Wir danken Nancy R. Sturm, Abteilung Immunologie, Mikrobiologie und Molekularbiologie, David Geffen School of Medicine, University of California in Los Angeles, für die kritische Durchsicht des Manuskripts. Der Nationale Rat für Forschung-CNPq, und der Stiftung für Forschung, Entwicklung-FAPDF, Brasilien, unterstützt die Studie. Wir danken der technischen Hilfe von Alessandro O. Souza, Maria C. Guimaro, Ciro Cordeiro, Ana de Cassia Rosa, Roseneide Alves und Rafael Andrade, von der Universität von Brasilia, Brasilien.

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Keine Interessenskonflikte erklärt.

Im Gegensatz zu Säugetieren anfällig für lebenslanges T. cruzi-Infektionen, sind Hühner refraktär auf T. cruzi-Infektion. Der große Vorteil des Huhns Modellsystem ist die Eliminierung der Infektion in einem frühen Entwicklungsstadium der embryonalen Immunsystems. Somit ist die einzige verbleibende Parasiten-DNA in das Huhn Körper mehrere Loci integriert. Die Nutzung der optimalen Menge an virulenten T. cruzi trypomastigotes auf fruchtbaren Ei impfen ist der kritische Schritt zur Erlangung Integration des KDNA Miniringe in den Hühnerembryo Genom. Die Quote der Live-Küken schlüpft aus Eiern mit 100 trypomastigotes geimpft ist vierfach höher als die mit 500 Parasiten erhalten. Es sollte darauf geachtet, die Parasiten Suspension in 10 ul des Nährbodens in die Eizelle Luftkammer werden. Es sollte kein Austritt von Eiweiß sein. Unter optimalen Bedingungen dauert die intrazelluläre parasitäre Infektion Ort widünne wenige Stunden nach der Inkubation und Parasit Vermehrung in den Wirtszellen Erlös für eine Woche, danach die Infektion wird durch die angeborene Immunität eliminiert. Die KDNA Integration erfordert eine Infektion leben, und die Impfung von nackten Miniringe in frühen Embryos Hühnereier nicht Integration zu erzielen. Die KDNA-positiven Embryonen und Kontrollen sollten unter kontrollierten Bedingungen bei 37,5 ° C und 65% Luftfeuchtigkeit untergebracht werden. Die Küken werden in Käfigen für zwei Wochen bei 33 ° C Raumtemperatur gehalten. Danach werden die Hühner in Käfigen auf hängeregale von 1,5 Meter Breite Gänge in einem Raum bei 22 ° C gehalten, getrennt mit gefilterter Luft und Überdruck unter ständiger Erschöpfung des Tierschutzes Bedingungen zu sichern. Die Erwachsenen sind Hähnchen-Chow gefüttert und trinken fließendem Wasser trinkbar zu vollem Wachstum und Reife zu erreichen, Eier zu legen um fünf Monate alt. Wartung von hygienischen Prozeduren sind für die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse unerlässlich bei der Arbeit mit T. cruzi geimpftin fruchtbare Hühnereiern. In der Hühner-Modellsystem der T. cruzi-Infektionen werden nach der Entwicklung des Immunsystems in der frühen Phase der embryonalen Entwicklung ausgerottet. Zusätzlich zum Sein Infektion-frei, die Küken schlüpfen, die von T. cruzi beimpften Eier, in Mangel an spezifischen Antikörpern, sind tolerant gegenüber den Parasiten-Antigene. Die Ablehnung der Herzfrequenz Zellen durch cytotoxische Lymphocyten (minimale Abhalteeinheit, 3) in den KDNA mutierten Genotyp Hühnern Es werden Modifikationen und Aufteilung der immunologischen Überwachung 3 zu sehen. Die genotypisch modifizierten T-Zellen präsentieren beschleunigte Abstoßung Selbst Gewebe im Körper. Die wichtigste Läsion ist das Herz, die ein Markenzeichen der Chagas-Krankheit ist. Der Übergang von einer physiologischen (Überwachung) zu einer pathophysiologischen Zustand ist in der KDNA mutierten Huhn Es werden klonal Proliferation von zytotoxischen Lymphozyten 3 zu sehen. Tseine transkingdom Modellsystem zeigt eine Parasiten-induzierte, genetisch-driven Autoimmunerkrankung (Abbildung 6), die sich aus der Genom-Modifikationen durch T. cruzi KDNA Minicircle Integrationen. Diese Änderungen werden nicht in Lb-Küken aus Eiern geschlüpften geimpft gesehen. Dieses Phänomen legt nahe, dass experimentelle Behandlung der entzündlichen Autoimmunkardiomyopathie in KDNA-mutierten Hühnern kann Droge Unterdrückung des Knochenmarks Vorläufer von spezifischen T-Zell-Phänotyp Infiltration des Herzmuskels, und die Transplantation von gesundem Knochenmark histokompatiblen benötigen, um die Ablehnung der Selbst-Gewebes zu verhindern.

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Taq DNA-Polymerase Rekombinante </td><td> Invitrogen </td><td> 11615-010 </td><td></td></tr><tr><td> Platinum Taq DNA-Polymerase </td><td> Invitrogen </td><td> 10966-030 </td><td></td></tr><tr><td> Zufällige Primer DNA Labeling-System </td><td> Invitrogen </td><td> 18187-013 </td><td></td></tr><tr><td> Eco RI </td><td> Invitrogen </td><td> 15202-021 </td><td></td></tr><tr><td> Mbo I </td><td> Invitrogen </td><td> 15248-016 </td><td></td></tr><tr><td> dNTP-Set, 100 mM Lösungen </td><td&gt; GE Healthcare </td><td> 28-4065-51 </td><td></td></tr><tr><td> Amersham Hybond - N + - Katzen-n. </td><td> GE Healthcare </td><td> RPN303B </td><td></td></tr><tr><td> PlasmidPrep Mini Spin Kit </td><td> GE Healthcare </td><td> 28-9042-70 </td><td></td></tr><tr><td> NsiI </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> R5884 1KU </td><td></td></tr><tr><td> DNA, Sodium Salt Fischsperma </td><td> Amresco </td><td> 0644-10G </td><td></td></tr><tr><td> Maus-Anti-Huhn-Bu-1b </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8370-02 </td><td></td></tr><tr><td> Maus anti-CD45-Huhn </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8270-08 </td><td></td></tr><tr><td>Maus-Anti-Huhn TCRγδ </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8230-08 </td><td></td></tr><tr><td> Maus-Anti-Huhn CD8α </td><td> SouthernBiotech </td><td> 9220-02 </td><td></td></tr><tr><td> Maus-Anti-Huhn Monozyten / Makrophagen </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8420-02 </td><td></td></tr><tr><td> MyCycle Termocycler </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td> 580BR 5501 </td><td></td></tr></tbody></table>

parasite induced genetically driven autoimmune chagas heart disease in the chicken model

Die Trypanosoma cruzi akuten Infektionen in der Kindheit erworbenen scheinen asymptomatisch, aber etwa ein Drittel der chronisch infizierten Fälle zeigen, Chagas-Krankheit bis zu drei Jahrzehnten oder später. Autoimmunität und Parasit Beharrlichkeit sind konkurrierende Theorien, um die Pathogenese der Chagas-Krankheit 1, 2 zu erklären. Um unterschiedliche Rollen durch Parasiten Persistenz und Autoimmunität in die Chagas-Krankheit impfen spielten wir den T. cruzi in der Luftkammer von befruchteten Eiern. Die reifen Huhn Immunsystem ist eine enge biologische Barriere gegen T. cruzi und die Infektion ist auf Entwicklung seines Immunsystems durch das Ende der ersten Woche des Wachstums 3 ausgerottet. Die Küken sind Parasiten-frei beim Schlupf, aber sie behalten integriert Parasit mitochondrialen DNA Kinetoplast (KDNA) in ihrem Genom, die auf ihre Nachkommen übertragen werden Minicircle. Dokumentation der KDNA Minicircle Integration in der Hühner-Genoms wurde von einem Targ erhaltenETED Prime TAIL-PCR, Southern-Hybridisierungen, Klonierung und Sequenzierung 3, 4. Die KDNA Minicircle Integrationen Bruch offenen Leserahmen für die Transkription und Immunsystems Faktoren Phosphatase (GTPase), Adenylatcyclase und Phosphorylasen (PKC, NF-Kappa B Aktivator, PI-3K) mit Zellphysiologie, Wachstum und Differenzierung 3, 5 zugeordnet - 7 und andere Gen funktioniert. Schwere Myokarditis bei Ablehnung der Herzfrequenz Fasern durch Effektoren zytotoxischer Lymphozyten in den KDNA mutierten Hühnern gesehen, zeigt eine entzündliche Kardiomyopathie ähnlich der in menschlichen Chagas-Krankheit zu sehen. Bemerkenswerterweise sind Herzinsuffizienz und Skelettmuskelschwäche bei erwachsenen Hühnern Gegenwart mit KDNA Bruch des Dystrophin-Gens auf Chromosom 1 8. Ähnliche Veränderungen werden mit genotipic Gewebezerstörung durch Effektoren CD45 +, + CD8γδ, CD8α Lymphozyten durchgeführt assoziiert. Damit diese Protozoen-Infektion auslösen können genetisch gesteuerte Autoimmunerkrankung.

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Parasite Induced Genetically Driven Autoimmune Chagas Heart Disease in the Chicken Model

Die Impfung von<em&gt; Trypanosoma cruzi</em&gt; In fruchtbaren Eier vor der Inkubation macht der Parasit KDNA Minicircle Integration in Embryozellen Genom. Kreuzungen zeigt die vertikale Übertragung der Mutationen auf die Nachkommen. Die KDNA integriert sich in kodierenden Regionen an mehreren Chromosomen und die Hühner mit einer entzündlichen Autoimmunerkrankung Herzkrankheit zu sterben.

Parasite Induced Genetisch Angetrieben Autoimmune Chagas-Herz-Krankheit in der Hähnchen-Modell

The Trypanosoma cruzi acute infections acquired in infancy and childhood seem asymptomatic, but approximately one third of the chronically infected cases ...

parasite-induced-genetically-driven-autoimmune-chagas-heart-disease

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

13.7K Aufrufe.  University of Brasilia. Die Impfung von Trypanosoma cruzi In fruchtbaren Eier vor der Inkubation macht der Parasit KDNA Minicircle Integration in Embryozellen Genom. Kreuzungen zeigt die vertikale Übertragung der Mutationen auf die Nachkommen. Die KDNA integriert sich in kodierenden Regionen an mehreren Chromosomen und die Hühner mit einer entzündlichen Autoimmunerkrankung Herzkrankheit zu sterben.