Este trabajo fue financiado por la Sociedad Max Planck.

<ol>
	<li>Axelrod, D., Thompson, N. L., Burghardt, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+internal+inflection+fluorescent+microscopy.">Total internal inflection fluorescent microscopy.</a> J. Microsc. 129, 19-28 (1983).</li><li>Axelrod, D., Omann, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+microscopy.">Combinatorial microscopy.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7, 944-952 (2006).</li><li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+imaging+of+surface+fluorescence+with+very+high+aperture+microscope+objectives.">Selective imaging of surface fluorescence with very high aperture microscope objectives.</a> J. Biomed. Opt. 6, 6-13 (2001).</li><li>Dominguez-Escobar, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processive+movement+of+MreB-associated+cell+wall+biosynthetic+complexes+in+bacteria.">Processive movement of MreB-associated cell wall biosynthetic complexes in bacteria.</a> Science. 333, 225-228 (2011).</li><li>Sparkes, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleach+it,+switch+it,+bounce+it,+pull+it:+using+lasers+to+reveal+plant+cell+dynamics.">Bleach it, switch it, bounce it, pull it: using lasers to reveal plant cell dynamics.</a> J. Exp. Bot. 62, 1-7 (2011).</li><li>Uchida, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+synthesis+and+absolute+configuration+of+avenolide,+extracellular+factor+in+Streptomyces+avermitilis.">Total synthesis and absolute configuration of avenolide, extracellular factor in Streptomyces avermitilis.</a> J. Antibiot. (Tokyo). , (2011).</li><li>Yu, H., Wedlich-Soldner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+actin+dynamics:+Generating+randomness+by+formin(g)+and+moving.">Cortical actin dynamics: Generating randomness by formin(g) and moving.</a> Bioarchitecture. 1, 165-168 (2011).</li><li>Yu, J. H., Crevenna, A. H., Bettenbuhl, M., Freisinger, T., Wedlich-Soldner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+actin+dynamics+driven+by+formins+and+myosin+V.">Cortical actin dynamics driven by formins and myosin V.</a> J. Cell. Sci. 124, 1533-1541 (2011).</li><li>Berchtold, D., Walther, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TORC2+plasma+membrane+localization+is+essential+for+cell+viability+and+restricted+to+a+distinct+domain.">TORC2 plasma membrane localization is essential for cell viability and restricted to a distinct domain.</a> Mol. Biol. Cell. 20, 1565-1575 (2009).</li><li>Vizcay-Barrena, G., Webb, S. E., Martin-Fernandez, M. L., Wilson, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+and+single-molecule+imaging+of+plant+fluorescent+proteins+using+total+internal+reflection+fluorescence+microscopy+(TIRFM).">Subcellular and single-molecule imaging of plant fluorescent proteins using total internal reflection fluorescence microscopy (TIRFM).</a> J. Exp. Bot. 62, 5419-5428 (2011).</li></ol>

No hay conflictos de interés declarado.

Microscopía TIRF es la técnica de elección para las proteínas de la imagen periféricos. La profundidad de penetración baja del campo evanescente minimiza de fuera de foco de luz, lo que conduce a una señal de muy buena a ruido y permite la adquisición de datos con altas velocidades de fotogramas o imágenes de las proteínas expresadas muy débilmente. La combinación de alto contraste y alta velocidad de fotogramas hace de la microscopía TIRF una herramienta perfecta para imagen dinámica espacio-temporal de l...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre de la herramienta / reactivo </td><td> Tipo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Agitador orbital </td><td> Herramienta </td><td> UniEquip </td><td> UNITWIST en 3-D DIRECCIÓN SHAKER </td></tr><tr><td> TIRF microscopio </td><td> Hasta </td><td></td><td> Configuración personalizada </td></tr><tr><td> De envases de vidrio </td><td> Herramienta </td><td> Vitlab </td><td> 340-232880353 </td></tr><tr><td> Rejilla de coloración de cerámica </td><td> Herramienta </td><td> Thomas Ciencia. </td><td> 8542E40 </td></tr><tr><td> Concanavalina A </td><td> Reactivo </td><td> Sigma </td><td> L7647 </td></tr><tr><td> Cubreobjetos # 1 (18 x 18 mm) </td><td> Microscopio </td><td> Menzel Gläser </td><td> BB018018A1 </td></tr><tr><td> Preparaciones para microscopio </td><td> Microscopio </td><td> Menzel Gláser </td><td> AA00000102E </td></tr><tr><td> Inmersión en aceite </td><td> Microscopio </td><td> Zeiss </td><td> Immersol 518F </td></tr><tr><td> Agarosa </td><td> Reactivo </td><td> Invitrogen </td><td> 16500-500 </td></tr><tr><td> FluoSpheres </td><td> Reactivo </td><td> Invitrogen </td><td> F8795 </td></tr></tbody></table>

visualization of cortex organization and dynamics in microorganisms, using total internal reflection fluorescence microscopy

Microscopía TIRF se ha convertido en una tecnología de imagen de gran alcance para estudiar dinámica espacio-temporal de las moléculas fluorescentes in vitro y en células vivas 1. El fenómeno óptico de reflexión interna total ocurre cuando la luz pasa de un medio con alto índice de refracción en un medio con bajo índice de refracción en un ángulo mayor que un ángulo característica crítica (es decir, más cerca de ser paralelo con el límite). Aunque toda la luz se refleja de nuevo bajo tales condiciones, una onda evanescente se crea que se propaga a través ya lo largo del límite, que decae exponencialmente con la distancia, y sólo penetra áreas de la muestra que son 100-200 nm cerca de la interfaz 2. Además de proporcionar resolución axial superior, la excitación reducida de fuera de fluoróforos focales crea una señal de muy alta a ruido y minimiza los efectos perjudiciales de photobleaching 2,3. Al ser una técnica de campo amplio, TIRF también permite que la imagen más rápido de corriente alternaquisition que la mayoría de exploración basados ​​en configuraciones confocal. A primera vista, la profundidad de penetración bajo TIRF parece ser incompatible con la imagen de las células bacterianas y de hongos, que a menudo rodeadas de paredes celulares gruesas. Por el contrario, hemos encontrado que las paredes celulares de levadura y células bacterianas en realidad mejorar la facilidad de uso de TIRF y aumentar la gama de estructuras observables 4-8. Muchos procesos celulares por lo tanto, se puede acceder directamente por la TIRF en pequeños microorganismos unicelulares, que a menudo ofrecen poderosas técnicas de manipulación genética. Esto nos permite llevar a cabo en los experimentos de bioquímica in vivo, donde la cinética de las interacciones de las proteínas y las actividades se puede evaluar directamente en las células vivas. Se describe aquí los pasos individuales necesarios para obtener imágenes de alta calidad para TIRF Saccharomyces cerevisiae o células de Bacillus subtilis. Se señala varios problemas que pueden Affect TIRF visualización de sondas fluorescentes en las células e ilustrar el procedimiento con varios ejemplos de aplicación. Por último, se demuestra cómo las imágenes TIRF se puede mejorar usando técnicas de restauración de imagen establecidos.

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Visualization of Cortex Organization and Dynamics in Microorganisms, using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

Reflexión interna total de fluorescencia (TIRF) microscopía es un enfoque poderoso para observar las estructuras cerca de la superficie celular en alto contraste y resolución temporal. Se demuestra cómo TIRF puede ser empleado para estudiar la dinámica de proteínas en la corteza de la pared celular-cerrados células bacterianas y fúngicas.

La visualización de la corteza organización y dinámica de los microorganismos, con total Microscopía de fluorescencia de reflexión interna

TIRF microscopy has emerged as  a powerful imaging technology to study spatio-temporal dynamics of fluorescent molecules  in vitro and in living cells1. ...

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Bioengineering

11.4K vistas.  Max Planck Institute of Biochemistry. Reflexión interna total de fluorescencia (TIRF) microscopía es un enfoque poderoso para observar las estructuras cerca de la superficie celular en alto contraste y resolución temporal. Se demuestra cómo TIRF puede ser empleado para estudiar la dinámica de proteínas en la corteza de la pared celular-cerrados células bacterianas y fúngicas.