Los autores agradecen a Nina Bispham por su asistencia técnica. Este trabajo fue apoyado por la American Heart Association (12POST11920023), y el NIH (K23DK088833, K23DK087859).

Este protocolo sigue las directrices de la Junta de Revisión Institucional múltiple Colorado (COMIRB). 1. Preparación para las pruebas Sesión <ol><li> Los participantes deben seguir las siguientes restricciones para realizar mediciones más precisas: 12 hr ayuno de comida y cafeína, 12 horas de restricción de ejercicio, 12 horas de restricción de fumar, en su caso,&gt; 4 moderación vida media de los medicamentos si es posible (puede no ser factible en un población, como los pacientes con ERC), y las mujeres pre-menopáusicas deben ser probados en los días 1-7 del ciclo menstrual para reducir al mínimo las influencias hormonales. </li><li> Preparar 500 ml de tampón de disociación por la adición de 2 ml de 0,5 M de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), 0,05 g de heparina (180 unidades USP / mg), y 2,5 g de albúmina de suero bovino a 476,8 ml de solución salina tamponada con fosfato (PBS) a pH de 7,4. Esto se puede almacenar a 4 ° C durante varios meses. </li><li> Encienda el ultrasonido, el ordenador y la hemodinámica no invasivaEstación de trabajo (NIHem, equipo rigidez arterial). Conecte los cables de la salida de la ecografía para la caja del gatillo de la onda R del ordenador. </li></ol> 2. Recopilación y procesamiento de células endoteliales vasculares <ol><li> Una enfermera o un médico entrenado realiza la recolección (pasos 2.2 a 2.5, 2.7) y un investigador recopila y procesa los cables (pasos 2.6, 2.8 a 2.19) </li><li> Prepara el sitio antecubital con un antiséptico tópico, aplicar un torniquete, localizar la vena, y cannulate con un catéter 18 G. Colocar un adaptador de heplock en el extremo de la IV. </li><li> Póngase los guantes estériles y poner paños fenestrados estériles sobre el sitio. </li><li> Coloque 2 J-cables en las cortinas. Tire del arco de la &quot;J&quot; para desenrollar la forma de &quot;J&quot; de los dos cables. </li><li> Destape la heplock y alimentar a J-cable en la vena de aproximadamente 8 cm. Empuje hacia atrás y hacia adelante varias veces antes de retirar el cable. Evite arterial grave por cable. </li><li> Use cortadores de alambre para cortar los cables para que quepan en unTubo cónico de 50 ml que contiene ~ 30 ml de tampón de disociación </li><li> Repita el paso 2.5 para el segundo alambre. </li><li> Repita el paso 2.6 para el segundo alambre. Tubo de retorno al laboratorio húmedo. </li><li> Sus brazos a los cables con un par de fórceps y mantener los cables en el interior del tubo, pero por encima de la solución. Durante 10 min, utilizar una pipeta motorizada para recoger varias veces el tampón de disociación desde el tubo cónico de 50 ml y liberarlo de modo que se ejecuta abajo de la longitud de los cables para enjuagar y vibrar los cables, a continuación, sacuda el exceso de líquido de los cables en el tubo. </li><li> Centrifugar durante 7 minutos a 400 x g y 4 ° C. </li><li> Preparar la solución de formaldehído en tubo de aluminio recubierto mediante la combinación de 100 ml de solución de formaldehído + 900 ml de PBS. </li><li> Lentamente retire el tubo de centrífuga, encender la bomba de vacío, coloque una punta de la pipeta en el extremo de la manguera de succión y dejar ~ 400 ml en el tubo, la aspiración de los demás y sin perturbar el sedimento. </li><li> Cubra con papel aluminio y pipeta de 1 ml de solución de formaldehído enel tubo para fijar la muestra. No volver a suspender. Incubar durante 10 min a temperatura ambiente. </li><li> Preparar 8 diapositivas mediante marcaje con tema y la información visita de estudio y la elaboración de un óvalo en cada portaobjetos con una pluma de Papanicolaou. </li><li> Añadir 15 ml de PBS, volver a suspender, y se centrifuga durante 5 min a 400 xg y 4 º C. </li><li> Repita el paso 2.15, agregar 12 ml de PBS, resuspender y centrifugar durante 6 minutos a 400 x g y 4 ° C. </li><li> Lentamente retire el tubo de centrífuga, encender la bomba de vacío, coloque una punta de la pipeta en el extremo de la manguera de succión y dejar ~ 2 ml en el tubo, la aspiración de los demás y sin perturbar el sedimento. </li><li> Resuspender y pipeta de forma homogénea en las 8 toboganes en las áreas ovales. </li><li> Coloque en la incubadora a 37 ° C durante 5 horas y luego almacenan a -80 ° C hasta que esté listo para su análisis (muestras estarán bien durante muchos años). </li></ol> 3. Evaluación de la fiebre aftosa y BA aPWV <ol><li> Haga que la investigación del cambio sujeto en pantalones cortos desechables y tienen him / su supina mentira en una tranquila tenue, ambiente, clima controlado. </li><li> Coloque el número apropiado de ECG para la ecografía específica y el dispositivo de la rigidez arterial (este procedimiento se utiliza la no invasiva hemodinámica estación de trabajo [NIHem] para medir la rigidez arterial, que requiere 4 electrodos) y manguito de presión arterial en sujetos. </li><li> Después de 20 minutos, comenzará lecturas de la presión arterial. Realizar al menos 3, y repetir hasta que las mediciones están dentro de 5 mmHg, descansando 2 minutos entre cada lectura. </li><li> Comience tonometría palpando el pulso de la arteria braquial y colocar el tonómetro para registrar las formas de onda braquial mediante el programa de software. </li><li> Repita el procedimiento para las arterias radiales, femorales y carótidas. </li><li> Medir la distancia a cada uno de estos sitios de la muesca supersternal utilizando una cinta métrica (braquial, radial y carotídeo) y una regla personalizada / pinza (femoral). </li><li> Calcular la carótida-braquial, la carótida-radial y carotídeo-femoral (aPWV) utilizando el programa de software. </li><li> Lugarmanguito de presión arterial antebrazo distal al olécranon y grabar al menos 10 ciclos cardíacos de imágenes de ultrasonido de la arteria braquial de referencia y medidas de la velocidad del flujo sanguíneo, con un software vascular se establece en el modo de accionar. Un brazo mecánico se puede utilizar para estabilizar la sonda de ultrasonido, si se desea. </li><li> Inflar el antebrazo manguito de presión arterial a 250 mmHg y comenzar temporizador. Instruya a los participantes a permanecer muy quieto. </li><li> Comience velocidades de grabación con un conjunto de software vascular al modo de disparar cuando el temporizador lee 04:45. Suelte el gatillo del manguito a las 5:00 y cambiar el ultrasonido para grabar imágenes en modo B (diámetro) cuando el reloj marca las 05:10. </li><li> Continuar el registro hasta que el reloj marca las 7:00. </li><li> Consigue al menos 10 ciclos cardíacos de imágenes de ultrasonido de la arteria braquial de referencia con un software vascular establecido en el modo de disparo. </li><li> Tomar la presión arterial del sujeto. Si la presión arterial sistólica&gt; 100 mmHg, coloque 0,4 mg de nitroglicerina sublingual debajo de la asignatura y# 39; s lengua y comenzar temporizador, a menos que el paciente tiene otra contraindicación. </li><li> Comience a grabar en modo B (imágenes de diámetro) cuando el reloj marca las 03:00 con el software vascular establecida en modo de disparo. </li><li> Detenga la grabación cuando el reloj marca las 08:00. </li><li> Vigilar la presión arterial hasta que vuelva a la línea de base </li></ol> 4. Preparación de vena umbilical humana células endoteliales (HUVEC) Control Slides <ol><li> Crecer HUVECs al paso 5-6 y ~ 80% de confluencia. </li><li> Tripsinizar con 3 ml de tripsina o lo que sea necesario para el plato / recipiente. </li><li> Neutralizar la tripsina usando un volumen igual de solución de neutralización de tripsina. </li><li> Centrifugar a 200 xg durante ~ 5 min y eliminar la tripsina y la solución de neutralización por vacío. </li><li> Resuspender en 10 ~ ml de PBS para lavar. </li><li> Centrifugar a 200 xg ~ 5 min. Retire PBS. </li><li> Retire PBS y fijar en 1800 l de PBS + 200 l de formaldehído. </li><li> Resuspender en PBS (~ 10 ml). </li><li> Centrifugar a 200 xg ~5 min. Retire PBS, se resuspenden en un volumen apropiado para agregar ~ 200 l por diapositiva. </li><li> Diapositivas Almacenar a -80 ° C hasta que esté listo para su análisis (muestras estarán bien durante muchos años). </li></ol> 5. La tinción de las células vasculares endoteliales <ol><li> Tome diapositivas de -80 ° C congelador y esperar 5 minutos a temperatura ambiente (este procedimiento es para un lote de 10 muestras, incluyendo una diapositiva de control HUVEC). </li><li> Limpie el exceso de agua con una delicada tarea limpiar (no tocar el centro de la diapositiva). </li><li> Re-hidratar las diapositivas mediante la adición de PBS alterado para cada diapositiva y se dejan por 10 min. </li><li> Aunque las diapositivas están de pie, preparar 5% de suero de burro y otras soluciones. <ol><li> Preparar 5% de suero de burro añadiendo 300 l de suero de burro para 5.700 l de PBS alterado (a un pH de 7,4) durante un máximo de 10 diapositivas (aumentar esta cantidad para más). </li><li> Diluir el anticuerpo primario de interés en 1000 l de 5% de suero. Por ejemplo, nitrotirosina y NADPHoxidasa (1:300 y 1:1.500) podrían ser utilizados como marcadores de estrés oxidativo. </li><li> Preparar AF568 secundaria mediante la dilución de 5 l de AF568 a 1500 μll de 5% de suero. </li><li> Preparar VE cadherina mediante la dilución de 2 l de VE cadherina a 1000 l de 5% de suero. </li><li> Preparar AF488 diluyendo 5 l de VE cadherina a 1.000 l de 5% de suero. </li><li> Mantenga AF568, AF488 VE cadherina y bajo la hoja a través de todo el proceso y luego se coloca en eje de balancín de 4 ° C refrigerador mientras se prepara diapositivas. </li></ol></li><li> Después de 10 minutos de rehidratación, toboganes secos con una tarea delicada limpie. </li><li> Añadir 5% de suero de burro durante 60 minutos y coloque un pedazo de lámina de parafina de plástico sobre el área de un círculo para asegurar una cobertura completa de la sustancia química. </li><li> Deseche la película de parafina de plástico y láminas secas con una delicada tarea limpie. No lave. Añadir el anticuerpo primario durante 60 minutos y coloque un pedazo de lámina de parafina de plástico sobre el área de un círculo para asegurarla cobertura completa de la sustancia química. </li><li> Deseche la película de parafina de plástico, enjuague con PBS alterado de botella con atomizador y sumergirse en las columnas de diapositivas durante 5 min. Aunque las diapositivas están en remojo, los trasladan a una habitación oscura. Trabajar en la oscuridad durante todos los pasos restantes. </li><li> Diapositivas secos con Kimwipes, añaden AF568 (anticuerpo secundario) durante 45 minutos y colocar un trozo de película de parafina de plástico sobre el área de un círculo para asegurar una cobertura completa de la sustancia química. Cubra la luz. </li><li> Deseche la película de parafina de plástico en el envase para peligros biológicos. Lavar con PBS alterado de botella con atomizador, y luego sumergirse en las columnas durante 5 min. </li><li> Diapositivas secos con Kimwipes, a continuación, añadir VE cadherina durante 60 minutos y colocar un trozo de película de parafina de plástico sobre el área de un círculo para asegurar una cobertura completa de la sustancia química. Cubra la luz. </li><li> Deseche la película de parafina de plástico en el envase para peligros biológicos. Lavar con PBS alterado de botella con atomizador, y luego sumergirse en las columnas durante 5 min. </li><li> Diapositivas secos conuna tarea delicada limpie, añada AF488 durante 30 minutos y coloque un pedazo de lámina de parafina de plástico sobre el área de un círculo para asegurar una cobertura completa de la sustancia química. Cubra la luz. </li><li> Deseche la película de parafina de plástico en el envase para peligros biológicos. Lavar con PBS alterado de botella con atomizador, y luego sumergirse en las columnas durante 5 min. </li><li> Diapositivas secos con una tarea delicada limpie y deje que se sequen durante 20 min. Cubra la luz. </li><li> Añadir una gota única de fluoroshield medio de montaje con 4 &#39;, clorhidrato de 6-diamino-2-fenilindol (DAPI) a cada diapositiva y cubrir cada uno con una hoja de cubierta. </li><li> Coloque los portaobjetos en 4 ° C refrigerador cubierto con papel de aluminio. Imaging debe ser completado dentro de 48 horas. </li></ol> 6. Imagen y Análisis de las células endoteliales vasculares <ol><li> Preparar microscopio para obtener imágenes de las células endoteliales teñidas de acuerdo a las especificaciones del microscopio específico. Un solo técnico ciego debe analizar cualquier proteína particular de un murciélagoCH de las células. </li><li> Escanear diapositivas de forma sistemática. Identificar las células endoteliales mediante tinción positiva para VE cadherina y confirmar la integridad nuclear por tinción positiva para DAPI. </li><li> Imagen 30 células por diapositiva para su posterior análisis. Repita el proceso para cada diapositiva en el lote de colores, incluyendo el HUVEC. </li><li> Analizar la intensidad de la tinción para el anticuerpo primario de interés usando un software de cualitativa. </li><li> Para minimizar el posible efecto de confusión de las diferencias en la intensidad de la tinción entre las diferentes sesiones de tinción, los valores del informe como proporción de expresión de la proteína en las células endoteliales recogidos a la misma expresión de la proteína en las HUVEC. </li></ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

La obtención de resultados precisos para la fiebre aftosa y BA aPWV requiere la adquisición de imágenes de ultrasonido de alta calidad y formas de onda de presión, respectivamente. Para ello resulta fundamental la formación y el uso adecuado y continuo de cada técnica por parte del operador 44. Además, es fundamental para el control de la mayor cantidad de variables externas que pueden influir en los resultados como sea posible mediante la estandarización de la sesión de pruebas (por e...

La enfermedad renal crónica (ERC) es un importante problema de salud pública que ha alcanzado proporciones de epidemia, afectando ~ 11,5% de la población, sólo en 1 de los Estados Unidos. El riesgo de muerte cardiovascular o un evento cardiovascular en los pacientes con ERC se incrementa de manera significativa en comparación con la población general 2-4. Aunque los pacientes con ERC presentan una alta prevalencia de factores de riesgo cardiovascular tradicionales, esto sólo explica parte de su aumento de la incidencia de enfermedad cardiovascular (ECV) 5. Disfunción vascular es un importante factor de riesgo cardiovascular no tradicionales ganando mayor reconocimiento en el campo de la nefrología 6-9. Mientras que muchos cambios probablemente contribuyen al desarrollo de la disfunción arterial, entre los de mayor preocupación son el desarrollo de la disfunción endotelial vascular, más comúnmente evaluada como la dilatación dependiente del endotelio alterada (EDD), y la rigidez de la Large arterias elásticas 10. Existen diversas técnicas para evaluar EDD y la rigidez de la arteria elástica grande, pero el más comúnmente utilizado son la dilatación mediada por flujo de la arteria braquial fiebre aftosa BA y la velocidad de la onda del pulso aórtico (aPWV), respectivamente. Otra técnica muy utilizada para evaluar EDD es medir el antebrazo respuesta del flujo sanguíneo a los agentes farmacológicos tales como la acetilcolina utilizando pletismografía de oclusión venosa 11,12. Sin embargo, esta metodología requiere la cateterización de la arteria braquial, que es más invasiva que la fiebre aftosa BA y puede ser contraindicado en pacientes con ERC. Una técnica alternativa para evaluar la rigidez arterial es medir la distensibilidad arterial locales (la inversa de la rigidez) de la arteria carótida, aunque esto no es tan ampliamente utilizado o validado con puntos finales clínicos como aPWV 13. Los pacientes con enfermedad renal crónica demuestran tanto deteriorada fiebre aftosa BA 14-16 y una mayor velocidad de la onda del pulso aórtico aPWV 13,17,18, incluso antes de necesitar diálisis. Es importante destacar que desde una perspectiva clínica, tanto de estas medidas no invasivas de la disfunción vascular son predictores independientes de futuros eventos cardiovasculares y la mortalidad en pacientes tanto con ERC 19-21, así como en otras poblaciones 22-26. Estas técnicas se pueden aplicar al estudio de varias poblaciones en situación de riesgo de las enfermedades cardiovasculares, incluidos los pacientes con ERC. Los mecanismos exactos por los que la disfunción arterial se desarrolla en la ERC se conocen por completo; Sin embargo, la reducción de óxido nítrico (NO) biodisponibilidad es un contribuyente fundamental 27-30 y un mecanismo común de ambos impedimentos EDD y el aumento de la rigidez arterial 10,31. En la ERC, el estrés oxidativo se incrementa y contribuye a la reducción en la biodisponibilidad de NO 32-34. El estrés oxidativo se define como biodisponibilidad excesiva de especies reactivas de oxígeno (ROS) relativos a las defensas antioxidantes. Estímulos fisiológicos, incLuding señalización inflamatoria, promover sistemas de enzimas oxidantes para producir ROS, incluyendo el anión superóxido (O 2 ● -) (por ejemplo, la enzima oxidante NADPH oxidasa.) 35. Producción de superóxido conduce en última instancia a reduce la biodisponibilidad de óxido nítrico (NO). Deterioro de la biodisponibilidad de NO puede a su vez contribuir al desarrollo de la ERC, como la disfunción endotelial es un predictor independiente de la ERC incidente 36. Esto es consistente con los datos en animales que demuestran que la inhibición de la eNOS induce hipertensión (sistémica y glomerular), isquemia glomerular, glomeruloesclerosis y daño túbulo-intersticial 37. De hecho, parece necesario reducir la biodisponibilidad de NO para el desarrollo y la progresión de la enfermedad renal experimental que imita la enfermedad humana, lo que sugiere un papel clave para la disfunción endotelial en la enfermedad renal crónica humana 38,39. Marcadores de estrés oxidativo vascular pueden ser evaluados en vascular células endoteliales recolectados de sujetos humanos de investigación, utilizando una técnica desarrollada originalmente por Colombo et al. 40 y modificado Seals et al 41-43. Uso de 2 J-alambres estériles, las células se recogieron de la vena antecubital, recuperado, fijo, y más tarde identificado positivamente como células endoteliales y se analizaron para la expresión de proteínas de interés usando inmunofluorescencia. Ofrecemos aquí una discusión de esta metodología que se puede utilizar para: a) la medida de la fiebre aftosa BA; b) medir aPWV; c) medir endotelial vascular expresión de la proteína celular de los marcadores de estrés oxidativo. La atención se centra en los pacientes con ERC, que no requieren diálisis crónica.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:736px;" width="736">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:109px;">Company</td>
			<td style="width:244px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">J-wire</td>
			<td style="width:109px;">St. Jude</td>
			<td style="width:244px;">404584</td>
			<td>2 per collection</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Disposable shorts (MediShorts)</td>
			<td>Quick Medical&#160;</td>
			<td>4507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Non-invasive hemodynamic workstation (NIHem)</td>
			<td style="width:109px;">Cardiovascualr Engineering</td>
			<td style="width:244px;">N/A</td>
			<td>Includes custom ruler.&#160; An alternate system is the Sphygmocor</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Ultrasound</td>
			<td style="width:109px;">G.E.</td>
			<td>Model: Vivid7 Dimension</td>
			<td>We use a G.E., but there are many companies and models</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Vascular software (Vascular Imager)&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Medical Imaging Applications</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">R-wave trigger box</td>
			<td style="width:109px;">Medical Imaging Applications</td>
			<td>N/A</td>
			<td>custom made</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Rapid Cuff Inflation System</td>
			<td style="width:109px;">Hokanson</td>
			<td style="width:244px;">Model: Hokanson E20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Forearm blood pressure cuff</td>
			<td style="width:109px;">Hokanson</td>
			<td style="width:244px;">N/A</td>
			<td>custom cuff with 6.5 x 34 cm bladder&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">HUVECs</td>
			<td style="width:109px;">Invitrogren&#160;</td>
			<td>C-015-5C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Donkey serum</td>
			<td style="width:109px;">Jackson&#160;</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:216px;">Pap pen</td>
			<td style="width:109px;">Research Products International</td>
			<td>195505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">VE Cadherin</td>
			<td style="width:109px;">Abcam</td>
			<td style="width:244px;">ab33168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">AF568</td>
			<td style="width:109px;">Life Technologies</td>
			<td>A11011</td>
			<td>depends on specifications of microscpe&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">AF488</td>
			<td style="width:109px;">Life Technologies</td>
			<td>A11034</td>
			<td>depends on specifications of microscpe&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Nitrotyrosine antibody&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Abcam</td>
			<td>ab7048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">NADPH oxidase antibody</td>
			<td>Upstate</td>
			<td>07-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">DAPI&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Vector</td>
			<td style="width:244px;">H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Delicate task wipe (Kimwipe)&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Fisher Scientific</td>
			<td>06-666-A&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Plastic paraffin film (parafilm)&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Confocal microscope&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Olympus&#160;</td>
			<td>Model: FV1000 FCS/RICS</td>
			<td>many options exist&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of vascular function in patients with chronic kidney disease

Los pacientes con enfermedad renal crónica (ERC) han aumentado significativamente el riesgo de enfermedad cardiovascular (ECV) en comparación con la población general, lo que se explica sólo en parte por factores de riesgo de ECV tradicionales. Disfunción vascular es un factor de riesgo no tradicional importante, caracterizado por la disfunción endotelial vascular (más comúnmente evaluado como deteriorado dependiente del endotelio dilatación [EDD]) y la rigidez de las grandes arterias elásticas. Si bien existen varias técnicas para evaluar EDD y la rigidez de la arteria elástica grande, la más comúnmente utilizados son la dilatación de la arteria braquial mediada por flujo (FMD BA) y la velocidad de la onda del pulso aórtico (aPWV), respectivamente. Ambas medidas no invasivas de la disfunción vascular son predictores independientes de eventos cardiovasculares futuros en pacientes con y sin enfermedad renal. Los pacientes con enfermedad renal crónica demuestran tanto deteriorada fiebre aftosa BA, y el aumento de aPWV. Aunque el mecanismo exacto por el cual deve disfunción vascularlops en la ERC se conocen por completo, un aumento del estrés oxidativo y la consiguiente reducción en el óxido nítrico (NO) la biodisponibilidad son contribuyentes importantes. Cambios celulares en el estrés oxidativo se pueden evaluar mediante la recopilación de las células endoteliales vasculares de la vena antecubital y la medición de la expresión de proteínas de los marcadores de estrés oxidativo utilizando inmunofluorescencia. Ofrecemos aquí una discusión de estos métodos para medir la fiebre aftosa BA, aPWV y vascular endotelial la expresión de proteínas de la célula.

Fiebre aftosa BA se cuantifica como el cambio máximo en el diámetro de la arteria braquial siguiente hiperemia reactiva. Por lo tanto, el diámetro en reposo se compara con el diámetro tras el final de un período de 5 min manguito de presión arterial de oclusión (Figura 1). El panel A muestra una imagen de ultrasonidos representativa de la arteria braquial, y el panel B muestra un gráfico del cambio de la onda R cerrada en diámetro desde la liberación del manguito a 2 min después, t...

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Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

El grado de disfunción vascular y contribuir mecanismos fisiológicos se puede evaluar en los pacientes con enfermedad renal crónica mediante la medición de la dilatación de la arteria braquial mediada por flujo, velocidad de onda de pulso aórtica y vascular endotelial la expresión de proteínas de la célula.

Evaluación de la función vascular en pacientes con enfermedad renal crónica

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

assessment-vascular-function-patients-with-chronic-kidney

Research

JoVE Journal

Medicine

16.1K vistas.  University of Colorado, Denver.  El grado de disfunción vascular y contribuir mecanismos fisiológicos se puede evaluar en los pacientes con enfermedad renal crónica mediante la medición de la dilatación de la arteria braquial mediada por flujo, velocidad de onda de pulso aórtica y vascular endotelial la expresión de proteínas de la célula. 

Video: Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

Examining the Characteristics of Episodic Memory using Event-related Potentials in Patients with Alzheimer's Disease

Our laboratory uses event-related EEG potentials (ERPs) to understand and support behavioral investigations of episodic memory in patients with amnestic mild cognitive impairment (aMCI) and Alzheimer's disease (AD). Whereas behavioral data inform us about the patients' performance, ERPs allow us to record discrete changes in brain activity. Further, ERPs can give us insight into the onset, duration, and interaction of independent cognitive processes associated with memory retrieval. In patient populations, these types of studies are used to examine which aspects of memory are impaired and which remain relatively intact compared to a control population. The methodology for collecting ERP data from a vulnerable patient population while these participants perform a recognition memory task is reviewed. This protocol includes participant preparation, quality assurance, data acquisition, and data analysis. In addition to basic setup and acquisition, we will also demonstrate localization techniques to obtain greater spatial resolution and source localization using high-density (128 channel) electrode arrays.

Examining the Characteristics of Episodic Memory using Event-related Potentials in Patients with Alzheimer&#039;s Disease

The methodology for collecting high-density event-related potential data while patients with Alzheimer's disease perform a recognition memory task is reviewed. This protocol will include subject preparation, quality assurance, data acquisition, and data analysis.

Examinar las características de la memoria episódica con potenciales relacionados con eventos en pacientes con enfermedad de Alzheimer

Our laboratory uses event-related EEG potentials (ERPs) to understand and support behavioral investigations of episodic memory in patients with amnestic ...

Investigación

Medicina

Spectral Karyotyping to Study Chromosome Abnormalities in Humans and Mice with Polycystic Kidney Disease

Conventional method to identify and classify individual chromosomes depends on the unique banding pattern of each chromosome in a specific species being analyzed 1, 2. This classical banding technique, however, is not reliable in identifying complex chromosomal aberrations such as those associated with cancer. To overcome the limitations of the banding technique, Spectral Karyotyping (SKY) is introduced to provide much reliable information on chromosome abnormalities.
SKY is a multicolor fluorescence in-situ hybridization (FISH) technique to detect metaphase chromosomes with spectral microscope 3, 4. SKY has been proven to be a valuable tool for the cytogenetic analysis of a broad range of chromosome abnormalities associated with a large number of genetic diseases and malignancies 5, 6. SKY involves the use of multicolor fluorescently-labelled DNA probes prepared from the degenerate oligonucleotide primers by PCR. Thus, every chromosome has a unique spectral color after in-situ hybridization with probes, which are differentially labelled with a mixture of fluorescent dyes (Rhodamine, Texas Red, Cy5, FITC and Cy5.5). The probes used for SKY consist of up to 55 chromosome specific probes 7-10.
The procedure for SKY involves several steps (Figure 1). SKY requires the availability of cells with high mitotic index from normal or diseased tissue or blood. The chromosomes of a single cell from either a freshly isolated primary cell or a cell line are spread on a glass slide. This chromosome spread is labeled with a different combination of fluorescent dyes specific for each chromosome. For probe detection and image acquisition,the spectral imaging system consists of sagnac interferometer and a CCD camera. This allows measurement of the visible light spectrum emitted from the sample and to acquire a spectral image from individual chromosomes. HiSKY, the software used to analyze the results of the captured images, provides an easy identification of chromosome anomalies. The end result is a metaphase and a karyotype classification image, in which each pair of chromosomes has a distinct color (Figure 2). This allows easy identification of chromosome identities and translocations. For more details, please visit Applied Spectral Imaging website (<a href="http://www.spectral-imaging.com/" target="_blank">http://www.spectral-imaging.com/</a>).
SKY was recently used for an identification of chromosome segregation defects and chromosome abnormalities in humans and mice with Autosomal Dominant Polycystic Kidney Disease (ADPKD), a genetic disease characterized by dysfunction in primary cilia 11-13. Using this technique, we demonstrated the presence of abnormal chromosome segregation and chromosomal defects in ADPKD patients and mouse models 14. Further analyses using SKY not only allowed us to identify chromosomal number and identity, but also to accurately detect very complex chromosomal aberrations such as chromosome deletions and translocations (Figure 2).

Spectral Karyotyping (SKY) is an advanced cytogenetics technique to identify genomic and chromosomal aberrations. This technique takes advantage of chromosome painting probes, which allow classification of all chromosomes. SKY can also identify complex chromosome aberrations and segregation defects in mice and humans with various diseases, including polycystic kidney disease.

Cariotipo espectral para el Estudio de anomalías cromosómicas en humanos y ratones con la enfermedad renal poliquística

Conventional method to identify and classify individual chromosomes depends on the unique banding pattern of each chromosome in a specific species being ...

Utilizing Repetitive Transcranial Magnetic Stimulation to Improve Language Function in Stroke Patients with Chronic Non-fluent Aphasia

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been shown to significantly improve language function in patients with non-fluent aphasia1. In this experiment, we demonstrate the administration of low-frequency repetitive TMS (rTMS) to an optimal stimulation site in the right hemisphere in patients with chronic non-fluent aphasia. A battery of standardized language measures is administered in order to assess baseline performance. Patients are subsequently randomized to either receive real rTMS or initial sham stimulation. Patients in the real stimulation undergo a site-finding phase, comprised of a series of six rTMS sessions administered over five days; stimulation is delivered to a different site in the right frontal lobe during each of these sessions. Each site-finding session consists of 600 pulses of 1 Hz rTMS, preceded and followed by a picture-naming task. By comparing the degree of transient change in naming ability elicited by stimulation of candidate sites, we are able to locate the area of optimal response for each individual patient. We then administer rTMS to this site during the treatment phase. During treatment, patients undergo a total of ten days of stimulation over the span of two weeks; each session is comprised of 20 min of 1 Hz rTMS delivered at 90% resting motor threshold. Stimulation is paired with an fMRI-naming task on the first and last days of treatment. After the treatment phase is complete, the language battery obtained at baseline is repeated two and six months following stimulation in order to identify rTMS-induced changes in performance. The fMRI-naming task is also repeated two and six months following treatment. Patients who are randomized to the sham arm of the study undergo sham site-finding, sham treatment, fMRI-naming studies, and repeat language testing two months after completing sham treatment. Sham patients then cross over into the real stimulation arm, completing real site-finding, real treatment, fMRI, and two- and six-month post-stimulation language testing.

We explore the use of repetitive transcranial magnetic stimulation (rTMS) to improve language abilities in patients with chronic stroke and non-fluent aphasia. After identifying a site in the right frontal gyrus for each patient that responds optimally to stimulation, we target this site during ten days of rTMS treatment.

La utilización de Estimulación Magnética Transcraneal Repetitiva para mejorar la función del lenguaje en pacientes con accidente cerebrovascular crónico con afasia no fluente

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been shown to significantly improve language function in patients with non-fluent aphasia1. In this ...

5/6th Nephrectomy in Combination with High Salt Diet and Nitric Oxide Synthase Inhibition to Induce Chronic Kidney Disease in the Lewis Rat

Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements of homeostasis, integrative animal models are necessary to study development and progression of CKD. To study development of CKD and novel therapeutic interventions in CKD, we use the 5/6th nephrectomy ablation model, a well known experimental model of progressive renal disease, resembling several aspects of human CKD. The gross reduction in renal mass causes progressive glomerular and tubulo-interstitial injury, loss of remnant nephrons and development of systemic and glomerular hypertension. It is also associated with progressive intrarenal capillary loss, inflammation and glomerulosclerosis. Risk factors for CKD invariably impact on endothelial function. To mimic this, we combine removal of 5/6th of renal mass with nitric oxide (NO) depletion and a high salt diet. After arrival and acclimatization, animals receive a NO synthase inhibitor (NG-nitro-L-Arginine) (L-NNA) supplemented to drinking water (20 mg/L) for a period of 4 weeks, followed by right sided uninephrectomy. One week later, a subtotal nephrectomy (SNX) is performed on the left side. After SNX, animals are allowed to recover for two days followed by LNNA in drinking water (20 mg/L) for a further period of 4 weeks. A high salt diet (6%), supplemented in ground chow (see time line Figure 1), is continued throughout the experiment. Progression of renal failure is followed over time by measuring plasma urea, systolic blood pressure and proteinuria. By six weeks after SNX, renal failure has developed. Renal function is measured using 'gold standard' inulin and para-amino hippuric acid (PAH) clearance technology. This model of CKD is characterized by a reduction in glomerular filtration rate (GFR) and effective renal plasma flow (ERPF), hypertension (systolic blood pressure&gt;150 mmHg), proteinuria (&gt; 50 mg/24 hr) and mild uremia (&gt;10 mM). Histological features include tubulo-interstitial damage reflected by inflammation, tubular atrophy and fibrosis and focal glomerulosclerosis leading to massive reduction of healthy glomeruli within the remnant population (&lt;10%). Follow-up until 12 weeks after SNX shows further progression of CKD.

A two-stage method to establish chronic kidney disease (CKD) in the Lewis rat by surgically removing 5/6th of renal mass is described. Combination of the surgical procedure, NOS-inhibition and a high-salt diet leads to a model resembling human CKD, allowing study of causal mechanisms and development of novel therapeutic interventions.

5/6th nefrectomía en combinación con dieta alta en sal y el óxido nítrico sintasa inhibición para inducir la enfermedad renal crónica en la rata Lewis

Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements ...

Computerized Dynamic Posturography for Postural Control Assessment in Patients with Intermittent Claudication

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic conditions. As part of a diagnostic assessment, the early detection of postural deficits is important so that appropriate and targeted interventions can be prescribed. The Sensory Organization Test (SOT) on the EquiTest determines an individual&#39;s use of the sensory systems (somatosensory, visual, and vestibular) that are responsible for postural control. Somatosensory and visual input are altered by the calibrated sway-referenced support surface and visual surround, which move in the anterior-posterior direction in response to the individual&#39;s postural sway. This creates a conflicting sensory experience. The Motor Control Test (MCT) challenges postural control by creating unexpected postural disturbances in the form of backwards and forwards translations. The translations are graded in magnitude and the time to recover from the perturbation is computed.
Intermittent claudication, the most common symptom of peripheral arterial disease, is characterized by a cramping pain in the lower limbs and caused by muscle ischemia secondary to reduced blood flow to working muscles during physical exertion. Claudicants often display poor balance, making them susceptible to falls and activity avoidance. The Ankle Brachial Pressure Index (ABPI) is a noninvasive method for indicating the presence of peripheral arterial disease and intermittent claudication, a common symptom in the lower extremities. ABPI is measured as the highest systolic pressure from either the dorsalis pedis or posterior tibial artery divided by the highest brachial artery systolic pressure from either arm. This paper will focus on the use of computerized dynamic posturography in the assessment of balance in claudicants.

Individuals with intermittent claudication exhibit poor balance compared to healthy controls. Computerized dynamic posturography is an objective method for measuring an individual's postural responses to balance disturbances. This provides an objective reflection of the person&#x2019;s ability to respond to situations under which sensory stimuli are altered and unexpected perturbations occur.

Posturografía dinámica computarizada para la evaluación de control postural en pacientes con claudicación intermitente

Computerized dynamic posturography with the EquiTest is an objective technique for measuring postural strategies under challenging static and dynamic ...

Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension and Assessment of Right Ventricular Function in the Piglet

An original piglet model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) associated with chronic Right Ventricular (RV) dysfunction is described. Pulmonary Hypertension (PH) was induced in 3-week-old piglets by a progressive obstruction of the pulmonary vascular bed. A ligation of the left Pulmonary Artery (PA) was performed first through a mini-thoracotomy. Second, weekly embolizations of the right lower pulmonary lobe were done under fluoroscopic guidance with n-butyl-2-cyanoacrylate during 5 weeks. Mean Pulmonary Arterial Pressure (mPAP) measured by ritght heart catheterism, increased progressively, as well as Right Atrial pressure and Pulmonary Vascular Resistances (PVR) after 5 weeks compared to sham animals. Right Ventricular (RV) structural and functional remodeling were assessed by transthoracic echocardiography (RV diameters, RV wall thickness, RV systolic function). RV elastance and RV-pulmonary coupling were assessed by Pressure-Volume Loops (PVL) analysis with conductance method. Histologic study of the lung and the right ventricle were also performed. Molecular analyses on RV fresh tissues could be performed through repeated transcutaneous endomyocardial biopsies. Pulmonary microvascular disease in obstructed and unobstructed territories was studied from lung biopsies using molecular analyses and pathology. Furthermore, the reliability and the reproducibility was associated with a range of PH severity in animals. Most aspects of the human CTEPH disease were reproduced in this model, which allows new perspectives for the understanding of the underlying mechanisms (mitochondria, inflammation) and new therapeutic approaches (targeted, cellular or gene therapies) of the overloaded right ventricle but also pulmonary microvascular disease.

Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) and Right Ventricular (RV) dysfunction were induced in piglets by progressive obstruction of the pulmonary arteries. Consequences were remarkably similar to those observed in CTEPH patients. This animal model would be a very useful tool for pathophysiology and therapeutic experiments on CTEPH and RV failure.

Hipertensión pulmonar tromboembólica crónica y Evaluación de la función ventricular derecha en el Piglet

An original piglet model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) associated with chronic Right Ventricular (RV) dysfunction is described. ...

Assessment of Kidney Function in Mouse Models of Glomerular Disease

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function in diabetic nephropathy and podocyte-specific VEGF-A knock-out mice; therefore, this protocol describes the full kidney work-up used in our lab to assess these mouse models of glomerular disease, enabling a vast amount of information regarding kidney and glomerular function to be obtained from a single mouse. In comparison to alternative methods presented in the literature to assess glomerular function, the use of the method outlined in this paper enables the glomerular phenotype to be fully evaluated from multiple aspects. By using this method, the researcher can determine the kidney phenotype of the model and assess the mechanism as to why the phenotype develops. This vital information on the mechanism of disease is required when examining potential therapeutic avenues in these models. The methods allow for detailed functional assessment of the glomerular filtration barrier through measurement of the urinary albumin creatinine ratio and individual glomerular water permeability, as well as both structural and ultra-structural examination using the Periodic Acid Schiff stain and electron microscopy. Furthermore, analysis of the genes dysregulated at the mRNA and protein level enables mechanistic analysis of glomerular function. This protocol outlines the generic but adaptable methods that can be applied to all mouse models of glomerular disease.

This protocol describes a full kidney work-up that should be carried out in mouse models of glomerular disease. The methods allow for detailed functional, structural, and mechanistic analysis of glomerular function, which can be applied to all mouse models of glomerular disease.

Evaluación de la función renal en modelos de ratón de la enfermedad Glomerular

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function ...

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

Patients with severe traumatic brain injury (sTBI) have difficulty knowing whether they are accurately expressing their thoughts and emotions because of disorders of consciousness, disrupted higher brain function, and verbal disturbances. As a consequence of an insufficient ability to communicate, objective evaluations are needed from family members, medical staff, and caregivers. One such evaluation is the assessment of functioning brain areas. Recently, multimodal brain imaging has been used to explore the function of damaged brain areas. [18F]-fluorodeoxyglucose positron emission tomography-computed tomography ([18F]FDG-PET/CT) is a successful tool for examining brain function. However, the assessment of brain glucose metabolism based on [18F]FDG-PET/CT is not standardized and depends on several varying parameters, as well as the patient&#39;s condition. Here, we describe a series of semiquantitative assessment protocols for a region-of-interest (ROI) image analysis using self-produced [18F]FDG tracers in patients with sTBI. The protocol focuses on screening the participants, preparing the [18F]FDG tracer in the hot lab, scheduling the acquisition of [18F]FDG-PET/CT brain images, and measuring glucose metabolism using the ROI analysis from a targeted brain area.

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

[18F]-fluorodeoxyglucose (FDG) positron emission tomography-computed tomography is useful for studying glucose metabolism related to brain function. Here, we present a protocol for an [18F]FDG tracer set-up and semiquantitative assessment of the region-of-interest analysis for targeted brain areas associated with clinical manifestations in patients with severe traumatic brain injury.

Evaluación semicuantitativa usando [18F] FDG trazador en pacientes con lesión cerebral grave

Patients with severe traumatic brain injury (sTBI) have difficulty knowing whether they are accurately expressing their thoughts and emotions because of ...

Interventional Diagnostic Procedure: A Practical Guide for the Assessment of Coronary Vascular Function

Approximately 40% of patients undergoing invasive coronary angiography for investigation of angina are found to have no obstructive coronary artery disease (ANOCA). Abnormal coronary function underlies coronary vasomotion syndromes including coronary endothelial dysfunction, microvascular angina, vasospastic angina, post-PCI angina and myocardial infarction with no obstructive coronary arteries (MINOCA). Each of these endotypes are distinct subgroups, characterized by specific disease mechanisms. Diagnostic criteria and linked therapy for these conditions are now established by expert consensus and clinical guidelines.
Coronary function tests are performed as an adjunctive interventional diagnostic procedure (IDP) in appropriately selected patients during coronary angiography. This aids differentiation of patients according to endotype. The IDP includes two distinct components: a diagnostic guidewire test and a pharmacological coronary reactivity test. The tests last approximately 5 minutes for the former and 10-15 minutes for the latter. Patient safety and staff education are key.
The diagnostic guidewire test measures parameters of coronary flow limitation (fractional flow reserve [FFR], coronary flow reserve [CFR], microvascular resistance [index of microvascular resistance (IMR)], basal resistance index, and vasodilator function [CFR, resistive reserve ratio (RRR)]).
The pharmacological coronary reactivity test measures the vasodilator potential and propensity to vasospasm of both the main coronary arteries and the micro-vessels. It involves intra-coronary infusion of acetylcholine and glyceryl trinitrate (GTN). Acetylcholine is not licensed for parenteral use and is therefore prescribed on a named-patient basis. Vasodilatation is the normal, expected response to infusion of physiological concentrations of acetylcholine. Vascular spasm represents an abnormal response, which supports the diagnosis of vasospastic angina.
The purpose of this practical guide is to provide information on the preparation and administration of the IDP in clinical practice. It discusses some key preparation and safety considerations, as well as tips for procedural success. The IDP supports stratified medicine for a personalized approach to health and wellbeing.

The purpose of this practical guide is to provide information on the preparation and administration of an interventional diagnostic procedure in clinical practice. It discusses some key preparation and safety considerations, as well as tips for procedural success.

Procedimiento de diagnóstico intervencionista: una guía práctica para la evaluación de la función vascular coronaria

Approximately 40% of patients undergoing invasive coronary angiography for investigation of angina are found to have no obstructive coronary artery ...

Muscle Function Obtained with Motion Mode Ultrasound and Surface Electromyography during Core Endurance Exercise

Motion mode (M-mode) ultrasound allows researchers and clinicians to measure the change of muscle thickness across time. Muscle thickness can be measured between fascial borders at a given time point during an exercise. This selected time point produces a one-dimensional image resulting in real-time, live observation of anatomy. Ultrasound used during functional movement can be referred to as dynamic ultrasound; this is feasible and reliable with the use of a linear transducer, elastic belt, and foam block to secure consistent transducer placement. The lateral abdominal wall is commonly investigated using ultrasound due to the overlapping nature of the muscles. Surface electromyography (sEMG) can complement M-mode ultrasound imaging because it measures the electrical representation of muscle activation. There is minimal evidence using M-mode ultrasound and sEMG simultaneously during core exercise. Exercises that challenge the core musculature involve both isometric holds (e.g., side plank), as well as oscillatory extremity movements (e.g., dead bug). In this study, both instruments will be used simultaneously to measure core muscle function during exercise. Ultrasound measurements will be obtained using a linear transducer and ultrasound unit, and sEMG measurements will be acquired from a wireless sEMG system. To make comparisons between participants and exercises, normalization methods using static, exercise starting positions for both instruments will be used. An activation ratio will be used for ultrasound and calculated by dividing the contracted thickness (thickness during a time point of exercise) by the rested (starting position) thickness. Muscle thickness will be measured in centimeters from the superior inferior fascial border to inferior superior fascial border. These methods aim to offer an innovative and practical measurement of muscle function with M-mode ultrasound and sEMG during core endurance exercises.

This protocol uses motion mode ultrasound and surface electromyography simultaneously to measure muscle function of the core. Muscle thickness and activation of the local stabilizers (e.g., transverse abdominis, internal oblique) and global movers (e.g., external oblique) is achievable during specific time points of the side plank and dead bug exercises.

Función muscular obtenida con ultrasonido de modo de movimiento y electromiografía de superficie durante el ejercicio de resistencia central

Motion mode (M-mode) ultrasound allows researchers and clinicians to measure the change of muscle thickness across time. Muscle thickness can be measured ...