The authors would like to thank Prof. Steven Nutt and Mr. Yuzheng Zhang for assistant with the Focus Ion Beam, and the Center for Electron Microscopy and Microanalysis (CEMMA) at USC for electron microscopy. Research was supported by NIH-NIDCR grants; DE-13414 and DE-020099 to J.M.O.

Los molares humanos se extrajeron siguiendo los procedimientos estándar para la extracción de la Escuela Ostrow de Odontología de la Universidad del Sur de California y manipulados con la aprobación de la Junta de Revisión Institucional. 1. Preparación del Diente grabado con ácido, Slice <ol><li> Seleccionar un tercer molar humano sin ningún tipo de caries restaurados. </li><li> Retire la parte de la raíz del molar, y cortar la corona del molar longitudinalmente en rodajas de 2 mm de grosor utilizando una sierra de diamante de baja velocidad refrigerado por agua. Ultrasonidos limpiar estas rodajas durante 2 minutos, y luego enjuague con agua desionizada 3 veces. </li><li> Para simular lesiones erosivas, grabar las rodajas de dientes con un 30% de ácido fosfórico durante 30 segundos luego enjuagar inmediatamente con agua desionizada. </li><li> Ultrasonidos limpiar las rodajas grabadas durante 2 minutos, y luego enjuague con agua desionizada 3 veces. </li></ol> 2. Preparación de amelogenina-quitosano hidrogel <ol><li> PREPARACIÓNn de la solución madre quitosano <ol><li> Disolver 1% (w / v) de quitosano (peso molecular medio, 75-85% desacetilado) en una solución al 1% (v / v) de ácido acético seguido de agitación a 80 ° CO / N. </li><li> Después de enfriar la solución a TA, se filtra la solución de quitosano utilizando un filtro de 0,45 micras. Ajustar el valor de pH a 5,0 mediante la adición de solución 1 M de NaOH. </li></ol></li><li> Preparación de calcio y la solución de stock de fosfato (0,1 M) <ol><li> Pesar de cloruro de calcio (CaCl2) y preparar una solución de 0,1 M, a continuación, mezclar usando un vórtice hasta que la solución es clara. Ajustar el valor de pH a 11 mediante la adición de solución 1 M de NaOH. </li><li> Pesar de fosfato de sodio dibásico (Na 2 HPO 4) y preparar una solución de 0,1 M, a continuación, mezclar usando un vórtice hasta que la solución es clara. </li></ol></li><li> Expresión y purificación de amelogenina recombinante 17-18 La amelogenina recombinante de longitud completa de porcino (rP172) utilizado aquí tiene 172 aminoácidos y es un análogo de la plenaDe longitud P173 porcina natural, pero que carece de la metionina N-terminal, así como un grupo fosfato en Ser16 18. <ol><li> Añadir 20 g de caldo de Lisogenia (LB) polvo de agar en 500 ml de agua desionizada, la solución en autoclave a 121 ° C (ajuste de líquido) durante 20 min. Deje enfriar el agar a ~ 55 ° C, añadir ampicilina (100 mg / ml) en solución de agar. </li><li> Transferir la solución de agar a placas de Petri, que cada plato fresco hasta que esté sólido, y luego la vuelta para evitar la condensación en el agar. Placas, almacenarlas en bolsas de plástico a 4 ° C. </li><li> Racha de la placa de agar LB con células recombinantes (E. coli-FC21) de la solución madre en glicerol (-80 ° C). Las placas se incuban O / N a 37 ° C. </li><li> Preparar 50 ml de medio NZCYM y esterilizar en autoclave los medios de comunicación a 121 ° C durante 30 min. Permita que el medio se enfríe, añadir 50 l de 100 mg / ml de ampicilina a 50 ml de medio. </li><li> Inocular una sola colonia de la placa de agar LB en los medios de comunicación NZCYM 50ml suplementado con ampicillpulg incuban las células O / N en una incubadora de agitación a 37 º C. </li><li> Preparar 1 l de medio NZCYM y los medios de comunicación en autoclave a 121 ° C durante 30 min. Añadir 1 ml de 100 mg / ml de ampicilina a 1000 ml de medio. Tome una densidad óptica (DO) como blanco utilizando un espectrofotómetro UV-Vis. NOTA: No se deshaga de esto después de la primera lectura. </li><li> Inocular 10 ml de cultivo celular de la etapa 2.3.5 en 1000 ml de medios de comunicación desde el paso 2.3.6. Lea la densidad óptica a 595 nm inmediatamente después de la inoculación. Tome la lectura de la densidad óptica periódicamente para hacer un seguimiento del crecimiento. NOTA: Lea el blanco cada vez que se toma la OD. </li><li> Inducir con 700 l de isopropil β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG, 1 M) cuando el crecimiento bacteriano llega a alrededor de 0,75 ~ 0,8 OD a 595 nm. </li><li> Recoger las células cuando el OD alcanza 1,1. Verter el contenido del matraz a 6 botellas de plástico. Balanzas y pesar las botellas antes de utilizar la centrífuga. Centrifugar durante 20 minutos a 8554 xga 4 º C.Mantenga el sedimento celular en el -20 ° CO / N. </li><li> Saque los sedimentos celulares y combinarlos en un tubo de 50 ml. Añadir 3,5 ml de HCl de guanidina 4M por l de fermentación. Veces Sonicar 2-3 sobre hielo, 30 segundos cada vez, con intervalos de 1 min. </li><li> Hacer diluciones 6x de volumen de células con ácido fórmico al 0,5% y dejar que se revuelva en la cámara fría durante 2 horas. Centrifugar durante 30 min, 8554 xga 4 º C. Mantenga el sobrenadante. Añadir sulfato de amonio saturado al 20% utilizando la solución madre saturadas y revuelo en la sala fría, O / N. </li><li> Centrifugar durante 30 min, 8.554 xg a 4 ° C y mantener el sedimento. Reconstituir los pellets en 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA), la carga en una columna C4 (10 x 250 mm, 5 micras), y fraccionar utilizando un gradiente lineal de A = 0,1% de TFA y B = 60% de acetonitrilo en TFA, en un tasa de 1,5 ml · min -1 fluir. </li><li> Congelar la solución de proteína en hielo seco y liofilizar la congelada muestra O / N. </li></ol></li><li> Preparación de amelogenina-quitosano (CS-AMEL) hydrogEL (Figura 1A) <ol><li> Añadir 200 g de rp172 en un tubo que contiene 960 l de solución de quitosano al 1%, a continuación, mezclar usando un vórtice hasta que la solución es clara. </li><li> Añadir 25 l de solución de CaCl M 0,1 2 seguido por 15 l de 0,1 M de Na 2 HPO 4 solución a la solución de quitosano que contiene amelogenina-, a continuación, mezclar usando un vórtice durante 5 min. </li><li> Ajustar el pH de la solución de CS-AMEL a 6,5 ​​por adición cuidadosa de solución 1 M de NaOH. CS-AMEL hidrogel formará cuando el valor de pH alcanza 6,5. </li></ol></li></ol> 3. Esmalte Recrecimiento en Amelogenin-quitosano hidrogel <ol><li> Preparación de la solución de saliva artificial <ol><li> Disolver una cierta cantidad de cloruro de magnesio (MgCl2, 0,2 mM), cloruro de calcio (CaCl2, 1 mM), fosfato dihidrógeno de potasio (KH 2 PO 4, 4 mM), cloruro de potasio (KCl, 16 mM) y cloruro de amonio ( NH4Cl, 4,5 mM) en 20 mM de HEPES(4 - (2-hidroxietil) piperazina-1-etano-sulfónico) tampón 12. </li><li> Ajustar el pH a 7.0 con 1 M de NaOH y almacenar la solución de saliva artificial a 4 ° C. </li><li> Antes de utilizar la solución, agregar fluoruro de sodio (NaF, 300 ppm). </li></ol></li><li> Aplicación de la CS-AMEL hidrogel <ol><li> Aplicar sobre 20 l de hidrogel CS-AMEL a la rebanada diente se graban mediante una jeringa (Figura 1B). </li><li> Secar la rebanada diente de hidrogel cubierto en un desecador a temperatura ambiente durante 2 h. </li><li> Transferir la rebanada diente a un vaso de precipitados que contiene 30 ml de solución de saliva artificial. Cubrir el vaso con papel de aluminio, y luego mantener el vaso de precipitados en un horno a 37 ° C durante 7 días. </li><li> Retire el trozo de diente y secarlo en un desecador a temperatura ambiente. </li></ol></li></ol> 4. Caracterización de la interfaz entre la capa recién cultivado y esmalte La microestructura de la interfaz entre la capa recién crecido y esmalte fue observaciónved por microscopía electrónica de barrido (SEM) y microscopía electrónica de transmisión de alta revolución (HR-TEM). La muestra de TEM se preparó usando un haz de iones enfocado técnica (FIB), los pasos para los que son de la siguiente manera. <ol><li> Cargue la muestra en un instrumento FIB-SEM y terminar todas las alineaciones de acuerdo a las instrucciones de funcionamiento. NOTA: El ajuste de Z Fine se debe realizar por lo menos 2 veces. </li><li> Depositar una capa de carbono (15 × 3 micras) sobre la muestra para proteger la estructura subyacente (Figura 2A). </li><li> Moler la muestra cuidadosamente en los lados superior, inferior y derecho de la capa de carbón para preparar una pieza delgada de la muestra y, a continuación, cortar la parte inferior de esta pieza delgada. NOTA: Compruebe la alineación del haz de iones antes de cada etapa de molienda (Figura 2B). </li><li> Weld una punta de Pt sobre la pieza fina y cortar la parte izquierda para separar la pieza de muestra (Figura 3C). NOTA: Compruebe la alineación del haz de iones antes de la etapa de soldadura. </li><li> Levante tque PT punta con la muestra lentamente, y montar la muestra laminar sobre una rejilla TEM lift-out. </li><li> Separe la punta de la muestra, y diluir la muestra hasta que su grosor es inferior a 100 nm (Figura 3D). Retire la muestra del instrumento para llevar a cabo la observación TEM. NOTA: Compruebe la alineación del haz de iones antes de cada proceso de adelgazamiento. </li></ol> 5. Evaluación de propiedades de unión y mecánicas de la capa recién Grown <ol><li> La fuerza de unión se evalúa por tratamiento ultrasónico. Mantener la rebanada diente reparado en un limpiador de ultrasonidos (42 kHz, 100 W) durante 10 min, y a continuación, observar la interfaz entre la capa de esmalte natural y reparado con un análisis SEM de retrodispersión de electrones. </li><li> Medir la dureza y módulo elástico a 20 puntos de prueba en cada superficie del esmalte reparado (n = 3) por un nano-penetrador con una punta Berkovich. </li></ol> 6. Inmunofluorescencia La tinción <ol><li> Lave el diente con slice Tris buffer solución salina (TBS) durante 15 min. </li><li> Bloque con 1% de albúmina de suero bovino (BSA) en TBS durante 15 min. </li><li> Eliminar el líquido y se incuba la muestra O / N con 1 ° Ab (1:500 pollo anti-amelogenina) diluido en TBS (0,1% de BSA, 0,3% de Triton X-100). </li><li> Lavar la muestra con TBS durante 30 min y se incuba O / N con 2 ° Ab (1:100 FITC anti-pollo) diluido en TBS. </li><li> Lavar la muestra con TBS durante 30 minutos y dejar secar durante otros 30 min. </li><li> Observar al microscopio de fluorescencia. </li></ol>

<ol>
	<li>Moradian-Oldak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-+mediated+enamel+mineralization.">Protein- mediated enamel mineralization.</a> Frontiers in Bioscience. 17, 1996-2023 (2012).</li><li>Palmer, L. C., Newcomb, C. J., Kaltz, S. R., Spoerke, E. D., Stupp, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomimetic+Systems+for+Hydroxyapatite+Mineralization+Inspired+By+Bone+and+Enamel.">Biomimetic Systems for Hydroxyapatite Mineralization Inspired By Bone and Enamel.</a> Chem. 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Growth Des. 12, 4897-4905 (2012).</li><li>Fan, Y., Sun, Z., Abbott, C., Moradian-Oldak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+enamel+inspired+nanocomposite+fabrication+through+amelogenin+supramolecular+assembly.">A enamel inspired nanocomposite fabrication through amelogenin supramolecular assembly.</a> Biomaterials. 28, 3034-3042 (2007).</li><li>Wright, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+etiologies+and+associated+phenotypes+of+amelogenesis+imperfecta.">The molecular etiologies and associated phenotypes of amelogenesis imperfecta.</a> Am. J. Med. Gent. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Initial+Stages+of+Template-Controlled+CaCO3+Formation+Revealed+by+Cryo-TEM.">The Initial Stages of Template-Controlled CaCO3 Formation Revealed by Cryo-TEM.</a> Science. 323, 1455-1458 (2009).</li><li>Gebauer, D., Volkel, A., Colfen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+Prenucleation+Calcium+Carbonate+Clusters.">Stable Prenucleation Calcium Carbonate Clusters.</a> Science. 322, 1819-1822 (2008).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Mientras que el contenido mineral del esmalte es alto por lo que es el tejido mineralizado más duro del cuerpo humano, este biocerámico es susceptible a los procesos de desmineralización, que suelen aparecer como caries dental o erosión. Las mutaciones genéticas también pueden hacer que el esmalte delgadas o blandas que conducen a una serie de enfermedades hereditarias de la malformación del esmalte llamado amelogénesis imperfecta 20. Productos para el cuidado de la salud oral que contienen f...

Dental enamel is the hard mineralized surface of human teeth. It is composed of numerous needle-like apatite crystals, which are bundled in organized, parallel prisms to ensure the unique mechanical strength and biological protection that enamel provides1-2. Unlike other mineralized tissues, such as bone and dentin, mature enamel is acellular and cannot regenerate itself after substantial mineral loss1-2, which often occurs as dental caries or erosion. Commercially available products such as fluoride containing varnishes, tooth pastes and mouthwashes are effective in re-mineralizing enamel but none of them have the potential to promote the formation of organized apatite crystals. Clinically, the conventional treatment for enamel repair involves a filling procedure with artificial materials such as amalgam, ceramics, or composite resin 3. However, these materials usually do not interface well with the natural tissue surrounding the lesion, because their structures, components and properties are different from the natural enamel. As a result, secondary caries frequently develops overtime at the interface between the tooth and foreign materials. Therefore, in situ regrowth of enamel with a dense interface is an attractive target for the fields of materials science and stomatology. One particularly promising way to achieve this purpose is biomimetic synthesis of enamel-like material on the enamel surface. Recently, numerous in vitro attempts have been made to prepare enamel-like materials using biomimetic systems that contain nano-apatites or different organic additives 4-12. However, developing the optimal biomimetic strategy to promote remineralization crystals to achieve a perfect dense interface is still a challenge. 
During enamel mineralization, the oriented growth and elongation of apatite crystals is regulated by an amelogenin-rich matrix 1,13-14. To mimic the organic matrix in developing enamel, herein we describe a detailed protocol for fabricating an amelogenin-chitosan (CS-AMEL) hydrogel for in situ enamel regrowth on an acid-etched enamel surface used as a model for erosive lesions. As &#8220;the most versatile growth media&#8221; for crystals 15, hydrogel matrices have an advantage over a solution system since clinically they are easier to handle. Moreover, CS-AMEL is biocompatible, biodegradable, and has unique antimicrobial and adhesion properties that compare favorably with other biomimetic systems for dental applications 16. Importantly, the in situ mineralization of apatite crystals on the enamel surface provides a dense interface between the repaired layer and the natural enamel, which can potentially improve the durability of restorations and prevent the formation of new caries at the margin of the restoration.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1219">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Name</td>
			<td style="width:209px;">Company</td>
			<td style="width:164px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:516px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Material/ Reagent</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:164px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:331px;">Human Third Molar&#160;</td>
			<td style="width:209px;">Ostrow School of Dentistry of the University of Southern California&#160;</td>
			<td style="width:164px;">N/A</td>
			<td style="width:516px;">The human molars were extracted following the standard procedures for extraction at the Ostrow School of Dentistry of the University of Southern California and handled with the approval of the Institutional Review Board.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:331px;">Recombinant Pocine Amelogenin</td>
			<td style="width:209px;">Expression and purification&#160; in lab</td>
			<td style="width:164px;">N/A</td>
			<td style="width:516px;">rP172, full-length&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Chitosan&#160;</td>
			<td style="width:209px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:164px;">448877</td>
			<td style="width:516px;">medium molecular weight, 75-85% deacetylated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Phosphoric Acid&#160;</td>
			<td style="width:209px;">VWR</td>
			<td style="width:164px;">AA033266</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Acetic Acid Glacial</td>
			<td style="width:209px;">VWR</td>
			<td style="width:164px;">A036289</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Sodium Hydroxide</td>
			<td style="width:209px;">VWR</td>
			<td style="width:164px;">BDH9292</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Calcium Chloride&#160;</td>
			<td style="width:209px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:164px;">223506</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Dibasic Sodium Phosphate Anhydrous</td>
			<td style="width:209px;">VWR</td>
			<td style="width:164px;">BDH0316</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">BL21-CodonPlus (DE3)-RP&#160;</td>
			<td style="width:209px;">Agilent Technologies Inc.</td>
			<td style="width:164px;">230255</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Ammonium Sulfate</td>
			<td style="width:209px;">VWR</td>
			<td style="width:164px;">BDH8001</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Trifluoroacetic Acid</td>
			<td style="width:209px;">VWR</td>
			<td style="width:164px;">AAAL06374</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Acetonitrile</td>
			<td style="width:209px;">VWR</td>
			<td style="width:164px;">BDH1103</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Magnesium Chloride&#160;</td>
			<td style="width:209px;">VWR</td>
			<td style="width:164px;">BDH0244</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Potassium Dihydrogen Phosphate&#160;</td>
			<td style="width:209px;">VWR</td>
			<td style="width:164px;">BDH9268</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Potassium Chloride&#160;</td>
			<td style="width:209px;">VWR</td>
			<td style="width:164px;">BDH0258</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Ammonium Chloride&#160;</td>
			<td style="width:209px;">VWR</td>
			<td style="width:164px;">AAAA15000</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:331px;">HEPES (4-(2-Hydroxyethyl)piperazine-1-ethane-sulfonic acid)</td>
			<td style="width:209px;">VWR</td>
			<td style="width:164px;">AAA14777</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Sodium Fluoride&#160;</td>
			<td style="width:209px;">VWR</td>
			<td style="width:164px;">AA11561</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Tris-Buffered Saline</td>
			<td style="width:209px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:164px;">170-6435</td>
			<td style="width:516px;">10&#215; TBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td style="width:209px;">EMD Millipore&#160;</td>
			<td style="width:164px;">12659</td>
			<td style="width:516px;">CalBioChem, Albumin, Bovine Serum, Fraction V, Low Heavy Metals&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:209px;">EMD Millipore&#160;</td>
			<td style="width:164px;">TX1568-1</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Chicken Anti-Amelogenin</td>
			<td style="width:209px;">N/A</td>
			<td style="width:164px;">N/A</td>
			<td style="width:516px;">A gift from Prof. Malcolm Snead, University of Southern California</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Bovine Anti-Chicken IgY-FITC</td>
			<td style="width:209px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td style="width:164px;">Sc-2700</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:331px;">Equipments</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:164px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:331px;">High Performance Liquid Chromatography System</td>
			<td style="width:209px;">Agilent Technologies Inc.</td>
			<td style="width:164px;">Varian Prostar 210</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">C4 column</td>
			<td style="width:209px;">Phenomenx&#160;</td>
			<td style="width:164px;">Jupiter 5&#956; 300A</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Scanning Electron Microscopy&#160;</td>
			<td style="width:209px;">JEOL&#160;</td>
			<td style="width:164px;">JSM-7001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">FIB-SEM&#160;</td>
			<td style="width:209px;">JEOL&#160;</td>
			<td style="width:164px;">JIB-4500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Transmission Electron Microscopy&#160;</td>
			<td style="width:209px;">JEOL</td>
			<td style="width:164px;">JEM-2100F</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Digital Low Speed Diamond Saw</td>
			<td style="width:209px;">MTI Corporation</td>
			<td style="width:164px;">SYJ-150</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Fluorescence Microscopy</td>
			<td style="width:209px;">Leica</td>
			<td style="width:164px;">DMI3000 B</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Ultrasonic Cleaner&#160;</td>
			<td style="width:209px;">Branson&#160;</td>
			<td style="width:164px;">2510</td>
			<td style="width:516px;">42 kHz, 100 W</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Nano-indenter&#160;</td>
			<td style="width:209px;">Agilent Technologies Inc.</td>
			<td style="width:164px;">MTS XP</td>
			<td style="width:516px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of amelogenin-chitosan hydrogel for in vitro enamel regrowth with a dense interface

Biomimetic enamel reconstruction is a significant topic in material science and dentistry as a novel approach for the treatment of dental caries or erosion. Amelogenin has been proven to be a critical protein for controlling the organized growth of apatite crystals. In this paper, we present a detailed protocol for superficial enamel reconstruction by using a novel amelogenin-chitosan hydrogel. Compared to other conventional treatments, such as topical fluoride and mouthwash, this method not only has the potential to prevent the development of dental caries but also promotes significant and durable enamel restoration. The organized enamel-like microstructure regulated by amelogenin assemblies can significantly improve the mechanical properties of etched enamel, while the dense enamel-restoration interface formed by an in situ regrowth of apatite crystals can improve the effectiveness and durability of restorations. Furthermore, chitosan hydrogel is easy to use and can suppress bacterial infection, which is the major risk factor for the occurrence of dental caries. Therefore, this biocompatible and biodegradable amelogenin-chitosan hydrogel shows promise as a biomaterial for the prevention, restoration, and treatment of defective enamel.

La eficacia del protocolo descrito aquí se demuestra por microscopía electrónica de barrido (SEM), difracción de electrones área seleccionada (SAED) y difracción de rayos X (DRX) análisis. Después de la reparación por amelogenina-quitosano (CS-AMEL) hidrogel durante 7 días, se formó una capa similar al esmalte con un espesor de 15 micras en la superficie de esmalte grabado. La capa recién crecido-se hizo de matrices altamente ordenadas de cristales con un diámetro de ~ 50 nm, preferentemente creciente a lo ...

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Development of Amelogenin-chitosan Hydrogel for In Vitro Enamel Regrowth with a Dense Interface

En este artículo, se describe un protocolo para fabricar un hidrogel amelogenina quitosano para la reconstrucción del esmalte superficial. Organizado en el crecimiento in situ de los cristales de apatita en el hidrogel formado una densa interfaz de esmalte-restauración, lo que mejorará la eficacia y durabilidad de las restauraciones.

Desarrollo de amelogenina-quitosano hidrogel para<em&gt; In Vitro</em&gt; Esmalte Recrecimiento con una interfaz Dense

Biomimetic enamel reconstruction is a significant topic in material science and dentistry as a novel approach for the treatment of dental caries or ...

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

Development of Amelogenin-chitosan Hydrogel for In Vitro Enamel Regrowth with a Dense Interface

14.9K vistas.  University of Southern California.  En este artículo, se describe un protocolo para fabricar un hidrogel amelogenina quitosano para la reconstrucción del esmalte superficial. Organizado en el crecimiento in situ de los cristales de apatita en el hidrogel formado una densa interfaz de esmalte-restauración, lo que mejorará la eficacia y durabilidad de las restauraciones. 