Bu çalışma Max Planck toplum tarafından finanse edildi.

<ol>
	<li>Axelrod, D., Thompson, N. L., Burghardt, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+internal+inflection+fluorescent+microscopy.">Total internal inflection fluorescent microscopy.</a> J. Microsc. 129, 19-28 (1983).</li><li>Axelrod, D., Omann, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+microscopy.">Combinatorial microscopy.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7, 944-952 (2006).</li><li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+imaging+of+surface+fluorescence+with+very+high+aperture+microscope+objectives.">Selective imaging of surface fluorescence with very high aperture microscope objectives.</a> J. Biomed. Opt. 6, 6-13 (2001).</li><li>Dominguez-Escobar, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processive+movement+of+MreB-associated+cell+wall+biosynthetic+complexes+in+bacteria.">Processive movement of MreB-associated cell wall biosynthetic complexes in bacteria.</a> Science. 333, 225-228 (2011).</li><li>Sparkes, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleach+it,+switch+it,+bounce+it,+pull+it:+using+lasers+to+reveal+plant+cell+dynamics.">Bleach it, switch it, bounce it, pull it: using lasers to reveal plant cell dynamics.</a> J. Exp. Bot. 62, 1-7 (2011).</li><li>Uchida, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+synthesis+and+absolute+configuration+of+avenolide,+extracellular+factor+in+Streptomyces+avermitilis.">Total synthesis and absolute configuration of avenolide, extracellular factor in Streptomyces avermitilis.</a> J. Antibiot. (Tokyo). , (2011).</li><li>Yu, H., Wedlich-Soldner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+actin+dynamics:+Generating+randomness+by+formin(g)+and+moving.">Cortical actin dynamics: Generating randomness by formin(g) and moving.</a> Bioarchitecture. 1, 165-168 (2011).</li><li>Yu, J. H., Crevenna, A. H., Bettenbuhl, M., Freisinger, T., Wedlich-Soldner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+actin+dynamics+driven+by+formins+and+myosin+V.">Cortical actin dynamics driven by formins and myosin V.</a> J. Cell. Sci. 124, 1533-1541 (2011).</li><li>Berchtold, D., Walther, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TORC2+plasma+membrane+localization+is+essential+for+cell+viability+and+restricted+to+a+distinct+domain.">TORC2 plasma membrane localization is essential for cell viability and restricted to a distinct domain.</a> Mol. Biol. Cell. 20, 1565-1575 (2009).</li><li>Vizcay-Barrena, G., Webb, S. E., Martin-Fernandez, M. L., Wilson, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+and+single-molecule+imaging+of+plant+fluorescent+proteins+using+total+internal+reflection+fluorescence+microscopy+(TIRFM).">Subcellular and single-molecule imaging of plant fluorescent proteins using total internal reflection fluorescence microscopy (TIRFM).</a> J. Exp. Bot. 62, 5419-5428 (2011).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

TIRF mikroskopi görüntü periferik proteinleri tercih edilen tekniktir. Yiten alan düşük penetrasyon derinliği gürültü oranı çok iyi bir sinyal yol açar ve yüksek kare hızları, ya da çok zayıf ifade proteinlerin görüntüleme ile veri toplama sağlar odaklanma ışık, dışı en aza indirir. Yüksek kontrast ve yüksek kare oranı ile TIRF mikroskopi kortikal lokalize proteinlerin görüntüleme uzay-zamansal dinamiği için mükemmel bir araçtır. İlginçtir bir çok mikroorganizma çevreleyen kal?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Aracı / reaktif Adı </td><td> Tip </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Orbital Çalkalayıcı </td><td> Araç </td><td> UniEquip </td><td> UNITWIST 3-D YÖNLÜ SHAKER </td></tr><tr><td> TIRF mikroskop </td><td> Kadar </td><td></td><td> Özelleştirilmiş kurulum </td></tr><tr><td> Cam kabı </td><td> Araç </td><td> VITLAB </td><td> 340-232880353 </td></tr><tr><td> Seramik boyama raf </td><td> Araç </td><td> Thomas Sci. </td><td> 8542E40 </td></tr><tr><td> Concanavalin A </td><td> Reaktif </td><td> Sigma </td><td> L7647 </td></tr><tr><td> Lameller # 1 (18 x 18 mm) </td><td> Mikroskop </td><td> Menzel Gläser </td><td> BB018018A1 </td></tr><tr><td> Mikroskop Slaytlar </td><td> Mikroskop </td><td> Menzel Glazer </td><td> AA00000102E </td></tr><tr><td> Immersion Yağı </td><td> Mikroskop </td><td> Zeiss </td><td> Imersol 518F </td></tr><tr><td> Agaroz </td><td> Reaktif </td><td> Invitrogen </td><td> 16500-500 </td></tr><tr><td> FluoSpheres </td><td> Reaktif </td><td> Invitrogen </td><td> F8795 </td></tr></tbody></table>

visualization of cortex organization and dynamics in microorganisms, using total internal reflection fluorescence microscopy

TIRF mikroskopi in vitro floresan moleküllerin uzay-zamansal dinamiklerini incelemek için güçlü bir görüntüleme teknolojisi olarak ve hücrelerin 1 canlı ortaya çıkmıştır. Hafif karakteristik bir kritik açı (yani yakın sınır paralel olmaya) daha büyük bir açıyla düşük kırılma endeksi ile orta içine yüksek refraktif indeksi ile orta geçerken toplam iç yansıma optik olayı oluşur. Tüm ışık bu koşullar altında geri yansıtılmasına karşın, bir fani dalga oluşturulduğunu genelinde ve mesafe ile katlanarak bozunmaları ve sadece arayüz 2 civarındaki 100-200 nm örnek alanlar nüfuz sınır boyunca yayılır. Üstün aksiyal çözünürlük sağlamasının yanı sıra, odak florofor dışı düşük uyarılma gürültü oranı çok yüksek bir sinyal oluşturur ve 2,3 photobleaching zararlı etkilerini en aza indirir. Geniş açılı bir tekniği olan TIRF da daha hızlı görüntü ac veriyortemelli konfokal kurulumları tarama çoğundan daha quisition. İlk bakışta, TIRF düşük penetrasyon derinliği genellikle kalın hücre duvarları ile çevrilidir bakteriyel ve mantar hücreleri, görüntüleme ile uyumlu görünmektedir. Aksine, maya ve bakteriyel hücre hücre duvarları aslında TIRF kullanışlılığını iyileştirmek ve gözlemlenebilir yapılar 4-8 aralığında artış olduğunu bulduk. Pek çok hücresel süreçleri bu nedenle doğrudan çoğu zaman güçlü genetik manipulasyon teknikleri sunan küçük, tek hücreli mikroorganizmalar, içinde TIRF tarafından erişilebilir. Bu bize protein etkileşimleri ve faaliyetlerin kinetiği doğrudan canlı hücreler içerisinde değerlendirilebilir vivo biyokimya deneyler, içinde gerçekleştirmenizi sağlar. Biz burada Saccharomyces cerevisiae veya Bacillus subtilis hücreleri için yüksek kaliteli TIRF görüntüler elde etmek için gerekli adımları tek tek açıklayın. Biz Affe çeşitli sorunlara işaretct TIRF hücrelerinde floresan probların görselleştirme ve çeşitli uygulama örnekleri ile işlem göstermektedir. Son olarak, TIRF görüntüleri daha köklü görüntü restorasyon teknikleri kullanılarak artırılabilir nasıl gösterilmektedir.

Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Cortex Organization and Dynamics in Microorganisms, using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Visualization of Cortex Organization and Dynamics in Microorganisms, using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

Toplam İç Yansıma Floresans (TIRF) mikroskopi yakın yüksek kontrast ve zamansal çözünürlükte hücre yüzeyine yapıları gözlemlemek için güçlü bir yaklaşımdır. Biz TIRF hücre duvarı kapalı bakteriyel ve mantar hücreleri kortekste protein dinamiklerini incelemek için istihdam edilebilir göstermek.

Mikroorganizmalarda Cortex Organizasyon ve Dinamiği Görselleştirme, Toplam İç Yansıma Floresan Mikroskobu kullanılarak

TIRF microscopy has emerged as  a powerful imaging technology to study spatio-temporal dynamics of fluorescent molecules  in vitro and in living cells1. ...

visualization-cortex-organization-dynamics-microorganisms-using-total

Research

JoVE Journal

Bioengineering

11.4K Görüntüleme.  Max Planck Institute of Biochemistry. Toplam İç Yansıma Floresans (TIRF) mikroskopi yakın yüksek kontrast ve zamansal çözünürlükte hücre yüzeyine yapıları gözlemlemek için güçlü bir yaklaşımdır. Biz TIRF hücre duvarı kapalı bakteriyel ve mantar hücreleri kortekste protein dinamiklerini incelemek için istihdam edilebilir göstermek.