Agradecemos al Sr. John Crowell y el Sr. Terry Upshall por su experiencia técnica y asistencia con la fotografía y videografía. Esta labor fue apoyada por las subvenciones de funcionamiento a JLV de los Institutos Canadienses de Investigación en Salud y la Corporación de Investigación y Desarrollo de Terranova y un Corazón y fundación del movimiento de Canadá Asociación Canadiense para la concesión de Recuperación Stroke Catalyst. RBR era un receptor de un Keith Griffiths Memorial del corazón y derrame Fundación de Becas de Posgrado.

Declaración de Ética: Todos los experimentos fueron aprobados por la Universidad Memorial de Comité de Ética Animal Care de Terranova de acuerdo con las directrices del Consejo Canadiense de los Animales. 1. Los ratones <ol><li> Utilice ratones adultos. En este estudio, se utilizaron ratones macho adulto FVBN (n = 10) entre 2-4 meses. Los ratones en una hr 12:12 reverso del ciclo de luz-oscuridad y proporcionar comida para roedores estándar y agua ad libitum. </li></ol> 2. Los materiales requeridos para la Prueba de Cilindro <ol><li> Obtener una tabla con una tapa transparente para filmar la prueba cilindro. Las dimensiones de la mesa son irrelevantes, la parte superior debe ser de plexiglás o vidrio, y debe haber espacio suficiente para colocar un espejo por debajo de la mesa. Esto permite que para el ratón que se grabó en vídeo desde abajo. Use un espejo debajo de la tabla para reflejar la imagen a través del cilindro. Como alternativa, utilice una cámara al revés si está disponible. Las dimensiones de la mesa utilizados en este protocolo son 54 x 56 x 66.5cm (WxLxH) con un 51 x 51cm superior (ancho x largo). </li><li> Obtener un espejo. Las dimensiones del espejo utilizados en este protocolo son 34 x 58 cm (ancho x largo). </li><li> Obtener un cilindro transparente / plexiglás para el ratón para llevar a cabo. Las dimensiones del cilindro utilizados en este protocolo son 17.5cm de alto, 8,8 cm ID, 9.5cm diámetro exterior con un espesor de pared de 0.35cm. Un cilindro más alto puede ser necesario para las cepas de ratón más activos. </li><li> Coloque el cilindro en el tablero de la mesa y filmar el reflejo en el espejo de abajo. </li><li> Se requiere una cámara de vídeo y el trípode. Grabar videos en aproximadamente 650KB / s, que es de aproximadamente 190 MB por cada 5 min de vídeo cilindro. Asegúrese de que la cámara tiene una funcionalidad de zoom para asegurar que el cilindro abarca todo el campo de visión. NOTA: La cámara de vídeo utilizado en este protocolo es un Sony DCR-SR42, 40x zoom óptico, zoom digital 2,000x, 680kpix que utiliza la definición estándar, vídeo NTSC entrelazado). </li><li> Obtener software para el análisis - un pl mediosayer con el apoyo de vídeo y modulación velocidad de reproducción. El reproductor de medios utilizados en este protocolo es la v2.1.2 VLC Media Player. </li><li> Obtener un equipo con un sistema operativo capaz de ejecutar el reproductor multimedia y un monitor. </li><li> Se requiere el almacenamiento electrónico de videos. Descargar videos a un disco duro externo o copiarlo en DVD para el almacenamiento a largo plazo. NOTA: En 190 MB por vídeo, 84 sesiones caben en una tarjeta SD de 16 GB y 168 sesiones caben en una tarjeta SD de 32 GB. Debido al costo relativamente bajo de los medios SD, y la incertidumbre de cuánto tiempo algunos ratones requieren para completar 20 traseros, se recomienda una tarjeta de 32 GB. En el estudio actual, los videos fueron copiados de la cámara a un disco duro externo de 2 TB y luego vueltos a copiar en DVD como copia de seguridad. </li></ol> 3. Configuración experimental de la prueba del cilindro <ol><li> Fije espejo debajo de la mesa en un ángulo de 45 grados a la mesa. Haga esto utilizando dos soportes unidos a las patas de la mesa de Support la parte superior e inferior del espejo, respectivamente. Ubicaciones de los soportes se observan en una vista lateral de la mesa (Figura 1A) y una vista de cara de la tabla (Figura 1B). </li><li> Coloque cilindro en el centro de la mesa. Dibuje cuatro líneas equidistantes en el que el cilindro se sienta en la mesa con un marcador negro (Sharpie) de manera que el cilindro puede ser levantada y regresó a la misma posición (Figura 2). Dibujo ellos en la parte inferior de la mesa transparente permite que el tablero de la mesa a limpiar entre los ensayos con animales sin disolver la tinta de marcador. </li><li> Conecte la cámara y el trípode. Apunte la cámara hacia el espejo para que la imagen está mirando directamente a través del cañón del cilindro. Asegúrese de que la pared interior completa del cilindro es visible y sin obstrucciones por la base (Figura 3). Ver una vista lateral en de la configuración, incluyendo el ángulo relativo de la configuración de la cámara y el espejo, desde arriba (Figura 4A) y de lanivel de la mesa, incluyendo una cría de ratón (Figura 4B). </li><li> Prepare tarjetas de referencia para identificar cada ratón antes de la filmación. Asegúrese de que las tarjetas suelen incluir un número de identificación para cada ratón, el punto de tiempo de la prueba (por ejemplo., 3 ​​días después del tratamiento) y la fecha de la sesión de filmación. No incluya el grupo de tratamiento en la tarjeta de señal para garantizar el experimentador está cegado. </li><li> Se requiere de Cine en condiciones de iluminación interior estándar como este nivel de luz para ver claramente los movimientos del ratón alrededor del cilindro. NOTA: Si está disponible a filmar en la oscuridad con una cámara de luz roja puede ser suficiente, sin embargo, uno primero habría que probar si toca la pata y lastres son claramente visibles para la cuantificación. </li></ol> 4. Ejecución <ol><li> Comienza el rodaje. Mostrar la tarjeta de señal del ratón apropiada frente a la lente de la cámara. </li><li> Baje el ratón en el cilindro de la parte superior abierta inmediatamente después de la filmación de la tarjeta de señal. </li><li> Comienza el rodaje de ratón. Reducir al mínimo el ruido durante este tiempo, como los ratones pueden perder el interés en explorar si sobresaltada. </li><li> Observar la parte trasera ratones para explorar el cilindro. Capturar el vídeo hasta que el ratón realiza un mínimo de veinte partes posteriores. NOTA: Un trasera ocurre cuando ambas patas delanteras pierden el contacto con el suelo y el ratón se coloca en sus piernas traseras. </li><li> Limpie mesa y el cilindro con una solución de limpieza adecuada entre cada ratón para desinfectar y eliminar los olores de ratón. </li><li> La congelación es cuando los ratones dejan de explorar y permanecer tranquilamente sentado en cuatro patas durante aproximadamente 5 minutos. Si los ratones se congelan antes de que ocurran veinte partes posteriores, puede ser necesario para eliminarlos desde el cilindro durante 10-20 min antes de reanudar la prueba. Si los ratones no realizan veinte partes posteriores, se retiran del estudio. NOTA: En nuestra experiencia, los ratones nunca han necesitado ser excluido debido a un fallo de explorar el cilindro. </li></ol> 5. Evaluación de la prueba del cilindro usando la pata-ArrastrarAnálisis <ol><li> Reproduzca el vídeo a una velocidad de entre 0,25x y 0.67X velocidad regular dependiendo de la rapidez con el ratón explora el cilindro. Utilice un reproductor multimedia que ofrece velocidades de reproducción lentas. </li><li> Cuantificar el número total de toques pata. Toques de la pata se producen cuando las traseras de ratón (Figura 5A), toca el lado del cilindro (Figura 5B), posteriormente desmonta con ambas patas simultáneamente (Figura 5C) y tierras (Figura 5d). La pata puede o no puede ponerse en contacto con la pared del cilindro con una palma completa, pero algún tipo de contacto con la pared del cilindro debe ocurrir. Evaluar toques pata contando el número de veces que el ratón hace contacto (no importa cuán breve) con la pared del cilindro con una o ambas patas delanteras mientras está de pie sobre sus patas traseras durante una trasera. Tenga en cuenta que el contacto con la pared del cilindro solamente se cuenta como un &quot;toque la pata&quot; o &quot;pata-arrastre&quot; si el ratón está en una posición trasera - de pieen sus extremidades traseras con ambas patas delanteras fuera de la mesa. Si el ratón se mantiene en una postura de 3 puntos - ambos miembros posteriores y una pata de la mesa y se pone a tocar la pared con la pata libre - esto no se cuenta como un toque de la pata. Los ratones pueden trasero y tocar la pared del cilindro con una sola pata y esto se cuenta como un toque de la pata. Nota: un ratón también puede mover su cuerpo alrededor del cilindro durante una parte trasera, lo que hace más de dos contactos. Estos contactos se cuentan - uno para cada contacto pata izquierda y uno para cada contacto pata derecha. </li><li> Cuantificar el número de pata-arrastres. Comportamiento arrastrando la pata es distinta de toques normales pata. <ol><li> Si los contactos de la pata de la pared del cilindro con una palma abierta completa (Figura 6B), que poco a poco se apartarán de la pared, a menudo con un ligero temblor. El movimiento comienza con los dígitos arrastrando contra la pared del cilindro, ya sea en una dirección medial o hacia abajo, (Figura 6C) antes de caer lejos completely (Figura 6D). El ratón y luego desmontar con su pata afectada (Figura 6E) antes de aterrizar en cuatro patas (Figura 6F). Esto se considera una pata y arrastre y debe ser contada en un recuento. </li><li> Si la pata no hace contacto con la pared del cilindro con una palma totalmente abierta, se pastar la pared del cilindro con sus dígitos antes de caer fuera de la pared del cilindro. Del mismo modo, un ratón puede arrastrar su pata contra la pared del cilindro, pero no lo liberan por completo antes de desmontar. Estos se consideran tanto la pata-arrastra, así como toques y debe ser contada como tanto en un recuento. </li><li> La pata también puede arrastrar a lo largo de la pared del cilindro, mientras que un ratón explora el cilindro. En este caso, la pata seguirá la torsión del torso del ratón, ya que explora izquierda o derecha de su posición original (Figura 7A-D) antes de desmontar (Figura 7E). Esto no se considera una pata y arrastre, ya que depende del ratón elegir al azaruna dirección para explorar y no depende de que fue dañado hemisferio cortical. </li></ol></li><li> Paw-arrastres se expresan como un porcentaje de la pata-arrastra por número total de toques pata durante una sesión. Expresar el número de pata-drags como un porcentaje del total de contactos de la pata para cada extremidad anterior por separado. </li><li> Toques que resulta en una pata y arrastre cuentan como una pata y arrastre y un toque simultáneamente. Por lo tanto, si un ratón arrastra su pata cada vez que sus contactos pata la pared del cilindro, el porcentaje de la pata-arrastrando se expresa como 100%. </li></ol> 6. Otros Diseño Experimental Sugerencias <ol><li> Para reducir al mínimo las variables extrañas: <ol><li> Pruebe los ratones al mismo tiempo en cada día de pruebas. Prueba de los ratones durante su ciclo de estela. Mantener los ratones en un ciclo de luz de marcha atrás 12 horas facilita el rendimiento. </li><li> Los ratones pueden ser reacios a explorar el cilindro si hincapié ya sea por el ruido o un nuevo entorno. Prueba de ratones en su local de confinamiento o una habitación que han been familiarizado con reduce el estrés. Esto puede ocurrir si la habitación es ruidoso, si el ratón ha sido empujado antes de entrar en el cilindro o debido a la habituación. NOTA: La prueba debe realizarse una vez antes de la manipulación experimental para servir como una lectura de línea de base. Después de la manipulación, días de pruebas son a discreción del experimentador, aunque se aconseja de evitar un número excesivo de las exposiciones al cilindro en un corto período de tiempo. </li><li> Los ratones puede llegar a ser reacios a atrás después de 6-7 exposiciones al cilindro. Para el estudio actual, los ratones se pusieron a prueba en el cilindro para un total de siete veces, antes de la isquemia y en los días 1, 3, 7, 14, 21 y 28 después de la cirugía. NOTA: En este estudio se utilizó la cepa FVBN ratón. Hemos probado previamente ratones C57BL / 6 en el cilindro y el comportamiento de la pata-arrastrando observada después de una ET-1 lesión isquémica (datos no mostrados). C57BL / 6 ratones eran más activos que los ratones FVBN cuando la cría y con frecuencia saltaron sobre el borde del cilindroantes de subir a cabo. Taller cilindros se deben usar si los ratones intentan escapar saltando. </li></ol></li></ol> 7. La endotelina-1 Cirugía e infarto Medidas Volumen <ol><li> Realizar endotelina-1 cirugía y mediciones de volumen del infarto de acuerdo con los protocolos publicados previamente 4. Para dirigirse a la corteza motora de la extremidad anterior anterior, cada ratón debe recibir tres ET-1 inyecciones en las siguientes coordenadas: (i) 0,7 anteroposterior (AP) /1.5 medial-lateral (ml) / - 1,2 dorsal-ventral (DV), ( ii) 0,4 AP / 1,25 ml / - 1,2 DV y (iii) 0,1 AP / 1,75 ml / -1,2 DV 4. </li></ol> 8. Análisis estadístico <ol><li> Se recomienda una de dos vías para medidas repetidas análisis de varianza (ANOVA) para analizar el porcentaje de pata-arrastrando las patas para afectados y no afectados a través de diferentes puntos de tiempo. </li></ol>

<ol>
	<li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke,+cortical+ablation,+parkinsonism+and+spinal+cord+injury.">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li><li>Kolb, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor-stimulated+generation+of+new+cortical+tissue+and+functional+recovery+after+stroke+damage+to+the+motor+cortex+of+rats.">Growth factor-stimulated generation of new cortical tissue and functional recovery after stroke damage to the motor cortex of rats.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 27 (5), 983-997 (2007).</li><li>Windle, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+four+different+methods+of+producing+focal+cerebral+ischemia+with+endothelin-1+in+the+rat.">An analysis of four different methods of producing focal cerebral ischemia with endothelin-1 in the rat.</a> Exp Neurol. 201 (2), 324-334 (2006).</li><li>Roome, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reproducible+Endothelin-1+model+of+forelimb+motor+cortex+stroke+in+the+mouse.">A reproducible Endothelin-1 model of forelimb motor cortex stroke in the mouse.</a> J Neurosci Methods. 233, 34-44 (2014).</li><li>Tennant, K. A., Jones, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensorimotor+behavioral+effects+of+endothelin-1+induced+small+cortical+infarcts+in+C57BL/6+mice.">Sensorimotor behavioral effects of endothelin-1 induced small cortical infarcts in C57BL/6 mice.</a> J Neurosci Methods. 181 (1), 18-26 (2009).</li><li>Wang, Y., Jin, K., Greenberg, D. 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P., Campbell-Hope, L. J., Pemberton, K. D., Dunnett, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+'staircase+test':+a+measure+of+independent+forelimb+reaching+and+grasping+abilities+in+rats.">The 'staircase test': a measure of independent forelimb reaching and grasping abilities in rats.</a> J Neurosci Methods. 36 (2-3), 219-228 (1991).</li><li>Farr, T. D., Whishaw, I. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+qualitative+impairments+in+skilled+reaching+in+the+mouse+(Mus+musculus)+after+a+focal+motor+cortex+stroke.">Quantitative and qualitative impairments in skilled reaching in the mouse (Mus musculus) after a focal motor cortex stroke.</a> Stroke. 33 (7), 1869-1875 (2002).</li><li>Tennant, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vermicelli+and+capellini+handling+tests:+simple+quantitative+measures+of+dexterous+forepaw+function+in+rats+and+mice.">The vermicelli and capellini handling tests: simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice.</a> J Vis Exp. (41), (2010).</li><li>Clarkson, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AMPA+receptor-induced+local+brain-derived+neurotrophic+factor+signaling+mediates+motor+recovery+after+stroke.">AMPA receptor-induced local brain-derived neurotrophic factor signaling mediates motor recovery after stroke.</a> J Neurosci. 31 (10), 3766-3775 (2011).</li><li>Clarkson, A. N., Huang, B. S., Macisaac, S. E., Mody, I., Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reducing+excessive+GABA-mediated+tonic+inhibition+promotes+functional+recovery+after+stroke.">Reducing excessive GABA-mediated tonic inhibition promotes functional recovery after stroke.</a> Nature. 468 (7321), 305-309 (2010).</li></ol>

Los autores no tienen intereses financieros en competencia.

Los puntos clave para establecer la hora de cuantificar el comportamiento de la pata y arrastrando en la prueba del cilindro son los siguientes: i) cuantificar el número de pata-arrastra frente toques totales pata de cada pata antes de la lesión cerebral para establecer una línea de base; ii) cuantificar el número de pata-drags frente toques totales pata de cada pata después de la lesión isquémica; y iii) discriminar entre una pata y arrastre y el movimiento lateral de la pata a lo largo de la pared del cilindro ...

El objetivo de las estrategias de regeneración neural es demostrar tanto la reparación de tejidos y la recuperación funcional. La recuperación funcional es típicamente evaluado con pruebas de comportamiento que miden los déficits funcionales, en este caso relacionado con las habilidades motoras que están asociados con el daño a las regiones específicas del cerebro. La lesión cerebral traumática o daño isquémico a la zona de la extremidad anterior de la corteza sensitivomotora se pueden demostrar por una serie de pruebas de comportamiento. Una de estas pruebas, la prueba del cilindro se utiliza ampliamente en ratas para evaluar los déficits funcionales en la actividad de la extremidad anterior 1. La prueba tiene un bajo coste de puesta a punto que requiere sólo un cilindro, una cámara y una mesa con una tapa transparente. Es fácil de administrar, ya que se basa en el comportamiento exploratorio natural de los roedores, por lo que no se requiere pre-entrenamiento y la privación de alimentos o recompensas. A pesar de estas numerosas ventajas, la prueba del cilindro se utiliza bajo-evaluar déficits extremidades anteriores en ratones después de lesiones focales en la extremidad anterior sensorimotor corteza, que atribuimos al análisis del comportamiento del ratón en la prueba de cilindro. Miembro Anterior asimetría es la medida clásica de análisis para la prueba del cilindro. Cuando se coloca en el cilindro, roedores exploran de forma natural las paredes del cilindro con la cría en sus patas traseras y tocando las paredes del cilindro con sus patas extremidades anteriores para mantener el equilibrio postural. El número de toques de la pata con la pared con cada extremidad anterior es fácilmente cuantificado por el rodaje de roedores durante esta exploración del cilindro. Asimetría extremidad anterior se produce cuando la extremidad anterior de la pata afectada hace menos toques con la pared de la extremidad anterior de la pata afectada y es indicativo de daño a la corteza sensitivomotora contralateral. En ratas, las inyecciones intra-corticales del agente vasoconstrictor, la endotelina (ET-1), en el córtex sensoriomotor extremidad anterior causa una lesión isquémica focal que resulta en déficits de comportamiento en la extremidad anterior contralateral. Las deficiencias en el uso de la extremidad anterior contralateral se detectan fácilmente como los cambios en forelimb asimetría en la prueba del cilindro en ratas 1-3. En contraste con las ratas sin embargo, los cambios en la asimetría de la extremidad anterior son variables y menos consistente en ratones después comparables ET-1 inyecciones 4-6. Aquí se demuestra una novela análisis del comportamiento del miembro anterior en la prueba de cilindro - análisis del comportamiento de la pata y arrastrando. Hemos demostrado previamente que el análisis de la pata-arrastrando es una medida más sensible de daño a la corteza sensitivomotora extremidad anterior en ratones que el análisis de la asimetría de la extremidad anterior clásica y por lo tanto es aplicable a una variedad de modelos de lesiones corticales focales. El examen de cómo los contactos patas delanteras la pared del cilindro después del daño isquémico a la corteza sensoriomotora extremidad anterior reveló un comportamiento novedoso en ratones - pata-4 arrastrando. Una pata de arrastre se produce cuando un ratón se coloca sobre sus patas traseras para explorar la pared del cilindro y luego arrastra su pata afectada (contraindicado lesional) a lo largo de la pared del cilindro hacia su línea media o hacia abajo, mientras que la paredsu pata afectada proporciona apoyo postural contra la pared. Paw-arrastra rara vez ocurre en los ratones lesionados por lo tanto, la aparición de una pata-resistencia es un indicador positivo de la lesión en la extremidad anterior sensoriomotoras corteza 4. Hemos cuantificado previamente comportamiento pata-arrastrando en ratones después de ET-1 daño isquémico a la corteza sensoriomotora extremidad anterior y han mostrado un comportamiento pata-arrastrando sostenida en ratones hasta dos semanas después del accidente cerebrovascular 4. Aquí nos muestran que el comportamiento de la pata-arrastre se mantiene hasta cuatro semanas después del accidente cerebrovascular. Análisis del comportamiento de la pata-arrastrando proporciona una nueva y sensible herramienta para evaluar el daño isquémico focal a la corteza sensoriomotora extremidad anterior en ratones. Su bajo costo de configuración, facilidad de administración y anotando hacen de esta una herramienta simple, pero útil para evaluar rápidamente los déficits conductuales extremidades anteriores en ratones.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Plexi-glass cylinder</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>17.5cm high, 9.5cm outer diameter, 8.8cm inner diameter, wall thickness 0.35cm (or 3.5 mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>viewing table</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>54x56x66.5cm (width x length x height), top of table is a 51x51cm sheet of plexiglass.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mirror</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>34x58cm mirror</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>video camera</td>
			<td>Sony</td>
			<td>DCR-SR42</td>
			<td>Video camera with onboard storage, SD functionality, 40x optical zoom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td>Optiplex 760</td>
			<td>Processor: Intel, 3.0 GHz, Memory 4.00GB (RAM)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>computer monitor</td>
			<td>Samsung</td>
			<td>S22C350H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel (Microsoft Office Professional Plus)</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>v14.0.7106.5003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VLC Media Player</td>
			<td>Video LAN</td>
			<td>v2.1.2</td>
			<td>Media player with playback speed modulation and video support</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>External Hard Drive</td>
			<td>Western Digital</td>
			<td>WDBAAU0020HBK-01</td>
			<td>2 TB</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

paw-dragging: a novel, sensitive analysis of the mouse cylinder test

La prueba de cilindro se utiliza rutinariamente para predecir el daño isquémico focal a la corteza motora de la extremidad anterior en roedores. Cuando se coloca en el cilindro, roedores explorar por la crianza y tocando las paredes del cilindro con sus patas extremidades anteriores de apoyo postural. Después de una lesión isquémica a la corteza sensoriomotora extremidad anterior, ratas dependen más de su pata extremidad anterior afectada por el apoyo postural resulta en un menor número de toques con su pata afectada que se denomina asimetría extremidad anterior. En contraste, el daño isquémico focal en el cerebro de ratón no resultar en déficits consistentes comparables en la asimetría de la extremidad anterior. Si bien el déficit de asimetría extremidad anterior se observan con poca frecuencia, los ratones no demuestran una novela derrame cerebral posterior comportamiento llamado &quot;pata-arrastre&quot;. Paw-arrastre es la tendencia de un ratón para arrastrar su pata afectada a lo largo de la pared del cilindro en lugar de empujar directamente fuera de la pared cuando el desmontaje de una parte trasera a una posición de cuatro patas. Hemos demostrado previamente quecomportamiento arrastrando la pata es muy sensible a pequeñas lesiones isquémicas corticales a la corteza motora de la extremidad anterior. Aquí le ofrecemos un protocolo detallado para el análisis de la pata y arrastrando. Definimos lo que una pata-de arrastre es y demostrar cómo cuantificar el comportamiento de la pata y arrastrando. La prueba del cilindro es una prueba sencilla y económica de administrar y no requiere de estrategias de privación de alimentos pre-entrenamiento o. En el uso de análisis de la pata-arrastrar con la prueba del cilindro, se llena un nicho para predecir lesiones isquémicas corticales como photothrombosis y endotelina-1 (ET-1) isquemia inducida - dos modelos que están cada vez más en popularidad y producen lesiones focales más pequeños de oclusión de la arteria cerebral media. Por último, medir el comportamiento de la pata y arrastrando en la prueba del cilindro permitirá que los estudios de la recuperación funcional después de una lesión cortical utilizando una amplia cohorte de cepas de ratones transgénicos, donde previo análisis de la asimetría de la extremidad anterior ha fallado en detectar déficits consistentes.

Hemos demostrado anteriormente que el comportamiento de la pata-arrastrando aparece después de una lesión isquémica focal a la corteza sensoriomotora extremidad anterior y es un indicador positivo de daños 4. Inyecciones intra-corticales de ET-1 en el córtex sensoriomotor extremidad anterior se utilizaron para inducir una lesión isquémica (Figura 8A, B). Este estudio examinó si el comportamiento de la pata-arrastrando extendió por más de 14 días después de la lesión para su uso p...

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Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test

Classical análisis de asimetría de la extremidad anterior de la prueba de cilindro se usa rutinariamente para evaluar los déficits de comportamiento en ratas después de la lesión cerebral o ictus; sin embargo, no puede detectar déficits consistentes en ratones. Este estudio demuestra que la cuantificación de comportamiento pata-arrastre es un análisis más sensible de la lesión cerebral en ratones.

Paw-Arrastrar: una novela, Análisis sensible de la prueba Cilindro Ratón

The cylinder test is routinely used to predict focal ischemic damage to the forelimb motor cortex in rodents. When placed in the cylinder, rodents explore ...

paw-dragging-a-novel-sensitive-analysis-of-the-mouse-cylinder-test

Research

JoVE Journal

Behavior

23.0K vistas.  Memorial University of Newfoundland.  Classical análisis de asimetría de la extremidad anterior de la prueba de cilindro se usa rutinariamente para evaluar los déficits de comportamiento en ratas después de la lesión cerebral o ictus; sin embargo, no puede detectar déficits consistentes en ratones. Este estudio demuestra que la cuantificación de comportamiento pata-arrastre es un análisis más sensible de la lesión cerebral en ratones. 

Video: Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test

Inchworming: A Novel Motor Stereotypy in the BTBR T+ Itpr3tf/J Mouse Model of Autism

Autism Spectrum Disorder (ASD) is a behaviorally defined neurodevelopmental disorder characterized by decreased reciprocal social interaction, abnormal communication, and repetitive behaviors with restricted interest. As diagnosis is based on clinical criteria, any potentially relevant rodent models of this heterogeneous disorder should ideally recapitulate these diverse behavioral traits. The BTBR T+ Itpr3tf/J (BTBR) mouse is an established animal model of ASD, displaying repetitive behaviors such as increased grooming, as well as cognitive inflexibility. With respect to social interaction and interest, the juvenile play test has been employed in multiple rodent models of ASD. Here, we show that when BTBR mice are tested in a juvenile social interaction enclosure containing sawdust bedding, they display a repetitive synchronous digging motion. This repetitive motor behavior, referred to as &#34;inchworming,&#34; was named because of the stereotypic nature of the movements exhibited by the mice while moving horizontally across the floor. Inchworming mice must use their fore- and hind-limbs in synchrony to displace the bedding, performing a minimum of one inward and one outward motion. Although both BTBR and C56BL/6J (B6) mice exhibit this behavior, BTBR mice demonstrate a significantly higher duration and frequency of inchworming and a decreased latency to initiate inchworming when placed in a bedded enclosure. We conclude that this newly described behavior provides a measure of a repetitive motor stereotypy that can be easily measured in animal models of ASD.

Inchworming: A Novel Motor Stereotypy in the BTBR T+ Itpr3tf/J Mouse Model of Autism

Inchworming is a highly repetitive synchronous digging motion displayed by BTBR T+ Itpr3tf/J (BTBR) mice when placed in a testing cage with sufficient sawdust bedding. The procedure is a modification of the juvenile social interaction protocol and is used here to assess repetitive motor stereotypies relevant to Autism Spectrum Disorder.

Inchworming: A Novel Motor estereotipias en el BTBR<em&gt; T<sup&gt; +</sup&gt; Itpr3<sup&gt; Tf</sup</em&gt; / J Modelo de ratón de autismo

Autism Spectrum Disorder (ASD) is a behaviorally defined neurodevelopmental disorder characterized by decreased reciprocal social interaction, abnormal ...

Investigación

Comportamiento

Contextual and Cued Fear Conditioning Test Using a Video Analyzing System in Mice

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association between environmental cues and aversive experiences. In this test, mice are placed into a conditioning chamber and are given parings of a conditioned stimulus (an auditory cue) and an aversive unconditioned stimulus (an electric footshock). After a delay time, the mice are exposed to the same conditioning chamber and a differently shaped chamber with presentation of the auditory cue. Freezing behavior during the test is measured as an index of fear memory. To analyze the behavior automatically, we have developed a video analyzing system using the ImageFZ application software program, which is available as a free download at http://www.mouse-phenotype.org/. Here, to show the details of our protocol, we demonstrate our procedure for the contextual and cued fear conditioning test in C57BL/6J mice using the ImageFZ system. In addition, we validated our protocol and the video analyzing system performance by comparing freezing time measured by the ImageFZ system or a photobeam-based computer measurement system with that scored by a human observer. As shown in our representative results, the data obtained by ImageFZ were similar to those analyzed by a human observer, indicating that the behavioral analysis using the ImageFZ system is highly reliable. The present movie article provides detailed information regarding the test procedures and will promote understanding of the experimental situation.

This article presents a protocol for a contextual and cued fear conditioning test using a video analyzing system to assess fear learning and memory in mice.

Contextuales y complementada el condicionamiento del miedo de prueba utilizando un sistema de análisis de vídeo en ratones

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association ...

The Forced Swim Test as a Model of Depressive-like Behavior

The goal of the present protocol is to describe the forced swim test (FST), which is one of the most commonly used assays for the study of depressive-like behavior in rodents. The FST is based on the assumption that when placing an animal in a container filled with water, it will first make efforts to escape but eventually will exhibit immobility that may be considered to reflect a measure of behavioral despair. This test has been extensively used because it involves the exposure of the animals to stress, which was shown to have a role in the tendency for major depression. Additionally, the FST has been shown to share some of the factors that are influenced or altered by depression in humans, including changes in food consumption, sleep abnormalities and drug-withdrawal-induced anhedonia. The main advantages of this procedure are that it is relatively easy to perform and that its results are easily and quickly analyzed. Moreover, its sensitivity to a broad range of antidepressant drugs that makes it a suitable screening test is one of the most important features leading to its high predictive validity. Despite its appeal, this model has a number of disadvantages. First, the issue of chronic augmentation is problematic in this test because in real life patients need to be treated for at least several weeks before they experience any relief from their symptoms. Last, due to the aversiveness of the FST, it is important to take into account possible influences it might have on brain structure/function if brain analyses are to be carried out following this procedure.

This protocol describes the forced swim test, which is used for the study of depressive-like behavior in rodents. This procedure involves placing an animal in a container filled with water that eventually will lead to the exhibition of immobility behavior, which is considered to reflect behavioral despair.

La prueba de natación forzada como un modelo de depresivo-como comportamiento

The goal of the present protocol is to describe the forced swim test (FST), which is one of the most commonly used assays for the study of depressive-like ...

Morris Water Maze Test: Optimization for Mouse Strain and Testing Environment

The Morris water maze (MWM) is a commonly used task to assess hippocampal-dependent spatial learning and memory in transgenic mouse models of disease, including neurocognitive disorders such as Alzheimer&#8217;s disease. However, the background strain of the mouse model used can have a substantial effect on the observed behavioral phenotype, with some strains exhibiting superior learning ability relative to others. To ensure differences between transgene negative and transgene positive mice can be detected, identification of a training procedure sensitive to the background strain is essential. Failure to tailor the MWM protocol to the background strain of the mouse model may lead to under- or over- training, thereby masking group differences in probe trials. Here, a MWM protocol tailored for use with the F1 FVB/N x 129S6 background is described. This is a frequently used background strain to study the age-dependent effects of mutant P301L tau (rTg(TauP301L)4510 mice) on the memory deficits associated with Alzheimer&#8217;s disease. Also described is a strategy to re-optimize, as dictated by the particular testing environment utilized.

This manuscript describes a Morris water maze (MWM) protocol tailored for use with a commonly used mouse model of Alzheimer's disease. The MWM is widely used in transgenic mouse models. Implementation of a procedure sensitive to the background strain of the mouse model is essential for detecting group differences.

Morris Water Maze Prueba: Optimización de ratón Colar y entorno de pruebas

 The Morris water maze (MWM) is a commonly used task to assess hippocampal-dependent spatial learning and memory in transgenic mouse models of disease, ...

A Novel Approach to Assess Motor Outcome of Deep Brain Stimulation Effects in the Hemiparkinsonian Rat: Staircase and Cylinder Test

Deep brain stimulation of the subthalamic nucleus is an effective treatment option for Parkinson&#39;s disease. In our lab we established a protocol to screen different neurostimulation patterns in hemiparkinsonian (unilateral lesioned) rats. It consists of creating a unilateral Parkinson&#39;s lesion by injecting 6-hydroxydopamine (6-OHDA) into the right medial forebrain bundle, implanting chronic stimulation electrodes into the subthalamic nucleus and evaluating motor outcomes at the end of 24 hr periods of cable-bound external neurostimulation. The stimulation was conducted with constant current stimulation. The amplitude was set 20% below the individual threshold for side effects. The motor outcome evaluation was done by the assessment of spontaneous paw use in the cylinder test according to Shallert and by the assessment of skilled reaching in the staircase test according to Montoya. This protocol describes in detail the training in the staircase box, the cylinder test, as well as the use of both in hemiparkinsonian rats. The use of both tests is necessary, because the staircase test seems to be more sensitive for fine motor skill impairment and exhibits greater sensitivity to change during neurostimulation. The combination of the unilateral Parkinson model and the two behavioral tests allows the assessment of different stimulation parameters in a standardized way.

Deep brain stimulation (DBS) is an effective treatment option for Parkinson's disease. We established a study design to screen novel stimulation paradigms in rats. The protocol describes the use of the staircase test and cylinder test for motor outcome assessment in DBS treated hemiparkinsonian rats.

Un nuevo enfoque para evaluar el resultado de motor de Estimulación Cerebral Profunda Efectos en la rata hemiparkinsonianas: Escalera y cilindro de prueba

Deep brain stimulation of the subthalamic nucleus is an effective treatment option for Parkinson&#39;s disease. In our lab we established a protocol to ...

The Treadmill Fatigue Test: A Simple, High-throughput Assay of Fatigue-like Behavior for the Mouse

Fatigue is a prominent symptom in many diseases and disorders and reduces quality of life for many people. The lack of clear pathogenesis and failure of current interventions to adequately treat fatigue in all patients leaves a need for new treatment options. Despite the therapeutic need and importance of preclinical research in helping identify promising novel treatments, few preclinical assays of fatigue are available. Moreover, the most common preclinical assay used to assess fatigue-like behavior, voluntary wheel running, is not suitable for use with some strains of mice, may not be sensitive to drugs that reduce fatigue, and has relatively low throughput. The current protocol describes a novel, non-voluntary preclinical assay of fatigue-like behavior, the treadmill fatigue test, and provides evidence of its efficacy in detecting fatigue-like behavior in mice treated with a chemotherapy drug known to cause fatigue in humans and fatigue-like behavior in animals. This assay may be a beneficial alternative to wheel running, as fatigue-like behavior and potential interventions can be assessed in a greater number of mice over a shorter time frame, thus permitting faster discovery of new therapeutic options.

Fatigue is a common, undertreated and frequently poorly-understood symptom in many diseases and disorders. New preclinical assays of fatigue may help to improve current understanding and future treatment of fatigue. To that end, the current protocol provides a novel means of measuring fatigue-like behavior in the mouse.

El Ensayo de fatiga rueda de ardilla: Un ensayo sencillo, de gran procesamiento de comportamiento a fatiga similar para el ratón

Fatigue is a prominent symptom in many diseases and disorders and reduces quality of life for many people. The lack of clear pathogenesis and failure of ...

The 4 Mountains Test: A Short Test of Spatial Memory with High Sensitivity for the Diagnosis of Pre-dementia Alzheimer's Disease

This protocol describes the administration of the 4 Mountains Test (4MT), a short test of spatial memory, in which memory for the topographical layout of four mountains within a computer-generated landscape is tested using a delayed match-to-sample paradigm. Allocentric spatial memory is assessed by altering the viewpoint, colors and textures between the initially presented and target images.
Allocentric spatial memory is a key function of the hippocampus, one of the earliest brain regions to be affected in Alzheimer&#39;s disease (AD) and impairment of hippocampal function predates the onset of dementia. It was hypothesized that performance on the 4MT would aid the diagnosis of predementia AD, which manifests clinically as Mild Cognitive Impairment (MCI).
The 4MT was applied to patients with MCI, stratified further based on cerebrospinal fluid (CSF) AD biomarker status (10 MCI biomarker positive, 9 MCI biomarker negative), and with mild AD dementia, as well as healthy controls. Comparator tests included tests of episodic memory and attention widely accepted as sensitive measures of early AD. Behavioral data were correlated with quantitative MRI measures of the hippocampus, precuneus and posterior cingulate gyrus.
4MT scores were significantly different between the two MCI groups (p = 0.001), with a test score of &#8804;8/15 associated with 100% sensitivity and 78% specificity for the classification of MCI with positive AD biomarkers, i.e., predementia AD. 4MT test scores correlated with hippocampal volume (r = 0.42) and cortical thickness of the precuneus (r = 0.55).
In conclusion, the 4MT is effective in identifying the early stages of AD. The short duration, easy application and scoring, and favorable psychometric properties of the 4MT fulfil the need for a simple but accurate diagnostic test for predementia AD.

The 4 Mountains Test: A Short Test of Spatial Memory with High Sensitivity for the Diagnosis of Pre-dementia Alzheimer&#039;s Disease

This article describes the 4 Mountains Test (4MT), a hippocampus-dependent test of working allocentric spatial memory. The hippocampus is affected early in Alzheimer's disease (AD) and this article outlines the 4MT methodology and results of patient testing, which demonstrates the value of the 4MT in the diagnosis of pre-dementia AD.

El 4 Montañas de prueba: una prueba corta de la memoria espacial con alta sensibilidad para el diagnóstico de pre-demencia Enfermedad de Alzheimer

This protocol describes the administration of the 4 Mountains Test (4MT), a short test of spatial memory, in which memory for the topographical layout of ...

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors remains poorly understood. In Drosophila melanogaster, environmental cues, such as food availability, affect mating activity offering a tractable system to investigate the mechanisms modulating sexual behavior. In D. melanogaster, environmental cues are often sensed via the chemosensory gustatory and olfactory systems. Here, we present a method to test the effect of environmental chemical cues on mating behavior. The assay consists of a small mating arena containing food medium and a mating couple. The mating frequency for each couple is continuously monitored for 24 h. Here we present the applicability of this assay to test environmental compounds from an external source through a pressurized air system as well as manipulation of the environmental components directly in the mating arena. The use of a pressurized air system is especially useful to test the effect of very volatile compounds, while manipulating components directly in the mating arena can be of value to ascertain a compound's presence. This assay can be adapted to answer questions about the influence of genetic and environmental cues on mating behavior and fecundity as well as other male and female reproductive behaviors.

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

We demonstrate an assay to analyze the environmental and genetic cues that influence mating behavior in the fruit fly Drosophila melanogaster.

Un método para probar el efecto de las señales ambientales sobre el comportamiento de apareamiento en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice

The object recognition test (ORT) is a commonly used behavioral assay for the investigation of various aspects of learning and memory in mice. The ORT is fairly simple and can be completed over 3 days: habituation day, training day, and testing day. During training, the mouse is allowed to explore 2 identical objects. On test day, one of the training objects is replaced with a novel object. Because mice have an innate preference for novelty, if the mouse recognizes the familiar object, it will spend most of its time at the novel object. Due to this innate preference, there is no need for positive or negative reinforcement or long training schedules. Additionally, the ORT can also be modified for numerous applications. The retention interval can be shortened to examine short-term memory, or lengthened to probe long-term memory. Pharmacological intervention can be used at various times prior to training, after training, or prior to recall to investigate different phases of learning (i.e., acquisition, early or late consolidation, or recall). Overall, the ORT is a relatively low-stress, efficient test for memory in mice, and is appropriate for the detection of neuropsychological changes following pharmacological, biological, or genetic manipulations.

The object recognition test (ORT) is a simple and efficient assay for evaluating learning and memory in mice. The methodology is described below.

Prueba de reconocimiento de objeto novedoso para la investigación del aprendizaje y la memoria en ratones

The object recognition test (ORT) is a commonly used behavioral assay for the investigation of various aspects of learning and memory in mice. The ORT is ...

Measuring Active and Passive Tameness Separately in Mice

Domesticated animals such as dogs and laboratory mice show a high level of tameness, which is important for humans to handle them easily. Tameness has two behavioral components: a reluctance to avoid humans (passive tameness) and a motivation to approach humans (active tameness). To quantify these components in mice, we previously developed behavioral tests for active tameness, passive tameness, and the willingness to stay on a human hand, each designed to be completed within 3 min. The data obtained were used for selective breeding, with a large number of mice analyzed per generation. The active tameness test measures the movement of the mouse toward a human hand and the contact it engages in. The passive tameness test measures the duration of time that a mouse tolerates human touch. In the stay-on-hand test, a mouse is placed on a human hand and touched slowly using the thumb of that hand; the duration of time that the animal remains on the hand is measured. Here, we describe the test set-up and apparatus, explain the procedures, and discuss the appropriate data analysis. Finally, we explain how to interpret the results.

Tameness in animals includes a reduction of avoidance responses to humans (passive tameness) and an increase in active approaches to humans (active tameness). Here, we describe detailed protocols for three behavioral tests (active tameness, passive tameness, and stay-on-hand tests) to separately measure the active and passive tameness of mice.

Medición activa y pasiva mansedumbre por separado en ratones

Domesticated animals such as dogs and laboratory mice show a high level of tameness, which is important for humans to handle them easily. Tameness has two ...