Estamos en deuda con Nancy R. Sturm, Departamento de Inmunología, Microbiología y Biología Molecular, Escuela David Geffen de Medicina de la Universidad de California en Los Ángeles, para la lectura crítica del manuscrito. El Consejo Nacional de Investigaciones-CNPq y la Fundación para el Desarrollo de la Investigación-FAPDF, Brasil, con el apoyo del estudio. Damos las gracias a la ayuda técnica de Alejandro O. Souza, María C. Guimaro, Ciro Cordeiro, Ana Rosa de Cassia, Alves Roseneide, y Andrade Rafael, de la Universidad de Brasilia, Brasil.

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No hay conflictos de interés declarado.

En contraste con los mamíferos susceptibles a la vida a lo largo T. cruzi, los pollos son refractarios a la T. cruzi. La ventaja principal del sistema de modelo de pollo es la eliminación de la infección temprana en el desarrollo del sistema inmune embrionario. Así, el ADN del parásito único que queda dentro del cuerpo que el pollo esté integrado en varios loci. El uso de la cantidad óptima de virulenta T. cruzi tripomastigotes para inocular huevo fértil es el paso crucial hacia la obtención de la integración de la minicircles KDNA en el genoma del embrión de pollo. La tasa de incubar pollitos en vivo a partir de huevos inoculados con 100 tripomastigotes es cuatro veces mayor que la obtenida con 500 parásitos. Se debe tener cuidado para inocular la suspensión parásitos en 10 l de medio de cultivo en la cámara de aire del huevo. No debe haber ninguna fuga de clara de huevo. Bajo condiciones óptimas, la infección parasitaria intracelular se lleva a cabo widelgada unas pocas horas después de la multiplicación de incubación y el parásito dentro de las células huésped producto durante una semana; posteriormente la infección se elimina por la inmunidad innata. La integración KDNA requiere una infección de estar, y la inoculación de minicircles desnudas en los primeros huevos de embrión de pollo no da lugar a la integración. Los embriones KDNA-positivos y los controles deben ser alojados bajo condiciones controladas a 37,5 ° C y 65% ​​de humedad. Los pollos se mantienen en jaulas de dos semanas a 33 ° C de temperatura ambiente. Posteriormente, los pollos se mantienen en jaulas suspendidas en bastidores separados por pasillos de 1,5 metros de anchura en una habitación a 22 ° C con aire filtrado y presión positiva en el agotamiento constante para asegurar condiciones de bienestar animal. Los adultos se alimentan de pollo-chow y beber agua potable corriente para lograr un crecimiento y madurez, poniendo los huevos a los cinco meses de edad. Mantenimiento de los procedimientos de higiene son esenciales para la reproducibilidad de los resultados cuando se trabaja con T. cruzi inoculadosen huevos de gallina fértiles. En el modelo de sistema de pollo de la T. cruzi son erradicadas tras el desarrollo del sistema inmune en el período inicial de crecimiento del embrión. Además de ser libre de infección, los polluelos que salen de T. cruzi inocularon huevos, en la falta de anticuerpos específicos, son tolerantes a los antígenos del parásito. El rechazo de las células diana del corazón por linfocitos citotóxicos (unidad mínima rechazo, Figura 3) se ve en los pollos KDNA-mutados que muestran modificaciones genotipo y de la descomposición de la vigilancia inmunológica 3. Los genotípicamente células T modificadas presentan rechazo acelerado de los tejidos auto en el cuerpo. El sitio de la lesión principal es el corazón, que es un sello distintivo de la enfermedad de Chagas. El paso de una fisiológica (vigilancia) a un estado fisiopatológico se ve en el pollo KDNA-mutado mostrando clonalmente proliferación de los linfocitos citotóxicos 3. Tsu sistema modelo transkingdom muestra un parásito inducida, genéticamente impulsada enfermedad autoinmune (Figura 6), derivado de modificaciones del genoma de la T. cruzi KDNA minicircle integraciones. Estas modificaciones no se ven en pollitos salidos de huevos inoculados Lb. Este fenómeno sugiere que el tratamiento experimental de la miocardiopatía inflamatoria autoinmune en perfiles de bandas de pollos mutantes pueden exigir la supresión de la droga de las células progenitoras de médula ósea de células T específicas fenotipo infiltrarse en el miocardio, y el trasplante de médula ósea sana histocompatible para prevenir el rechazo de uno mismo-tejido.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Taq polimerasa de ADN recombinante </td><td> Invitrogen </td><td> 11615-010 </td><td></td></tr><tr><td> Platinum Taq DNA Polimerasa </td><td> Invitrogen </td><td> 10966-030 </td><td></td></tr><tr><td> Los cebadores de ADN al azar un sistema de etiquetado </td><td> Invitrogen </td><td> 18187-013 </td><td></td></tr><tr><td> Eco RI </td><td> Invitrogen </td><td> 15202-021 </td><td></td></tr><tr><td> Mbo I </td><td> Invitrogen </td><td> 15248-016 </td><td></td></tr><tr><td> Juego de dNTP, Soluciones de 100mm </td><td&gt; GE Healthcare </td><td> 28-4065-51 </td><td></td></tr><tr><td> Amersham Hybond - N + - Cat. n. </td><td> GE Healthcare </td><td> RPN303B </td><td></td></tr><tr><td> PlasmidPrep mini kit de Giro </td><td> GE Healthcare </td><td> 28-9042-70 </td><td></td></tr><tr><td> NsiI </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> R5884 1Ku </td><td></td></tr><tr><td> ADN, sal sódica esperma de peces </td><td> AMRESCO </td><td> 0644-10G </td><td></td></tr><tr><td> Ratón anti-pollo de Bu-1b </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8370-02 </td><td></td></tr><tr><td> Mouse anti-CD45 de pollo </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8270-08 </td><td></td></tr><tr><td>Ratón anti-pollo TCRγδ </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8230-08 </td><td></td></tr><tr><td> Ratón anti-pollo CD8α </td><td> SouthernBiotech </td><td> 9220-02 </td><td></td></tr><tr><td> Ratón anti-pollo de monocitos / macrófagos </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8420-02 </td><td></td></tr><tr><td> MyCycle termociclador </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td> 580BR 5501 </td><td></td></tr></tbody></table>

parasite induced genetically driven autoimmune chagas heart disease in the chicken model

Las infecciones por Trypanosoma cruzi agudas adquiridas en la infancia y la niñez parecen asintomática, pero aproximadamente un tercio de los casos con infección crónica muestran la enfermedad de Chagas hasta tres décadas o más tarde. Autoinmunidad y la persistencia del parásito son las teorías que compiten para explicar la patogenia de la enfermedad de Chagas 1, 2. Para los roles desempeñados por separado la persistencia del parásito y la autoinmunidad en la enfermedad de Chagas que inocular a la T. cruzi en la cámara de aire de los huevos fertilizados. El sistema de pollo inmune madura es una barrera fuerte biológica contra T. cruzi y la infección está erradicada en el desarrollo de su sistema inmunológico por el final de la primera semana de crecimiento del 3. Los polluelos son libres de parásitos en la trama, pero conservan integrada del parásito mitocondrial ADN del cinetoplasto (kDNA) minicircle dentro de su genoma que se transmiten a su progenie. La documentación de la integración KDNA minicircle en el genoma de la gallina se obtuvo por un TargETED primer TAIL-PCR, hibridaciones Southern, la clonación y secuenciación de 3, 4. El KDNA minicircle integraciones rotura marcos de lectura abierta para la transcripción y factores del sistema inmunológico, la fosfatasa (GTPasa), adenilatociclasa y fosforilasas (PKC, el NF-kappa B activador, PI-3K) asociado con la fisiología celular, el crecimiento y la diferenciación 3, 5 - 7, y otras funciones de genes. Miocarditis grave debido al rechazo de las fibras del corazón diana por los linfocitos citotóxicos efectores se ve en los pollos kDNA mutados, mostrando una miocardiopatía inflamatoria similar a la observada en la enfermedad de Chagas humana. En particular, la insuficiencia cardíaca y la debilidad del músculo esquelético están presentes en los pollos adultos con rotura KDNA del gen de la distrofina en el cromosoma 1 8. Similares alteraciones genotípico están asociados con la destrucción del tejido realizado por efectores CD45 + y + y CD8γδ CD8α linfocitos. Así, esta infección protozoaria puede inducir la enfermedad autoinmune genéticamente accionado.

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Parasite Induced Genetically Driven Autoimmune Chagas Heart Disease in the Chicken Model

La inoculación de<em&gt; Trypanosoma cruzi</em&gt; En los huevos fértiles antes de la incubación hace que el parásito de KDNA minicircle la integración en el genoma de las células del embrión. Cruzamiento revela la transferencia vertical de las mutaciones a la descendencia. El KDNA se integra en las regiones de codificación en varios cromosomas, y los pollos mueren de una enfermedad inflamatoria autoinmune del corazón.

Parásito inducido genéticamente Impulsado enfermedad autoinmune de Chagas en el modelo de Pollo

The Trypanosoma cruzi acute infections acquired in infancy and childhood seem asymptomatic, but approximately one third of the chronically infected cases ...

parasite-induced-genetically-driven-autoimmune-chagas-heart-disease

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

13.7K vistas.  University of Brasilia. La inoculación de Trypanosoma cruzi En los huevos fértiles antes de la incubación hace que el parásito de KDNA minicircle la integración en el genoma de las células del embrión. Cruzamiento revela la transferencia vertical de las mutaciones a la descendencia. El KDNA se integra en las regiones de codificación en varios cromosomas, y los pollos mueren de una enfermedad inflamatoria autoinmune del corazón.