Observe el inicio de lesiones necróticas alrededor de los sitios de las heridas perforantes en la superficie inferior de las hojas. Al final del experimento, retire todas las hojas inoculadas y colóquelas en bolsas de plástico para muestras.