Los autores agradecen a Xiu-Ping Wang ayuda inicial con culturas DESC. Los autores son financiados en parte por becas y subvenciones de los Institutos Nacionales de Salud (K99-DE022059 a AHJ, K12-GM081266 a MGC, K08-DE022377-02 a OH y R01-DE021420 a ODK).

1. Dissect Menores Hemi-mandíbulas de Adultos Mouse <ol><li> Antes de realizar este protocolo, obtener la aprobación institucional necesario y asegúrese de cumplir con todas las directrices de cuidado de animales. La eutanasia a los animales utilizando el estándar aprobado por el IACUC procedimientos. Para este trabajo se utilizó asfixia de CO 2 seguido por dislocación cervical. <ol><li> OPCIONAL: Cabeza separada del resto del cuerpo, utilizando una hoja de afeitar. </li></ol></li><li> Quite la piel del labio inferior hasta el cuello. </li><li> Usando un bisturí, hacer una incisión entre los dos incisivos inferiores, que están conectados libremente. Al aplicar presión, la mandíbula se dividirá en dos mitades. </li><li> Cuña El escalpelo entre el cóndilo de la mandíbula y la articulación mandibular temporal y cortar junto con el músculo de la mandíbula para separar la mandíbula. </li><li> Quite todo el músculo, tendón y ligamento hasta sólo queda el hueso. </li></ol> 2. Aislar el Incisivo <ol><li> Usando un bisturí # 15, Afeitarse cuidadosamente el hueso en un ángulo de 45 ° desde el extremo distal hasta el extremo proximal de la región membranosa. Use la punta del bisturí para recoger la basura cualquier hueso remanente incluyendo los fragmentos de hueso en el borde. Poco a poco empiezan a recoger lejos en la cortical lingual de la mandíbula, empezando justo debajo del 3 er molar. </li><li> Continúe hasta que el incisivo es limpio, trabajando cuidadosamente hacia el área que contiene el CL. </li><li> Retire el conjunto de nervios alveolar inferior. </li><li> Haga un corte limpio para quitar primero el hueso y los tejidos proximal a la CL. </li><li> Haga un segundo corte distal con el bisturí, más o menos por debajo del 2 º molar. La región de los incisivos proximal se diseca a cabo mediante la inserción de la escalpelo entre el hueso y la superficie medial del incisivo proximal. Esto debe hacerse cuidadosamente, con el fin de no romper el tejido. El movimiento de la incisión es proximal-distal. PASO ALTERNATIVA: Quite la mayor cantidad de hueso como sea posible a lo largo de la zona superior de la incisor. Una vez que el área se limpia, quite cuidadosamente todo incisivo usando un tamaño de 5 pinzas para manejar la porción de esmalte más cercana a la región CL. </li><li> Coloque el tejido diseccionado (ya sea CL aislado como en la Figura 3E, o todo incisivo como en alternativa Paso 2.5) en 2% de colagenasa en 1X PBS durante 3-4 horas a 4 ° C en una placa de baja adherencia. Para 1-10 incisivos, utilice 100 l por pocillo en una placa de 12 pocillos. Por más de 10 incisivos, utilice 500 l por pocillo en una placa de 6 pocillos de baja adherencia. </li></ol> 3. Microdissect el labial Cervical Loop <ol><li> Retire región CL de la colagenasa y lugar en los medios de comunicación DMEM/F12 frío. </li><li> Tire suavemente en el extremo inferior de la CL utilizando ya sea el tamaño de 5 fórceps o una jeringa de insulina (1 cc, 28 G ½); el mesénquima se vendrá abajo mientras que el epitelio se mantiene intacta. El CL y el epitelio adyacente que se extiende lateralmente como una estructura &quot;de ala&quot; serán visibles. </li><li> Eliminarla yema apical del epitelio adyacente al hacer una incisión en forma de V a cada lado, y colocar inmediatamente en DMEM/F12 frío en hielo. </li><li> Repita el procedimiento para todas las cartas circulares, recoge en 1,5 ml tubo de microcentrífuga. </li><li> Centrifugar el tubo de microcentrífuga con muestras, extraer los medios de comunicación, reemplace con una solución de 100 células destacamento l. </li><li> Incubar los tejidos en solución de desprendimiento de las células durante 30 min a 37 ° C. </li><li> Disociar los tejidos para producir una suspensión de células pipeteando suavemente hacia arriba y el uso de un bajo coeficiente de adherencia de puntas de pipeta 1.000 l abajo. Las células también se pueden colocar a través de un filtro de células estéril para lograr la disociación. </li><li> Contar las células con un hemocitómetro, placa de plástico de cultivo de tejido u otro material deseado. </li></ol> 4. Cultivo primario de DESCs <ol><li> Las células de la placa en una placa de 6 pocillos a 1-6 x 10 4 células / ml en medio DESC, que consta de DMEM/F12 complementado con proteína recombinante EGF de ratón a una concentración de 20 ng / ml, la proteína recombinante FGF a una concentración de 25 ng / ml, 1X suplemento B27, y solución de 1% de antibiótico (penicilina, 100 U / ml, estreptomicina, 50 mg / ml). </li><li> Crecer células sembradas en una placa de 6 pocillos a 37 º C en 5% de CO 2 en 1 ml de medio DESC. No moleste a los cultivos iniciales durante 5 días después de la siembra para permitir la adhesión celular y la formación de colonias. </li><li> Para el primer cambio de los medios de comunicación, reemplace la mitad del volumen (500 l) de los medios tradicionales con la mitad del volumen (500 l) de los nuevos medios de comunicación. Compruebe colonias bajo el microscopio al cambiar el soporte. </li><li> Después del primer cambio de los medios de comunicación, a seguir cambiando los medios de comunicación (1-2 ml) cada 2 días. Compruebe colonias bajo el microscopio al cambiar el soporte. </li></ol> 5. DESCs Passage <ol><li> Medios Aspirar y lavar las células 3 veces con PBS precalentado. </li><li> Añadir precalentado 0,25% de tripsina-EDTA en solución salina y se incuba a 37 ° C durante 10-15 minutos para los DESCs separar. </li><li> Añadir media DESC para neutralizar la tripsina, la pipeta suavemente a lo largo de la placa de cultivo de tejidos para recoger las células, y el lugar en un tubo cónico de 15 ml. </li><li> Centrifugar las células a 800 xg durante 2 min. </li></ol>

<ol>
	<li>Sharpe, P. T., Young, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Test-tube+teeth..">Test-tube teeth..</a> Sci Am. 293, 34-41 (2005).</li><li>D'Souza, R. N., Klein, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+the+molecular+mechanisms+that+lead+to+supernumerary+teeth+in+mice+and+men:+Current+concepts+and+novel+approaches.">Unraveling the molecular mechanisms that lead to supernumerary teeth in mice and men: Current concepts and novel approaches.</a> Cells Tissues Organs. 186, 60-69 (2007).</li><li>Jernvall, J., Thesleff, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tooth+shape+formation+and+tooth+renewal:+evolving+with+the+same+signals.">Tooth shape formation and tooth renewal: evolving with the same signals.</a> Development. 139, 3487-3497 (2012).</li><li>Yen, A. H., Yelick, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+Tissue+Regeneration+A+Mini-Review.">Dental Tissue Regeneration A Mini-Review.</a> Gerontology. 57, 85-94 (2011).</li><li>Jheon, A. H., Seidel, K., Biehs, B., Klein, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+molecules+to+mastication:+the+development+and+evolution+of+tooth+development.">From molecules to mastication: the development and evolution of tooth development.</a> WIREs Dev Biol. 2, 165-182 (2013).</li><li>Wang, X. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+integrated+gene+regulatory+network+controls+stem+cell+proliferation+in+teeth.">An integrated gene regulatory network controls stem cell proliferation in teeth.</a> PLoS Biol. 5, (2007).</li><li>Harada, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+putative+stem+cells+in+dental+epithelium+and+their+association+with+Notch+and+FGF+signaling.">Localization of putative stem cells in dental epithelium and their association with Notch and FGF signaling.</a> J Cell Biol. 147, 105-120 (1999).</li><li>Juuri, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox2++stem+cells+contribute+to+all+epithelial+lineages+of+the+tooth+via+Sfrp5++progenitors.">Sox2+ stem cells contribute to all epithelial lineages of the tooth via Sfrp5+ progenitors.</a> Dev Cell. 23, 317-328 (2012).</li><li>Seidel, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hedgehog+signaling+regulates+the+generation+of+ameloblast+progenitors+in+the+continuously+growing+mouse+incisor.">Hedgehog signaling regulates the generation of ameloblast progenitors in the continuously growing mouse incisor.</a> Development. 137, 3753-3761 (2010).</li><li>Smith, C. E., Warshawsky, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+renewal+in+the+enamel+organ+and+the+odontoblast+layer+of+the+rat+incisor+as+followed+by+radioautography+using+3H-thymidine.">Cellular renewal in the enamel organ and the odontoblast layer of the rat incisor as followed by radioautography using 3H-thymidine.</a> Anat Rec. 183, 523-561 (1975).</li><li>Smith, C. E., Warshawsky, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+cell+turnover+in+the+enamel+organ+of+the+rat+incisor.+Evidence+for+ameloblast+death+immediately+after+enamel+matrix+secretion.">Quantitative analysis of cell turnover in the enamel organ of the rat incisor. Evidence for ameloblast death immediately after enamel matrix secretion.</a> Anat Rec. 187, 63-98 (1977).</li><li>Parsa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+by+FGFR2b+controls+the+regenerative+capacity+of+adult+mouse+incisors.">Signaling by FGFR2b controls the regenerative capacity of adult mouse incisors.</a> Development. 137, 3743-3752 (2010).</li><li>Chang, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-renewal+and+multilineage+differentiation+of+mouse+dental+epithelial+stem+cells.">Self-renewal and multilineage differentiation of mouse dental epithelial stem cells.</a> Stem Cell Res. 11, 990-1002 (2013).</li><li>Biehs, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bmi1+represses+Ink4a/Arf+and+Hox+genes+to+regulate+stem+cells+in+the+rodent+incisor.">Bmi1 represses Ink4a/Arf and Hox genes to regulate stem cells in the rodent incisor.</a> Nat Cell Biol. 15, 846-852 (2013).</li><li>Hwang, W. S., Tonna, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoradiographic+Analysis+of+Labeling+Indices+and+Migration+Rates+of+Cellular+Component+of+Mouse+Incisors+Using+Tritiated+Thymidine+(H3tdr).">Autoradiographic Analysis of Labeling Indices and Migration Rates of Cellular Component of Mouse Incisors Using Tritiated Thymidine (H3tdr).</a> J Dent Res. 44, 42-53 (1965).</li><li>Li, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=E-cadherin+regulates+the+behavior+and+fate+of+epithelial+stem+cells+and+their+progeny+in+the+mouse+incisor.">E-cadherin regulates the behavior and fate of epithelial stem cells and their progeny in the mouse incisor.</a> Dev Biol. 366, 357-366 (2012).</li><li>Smith, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+chemical+events+during+enamel+maturation.">Cellular and chemical events during enamel maturation.</a> Crit Rev Oral Biol Med. 9, 128-161 (1998).</li><li>Lapthanasupkul, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ring1a/b+polycomb+proteins+regulate+the+mesenchymal+stem+cell+niche+in+continuously+growing+incisors.">Ring1a/b polycomb proteins regulate the mesenchymal stem cell niche in continuously growing incisors.</a> Dev Biol. 367, 140-153 (2012).</li><li>Chavez, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+dental+epithelial+stem+cells+from+the+mouse+incisor+with+two-dimensional+and+three-dimensional+platforms.">Characterization of dental epithelial stem cells from the mouse incisor with two-dimensional and three-dimensional platforms.</a> Tissue Eng Part C Methods. 19, 15-24 (2013).</li><li>Kawano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+dental+epithelial+cell+line+(HAT-7)+and+the+cell+differentiation+dependent+on+Notch+signaling+pathway.">Establishment of dental epithelial cell line (HAT-7) and the cell differentiation dependent on Notch signaling pathway.</a> Connect Tissue Res. 43, 409-412 (2002).</li><li>Briggaman, R. A., Abele, D. C., Harris, S. R., Wheeler, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+characterization+of+a+viable+suspension+of+postembryonic+human+epidermal+cells.">Preparation and characterization of a viable suspension of postembryonic human epidermal cells.</a> J Invest Dermatol. 48, 159-168 (1967).</li><li>Fusenig, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+cultivation+of+epidermal+cells+from+embryonic+mouse+skin.">Isolation and cultivation of epidermal cells from embryonic mouse skin.</a> Naturwissenschaften. 58, 421 (1971).</li><li>Fusenig, N. E., Worst, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+epidermal+cell+cultures.+I.+Isolation+and+cultivation+of+epidermal+cells+from+adult+mouse+skin.">Mouse epidermal cell cultures. I. Isolation and cultivation of epidermal cells from adult mouse skin.</a> J Invest Dermatol. 63, 187-193 (1974).</li><li>Rheinwald, J. G., Green, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+cultivation+of+strains+of+human+epidermal+keratinocytes:+the+formation+of+keratinizing+colonies+from+single+cells.">Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells.</a> Cell. 6, 331-343 (1975).</li><li>Barrandon, Y., Green, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+clonal+types+of+keratinocyte+with+different+capacities+for+multiplication.">Three clonal types of keratinocyte with different capacities for multiplication.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 84, 2302-2306 (1987).</li><li>Blanpain, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-renewal,+multipotency,+and+the+existence+of+two+cell+populations+within+an+epithelial+stem+cell+niche.">Self-renewal, multipotency, and the existence of two cell populations within an epithelial stem cell niche.</a> Cell. 118, 635-648 (2004).</li><li>Toma, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+multipotent+adult+stem+cells+from+the+dermis+of+mammalian+skin.">Isolation of multipotent adult stem cells from the dermis of mammalian skin.</a> Nat Cell Biol. 3, 778-784 (2001).</li><li>Nowak, J. A., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+epithelial+stem+cells.">Isolation and culture of epithelial stem cells.</a> Methods Mol Biol. 482, 215-232 (2009).</li><li>Rheinwald, J. G., Green, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+and+the+multiplication+of+cultured+human+epidermal+keratinocytes.">Epidermal growth factor and the multiplication of cultured human epidermal keratinocytes.</a> Nature. 265, 421-424 (1977).</li><li>Brewer, G. J., Torricelli, J. R., Evege, E. K., Price, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+survival+of+hippocampal+neurons+in+B27-supplemented+Neurobasal,+a+new+serum-free+medium+combination.">Optimized survival of hippocampal neurons in B27-supplemented Neurobasal, a new serum-free medium combination.</a> J Neurosci Res. 35, 567-576 (1993).</li><li>Lesuisse, C., Martin, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+culture+of+mouse+cortical+neurons+as+a+model+for+neuronal+development,+aging,+and+death.">Long-term culture of mouse cortical neurons as a model for neuronal development, aging, and death.</a> J Neurobiol. 51, 9-23 (2002).</li><li>Felszeghy, S., Suomalainen, M., Thesleff, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signalling+is+required+for+the+survival+of+epithelial+stem+cells+in+the+continuously+growing+mouse+incisor.">Notch signalling is required for the survival of epithelial stem cells in the continuously growing mouse incisor.</a> Differentiation. 80, 241-248 (2010).</li><li>Fujimori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt/beta-catenin+signaling+in+the+dental+mesenchyme+regulates+incisor+development+by+regulating+Bmp4.">Wnt/beta-catenin signaling in the dental mesenchyme regulates incisor development by regulating Bmp4.</a> Dev Biol. 348, 97-106 (2010).</li><li>Klein, O. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+FGF+signaling+loop+sustains+the+generation+of+differentiated+progeny+from+stem+cells+in+mouse+incisors.">An FGF signaling loop sustains the generation of differentiated progeny from stem cells in mouse incisors.</a> Development. 135, 377-385 (2008).</li></ol>

Los autores no tienen conflictos de intereses a revelar.

Las células epiteliales fueron primero cultivadas con éxito hace más de 40 años 21-24, y más recientemente, el aislamiento con éxito de células madre epiteliales 25-27 ha avanzado nuestro conocimiento de la biología epitelial. Se presenta un protocolo para aislar el DESCs del incisivo ratón adulto, una población relativamente poco estudiado de las células madre que tiene el potencial de producir importantes conocimientos sobre la biología y la formación del esmalte dental. Este protoco...

Una de las características únicas de los vertebrados es la evolución de los dientes. El diente se ha convertido en un importante sistema modelo para muchas áreas de investigación, como las vías moleculares y especializaciones morfológicas relevantes a este órgano se han investigado desde varias perspectivas, incluso por los biólogos del desarrollo y evolución 5. Más recientemente, el campo de la medicina regenerativa ha comenzado a obtener información valiosa utilizando el diente como modelo. En particular, el descubrimiento de las células madre epiteliales dentales ha sido un importante avance 6-13. Todos los roedores tienen incisivos de crecimiento continuo cuyo crecimiento es impulsado por las células madre, por lo que estos dientes un modelo de sistema accesible para estudiar la regulación de células madre adultas. Experimentos de etiquetado en la década de 1970 10,11, seguido de linaje genético experimentos de rastreo 8,9,12,14, han demostrado que DESCs residen en la región proximal del incisivo. El vástagoprogenie de células en el compartimiento epitelial en el lado labial movimiento fuera del nicho putativo, conocido como el bucle de cuello uterino labial (CL), y contribuir a una población de células llamadas de tránsito de amplificación de células (TA) (Figura 1). Específicamente, DESCs residen en el epitelio externo del esmalte (OEE) y retículo estrellado (SR) 8,9,14, y el epitelio interno del esmalte (IEE) da lugar a las células de AT que progresan a través de un número limitado de ciclos celulares y luego mueven distalmente a lo largo de la longitud del incisivo (Figura 1). Los ameloblastos de diferenciación en el incisivo ratón continúan moviéndose distalmente a lo largo del incisivo a un ritmo notable de aproximadamente 350 micras en un solo día 15,16. Mientras se mueven, las células se diferencian en ameloblastos maduros y células estrato intermedio (SI). Después de depositar el espesor completo de la matriz del esmalte, muchos de los ameloblastos someterse a la apoptosis, y las células restantes se encogen en tamaño y regulan maduración del esmalte &lt;sup&gt; 17. El linaje de los otros tipos de células en el labial CL, como el SR, es menos clara, y los datos con respecto a las células madre en el mesénquima de 18 años y en la lingual CL sólo están comenzando a emerger. Utilizando el modelo de ratón incisivo, un número de grupos han trabajado para dilucidar las vías genéticas y los procesos biológicos de células que participan en la renovación de órganos basado en células madre natural. Sin embargo, el labial CL contiene un número relativamente pequeño de células, estimada en aproximadamente el 5,000 por incisivo ratón, lo que hace que el trabajo con células primarias desafiante. Por lo tanto, se han hecho esfuerzos para la cultura y expandir estas células in vitro 6,16,19,20 con el fin de abrir nuevas puertas a los enfoques experimentales que no son alcanzables in vivo. El estudio más reciente ha demostrado que estas células pueden tanto auto-renovarse y diferenciarse en células que expresan amelogenina cuando se cultivan 13. A continuación, describimos y demostrar un método para the cultura fiable y consistente de las células de la labial ratón CL.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="584">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Forceps, size 5</td>
			<td style="width:83px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11251-30</td>
			<td style="width:167px;">FST by Dumont, Dumoxel,&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps Straight, fine, 3.5</td>
			<td style="width:83px;">Roboz</td>
			<td style="width:119px;">RS5070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Razorblades</td>
			<td style="width:83px;">Electron Microscopy Services</td>
			<td style="width:119px;">#71960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scalpel Handle No.3</td>
			<td style="width:83px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Feather Blade No. 15</td>
			<td style="width:83px;">Electron Microscopy Services</td>
			<td style="width:119px;">#72044-15</td>
			<td>Surgical Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:216px;">Collagenase Type-1 filtered</td>
			<td style="width:83px;">Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td style="width:119px;">#4214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Insulin syringe</td>
			<td style="width:83px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">#329424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Accumax</td>
			<td style="width:83px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:119px;">#SCR006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:83px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11320-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">EGF</td>
			<td style="width:83px;">R&#38;D</td>
			<td style="width:119px;">2028-EG-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FGF2</td>
			<td style="width:83px;">R&#38;D</td>
			<td style="width:119px;">233-FB-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">B27 Supplement</td>
			<td style="width:83px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">10889-038</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and culture of dental epithelial stem cells from the adult mouse incisor

La comprensión de los mecanismos celulares y moleculares que subyacen a la regeneración de dientes y la renovación se ha convertido en un tema de gran interés 1-4, y el incisivo ratón proporciona un modelo para estos procesos. Este órgano notable crece continuamente durante toda la vida del animal y genera todos los tipos de células necesarios de piscinas activas de las células madre adultas alojados en el labial (hacia el labio) y lingual (hacia la lengua) (CL) regiones cervical bucle. Sólo las células madre dentales de la labial CL dan lugar a ameloblastos que generan esmalte, la cubierta externa de los dientes, en la superficie labial. Esta formación del esmalte asimétrica permite a la abrasión en la punta de los incisivos, y progenitores y células madre en el incisivo proximal asegurar que los tejidos dentales se reponen constantemente. La capacidad para aislar y cultivar estas células progenitoras o madre in vitro permite su expansión y abre las puertas a numerosos experimentos no alcanzables in vivo, tales como High prueba de rendimiento de los factores de regulación potencial de células madre. A continuación, describimos y demostrar un método fiable y consistente para las células de cultivo de la CL labial del incisivo ratón.

El ratón hemimandíbula comprende un continuo crecimiento de los incisivos y molares tres raíces (Figura 1A). Todos los dientes se componen de la dentina y el esmalte, los dos componentes mineralizados de la corona del diente (Figuras 1a y 1a &#39;). Las casas incisivos dos nichos de células madre llaman la CL labial y lingual CL, y el esmalte se forma exclusivamente en el lado labial (Figura 1A &#39;). DESCs son responsables de la formación del esm...

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Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

El continuo crecimiento de los incisivos ratón proporciona un modelo para el estudio de la renovación de los tejidos dentales a partir de células madre epiteliales dentales (DESCs). Un sistema sólido para la obtención de manera consistente y confiable de estas células de la incisivo y expandir in vitro se informó aquí.

Aislamiento y cultivo de células madre epiteliales dental del adulto Ratón Incisivo

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

isolation-culture-dental-epithelial-stem-cells-from-adult-mouse

Research

JoVE Journal

Biology

15.0K vistas.  University of California, San Francisco.  El continuo crecimiento de los incisivos ratón proporciona un modelo para el estudio de la renovación de los tejidos dentales a partir de células madre epiteliales dentales (DESCs). Un sistema sólido para la obtención de manera consistente y confiable de estas células de la incisivo y expandir in vitro se informó aquí. 