Agradecemos al Dr. Yuriy M. Usachev por su ayuda en la estandarización inicial de microscopía confocal de imágenes / del ratón plantar inmunotinción de biopsia, y la Dra. Donna L. Hammond, por su ayuda continua y la crítica constructiva en este trabajo. Este trabajo fue financiado por subvenciones del NINDS / NIH (NS069898), y un desarrollo de la idea de concesión de subvenciones del Departamento de Defensa Programa de Investigación de Cáncer de Próstata (DoD-PCRP-101096) para DPM

<ol>
	<li>Hoffman, E. M., Schechter, R., Miller, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixative+Composition+Alters+Distributions+of+Immunoreactivity+for+Glutaminase+and+Two+Markers+of+Nociceptive+Neurons,+Nav+1.8+and+TRPV1,+in+the+Rat+Dorsal+Root+Ganglion.">Fixative Composition Alters Distributions of Immunoreactivity for Glutaminase and Two Markers of Nociceptive Neurons, Nav 1.8 and TRPV1, in the Rat Dorsal Root Ganglion.</a> Journal of Histochemistry &#38; Cytochemistry. 58, 329-344 (2010).</li><li>Neves, J. D. S., Omar, N. F., Narvaes, E. A. O., Gomes, J. R., Novaes, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+different+decalcifying+agents+on+EGF+and+EGFR+immunostaining.">Influence of different decalcifying agents on EGF and EGFR immunostaining.</a> Acta Histochemica. 113, 484-488 (2011).</li><li>Watson, R. E., Wiegand, S. J., Clough, R. W., Hoffman, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+cryoprotectant+to+maintain+long-term+peptide+immunoreactivity+and+tissue+morphology.">Use of cryoprotectant to maintain long-term peptide immunoreactivity and tissue morphology.</a> Peptides. 7, 155-159 (1986).</li><li>Yen, L. D., Bennett, G. J., Ribeiro-da-Silva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sympathetic+sprouting+and+changes+in+nociceptive+sensory+innervation+in+the+glabrous+skin+of+the+rat+hind+paw+following+partial+peripheral+nerve+injury.">Sympathetic sprouting and changes in nociceptive sensory innervation in the glabrous skin of the rat hind paw following partial peripheral nerve injury.</a> The Journal of Comparative Neurology. 495, 679-690 (2006).</li><li>Boyette-Davis, J., Xin, W., Zhang, H., Dougherty, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraepidermal+nerve+fiber+loss+corresponds+to+the+development+of+Taxol-induced+hyperalgesia+and+can+be+prevented+by+treatment+with+minocycline.">Intraepidermal nerve fiber loss corresponds to the development of Taxol-induced hyperalgesia and can be prevented by treatment with minocycline.</a> Pain. 152, 308-313 (2011).</li><li>Bloom, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+Cancer-Induced+Bone+Remodeling,+Skeletal+Pain,+and+Sprouting+of+Sensory+Nerve+Fibers.">Breast Cancer-Induced Bone Remodeling, Skeletal Pain, and Sprouting of Sensory Nerve Fibers.</a> The Journal of Pain. 12, 698-711 (2011).</li><li>Constantin, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+Tumor+Necrosis+Factor+&#945;+(TNF&#945;)+Requires+TNF+Receptor+Type+2+to+Generate+Heat+Hyperalgesia+in+a+Mouse+Cancer+Model.">Endogenous Tumor Necrosis Factor &#945; (TNF&#945;) Requires TNF Receptor Type 2 to Generate Heat Hyperalgesia in a Mouse Cancer Model.</a> J. Neurosci. 28, 5072-5081 (2008).</li><li>Jankowski, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitization+of+Cutaneous+Nociceptors+after+Nerve+Transection+and+Regeneration:+Possible+Role+of+Target-Derived+Neurotrophic+Factor+Signaling.">Sensitization of Cutaneous Nociceptors after Nerve Transection and Regeneration: Possible Role of Target-Derived Neurotrophic Factor Signaling.</a> The Journal of Neuroscience. 29, 1636-1647 (2009).</li><li>Jimenez-Andrade, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+Sprouting+of+Adult+Nociceptors+in+Chronic+Prostate+Cancer-Induced+Bone+Pain.">Pathological Sprouting of Adult Nociceptors in Chronic Prostate Cancer-Induced Bone Pain.</a> J. Neurosci. 30, 14649-14656 (2010).</li><li>Persson, A. -. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium-calcium+exchanger+and+multiple+sodium+channel+isoforms+in+intra-epidermal+nerve+terminals.">Sodium-calcium exchanger and multiple sodium channel isoforms in intra-epidermal nerve terminals.</a> Molecular Pain. 6, 84-84 (2010).</li><li>Ohshima, M., Miyake, M., Takeda, M., Kamijima, M., Sakamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staphylococcal+Enterotoxin+B+Causes+Proliferation+of+Sensory+C-Fibers+and+Subsequent+Enhancement+of+Neurogenic+Inflammation+in+Rat+Skin.">Staphylococcal Enterotoxin B Causes Proliferation of Sensory C-Fibers and Subsequent Enhancement of Neurogenic Inflammation in Rat Skin.</a> Journal of Infectious Diseases. 203, 862-869 (2011).</li><li>Johnson, M. S., Ryals, J. M., Wright, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+loss+of+peptidergic+intraepidermal+nerve+fibers+in+an+STZ-induced+mouse+model+of+insensate+diabetic+neuropathy.">Early loss of peptidergic intraepidermal nerve fibers in an STZ-induced mouse model of insensate diabetic neuropathy.</a> Pain. 140, 35-47 (2008).</li></ol>

No hay conflictos de intereses declarados.

Aquí hemos detallado los métodos para la preparación de la piel del ratón y las secciones de tejido óseo para la inmunotinción y detección de las fibras nerviosas sensoriales periféricas. Las secciones producido a partir de biopsias por punción plantar contienen la piel lampiña y peludo, lo que significa que el protocolo puede ser utilizado en cualquier tipo de piel. Estas técnicas también pueden utilizarse para teñir otros tipos de células en estos tejidos (leucocitos, el endotelio vascular, músculo liso...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del Material </td><td> Tipo </td><td> Empresa </td><td> Catálogo N º </td><td> Comentario </td></tr><tr><td> 3mm Harris Micro-Punch </td><td> Material </td><td> Ted Pella </td><td> 15094 </td><td></td></tr><tr><td> Perfusión de la bomba </td><td> Material </td><td> VWR International </td><td> 23609-170 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehído </td><td> Reactivo </td><td> Fisher Scientific </td><td> T353 </td><td></td></tr><tr><td> Ácido pícrico </td><td> Reactivo </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 239801 </td><td></td></tr><tr><td> Octubre compuesto incrustación </td><td> Reactivo </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Cito-congelación criogénica en aerosol </td><td>Material </td><td> Control de la Compañía </td><td> 3118 </td><td></td></tr><tr><td> De suero de cabra </td><td> Reactivo </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G9023 </td><td></td></tr><tr><td> Incubación de la bandeja y la tapa de inmunotinción (Grande) </td><td> Material </td><td> RPI Corp. </td><td> 248270 (bandeja) 248270-A (la tapa) </td><td></td></tr><tr><td> ImmEdge pluma barrera hidrofóbica </td><td> Material </td><td> Vector Laboratories </td><td> H-4000 </td><td></td></tr><tr><td> Pinceles de pelo de camello (# 1 espesor) </td><td> Material </td><td> Ted Pella </td><td> 11859 </td><td></td></tr><tr><td> Pro-Long Oro Medio de montaje </td><td> Reactivo </td><td> Invitrogen </td><td> P36930 </td><td></td></tr></tbody></table>

tissue preparation and immunostaining of mouse sensory nerve fibers innervating skin and limb bones

Detección y procesamiento primario de los físicos, químicos y térmicos estímulos sensoriales de las fibras nerviosas sensoriales periféricas es la clave para la percepción sensorial en animales y humanos. Estas fibras nerviosas sensoriales periféricas expresan una gran cantidad de receptores y las proteínas de los canales iónicos que detectan e iniciar los estímulos sensoriales específicos. Se dispone de métodos para caracterizar las propiedades eléctricas de las fibras nerviosas sensoriales periféricas que inervan la piel, que también puede ser utilizado para identificar la expresión funcional de proteínas específicas de canales de iones en estas fibras. Sin embargo, los métodos electrofisiológicos similares no están disponibles (y también son difíciles de desarrollar) para la detección de la expresión funcional de los receptores y las proteínas de los canales iónicos en las fibras nerviosas sensoriales periféricas que inervan otras vísceras, incluidos los tejidos más difíciles, como los huesos. Por otra parte, estos métodos electrofisiológicos no puede ser utilizado para determinar la expresión de la proteína no excitabless en las fibras nerviosas sensoriales periféricas. Por lo tanto, la inmunotinción de muestras de tejidos periféricos / visceral de horario de oficina nervio sensorial ofrece la mejor manera posible para determinar la expresión de proteínas específicas de interés en estas fibras nerviosas. Hasta ahora, la mayoría de los estudios de expresión de proteínas en las neuronas sensoriales han utilizado los procedimientos de tinción en los ganglios sensoriales, donde se limita la información a la expresión de proteínas específicas en el cuerpo celular de tipos específicos o subconjuntos de neuronas sensoriales. Aquí mostramos los métodos detallados / protocolos para la preparación de las muestras de los tejidos periféricos / visceral de la inmunotinción de las fibras nerviosas sensoriales periféricas. En especial, detalle los métodos para la preparación de la piel o el plantar biopsia en sacabocados y hueso (fémur) secciones de los ratones de la inmunotinción de las fibras nerviosas sensoriales periféricas. Estos métodos no sólo son clave para la determinación cualitativa de la expresión de proteínas en las neuronas sensoriales periféricas, sino que también proporcionan un método de análisis cuantitativo paradeterminar los cambios en los niveles de expresión de proteínas en los tipos o subconjuntos específicos de las fibras sensoriales, así como para determinar los cambios morfológicos y / o anatómicas en el número y la densidad de las fibras sensoriales en varios estados patológicos. Además, estos métodos no se limitan a la coloración de las fibras nerviosas sensoriales sólo, pero también puede ser utilizado para la tinción de los tipos de fibras nerviosas de la piel, los huesos y el tejido visceral otros.

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Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones

Identificación de inmuno periféricos subtipos de fibras nerviosas sensoriales (y la detección de la expresión de proteínas en ella) son fundamentales para la comprensión de los mecanismos moleculares que subyacen a la sensación periférica. A continuación se describen los métodos para la preparación de las muestras de los tejidos periféricos / visceral, como los huesos y la piel del miembro, por inmunotinción específica de las fibras nerviosas sensoriales periféricas.

Preparación y tejido de fibras inmunotinción ratón nerviosas sensoriales que inervan la piel y los huesos de extremidades

Detection and primary processing of physical, chemical and thermal sensory stimuli by peripheral sensory nerve fibers is key to sensory perception in ...

tissue-preparation-immunostaining-mouse-sensory-nerve-fibers

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Neuroscience

23.0K vistas.  The University of Iowa. Identificación de inmuno periféricos subtipos de fibras nerviosas sensoriales (y la detección de la expresión de proteínas en ella) son fundamentales para la comprensión de los mecanismos moleculares que subyacen a la sensación periférica. A continuación se describen los métodos para la preparación de las muestras de los tejidos periféricos / visceral, como los huesos y la piel del miembro, por inmunotinción específica de las fibras nerviosas sensoriales per...