Siamo in debito con Nancy R. Sturm, Dipartimento di Immunologia, Microbiologia e Biologia Molecolare, David Geffen School of Medicine, University of California a Los Angeles, per la lettura critica del manoscritto. Il Consiglio Nazionale delle Ricerche-CNPq, e la Fondazione per la ricerca-sviluppo FAPDF, Brasile, ha sostenuto lo studio. Ringraziamo l&#39;assistenza tecnica di Alessandro O. Souza, Maria C. Guimaro, Ciro Cordeiro, Ana de Cassia Rosa, Alves Roseneide, e Rafael Andrade, presso l&#39;Università di Brasilia, in Brasile.

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	<li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+chagas'+disease:+parasite+persistence+and+autoimmunity.">Pathogenesis of chagas' disease: parasite persistence and autoimmunity.</a> CMR. 24, 592-630 (2011).</li><li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chagas+disease.">Chagas disease.</a> Postg. Med. J. 82, 788-798 (2006).</li><li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trypanosoma+cruzi+in+the+chicken+model:+Chagas-like+heart+disease+in+the+absence+of+parasitism.">Trypanosoma cruzi in the chicken model: Chagas-like heart disease in the absence of parasitism.</a> PLoS Negl. Trop. Dis. 5, e1000 (2011).</li><li>Hecht, M. 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Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.

In contrasto mammiferi sensibili alla vita lunga T. infezioni cruzi, polli sono refrattari a T. cruzi infezione. Il principale vantaggio del sistema modello pollo è l&#39;eliminazione del precoce dell&#39;infezione nello sviluppo del sistema immunitario embrionale. Pertanto, il DNA parassita solo rimane all&#39;interno del corpo pollo integrato su più loci. Uso della quantità ottimale di virulento T. cruzi tripomastigoti per inoculare uovo fertile è il passo fondamentale verso l&#39;ottenimento di integrazione del minicircles kDNA nel genoma dell&#39;embrione di pollo. Il tasso di schiusa in diretta pulcini dalle uova inoculate con 100 tripomastigoti è quattro volte superiore a quello ottenuto con 500 parassiti. Si deve prestare attenzione per inoculare la sospensione parassiti in 10 microlitri di terreno di coltura nella camera d&#39;aria dell&#39;uovo. Non ci dovrebbero essere perdite di bianco d&#39;uovo. In condizioni ottimali, l&#39;infezione parassita intracellulare avviene wisottile poche ore dopo l&#39;incubazione e la moltiplicazione dei parassiti all&#39;interno dei proventi cellule ospiti per una settimana, dopo l&#39;infezione viene eliminata l&#39;immunità innata. L&#39;integrazione kDNA richiede una infezione vivo, e l&#39;inoculazione di minicircles nudi in uova di pollo primi embrioni non si traduca in integrazione. Le kDNA positivi embrioni e controlli devono essere alloggiati in condizioni controllate a 37,5 ° C e 65% di umidità. I pulcini sono tenuti in gabbie per due settimane a 33 ° C temperatura ambiente. Successivamente i polli sono tenuti in gabbie sospese su graticci navate separate da 1,5 metri di larghezza in una stanza a 22 ° C con aria filtrata e pressione positiva in esaurimento costante per garantire condizioni di benessere degli animali. Gli adulti sono alimentati pollo-chow e bere acqua corrente potabile per ottenere piena crescita e la maturità, le uova a cinque mesi di età. Manutenzione delle procedure igieniche sono essenziali per la riproducibilità dei risultati quando si lavora con T. cruzi inoculatoin uova di pollo fertili. Nel sistema modello di pollo al T. infezioni cruzi sono sradicate dopo lo sviluppo del sistema immunitario nel primo periodo di crescita dell&#39;embrione. Inoltre ad essere privo di infezioni, i pulcini che si schiudono da T. cruzi inoculato le uova, in mancanza di anticorpi specifici, sono tolleranti agli antigeni del parassita. Il rigetto delle cellule del cuore di destinazione da parte dei linfociti citotossici (unità di rifiuto minima, figura 3) si vede nei polli kDNA-mutati che mostrano modifiche genotipo e dal cedimento di sorveglianza immunologica 3. Le genotipicamente modificate cellule T presenti rifiuto accelerata dei tessuti sé nel corpo. Il sito della lesione principale è il cuore, che è una caratteristica della malattia di Chagas. Il passaggio da uno fisiologico (sorveglianza) ad uno stato fisiopatologico si vede nella kDNA-mutato pollo mostra clonale proliferazione dei linfociti citotossici 3. Til suo modello di sistema transkingdom mostra un parassita indotta, geneticamente-driven malattia autoimmune (Figura 6), derivanti da modifiche del genoma della T. cruzi kDNA minicircle integrazioni. Queste modifiche non si vedono in pulcini nati da uova Lb-inoculate. Questo fenomeno suggerisce che il trattamento sperimentale della cardiomiopatia infiammatoria autoimmune in kDNA mutato polli possono richiedere la soppressione farmaco di midollo osseo progenitrici delle cellule T specifiche per fenotipo con infiltrazione del miocardio, istocompatibili e il trapianto di midollo osseo sano per prevenire il rigetto di auto-tessuto.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reattivo </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Comments </td></tr><tr><td> Taq polimerasi DNA ricombinante </td><td> Invitrogen </td><td> 11615-010 </td><td></td></tr><tr><td> DNA polimerasi Taq Platinum </td><td> Invitrogen </td><td> 10966-030 </td><td></td></tr><tr><td> Casuale Primers DNA sistema di etichettatura </td><td> Invitrogen </td><td> 18187-013 </td><td></td></tr><tr><td> Eco RI </td><td> Invitrogen </td><td> 15202-021 </td><td></td></tr><tr><td> I mbo </td><td> Invitrogen </td><td> 15248-016 </td><td></td></tr><tr><td> dNTP Set, 100 mM Solutions </td><td&gt; GE Healthcare </td><td> 28-4065-51 </td><td></td></tr><tr><td> Amersham Hybond - N + - Cat. n. </td><td> GE Healthcare </td><td> RPN303B </td><td></td></tr><tr><td> PlasmidPrep Mini Spin kit </td><td> GE Healthcare </td><td> 28-9042-70 </td><td></td></tr><tr><td> I NSI </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> R5884 1Ku </td><td></td></tr><tr><td> DNA, Fish sodio Sperm Salt </td><td> AMRESCO </td><td> 0644-10G </td><td></td></tr><tr><td> Topo anti-pollo Bu-1b </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8370-02 </td><td></td></tr><tr><td> Topo anti-CD45 di pollo </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8270-08 </td><td></td></tr><tr><td>Topo anti-pollo TCRγδ </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8230-08 </td><td></td></tr><tr><td> Topo anti-pollo CD8α </td><td> SouthernBiotech </td><td> 9220-02 </td><td></td></tr><tr><td> Topo anti-pollo monociti / macrofagi </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8420-02 </td><td></td></tr><tr><td> MyCycle Termocycler </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td> 580BR 5501 </td><td></td></tr></tbody></table>

parasite induced genetically driven autoimmune chagas heart disease in the chicken model

Le infezioni acute Trypanosoma cruzi acquisite durante l&#39;infanzia e l&#39;infanzia sembrano asintomatica, ma circa un terzo dei casi con infezione cronica mostrano la malattia di Chagas fino a tre decenni o versioni successive. Autoimmunità e persistenza parassita sono in competizione le teorie per spiegare la patogenesi della malattia di Chagas 1, 2. Per ruoli distinti svolto dalla persistenza parassita e autoimmunità nella malattia di Chagas si inoculare il T. cruzi nella camera d&#39;aria di uova fecondate. Il sistema immunitario di pollo maturo è una barriera a tenuta biologica contro T. cruzi e l&#39;infezione è sradicata sullo sviluppo del suo sistema immunitario dalla fine della prima settimana di crescita 3. I pulcini sono parassiti-free al momento della schiusa, ma mantengono integrato parassita cinetoplasto DNA mitocondriale (kDNA) minicircle nel loro genoma che vengono trasferiti alla loro progenie. Documentazione di integrazione kDNA minicircle nel genoma di pollo è stato ottenuto da un targeted prime TAIL-PCR, ibridazioni del Sud, la clonazione e sequenziamento 3, 4. Il kDNA minicircle integrazioni rottura cornici di lettura aperte per la trascrizione e fattori del sistema immunitario, fosfatasi (GTPasi), adenilato ciclasi e fosforilasi (PKC, NF-kappa B attivatore, PI-3K) associata fisiologia cellulare, la crescita, la differenziazione e 3, 5 - 7, e altre funzioni geniche. Miocardite grave a causa di rifiuto di fibre cardiache bersaglio da parte dei linfociti citotossici effettori è visto nei polli kDNA mutati, mostrando una cardiomiopatia infiammatoria simile a quella osservata nell&#39;uomo la malattia di Chagas. In particolare, insufficienza cardiaca e debolezza muscolare scheletrico sono presenti polli in adulti con kDNA rottura del gene distrofina nel cromosoma 1 8. Simili alterazioni genotipiche sono associati con la distruzione dei tessuti effettuata da effettori CD45 + e + e CD8γδ CD8α linfociti. Così questa infezione protozoo può indurre geneticamente guidato malattia autoimmune.

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Parasite Induced Genetically Driven Autoimmune Chagas Heart Disease in the Chicken Model

L&#39;inoculazione di<em&gt; Trypanosoma cruzi</em&gt; In uova fertili prima incubazione rende il kDNA parassita minicircle integrazione nel genoma delle cellule dell&#39;embrione. Incrocio rivela il trasferimento verticale delle mutazioni alla progenie. Il kDNA integra in regioni codificanti in cromosomi diversi ed i polli morire con una malattia infiammatoria autoimmune cuore.

Parasite indotta geneticamente Driven Autoimmune Disease Cuore Chagas nel modello di pollo

The Trypanosoma cruzi acute infections acquired in infancy and childhood seem asymptomatic, but approximately one third of the chronically infected cases ...

parasite-induced-genetically-driven-autoimmune-chagas-heart-disease

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

13.7K Views.  University of Brasilia. L'inoculazione di Trypanosoma cruzi In uova fertili prima incubazione rende il kDNA parassita minicircle integrazione nel genoma delle cellule dell'embrione. Incrocio rivela il trasferimento verticale delle mutazioni alla progenie. Il kDNA integra in regioni codificanti in cromosomi diversi ed i polli morire con una malattia infiammatoria autoimmune cuore.