Biz fotoğraf ve videografi ile teknik uzmanlık ve yardım için Sayın John Crowell ve Sayın Terry Upshall teşekkür ederiz. Bu çalışma İnme Kurtarma Catalyst hibe Kanada Sağlık Araştırma Enstitüleri ve Newfoundland Araştırma ve Geliştirme Kurumu ve Kalp ve Kanada Kanada Ortaklığı İnme Vakfı JLV hibe işletim tarafından desteklenmiştir. RBR bir Keith Griffiths Memorial Kalp ve İnme Vakfı Yüksek Lisans Bursu bir alıcı oldu.

Etik bildirimi: Bütün deneyler Hayvan Bakımı Kanada Konseyi kurallarına göre Newfoundland Hayvan Bakım Etik Kurulu Memorial Üniversitesi tarafından onaylanmıştır. 1. Fare <ol><li> Yetişkin fareler kullanın. Bu çalışmada, yetişkin erkek FVBN fare (n = 10) arasında 2-4 ay kullanılmıştır. 12:12 hr ev fareleri aydınlık-karanlık döngüsü ters ve standart kemirgen yemi ve su ad libitum sağlar. </li></ol> Silindir Testi İçin Gerekli Malzemeler 2. <ol><li> Silindir testin filme alınmasında şeffaf üst bir tablo elde etmek. Tablonun boyutları üst pleksiglas veya cam olmalı, ve masanın altına bir ayna konumlandırmak için yeterli yer olmalıdır, alakasız. Fare aşağıdan videoya edilmesi için bu izin verir. Silindir boyunca görüntü yansıtmak için aşağıdaki tabloda bir ayna kullanın. Varsa bir alternatif olarak, baş aşağı kamera kullanımı. Bu protokolde kullanılan tablonun boyutları 54 x 56 x 66.5cm 51 x 51cm üst (WXL) ile (ExBxY). </li><li> Bir ayna alın. Bu protokolde kullanılan ayna boyutları 34 x 58cm (WXL) bulunmaktadır. </li><li> Fare gerçekleştirmek için şeffaf / pleksiglas silindiri edinin. Bu protokolde kullanılan silindirin boyutları yüksek 17.5cm, 8,8 cm ID, 0.35cm bir duvar kalınlığı ile 9.5cm OD vardır. Bir uzun silindir daha aktif fare türü için de gerekli olabilir. </li><li> Masa üzerindeki silindir yerleştirin ve aşağıdaki aynada yansıması filme. </li><li> Bir video kamera ve tripod gereklidir. Yaklaşık silindir video 5 dakika başına 190MB yaklaşık 650KB / s Video kaydetme. Kamera silindir görüş tüm alanı kapsar emin olmak için bir yakınlaştırma işlevi olduğundan emin olun. NOT: Bu protokolde kullanılan video kamera standart tanımı, NTSC geçmeli videoyu kullanan bir Sony DCR-SR42, 40x optik zoom, 2,000x dijital zoom, 680kpix) olduğunu. </li><li> Analiz yazılımı edinin - Bir medya plvideo desteği ve oynatma hızı modülasyonu ile ayer. Bu protokolde kullanılan medya oynatıcı VLC Media Player v2.1.2 olduğunu. </li><li> Medya oynatıcı ve monitör çalıştırabilen bir işletim sistemine sahip bir bilgisayar edinin. </li><li> Videolar için elektronik depolama gereklidir. Harici bir sabit disk videoları indirin ya da uzun süreli saklama için DVD&#39;lere kopyalayın. NOT: Video başına 190MB anda, 84 seans, 16 GB SD karta uyacak ve 168 seans 32GB SD karta uyacaktır. Nedeniyle, SD medya göreceli ucuzluk ve bazı fareler 20 rears tamamlamak için ihtiyaç ne kadar zaman içinde belirsizlik, 32 GB kart önerilir. Bu çalışmada, videolar 2TB harici sabit disk kameradan kopyalanan ve daha sonra yedek olarak DVD&#39;lere recopied. </li></ol> Silindir Testi 3. Deneysel Kurulum <ol><li> Masa bir 45 derecelik açıyla aşağıdaki tabloda ayna sabitleyin. Masa ayakları bağlanmış bu kullanarak iki destek braketleri suppor için musunuzsırasıyla, aynanın alt ve üst t. Parantez yerleri tablosu (Şekil 1A) bir yan görünümü ve tablosu (Şekil 1B) bir yüzü üzerine görünümünde not edilir. </li><li> Masanın ortasına silindiri yerleştirin. Silindir siyah işaretleyici (Sharpie) silindir kaldırdı ve aynı pozisyona iade edilebilir ve böylece (Şekil 2) ile masaya oturur dört eşit uzaklıktaki çizgiler çizin. Şeffaf masa alt onları Çizim masa işaretleyici mürekkep eriterek olmadan hayvan testler arasında temizlenmelidir sağlar. </li><li> Kamera ve tripod takın. Resim silindir namlu doğrudan bakıyor böylece aynaya kamerayı yöneltin. Silindirin tam bir iç duvar tabanı (Şekil 3) ile görünür ve engelsiz olduğundan emin olun. , Kamera ve ayna ayarı göreli açısı dahil, kurulum yan görünüşe bakınız yukarıdaki (Şekil 4A) dan ve gelenFare yetiştirme (Şekil 4B) de dahil olmak üzere Tablo seviyesi. </li><li> Çekimlerin öncesinde her fare tanımlamak için işaret kartlarını hazırlayın. Kartlar tipik olarak, her bir fare için bir kimlik numarası, test zaman noktası (örn., 3 gün tedaviden sonra) ve film oturumu tarihini de emin olun. Deneyci kör sağlamak için işaret kartında tedavi grubunu dahil etmeyin. </li><li> Işığın bu seviyede gibi standart iç mekan aydınlatma koşullarında Film açıkça silindirin etrafına fare hareketlerini görmek için gereklidir. NOT: yeterli olabilir bir kırmızı ışık kamera ile karanlıkta filme Varsa, ancak bir ilk pençe dokunur ve Sürüyor açıkça ölçümü görebilir olup olmadığını test etmek gerekir. </li></ol> 4. Yürütme <ol><li> Filme başlayın. Kamera lensinin önünde uygun fare işaret kartını görüntüler. </li><li> Hemen işaret kartı filme sonra açık üstten silindir içine fare indirin. </li><li> Fareyi filme başlayın. Fareler startled eğer keşfetmek ilgi kaybedebilir olarak, bu süre boyunca gürültüyü en aza indirir. </li><li> Silindir keşfetmek için fareler arka gözlemleyin. Fare yirmi rears en az gerçekleştirene kadar video yakalama. NOT: Her iki forepaws zeminle temas kaybetmek ve fare arka ayakları üzerinde duruyor BIR arka oluşur. </li><li> Dezenfekte ve fare kokuları uzaklaştırmak için her fare arasında uygun bir temizleme solüsyonu ile masanın üzerinde ve silindir silin. </li><li> Fareler keşfetmek durdurmak ve sessizce yaklaşık 5 dakika boyunca dört ayak üzerinde oturan kalır zaman dondurma. Yirmi rears oluşmadan önce fareler dondurmak, bu testi başlamadan önce 10-20 dakika süreyle silindirden bunları kaldırmak için gerekli olabilir. Fareler yirmi rears yapmazsanız, onlar çalışmaya kaldırılır. NOT: Bizim tecrübelerimize göre, fareler yüzünden silindir keşfetmek için başarısızlık hariç gereken asla. </li></ol> Paw sürükleyerek kullanarak Silindir Testinin 5. DeğerlendirmeAnaliz <ol><li> Fare silindir araştırıyor ne kadar hızlı bağlı olarak 0.25X arasında 0.67x normal hızda hızında videoyu oynatın. Yavaş oynatma hızları sunan bir medya oynatıcı kullanın. </li><li> Pençe dokunur toplam sayısını ölçmek. Fare rears (Şekil 5A), silindir (Şekil 5B) yan dokunduğunda Paw dokunur sonra her ikisi de aynı anda pençeleri (Şekil 5C) ve arazilerin (Şekil 5D) ile kaldırır, ortaya çıkar. pençe olabilir veya tam hurma ile silindir duvara temas olmayabilir, ama silindir duvarı ile bazı temas gerçekleşmesi gerekir. Bir arka sırasında arka bacaklarda üzerinde dururken her iki forepaws ya da silindir duvarına (ne kadar kısa) fare temas ettiği sayısını sayarak pençe dokunur değerlendirin. Silindir duvarı ile temasın Not sadece bir &quot;pençe dokunuş&quot; veya &quot;pençe-drag&quot; fare bir arka pozisyonda ise sayılır - ayaktamasa kapalı hem forepaws ile arka bacaklarda üzerinde. Masa üzerine arka bacaklarda ve bir forepaw hem de ücretsiz pençe ile duvara dokunmak gelirleri - - fare 3 nokta duruşu kalırsa bu pençe dokunuş olarak sayılmaz. Fareler arka olabilir ve tek bir forepaw ile silindir duvara dokunun ve bu pençe dokunuş olarak sayılır. Not: Bir fare de ikiden fazla kişi yapıyor, bir arka sırasında silindir etrafında bedenini hareket edebilir. Her sol forepaw touch için bir ve her doğru forepaw touch için tek - Bu kişiler sayımı. </li><li> Pençe-drags sayısını ölçmek. Paw-sürükleyerek davranışı, normal pençe dokunur farklıdır. <ol><li> Pençe kişileri tam açık avuç (Şekil 6B) ile silindir duvarı varsa, yavaş yavaş hafif bir titreme ile sık sık, duvardan uzağa düşecek. Hareket complet uzak düşmeden önce silindir duvara ya medial veya aşağı yönde (Şekil 6C) sürükleyerek hane ile başlayanely (Şekil 6D). Fare sonra tüm ayak (Şekil 6F) açılış öncesi etkilenmeyen pençe (Şekil 6E) ile bağlantısını kesmek olacak. Bu pençe sürükleme olarak kabul edilir ve bir taksitli olarak sayılmalıdır. </li><li> Pençe tamamen açık hurma ile silindir duvara temas etmezse, silindir duvarından uzağa düşen öncesi hane ile silindir duvarını otlatmak olacaktır. Benzer şekilde, bir fare silindir duvara pençesini sürükleyip ama sökmek önce tamamen serbest olmayabilir. Bunlar hem dokunur yanı sıra pençe-sürükler ve taksitli hem olarak kabul edilmelidir kabul edilir. </li><li> Bir fare silindiri araştırıyor iken pençe da silindir duvar boyunca sürükleyebilirsiniz. O (Şekil 7E) sökme önce orijinal konumuna (Şekil 7A-D) sol veya sağ araştırıyor Bu durumda, pençe farenin gövde büküm takip edecektir. Rastgele seçerek fare bağlı olarak bu, bir pençe-sürükleyin kabul edilmezbir yönde keşfetmek ve kortikal hemisfer zarar gördüğü bağlı değildir. </li></ol></li><li> Paw-Sürüyor bir yüzdesi olarak ifade edilir bir oturum sırasında pençe dokunur toplam sayısı başına pençe-sürükler. Ayrı ayrı ön ayakları için toplam pençe rehber bir yüzdesi olarak pençe-drags sayısını ifade eder. </li><li> Bir pençe-drag sonuçlanan Dokunuşlar bir pençe-sürükle ve aynı zamanda bir dokunuş olarak sayılır. Fare onun pençe temas her defasında silindir duvarı pençesini sürükler Böylece, eğer pençe-sürükleyerek yüzdesi% 100 olarak ifade edilir. </li></ol> 6. Ek Deney Tasarımı Öneriler <ol><li> Yabancı değişkenleri en aza indirmek için: <ol><li> Her test gününde aynı anda fareler test edin. Onların uyanma döngüsü sırasında fareler test edin. 12 saat ters ışık döngüsü farelerin tutulması performansı kolaylaştırır. </li><li> Fareler gürültü veya yeni bir çevre yoluyla stresli ise silindir keşfetmek için isteksiz olabilir. Onların hayvan tutma oda veya bir odada fareler test onlar b vareen stresi azaltır aşina. Fare öncesinde silindir girmeden ya da alışma nedeniyle jostled olması durumunda oda, gürültülü, bu durum oluşabilir. NOT: Sınav bazal okuma olarak hizmet deneysel manipülasyon önce bir kez yapılmalıdır. O zaman kısa bir süre içinde silindire poz aşırı sayıda önlemek için tavsiye edilir olsa da manipülasyon sonra, test günleri, deneycinin takdirindedir. </li><li> Fareler silindire 6-7 maruz kalmalarından sonra arka isteksiz olabilir. Bu çalışmada, fareler iskemiden önce ve 1, 3, 7, 14, 21 ve 28, cerrahi sonrasında yedi kez, toplam silindir içinde test edildi. NOT: Bu çalışmada FVBN fare suşu kullanıldı. Daha önce, bir ET-1, iskemik yaralanma sonrası silindir ve gözlenen pençe sürükleyerek davranış C57BL / 6 fareleri test ettik (veriler gösterilmemiştir). C57BL / 6 fareleri yetiştirme sırasında FVBN farelere göre daha aktif ve sık silindirin jant üzerine arttıdışarı tırmanma önce. Fareler atlayarak kaçmaya çalışırsanız uzun silindir kullanılmalıdır. </li></ol></li></ol> 7. Endotelin-1 Cerrahi ve Enfarktüs Hacim Ölçümleri <ol><li> Daha önce yayınlanmış protokollere 4&#39;e göre Endotelin-1 cerrahi ve enfarktüs hacmi ölçümleri yapın. Ön ön ayakları, motor korteks hedeflemek için, her bir fare, aşağıdaki koordinat üç ET-1 enjeksiyonu yapılır: (i) 0,7 arterior (AP) için 1,5 medial-yanal (mi) / - 1.2 dorsal-ventral (DV), ( ii) 0,4 AP / 1.25 ml / - 1.2 DV ve (iii) 0,1 AP / 1.75 ml / -1.2 DV 4. </li></ol> 8. İstatistiksel Analiz <ol><li> Varyans iki yönlü tekrarlı ölçümler analizi (ANOVA) pençe-sürükleyerek farklı zaman noktalarında karşısında etkilenen ve etkilenmeyen pençelerinin için yüzde analiz etmek önerilir. </li></ol>

<ol><li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke%2C+cortical+ablation%2C+parkinsonism+and+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li>
<li>Kolb, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+factor-stimulated+generation+of+new+cortical+tissue+and+functional+recovery+after+stroke+damage+to+the+motor+cortex+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Growth factor-stimulated generation of new cortical tissue and functional recovery after stroke damage to the motor cortex of rats.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 27 (5), 983-997 (2007).</li>
<li>Windle, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+analysis+of+four+different+methods+of+producing+focal+cerebral+ischemia+with+endothelin-1+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">An analysis of four different methods of producing focal cerebral ischemia with endothelin-1 in the rat.</a> Exp Neurol. 201 (2), 324-334 (2006).</li>
<li>Roome, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reproducible+Endothelin-1+model+of+forelimb+motor+cortex+stroke+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A reproducible Endothelin-1 model of forelimb motor cortex stroke in the mouse.</a> J Neurosci Methods. 233, 34-44 (2014).</li>
<li>Tennant, K. A., Jones, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensorimotor+behavioral+effects+of+endothelin-1+induced+small+cortical+infarcts+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Sensorimotor behavioral effects of endothelin-1 induced small cortical infarcts in C57BL/6 mice.</a> J Neurosci Methods. 181 (1), 18-26 (2009).</li>
<li>Wang, Y., Jin, K., Greenberg, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+associated+with+endothelin-induced+cortical+infarction+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis associated with endothelin-induced cortical infarction in the mouse.</a> Brain Res. 1167, 118-122 (2007).</li>
<li>Baskin, Y. K., Dietrich, W. D., Green, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+effective+behavioral+tasks+for+evaluating+sensorimotor+dysfunction+following+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Two effective behavioral tasks for evaluating sensorimotor dysfunction following traumatic brain injury in mice.</a> J Neurosci Methods. 129 (1), 87-93 (2003).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+behavioral+testing+after+focal+ischemia+in+the+mouse%3A+functional+recovery+and+the+effects+of+gender%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Chronic behavioral testing after focal ischemia in the mouse: functional recovery and the effects of gender.</a> Exp Neurol. 187 (1), 94-104 (2004).</li>
<li>Clarke, J., Ploughman, M., Corbett, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+qualitative+and+quantitative+analysis+of+skilled+forelimb+reaching+impairment+following+intracerebral+hemorrhage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">A qualitative and quantitative analysis of skilled forelimb reaching impairment following intracerebral hemorrhage in rats.</a> Brain Res. , 204-212 (2007).</li>
<li>Montoya, C. P., Campbell-Hope, L. J., Pemberton, K. D., Dunnett, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%27staircase+test%27%3A+a+measure+of+independent+forelimb+reaching+and+grasping+abilities+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">The 'staircase test': a measure of independent forelimb reaching and grasping abilities in rats.</a> J Neurosci Methods. 36 (2-3), 219-228 (1991).</li>
<li>Farr, T. D., Whishaw, I. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+and+qualitative+impairments+in+skilled+reaching+in+the+mouse+%28Mus+musculus%29+after+a+focal+motor+cortex+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Quantitative and qualitative impairments in skilled reaching in the mouse (Mus musculus) after a focal motor cortex stroke.</a> Stroke. 33 (7), 1869-1875 (2002).</li>
<li>Tennant, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vermicelli+and+capellini+handling+tests%3A+simple+quantitative+measures+of+dexterous+forepaw+function+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The vermicelli and capellini handling tests: simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice.</a> J Vis Exp. (41), (2010).</li>
<li>Clarkson, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AMPA+receptor-induced+local+brain-derived+neurotrophic+factor+signaling+mediates+motor+recovery+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">AMPA receptor-induced local brain-derived neurotrophic factor signaling mediates motor recovery after stroke.</a> J Neurosci. 31 (10), 3766-3775 (2011).</li>
<li>Clarkson, A. N., Huang, B. S., Macisaac, S. E., Mody, I., Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+excessive+GABA-mediated+tonic+inhibition+promotes+functional+recovery+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Reducing excessive GABA-mediated tonic inhibition promotes functional recovery after stroke.</a> Nature. 468 (7321), 305-309 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını var.

şunlardır silindir testinde pençe-sürükleyerek davranışı ölçülmesi sırasında kilit noktaları kurmak: i) sayısını ölçmek bir temel oluşturmak için beyin hasarı önce her pençe için toplam pençe dokunur karşı pençe-sürükler; ii) iskemik yaralanma sonrası her pençe için toplam pençe dokunur karşı pençe-drags sayısını ölçmek; ve iii) pençe-sürükle ve farenin gövde yanal dönüşü sırasında silindir duvar boyunca pençe lateral hareketi arasında ayrım. <p class="jove_con...

Nöral rejenerasyon stratejileri hedefi doku onarımı ve fonksiyonel iyileşmeyi hem göstermektir. Fonksiyonel iyileşme genellikle spesifik beyin bölgelerinde hasar ile ilişkili motor becerileri kapsayan bu durumda, fonksiyon kaybı ölçmek davranış testleri ile değerlendirilir. Travmatik beyin yaralanması ya da korteksin sensorimotor ön ayakları bölgesinde bir iskemik hasarı davranış testleri bir dizi ile ispat edilebilir. Böyle bir testi, silindir testi ön ayakları faaliyeti 1 işlev bozukluklarını değerlendirmek için sıçanlarda yaygın olarak kullanılır. Test şeffaf bir üst sadece bir silindir, kamera ve masa gerektiren düşük kurulum maliyeti vardır. O kemirgenler doğal keşif davranışı dayalı olarak yönetmek kolaydır, bu nedenle egzersiz öncesi ve gıda yoksunluğu veya ödülleri gerekli değildir. Bu sayısız avantajlara rağmen, silindir testi ön ayakları s odak yaralanmalar aşağıdaki farelerde ön ayakları açıklarını değerlendirmek altında kullanılmaktadırBiz silindir testi fare davranış analizine özellik korteksi, ensorimotor. Ön ayakları asimetri silindir testi için analiz klasik ölçüsüdür. Silindire yerleştirildiğinde, kemirgenler doğal olarak arka bacaklarda üzerine yetiştirme ve postural denge için kendi ön ayakları pençeleri ile silindir duvarları dokunarak silindirin duvarları keşfedebilirsiniz. Her ön ayakları ile duvar pençe dokunur sayısı kolaylıkla silindirin bu keşif sırasında kemirgenler filme ile ölçülür. Etkilenen ön ayakları pençe etkilenmeyen ön ayakları pençe daha duvar az dokunur yapar ve karşı sensorimotor korteks hasar gösterdiğinde ön ayakları asimetri oluşur. Sıçanlarda, damar daraltıcı madde intra-kortikal enjeksiyonlar, Endotelin ön ayakları sensorimotor kortekse (ET-1), karşı ön ayakları davranışsal hasarları ile sonuçlanan bir fokal iskemi lezyon neden olur. Karşı ön ayakları kullanımda Açıkları kolaylıkla f değişiklikler olarak tespit edilirSıçanlarda 1-3 silindir test asimetri orelimb. Ancak sıçanlar aksine, ön ayakları asimetri değişiklikler değişir ve karşılaştırılabilir ET-1 enjeksiyonu 4-6 ardından farelerde daha az uyumludur. Burada silindir testinde ön ayakları davranış yeni bir analizini göstermektedir - pençe-sürükleyerek davranışının analizi. Daha önce bu pençe sürükleyerek analizi, klasik ön ayakları asimetri analizine göre farelerde ön ayakları sensorimotor korteks hasar daha duyarlı bir ölçüdür ve bu nedenle fokal kortikal yaralanma modellerinin çeşitli uygulanabilir olduğunu göstermiştir. 4 pençe-sürükleyerek - nasıl forepaw temasların incelenmesi ön ayakları sensorimotor korteks iskemik hasar aşağıdaki silindir duvar farelerde yeni davranış ortaya koymuştur. Fare sonra kendi orta hatta doğru veya duvar süre aşağı silindir duvar boyunca onun etkilenen (-kontra lezyonal) pençe sürükler silindir duvarını keşfetmek için arka ayakları üzerinde duruyor zaman bir pençe sürükleme oluşuronun etkilenmemiş forepaw duvara postural destek sağlar. Paw-sürükler nadiren bu nedenle pençe-drag görünümü ön ayakları sensorimotor korteks 4 yaralanma olumlu bir göstergedir yaralanmamış farelere meydana gelir. Biz daha önce ön ayakları sensorimotor korteks ET-1 iskemik hasarı aşağıdaki farelerde pençe-sürükleyerek davranışını sayısal ve inme sonrası 4 iki haftaya kadar farelerde sürekli pençe-sürükleyerek davranışı göstermiştir. Burada pençe-sürükleyerek davranışı dört hafta sonrası inme kadar sürekli olduğunu göstermektedir. Pençe-sürükleyerek davranış analizi farelerde ön ayakları sensorimotor korteks fokal iskemik hasarı değerlendirmek için yeni ve duyarlı bir araç sağlar. Onun ucuz set-up, yönetim kolaylığı ve bu hızla farelerde ön ayakları davranış açıklarını değerlendirmek için basit ama kullanışlı bir araç haline puanlama.

<table><tbody><tr><td>Plexi-glass cylinder</td><td></td><td></td><td>17.5 cm high, 9.5 cm outer diameter, 8.8 cm inner diameter, wall thickness 0.35 cm (or 3.5 mm)</td></tr><tr><td>viewing table</td><td></td><td></td><td>54x56x66.5 cm (width x length x height), top of table is a 51x51 cm sheet of plexiglass.</td></tr><tr><td>mirror</td><td></td><td></td><td>34x58 cm mirror</td></tr><tr><td>video camera</td><td>Sony</td><td>DCR-SR42</td><td>Video camera with onboard storage, SD functionality, 40x optical zoom</td></tr><tr><td>computer</td><td>Dell</td><td>Optiplex 760</td><td>Processor: Intel, 3.0 GHz, Memory 4.00GB (RAM)&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>computer monitor</td><td>Samsung</td><td>S22C350H</td><td></td></tr><tr><td>Excel (Microsoft Office Professional Plus)</td><td>Microsoft</td><td>v14.0.7106.5003</td><td></td></tr><tr><td>VLC Media Player</td><td>Video LAN</td><td>v2.1.2</td><td>Media player with playback speed modulation and video support</td></tr><tr><td>External Hard Drive</td><td>Western Digital</td><td>WDBAAU0020HBK-01</td><td>2 TB</td></tr></tbody></table>

paw-dragging: a novel, sensitive analysis of the mouse cylinder test

Silindir testi rutin olarak kemirgenlerde ön ayakları motor korteks fokal iskemik hasarı tahmin etmek için kullanılır. Silindire yerleştirildiğinde, kemirgenler yetiştirme ve postural destek için onların ön ayakları pençeleri ile silindir duvarlarını dokunarak keşfedebilirsiniz. Ön ayakları sensorimotor korteks iskemik hasarı takiben, sıçanlar ön ayakları asimetri denir onların etkilenen pençe ile daha az dokunur sonuçlanan postural destek için etkilenmemiş ön ayakları pençe daha ağır güveniyor. Buna karşılık, fare beyninde fokal iskemik hasar ön ayakları asimetri karşılaştırılabilir tutarlı açıkları neden başarısız olur. Ön ayakları asimetri açıkları seyrek görülürken, fareler &quot;pençe-sürükleme&quot; olarak adlandırılan yeni bir davranış sonrası inme göstermek yok. Paw-sürükleme, bir dört ayaklı duruş bir arkadan sökülmesi sırasında doğrudan duvardan defol ziyade silindir duvar boyunca onun etkilenen pençe sürüklemek için fare eğilimidir. Daha önce olduğunu göstermiştirPençe-sürükleyerek davranış ön ayakları motor korteks küçük kortikal iskemik yaralanmalara oldukça duyarlıdır. Burada pençe-sürükleyerek analizi için ayrıntılı bir protokol sağlar. Bir pençe-drag ne olduğunu tanımlamak ve pençe-sürükleyerek davranışını ölçmek için nasıl gösterilmektedir. Silindir testi yönetmek için basit ve ucuz bir testtir ve ön eğitim veya gıda yoksunluk stratejileri gerektirmez. Daha küçük odak yaralanmaları popülaritesi artan ve üretirler iki model - silindir testi ile pençe-sürükleyerek analizini kullanarak, böyle Fototromboz ve Endotelin-1 (ET-1) teşvikli iskemi gibi kortikal iskemik yaralanma tahmin etmek için bir boşluğu doldurmaktadır Orta serebral arter tıkanıklığı daha. Son olarak, silindir testinde pençe-sürükleyerek davranışını ölçen önceki ön ayakları asimetri analizleri tutarlı açıklarını tespit etmek için başarısız oldu transgenik fare suşlarının geniş kohort kullanarak kortikal yaralanma sonrası fonksiyonel iyileşme çalışmalarını sağlayacaktır.

Biz daha önce bu pençe-sürükleyerek davranış ön ayakları sensorimotor korteks fokal iskemik yaralanma takip belirir ve hasar 4 olumlu bir gösterge olduğunu göstermiştir. Ön ayakları sensorimotor kortekse ET-1 intra-kortikal enjeksiyonlar bir iskemik bir lezyon (Şekil 8A, B) ikna etmek için kullanıldı. Potansiyel kullanım fonksiyonel iyileşmeyi değerlendirmek için pençe-sürükleyerek davranış daha uzun 14 gün sonrası yaralanma uzatıldı olup olmadığını bu çal?...

Watch this Scientific Journal Video about Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test at JoVE.com

Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test

Silindir testi Klasik ön ayakları asimetri analizleri rutin beyin hasarı veya inme aşağıdaki sıçanlarda davranışsal açıkları değerlendirmek için kullanılır; Bununla birlikte, bu farelerin tutarlı açıkları tespit etmek için başarısız olur. Bu çalışma pençe-sürükleme davranışını miktarının farelerde beyin hasarının daha duyarlı bir analiz olduğunu göstermektedir.

Paw-sürükleme: Bir Roman, Fare Silindir Test Hassas Analizi

The cylinder test is routinely used to predict focal ischemic damage to the forelimb motor cortex in rodents. When placed in the cylinder, rodents explore ...

paw-dragging-a-novel-sensitive-analysis-of-the-mouse-cylinder-test

Research

JoVE Journal

Behavior

23.5K Görüntüleme.  Memorial University of Newfoundland.  Silindir testi Klasik ön ayakları asimetri analizleri rutin beyin hasarı veya inme aşağıdaki sıçanlarda davranışsal açıkları değerlendirmek için kullanılır; Bununla birlikte, bu farelerin tutarlı açıkları tespit etmek için başarısız olur. Bu çalışma pençe-sürükleme davranışını miktarının farelerde beyin hasarının daha duyarlı bir analiz olduğunu göstermektedir. 

Video: Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test

Assessment of Sensorimotor Function in Mouse Models of Parkinson's Disease

Sensitive and reliable behavioral outcome measures are essential to the evaluation of potential therapeutic treatments in preclinical trials for many neurodegenerative diseases. In Parkinson's disease, sensorimotor tests sensitive to varying degrees of nigrostriatal dysfunction are fundamental for testing the efficacy of potential therapeutics. Reliable and quite elegant sensorimotor measures exist for rats, however many of these tests measure sensorimotor asymmetry within the rat and are not entirely suitable for the newer genetic mouse models of PD. We have put together a battery of sensorimotor tests inspired by the sensitive tests in rats and adapted for mice. The test battery highlighted in this study is chosen for a) its sensitivity in a wide variety of mouse models of PD, b) its ease in implementing into a study, and c) its low expense. These tests have proven useful in characterizing novel genetic mouse models of PD as well as in testing potential disease-modifying therapies.

In Parkinson's disease and movement disorders in general, sensitive and reliable behavioral assays are essential for testing novel potential therapeutics. Here, we describe a manageable battery of sensorimotor tests for mice that are sensitive to varying degrees of injury to the nigrostriatal system and useful for preclinical studies.

Parkinson Hastalığı Fare Modeller Duyusal Motor Fonksiyon Değerlendirilmesi

Sensitive and  reliable behavioral outcome measures are essential to the evaluation of  potential therapeutic treatments in preclinical trials for many  ...

Davranış

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended upon this work to develop a simple quantitative measure of forepaw dexterity that is sensitive to lateralized impairments and age-dependent changes. Rodents learn skillful forepaw and digit movements to manage thin pasta pieces, which they eagerly consume. We have previously described methods for quantifying vermicelli handling in rats and showed that the measures are very sensitive to forelimb impairments resulting from unilateral ischemic lesions, middle cerebral artery occlusions and unilateral striatal dopamine depletion [Allred, R.P., Adkins, D.L., Woodlee, M.T., Husbands, L.C., Maldonado M.A., Kane, J.R., Schallert, T. &amp; Jones, T.A. The Vermicelli Handling Test: a simple quantitative measure of dexterous forepaw function in rats. J. Neurosci. Methods 170, 229-244 (2008)]. Here we present a more detailed protocol for this test in rats and compare it with a newly developed version for mice, the Capellini Handling Test. Rats and mice are videotaped while handling short lengths of uncooked vermicelli or capellini pasta, respectively, with a camera positioned to optimize the view of paw movements. Slow motion video playback allows for the identification of forepaw adjustments, defined as any distinct removal and replacement of the paw, or of any number of digits, on the pasta piece after eating commences. Forepaw adjustments per piece are averaged over trials per each testing session. Repeated testing permits sensitive quantitative analysis of changes in forepaw dexterity over time. Protocols for pre-testing habituation and handling practice, as well as procedures for characterizing atypical handling patterns, are described. Because rats and mice perform the pasta handling tests slightly differently, species-specific differences in administration and scoring of these tests are highlighted. All animal use was in accordance with protocols approved by the University of Texas at Austin Animal Care and Use Committee.

The Vermicelli and Capellini Handling Tests of forepaw dexterity take advantage of the natural inclination of rodents to manipulate food items using skillful forepaw and digit movements. Animals are videotaped while handling short strands of uncooked dry pasta. Slow motion video playback allows for the quantification of forepaw adjustments.

Şehriye ve Capellini İşleme Testleri: sıçan ve fareler hünerli forepaw fonksiyonu Basit kantitatif tedbirler

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Nörobilim

The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in injured sensory neurons and along the entire nociceptive pathway within the central nervous system. It is usually chronic and challenging to treat. In order to study neuropathic pain and its treatments, different models have been developed in rodents. These models derive from known etiologies, thus reproducing peripheral nerve injuries, central injuries, and metabolic-, infectious- or chemotherapy-related neuropathies. Murine models of peripheral nerve injury often target the sciatic nerve which is easy to access and allows nociceptive tests on the hind paw. These models rely on a compression and/or a section. Here, the detailed surgery procedure for the &#34;cuff model&#34; of neuropathic pain in mice is described. In this model, a cuff of PE-20 polyethylene tubing of standardized length (2 mm) is unilaterally implanted around the main branch of the sciatic nerve. It induces a long-lasting mechanical allodynia, i.e., a nociceptive response to a normally non-nociceptive stimulus that can be evaluated by using von Frey filaments. Besides the detailed surgery and testing procedures, the interest of this model for the study of neuropathic pain mechanism, for the study of neuropathic pain sensory and anxiodepressive aspects, and for the study of neuropathic pain treatments are also discussed.

Neuropathic pain is a consequence of a lesion or disease affecting the somatosensory system. The &#8220;cuff model&#8221; of neuropathic pain in mice consists of the implantation of a polyethylene cuff around the main branch of the sciatic nerve. Mechanical allodynia is tested using von Frey filaments.

Farelerde Nöropatik Ağrı Siyatik Sinir cuffing Modeli

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in ...

Tıp

Measuring Changes in Tactile Sensitivity in the Hind Paw of Mice Using an Electronic von Frey Apparatus

Measuring inflammation-induced changes in thresholds of hind paw withdrawal from mechanical pressure is a useful technique to assess changes in pain perception in rodents. Withdrawal thresholds can be measured first at baseline and then following drug, venom, injury, allergen,&#160;or otherwise evoked inflammation by applying an accurate force on very specific areas of the skin. An electronic von Frey apparatus allows precise assessment of mouse hind paw withdrawal thresholds that are not limited by the available filament sizes in contrast to classical von Frey measurements. The ease and rapidity of measurements allow for incorporation of assessment of tactile sensitivity outcomes in diverse models of rapid-onset inflammatory and neuropathic pain as multiple measurements can be taken within a short time period. Experimental measurements for individual rodent subjects can be internally controlled against individual baseline responses and exclusion criteria easily established to standardize baseline responses within and across experimental groups. Thus, measurements using an electronic von Frey apparatus represent a useful modification of the well-established classical von Frey filament-based assays for rodent mechanical allodynia that may also be applied to other nonhuman mammalian models.

Electronic von Frey measurements are an effective and improved alternative to classical von Frey filaments, as they allow rapid and precise measurement of changes in rodent mechanical withdrawal thresholds to continuously applied pressure stimuli before and after an inflammatory event.

Measuring inflammation-induced changes in thresholds of hind paw withdrawal from mechanical pressure is a useful technique to assess changes in pain ...

Urokinase-type Plasminogen Activator-induced Mouse Back Pain Model

A model of persisting lower back pain can be induced in mice with the simple methodology described herein. Step-by-step methods for simple, rapid induction of a persisting back pain model in mice are provided here using an injection of urokinase-type plasminogen activator (urokinase), a serine protease present in humans and other animals. The methodology for induction of persisting lower back pain in mice involves a simple injection of urokinase along the ligamentous insertion region of the lumbar spine. The urokinase inflammatory agent activates plasminogen to plasmin. Typically, the model can be induced within 10 min and hypersensitivity persists for at least 8 weeks.
Hypersensitivity, gait disturbance, and other standard anxiety- and depression-like measures can be tested in the persisting model.&#160;Back pain is the most prevalent type of pain. To improve awareness of back pain, the International Association for the Study of Pain (IASP) named 2021 the &#34;Global Year about Back Pain&#34; and 2022 the &#34;Global Year for Translating Pain Knowledge to Practice.&#34; One limitation of the therapeutic advancement of pain therapeutics is the lack of suitable models for testing persistent and chronic pain. The&#160;features of this model&#160;are suitable for testing potential therapeutics aimed at the reduction of back pain and its ancillary characteristics, contributing to IASP&#39;s naming 2022 as the Global Year for Translating Pain Knowledge to Practice.

Methods for simple, rapid induction of a back pain model in mice are provided here using an intraligament injection of urinary plasminogen activator.

Ürokinaz tipi Plazminojen Aktivatörü ile İndüklenen Fare Sırt Ağrısı Modeli

A model of persisting lower back pain can be induced in mice with the simple methodology described herein. Step-by-step methods for simple, rapid ...

The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The current treatments for OA pain such as NSAIDS or opiates are neither sufficiently effective nor devoid of detrimental side effects. Animal models of OA are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms and define novel pharmacological targets for therapy. Currently available models of OA in rodents include surgical and chemical interventions into one knee joint. The monoiodoacetate (MIA) model has become a standard for modelling joint disruption in OA in both rats and mice. The model, which is easier to perform in the rat, involves injection of MIA into a knee joint that induces rapid pain-like responses in the ipsilateral limb, the level of which can be controlled by injection of different doses. Intra-articular injection of MIA disrupts chondrocyte glycolysis by inhibiting glyceraldehyde-3-phosphatase dehydrogenase and results in chondrocyte death, neovascularization, subchondral bone necrosis and collapse, as well as inflammation. The morphological changes of the articular cartilage and bone disruption are reflective of some aspects of patient pathology. Along with joint damage, MIA injection induces referred mechanical sensitivity in the ipsilateral hind paw and weight bearing deficits that are measurable and quantifiable. These behavioral changes resemble some of the symptoms reported by the patient population, thereby validating the MIA injection in the knee as a useful and relevant pre-clinical model of OA pain.
The aim of this article is to describe the methodology of intra-articular injections of MIA and the behavioral recordings of the associated development of hypersensitivity with a mind to highlight the necessary steps to give consistent and reliable recordings.

Osteoarthritis (OA), or degenerative joint disease, is a debilitating condition associated with pain that remains only partially controlled by available analgesics. Animal models are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms. Here we describe the methodology for the monoiodoacetate model of OA pain in the mouse.

Fare Osteoartrit Ağrı Monoiodoacetate Modeli

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The ...

Automated Gait Analysis in Mice with Chronic Constriction Injury

The von Frey test is a classical method that has been widely used to examine the sensory function of neuropathic pain animals. However, it has some disadvantages such as subjective data and the requirement of a skilled, experienced experimenter. To date, a variety of modifications have improved the von Frey method, but it still has a few limitations. Recent reports have suggested that gait analysis produces more accurate and objective data from the neuropathic animals. This protocol demonstrates how to perform the automated gait analysis to determine the degree of neuropathic pain in mice. After several days of acclimation, the mice were allowed to walk freely on the glass floor to illuminate footprints. Then, quantification of the footprints and gait were performed through video clips with automatic analysis of various walking parameters, such as area of paw print, swing time, angle of paw, etc.
The main purpose of this study is to describe the methodology of automated gait analysis and briefly compare it with data from the classical sensory test using von Frey filament.

The precise assessment of pain response in a neuropathic animal model is critical to investigate the pathophysiology of pain diseases and develop new analgesics. We present a sensitive and objective method to determine the sensory function of the rodent hind paw by an automated gait analysis system.

Kronik daralma Yaralanmalı farelerde otomatik yürüyüş analizi

The von Frey test is a classical method that has been widely used to examine the sensory function of neuropathic pain animals. However, it has some ...

Establishing a Mouse Model of a Pure Small Fiber Neuropathy with the Ultrapotent Agonist of Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1

Patients with diabetes mellitus (DM) or those experiencing the neurotoxic effects of chemotherapeutic agents may develop sensation disorders due to degeneration and injury of small-diameter sensory neurons, referred to as small fiber neuropathy. Present animal models of small fiber neuropathy affect both large- and small-diameter sensory fibers and thus create a neuropathology too complex to properly assess the effects of injured small-diameter sensory fibers. Therefore, it is necessary to develop an experimental model of pure small fiber neuropathy to adequately examine these issues. This protocol describes an experimental model of small fiber neuropathy specifically affecting small-diameter sensory nerves with resiniferatoxin (RTX), an ultrapotent agonist of transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), through a single dose of intraperitoneal injection, referred to as RTX neuropathy. This RTX neuropathy showed pathological manifestations and behavioral abnormalities that mimic the clinical characteristics of patients with small fiber neuropathy, including intraepidermal nerve fiber (IENF) degeneration, specifically injury in small-diameter neurons, and induction of thermal hypoalgesia and mechanical allodynia. This protocol tested three doses of RTX (200, 50, and 10 &#181;g/kg, respectively) and concluded that a critical dose of RTX (50 &#181;g/kg) is required for the development of typical small fiber neuropathy manifestations, and prepared a modified immunostaining procedure to investigate IENF degeneration and neuronal soma injury. The modified procedure is fast, systematic, and economic. Behavioral evaluation of neuropathic pain is critical to reveal the function of small-diameter sensory nerves. The evaluation of mechanical thresholds in experimental rodents is particularly challenging and this protocol describes a customized metal mesh that is suitable for this type of assessment in rodents. In summary, RTX neuropathy is a new and easily established experimental model to evaluate the molecular significance and intervention underlying neuropathic pain for the development of therapeutic agents.

This study establishes an experimental model of pure small fiber neuropathy with resiniferatoxin (RTX). A unique dose of RTX (50 &#181;g/kg) is optimal for developing a small fiber neuropathy model that mimics patient characteristics and could help investigate the nociceptive molecular significance underlying neuropathic pain.

Saf küçük Fiber nöropati bir fare modeli ile geçici reseptör potansiyel Vanilloid tip 1 Ultrapotent Agonist kurulması

Patients with diabetes mellitus (DM) or those experiencing the neurotoxic effects of chemotherapeutic agents may develop sensation disorders due to ...

Development of Recombinant Proteins to Treat Chronic Pain

Chronic pain is difficult to treat and new approaches to resolve persistent pain are urgently needed. Anti-inflammatory cytokines are promising candidates for treating debilitating pain conditions due to their capacity to regulate aberrant neuro-immune interactions. However, physiologically they work in a network of various cytokines, and therefore their therapeutic effect may not be optimal when used as stand-alone drugs. To overcome this limitation, we developed a fusion protein of the anti-inflammatory cytokines IL4 and IL10. Here, we describe the methods for production and quality control of IL4-10 recombinant fusion protein and we test the effectiveness of the IL4-10 fusion protein to resolve pain in a mouse model of persistent inflammatory pain.

In this paper we provide details for the methods of production and quality control of an IL4-10 recombinant fusion protein. We also show how to test the effectiveness of this protein to resolve pain in a mouse model of inflammatory pain.

Kronik ağrı tedavisinde rekombinant proteinler gelişimi

Chronic pain is difficult to treat and new approaches to resolve persistent pain are urgently needed. Anti-inflammatory cytokines are promising candidates ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using reflexive tests that allow inferences regarding pain's nociceptive component but provide little information about the affective or motivational component of pain. Developing tests that capture these components of pain are therefore translationally important. Hence, researchers need to use non-reflexive behavioral assays to study pain perception at that level. Mechanical conflict-avoidance (MCA) is an established voluntary non-reflexive behavior assay, for studying motivational responses to a noxious mechanical stimulus in a 3 chamber paradigm. A change in a mouse's location preference, when faced with competing noxious stimuli, is used to infer the perceived unpleasantness of bright light versus tactile stimulation of the paws. This protocol outlines a modified version of the MCA assay which pain researchers can use to understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models. Though not specifically described here, our example MCA data use the intraplantar complete Freund's adjuvant (CFA), spared nerve injury (SNI), and a fracture/casting model as pain models to illustrate the MCA procedure.

The mechanical conflict-avoidance assay is used as a non-reflexive readout of pain sensitivity in mice which can be used to better understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models.

Farelerde Ağrı Davranışını Ölçmek için Mekanik Çatışmadan Kaçınma Testi

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...