Name: determination of biofilm initiation on virus-infected cells by bacteria and fungi
Uploaded: 2016-07-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 33 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Biofilm Initiation on Virus-infected Cells by Bacteria and Fungi at JoVE.com

This project was supported by Midwestern University, IL Office of Research and Sponsored Programs (ORSP) and Midwestern University College of Dental Medicine-Illinois (CDMI).

1. HSV Cepas y Manipulación Nota: Recombinante la no propagación de HSV-1 (KOS) gL86 y HSV-2 (KOS) 333gJ - con el reportero de la actividad de beta-galactosidasa utilizado fueron proporcionados por V. Twiari 36,37. <ol><li> Utilice virus de un solo lote y se almacena a -80 ° C, a una proporción de 1: 1 de medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) con suero bovino fetal al 20% (FBS) y leche descremada hasta su uso. Antes del almacenamiento mucho viral, determinar la concentración de virus por o-nitrofenil-β-D-galactopiranósido (ONPG) y 5-bromo-4-cloro-3-indolil-β-D-galactopiranósido (X-Gal) ensayo. </li><li> Determinar la viabilidad del virus y la multiplicidad de infección (MOI) por tinción con X-Gal para cada ensayo experimental usando el ensayo de la entrada del virus reportero, tal como se describe anteriormente (figura 1) 14. </li><li> Diluir el virus (Opt-MEM) para MOI deseada. Fijar monocapas (paraformaldehído; 0,5 ml / pocillo) antes de la tinción. Coloque los controles de la viabilidad del virus en un microti separadater placa en paralelo con placas de ensayo polimicrobiana. </li></ol> Manejo células HeLa 2. 299 <ol><li> Crecer a 37 ° C, 5% de CO 2 en DMEM con 4,5 g / l de glucosa, 10% inactivado por calor suero fetal bovino (FBS), gentamicina (50 mg / ml) y L-glutamina. células de paso a 80% de confluencia con una solución de tripsina (ácido etilendiaminotetraacético, EDTA 0,53 M; 0,05% de tripsina; 5 ml / frasco). </li></ol> 3. C. Manipulación albicans Nota: C. albicans obtenidos a partir de una fuente de laboratorio clínico se almacena a -80 ° C en Remmel leche descremada 2x medio. <ol><li> Cultura congelado Stock en Sabouraud Dextrosa Medio (37 ° C). Después de 24 horas la subcultura C. albicans sobre medio Fungisel (37 ° C; 48 hr) para su uso. </li><li> Generar tubo germinal (GT) (formas recoger colonias representativas, 3 ml de FBS; 3 h; 37 ° C; Abs 600, 0,3). Después de la incubación, lavar GT (HBSS; 2x; 4.000 xg). Añadir GT lavado para HBSS calentado (37 y# 176; C; 0,32 Abs 600). formas GT debería ser el 99% de las células observadas según lo determinado por conteo de hemocitómetro. </li><li> Hacer suspensiones forma de levadura (FA) de acciones por recoger colonias representativas Fungisel (HBSS, 3 ml; 0,32 Abs 600). Contar el número de formas de YF / ml al microscopio utilizando un hemocitómetro. formas de fiebre amarilla deben ser del 99% de las células observadas según lo determinado por conteo de hemocitómetro. </li><li> Hacer trabajo stock fúngica (250 l de GT o YF social en 25 ml de HBSS; 37 ° C; 10 5 UFC / ml) </li></ol> 4. S. Manipulación aureus <ol><li> Tienda S. aureus ATCC 25923 (-80 ° C; Remmel descremada leche 2x). Cultura en agar sangre de carnero (5%; 37 ° C; 24 h). Recoger colonias y traslado al manitol sales de medio plazo de 2 días para la acción (37 ° C; 18 h). </li><li> Hacer S. aureus suspensión de acciones (3 ml de HBSS; 1,32 Abs 600; 10 8 UFC / ml) <ol><li> Hacer trabajar S. aureus acciones (100 lde las acciones en 25 ml de HBSS; 10 5 CFU / ml). </li></ol></li></ol> 5. Candida y S. aureus Suspensiones <ol><li> Hacer mixta C. albicans y S. suspensión aureus (250 YF l o GT de valores y 100 l de S. aureus de valores en 25 ml de HBSS). </li></ol> 6. Ensayo polimicrobiana Biofilm <ol><li> Y placas de semillas 96 con 200 l de 2 x 10 5 HeLa células / ml (85% de nivel de confluencia). Placas de roca (30 - 45 min; 37 ° C) antes de la incubación (37 ° C; 5% de CO2; 18 h). Lavar las monocapas (1x; Opt-MEM) a continuación de la semilla con el HSV (HSV-1 (KOS) gL86 o HSV-2 (KOS) 33 GJ - en 100 l Opt-MEM; MOI 50 y 10). Incubar las placas (3 hr; 37 ° C; 5% de CO 2). Utilice sólo una cepa viral por día. </li><li> Lavar monocapas infectadas (1x; salina tamponada con fosfato (PBS) con Mg 2 y Ca 2; 100 l). Reemplazar PBS con HBSS caliente dejando 25 &amp; #181; l en cada pocillo. <ol><li> Añadir YF, GT y / o S. aureus suspensiones de trabajo (100 l; diana a células ratio = 5: 1; n = 16). tal como se indica en la Tabla 1 (Incubar las placas estáticas; 30 min; 37 ° C; 5% de CO 2). </li></ol></li><li> Después de la incubación, aspirar una columna en un momento inmediatamente rellenado con 300 l de PBS con Mg + 2 y Ca + 2. Repita este paso dos veces y luego añadir tampón de lisis de ensayo de radio-inmunoprecipitación (RIPA, filtro esterilizado; 200 l de una dilución 1:50). </li><li> Rápidamente Se tritura el lisado de células HeLa a continuación, colocar 50 l en sales de manitol (MS) y medios de comunicación / o Fungisel (F) (Figura 2). Extender el lisado utilizando una varilla de vidrio doblado en un ángulo de 90 °. Se incuban las placas (18 horas a 37 ° C). contar manualmente el número de colonias por placa. Los controles consisten de S. aureus y / o C. albicans adherencia a las células HeLa no infectadas por VHS. </li></ol> 7. Estudios de Imagen &lt;/ P&gt; <ol><li> Lavar cada cubreobjetos circular de vidrio (12 mm; 50 ml de acetona en 100 ml vaso de precipitados). cubreobjetos secos y esterilizar (Kimwipes; placas de Petri de vidrio). Coloque cubreobjetos estériles secos en los pocillos de placas de 24 pocillos estériles con pinzas esterilizadas alcohol de llama. </li><li> Añadir células HeLa (1 ml; volumen 5x utilizado para placas de 96 pocillos) a los pocillos de placas de 24 pocillos que contienen los cubreobjetos de vidrio redondos estériles lavados. Añadir los virus, bacterias y hongos de acuerdo con la plantilla (Tabla 2) en 5x el volumen utilizado para las placas de 96 pocillos, a continuación, se incuba y el proceso tal como se describe en los pasos 6.2.1 a 6.4 anteriormente. </li><li> Después del lavado final, fijar las células para microscopía inundando la corredera con metanol y permitiendo que se evapore. Almacenar las placas a temperatura ambiente hasta que la tinción. </li><li> Para la microscopía de campo brillante (1,000x aumento original final) llenar los pocillos que contienen cubreobjetos fijados con metanol con agua desionizada. Inmediatamente aspirar agua. Cubra cada cubreobjetos con Gramos violeta cristal. Lave cubreobjetos libre de mancha no ligada (agua desionizada). Cubreobjetos secos in situ a continuación, se adhieren con medio a una diapositiva de marcado de montaje conjunto duro (Figura 3). </li><li> Para la microscopía (objetivo 100x; 1,000x definitiva inicial de aumento) fluorescente de lavado cubreobjetos libre de metanol esencialmente como se describe en el paso 7.4. Seque los cubreobjetos en los pocillos. <ol><li> Después del secado, retire la cubierta se desliza y colocarlos en portaobjetos etiquetados. A continuación, añadir una cantidad suficiente de 1:20 dilución de isotiocianato de fluoresceína (FITC) y conjugado con virus herpes simplex tipo 1 + 2 anticuerpo gD para cubrir el cubreobjetos (1-5 l). </li><li> Incubar los portaobjetos en una cámara húmeda a 37 ° C durante 30 minutos. Después de la incubación, lavar los cubreobjetos en 4 cambios de PBS. </li><li> Después del lavado final, devuelva el cubreobjetos al portaobjetos etiquetados. Manchar con 4 &#39;, 6-diamino-2-fenilindol (DAPI; cámara de humedad, 37 ° C durante 30 minutos). Después de incubación, lavar los cubreobjetos en 4 Changes de PBS, a continuación, adhiera a la diapositiva etiquetados con juego duro medio de montaje. </li><li> Dejar que el medio de montaje para curar durante 24 horas a temperatura ambiente en la oscuridad. Examinar los cubreobjetos bajo petróleo objetivo ya sea en un microscopio de campo claro o microscopio de fluorescencia con filtros de corte FITC y DAPI. Examinar imágenes de al menos 50 campos (100 células por mínima organismo) para la co-localización (Figura 4). </li></ol></li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Actualmente no hay información disponible sobre las interacciones complejas entre permanente a los miembros semi-permanentes del microbioma de acogida que se cruzan múltiples dominios taxonómicos, es decir, procariotas, eucariotas y virales. Por lo tanto, hemos desarrollado un novedoso sistema de modelo in vitro para estudiar la iniciación del biofilm por S. aureus y C. albicans en HSV-1 o HSV-2 infectadas 229 células HeLa (HeLa) 38. El sistema modelo de células HeLa presenta una ventaja única. Esto es debido a su falta de expresión de fibronectina superficie, que sirve como un receptor tanto para S. aureus y C. 39-41 albicans. Desde la 42 superficie apical de los epitelios de las mucosas que normalmente carece de fibronectina, este sistema más estrechamente imita la observada en la infección natural y la colonización 43-47. Por lo tanto, somos capaces de examinar de manera más directa las obras viral rotación de entrada del receptor específicos a seguir en la adherencia posterior por otros miembros de la microbioma. Uso de entrada competentes no propagación de HSV-1 y HSV-2, estos resultados muestran que la entrada en la célula de HSV-1 o HSV-2 hace que las células refractarios a la super-infección con S. aureus, mientras que la mejora de C. adherencia albicans de una manera dependiente de la concentración de virus (Figura 4). Curiosamente, los efectos de HSV-1 en los formularios GT frente a la fiebre amarilla, era el reverso de la medida para el VHS-2, un hallazgo que puede tener un impacto significativo en la promoción de la candidiasis vaginal en presentación clínica 48-51. Desde una perspectiva de la patogénesis, en general se acepta que el fenotipo GT de C. albicans es la forma patógena, con el YF el estado comensal 51-54. La adherencia de C. albicans GT que se co-incubaron con S. aureus mostró un patrón alterado de la unión a las células HeLa infectadas con el HSV, en comparación con el medido para YF - S. unión aureus. HSV-1 mejora la adherencia de GT a las células HeLa, sino a un sigsignificativamente menor medida (p &lt;0,05) que la medida de la adherencia YF, como se mencionó anteriormente, es decir, el control del 270% para la adherencia YF y el control del 190% para la adherencia de GT. Además, mientras que S. aureus no tuvo efecto en HSV-1 mejora de la unión GT, el coccus negado la adherencia mejorada mediada por la presencia de HSV-2. El patrón inverso se observó para S. aureus efecto en la interacción con YF células infectadas por virus. Esta predilección por las diferentes formas de hongos por HSV-1 (YF) frente a HSV-2 (GT) puede jugar un papel de mantenimiento del estado dirigiendo comensal in vivo. Con respecto al efecto de la forma en GT S. aureus vinculante, la GT suprimió casi completamente la inhibición HSV-1 de la adhesión de estafilococos a las células HeLa. En cambio, aunque la capacidad de GT a asociar con 2 HSV-células infectadas se incrementó significativamente en comparación con HSV-1, la presencia de S. aureus bloqueó el aumento mediado por HSV-2 en la adherencia. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; La cuestión de si los cambios en la adherencia de microbios son el resultado de supuestos receptores específicos presentes alterados, o debido al impedimento estérico-mecánica pueden ser respondidas en este modelo. A través del uso combinado de la cuantificación de las interacciones célula-microbio (COUNT CFU) y el examen microscópico de las interacciones, hemos sido capaces de determinar que HSV-1 y HSV-2 parecen bloquear S. aureus células beta interacción, ya que S. aureus adhiere únicamente a las células HeLa no infectadas. Además, el examen microscópico de las células muestran que Candida y HSV-1 y HSV-2 co-localizados. Utilizan juntos aquí los hallazgos de este estudio paralelo al vivo observaciones sitio de especificidad en la colonización de lo que indica la utilidad de este modelo para el estudio de las interacciones polimicrobiana. El uso eficaz del protocolo descrito en el presente documento depende de una variedad de factores. En primer lugar, el uso de virus deficiente propagación. Esto permite una Examina limpiación de la señalización de entrada y la célula viral efecto tiene sobre las interacciones microbio posteriores, sin la complicación de los cambios que pueden ocurrir debido a envolver adquisición antes de salir de la célula. Además, el uso de virus defectuoso permite un entorno más seguro para el manejo de la bioseguridad de clase dos patógenos. En segundo lugar, este protocolo permite el uso de ambas variantes de adherencia virales y microbianas. El uso de variantes que sólo se unen a receptores específicos permite la delineación de los receptores compartidos entre los microbios, o, alternativamente, la detección de nuevos receptores. A través del uso de anticuerpos monoclonales a los receptores, existe el potencial para la visualización de la localización de la adhesina en la superficie microbiana y proporciona una herramienta para estudiar la expresión adhesina alterado. Este protocolo no es adecuado para el estudio de microbios que no pueden ser aislados selectivamente en medio diferencial. La metodología también es dependiente de la disponibilidad del anticuerpo monoclonal a las proteínas específicas del virus. Aunque unanálisis en este estudio se ha mejorado por el diferencial de tamaño entre la levadura y las bacterias, el uso de diferencialmente marcados con fluorescencia, por ejemplo, rojo Texas, el anticuerpo monoclonal específico microbio sería un eficaz trabajo en torno a si los microbios en cuestión ser similares en morfología y tamaño.

<html> El microbioma humano incluye diversos organismos de varios reinos taxonómicos que comparten regiones geográficas en el cuerpo. La adherencia a las superficies celulares es un primer paso esencial en la formación de biopelículas, que es parte del proceso de colonización microbioma. Incluido en el microbioma puede haber virus que causan infecciones crónicas y persistentes. La infección de células crónica por estos virus puede causar una alteración en la disponibilidad del receptor putativo. 1,2 Además, la entrada de la célula por patógenos intracelulares también podría afectar a la fluidez de membrana host / hidrofobicidad que a su vez puede alterar la unión de otros miembros microbioma, incluyendo bacterias y hongos . Con el fin de entender las interacciones que pueden ocurrir entre estos múltiples patógenos que co-localizar en las mismas regiones geográficas del huésped humano, debemos ser capaces de estudiar la interacción de los agentes patógenos que representan el espectro de los reinos taxonómicos presentes en la superficie de la mucosa. t &quot;&gt; El Herpesviridae son una familia de microbios presentes en el 100% de los seres humanos como miembros permanentes del microbioma 3,4. Además, pueden también ser derramada persistente tanto en presencia como en ausencia de síntomas. En concreto, el virus herpes simplex-1 y herpes simplex virus-2 (HSV-1 y HSV-2, respectivamente) son miembros permanentes del microbioma en el oronasopharynx y el tracto genital. en individuos inmunocompetentes, tanto HSV-1 y HSV-2 causa gingivoestomatitis, así como el herpes genital 5-8. en estos sitios, el VHS causa una infección latente, caracterizada por necrosis tumoral asintomática crónica persistente derramamiento viral 9. entrada del VHS en células da lugar a alteraciones en la expresión superficial de nectins, sulfato de heparán, balsas de lípidos y herpesvirus mediador de la entrada / receptor del factor de (HVEM / TNFr) 10-25. Estos receptores representan potencialmente compartidos para algunas bacterias y hongos, por ejemplo, S. aureus y C. albicans, que mientras que los patógenos oportunistas,También puede residir en calidad de miembros de la mucosa del microbioma oronasopharynx 26,27. Dentro de la oronasopharynx S. aureus y C. albicans ocupan dos sitios distintos de la colonización. En los anfitriones con los dientes naturales, la mucosa oral es compartida por HSV-1 y C. albicans, mientras que los orificios nasales nasal anterior están ocupados por S. aureus 28. Sin embargo, a pesar de los hallazgos in vitro que S. aureus se adhiere a las células epiteliales de la boca, 29,30 S. aureus es poca frecuencia aisladas de muestras orales cuando está presente el tejido normal 29,30. Poco se sabe en relación con nichos tracto genital co-colonización más allá de los hallazgos clínicos que S. aureus se asocia con la vaginitis aerobia, que se caracteriza por la inflamación genital, la descarga y la dispareunia, mientras que C. albicans produce lesiones de la mucosa similar a la observada en la cavidad oral 31-35. Por lo tanto, aunque estos miembros de la microbi oral y genitalome reinos taxonómicos transversales poco se conoce acerca de su interacción ya que afecta a su capacidad para iniciar la formación de biopelículas mediante la adhesión a la superficie de la célula huésped 5. Este protocolo se ha aplicado de manera efectiva para determinar las consecuencias funcionales de co-colonización / infección.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;C.albicans&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BBL Sabouraud Dextrose</td><td>BD</td><td>211584</td><td></td></tr><tr><td>Fungisel Agar</td><td>Dot Scientific</td><td>7205A</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;S.aureus&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mannitol Salt Agar</td><td>Troy Biologicals</td><td>7143B</td><td></td></tr><tr><td>Sheep blood agar</td><td>Troy Biologicals</td><td>221239</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Hela cells&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x DMEM (Dubelcco&#039;s Modified Eagle Medium, with 4.5 g/L glucose and L-glutamine, without sodium pyruvate</td><td>Corning</td><td>10-017-CM</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin 50 mg/ml</td><td>Sigma</td><td>1397</td><td>50 &amp;micro;g/ml final concentration in the complete DMEM</td></tr><tr><td>Trypsin EDTA (0.05% Trypsin, 0.53 M EDTA)Solution 1x</td><td>Corning</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td>10% final concentration in the complete DMEM</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Other medium and reagents&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ONPG</td><td>Thermo Scientific</td><td>34055</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Pure X gal</td><td>Invitrogen</td><td>15520-018</td><td></td></tr><tr><td>1x HBSS (Hanks&#039; Balanced Salt Solution)</td><td>Corning</td><td>20-021-CV</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Dot Scientific</td><td>30042-500</td><td></td></tr><tr><td>RIPA Lysis</td><td>Life Technologies</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Staining&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A433P-4</td><td></td></tr><tr><td>HSV 1&amp;amp;2, specific for gD</td><td>ViroStat</td><td>196</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>SIGMA</td><td>D8417-5MG</td><td></td></tr><tr><td>Gram Crystal Violet</td><td>Troy Biologicals</td><td>212527</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Supplies&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Petri dish 100 x 15</td><td>Dot Scientific</td><td>229693&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish 150 x 15</td><td>Kord Valmark</td><td>2902</td><td></td></tr><tr><td>96-Well plates</td><td>Evergreen Scientific</td><td>222-8030-01F</td><td></td></tr><tr><td>24-well plates</td><td>Evergreen Scientific</td><td>222-8044-01F</td><td></td></tr><tr><td>Culture tubes 100 x 13</td><td>Thomas Scientific</td><td>9187L61</td><td></td></tr><tr><td>Cover slip circles, 12 mm</td><td>Deckglaser</td><td>CB00120RA1</td><td></td></tr></tbody></table>

determination of biofilm initiation on virus-infected cells by bacteria and fungi

El estudio de las interacciones polimicrobianas a través de los reinos taxonómicos que incluyen hongos, bacterias y virus no se han examinado previamente con respecto a cómo los miembros virales de la microbioma afectan las interacciones microbio posteriores con estas células huésped infectadas por virus. La cohabitación de virus con bacterias y hongos es principalmente presente en las superficies de la mucosa de la cavidad oral y el tracto genital. células de la mucosa, particularmente aquellos con infecciones virales latentes crónicas o persistentes persistentes, podrían tener un impacto significativo en los miembros de la microbioma través de la alteración del virus en el número y tipo de receptores expresados. Modificación en la arquitectura de la membrana de la célula huésped se traduciría en la capacidad alterada de los miembros posteriores de la flora normal y patógenos oportunistas para iniciar el primer paso en la formación de biopelículas, es decir, la adhesión. Este estudio describe un método para la cuantificación y control visual del efecto de HSV en el inicio de biofilm formación (adherencia) de S. aureus y C. albicans.

El nivel de fiabilidad de los datos que se pueden obtener a partir sistema descrito en este informe se muestra en la Figura 2 af 38. Mediante el uso de este sistema de la modulación de la interacción de estafilococos y hongos con las células infectadas por virus y sus efectos en la adherencia de cada uno puede ser delineado. Estos tipos de estudios requieren el examen microscópico de la interacción tal como se muestra en las figuras 3 y 4 38 con el fin de determinar si la interacción polimicrobiana se está produciendo en las mismas células. En este estudio de interacción diferencial de células se observó como resultado de HSV-modulación de la adhesión de estafilococos y hongos que es especie viral específica. S. aureus y C. albicans (GT y YF) adherido a las mismas células HeLa control de HSV-no infectados. Esta co-localización en las células indica una falta de Phys<html> inferencia iCal con la adherencia de cada uno de células HeLa y que los niveles medidos de la adherencia diferencial medidos fueron probablemente mediada por HSV (Figura 3A, A1) 38. Sin embargo, al HSV-1 o HSV-2 infectadas células HeLa no co-localización de estafilococos y C. se observó albicans. (Figuras 3B, B1, B2, B3, C1, C2). Usando microscopía fluorescente (conjugado con FITC anti-HSV-gD anticuerpo monoclonal) confirmó además que S. aureus no apareció para co-localizar con C. albicans ni HSV-1 o HSV-2 (Figuras 4A, A1, A2, A3, A4, B1, B2, B3). Esta cooperación entre el VHS y Candida extenderse a ambas formas de tubo de levadura y germinales (Figuras 2A-F) de C. albicans. Esta especificidad de la asociación entre la tríada de microbios refleja la especificidad de la colonización visto en una escala mucho más amplia en la mucosa oronasopharynx anfitrión. <html> 1 &quot;&gt; <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/54162/54162fig1.jpg" /> Figura 1. X-gal tinción de fotos de Dosis Dependiente La infección por HSV-1 en células HeLa. Células HeLa infectadas con HSV-1 en varias MOI y X-Gal manchado. Células (A) HeLa en bien de la placa de 96 pocillos con X-Gal de control de células HeLa modelo de infectados manchado; 20 aumentos inicial; (B) células HeLa en bien de placa de 96 pocillos con células HeLa X-Gal manchado infectadas con HSV-1 a una multiplicidad de infección (MOI) de 10; 20 aumentos inicial; Células (C) HeLa en bien de placa de 96 pocillos con células HeLa X-Gal manchado infectadas con HSV-1 a una multiplicidad de infección (MOI) de 50; 20 aumentos inicial; barra de escala se aplica a todos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54162/54162fig1large.jpg" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> archivos / ftp_upload / 54162 / 54162fig2.jpg &quot;/&gt; La Figura 2. Efecto de HSV-1 (paneles A, C, E) y HSV-2 (paneles B, D, F) a multiplicidades de infección (MOI) de 50 y 10 en la adherencia de S. aureus y / o C. albicans a células HeLa. (A) S. aureus (Sa) de unión a 1 HSV-células infectadas en presencia de C. tubos germinales albicans (GT) o formas de levadura (YF); (B) S. aureus (Sa) de unión a 2 HSV-células infectadas en presencia de C. tubos germinales albicans (GT) o formas de levadura (YF); (C) C. tubos germinales albicans (GT) que se unen a 1 HSV-células infectadas en presencia de S. aureus (Sa), (D) C. tubos germinales albicans (GT) que se unen a 2 HSV-células infectadas en presencia de S. aureus (Sa); (E) C. formas de levadura albicans (YF) que se unen a 1 HSV-células infectadas en presencia de S. aureus (Sa); (F) C. formas de levadura albicans (YF) que se unen a 2 HSV-células infectadas en presencia de S. aureus (Sa). Todos los puntos de datos son la media +/- SEM, n = 16 normalizado con el control libre de virus. * = Significativamente diferente (p &lt;0,05) de control de células HeLa no infectadas. # = Significativamente diferente (p &lt;0,05) desde el punto emparejado indicada por el soporte; barra de escala se aplica a todos. 38 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54162/54162fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="figura 3" src="/files/ftp_upload/54162/54162fig3.jpg" /> Figura 3. La falta de S. aureus y C. albicans interacciones en células HeLa infectadas por HSV-1 y HSV-2. HSV-1 y HSV-2 infectadas (MOI 50) monocapas de células HeLa con S. aureus y C. albicans (5: 1 objetivo a célula). Para campo claro<html> microscopía, monocapas de células se tiñeron con cristal violeta de Gram, entonces examinadas por microscopía de luz. Las células que fueron positivos para Candida o S. aureus (100 células individuales por señal microbio / por cubreobjetos) fueron escaneados en segundo lugar para la presencia de señales microbio co-localización adicionales (1,000x ampliación inicial). (A &amp; A1) S. aureus (Sa) y C. albicans formas de levadura (FA) o formas de tubos germinales (GT) co-localizar en las células HeLa no infectadas; (A2, insertar). Porcentaje de células HeLa con co-localizada o microbios individuales; (B - B3) La falta de S.. aureus y C. albicans co-localización en presencia de HSV-1; (C - C2) Falta de S. aureus y C. albicans co-localización en presencia de HSV-2. La media ± SEM; barra de escala se aplica a todos. 38rget = &quot;_ blank&quot;&gt; Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/54162/54162fig4.jpg" /> Figura 4. La falta de co-localización de S. aureus con C. HeLa monocapas de células desafío albicans en células HeLa infectadas por HSV-1 o HSV-2. HSV-infectados con S. aureus y C. albicans (5: 1 objetivo a célula) teñidas (anticuerpo anti gD de HSV FITC-conjugado, y DAPI). Las imágenes son representativas de los resultados de la detección de células que eran señal positiva para HSV después explorado por Candida y S. aureus (100 células individuales por señal microbio por cubreobjetos) que luego se escanea en segundo lugar para la presencia de señales microbio co-localización adicionales (1,000x ampliación inicial; Nikon). (A - A4) C. albicans (A2, inserto; DAPI) co-localizar con HSV-1; (B- B3) C. albicans co-localizada con HSV-2 (B1, insertar, C. albicans DAPI). La media ± SEM; barra de escala se aplica a todos. 38 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54162/54162fig4large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td></td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 6 </td><td> 7 </td><td> 8 </td><td> 9 </td><td> 10 </td><td> 11 </td><td> 12 </td></tr><tr><td> tubos </td><td> GT </td><td> YF </td><td> MSSA </td><td colspan="2"> GT / MSSA </td><td colspan="2"> YF / MSSA </td><td> GT </td><td> YF </td><td> MSSA </td><td colspan="2"> GT / MSSA </td><td colspan="2"> YF / MSSA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> MEDIOS DE COMUNICACIÓN </td><td> F </td><td> F </td><td> SRA </td><td> SRA </td><td> F </td><td> SRA </td><td> F </td><td> F </td><td> F </td><td> SRA </td><td> SRA </td><td> F </td><td> SRA </td><td> F </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> UN </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> segundo </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> do </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> re </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> mi </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> F </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> GRAMO </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> MARIDO </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabla 1. Determinación Plantilla general de la adherencia microbiana en polimicrobianas Interacciones GT = Candida albicans fenotipo tubo germinal.; YF = C. albicans forma de levadura fenotipo; SASM = Staphylococcus aureus meticilina sensibles; MS = sales de manitol medio; F = Fungisel medio. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54162/54162table1.xlsx" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para descargar este archivo.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> placa 1 </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> 6 </td></tr><tr><td&gt; Control </td><td> solamente células HeLa </td><td> HeLa + GT </td><td> HeLa + YF </td><td> HeLa + Sa </td><td> HeLa + GT + Sa </td><td> HeLa + YF + Sa </td></tr><tr><td> UN </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> segundo </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> do </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> re </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> La placa 2 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> HSV </td><td> células HeLa + HSV </td><td> HSV + HeLa + GT </td<html> &gt; <td> HSV + HeLa + YF </td><td> HSV + HeLa + Sa </td><td> HSV + HeLa + GT + Sa </td><td> HSV + HeLa + YF + Sa </td></tr><tr><td> UN </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> segundo </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> do </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> re </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabla 2. Plantilla general para el análisis visual de polimicrobianas interacciones con las células infectadas por el VHS y no infectados HeLa GT = Candida albicans fenotipo tubo germinal.; YF = C. albicans forma de levadura fenotipo; SA = meticilina Staphylococcus aureus sensible; HSV = virus del herpes simple.ve.com/files/ftp_upload/54162/54162table2.xlsx &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Haga clic aquí para descargar este archivo.

Watch this Scientific Journal Video about Determination of Biofilm Initiation on Virus-infected Cells by Bacteria and Fungi at JoVE.com

Determination of Biofilm Initiation on Virus-infected Cells by Bacteria and Fungi

A method is described herein for the determination of inter-Kingdom association and competition (bacterial and fungal) for adherence to virus-infected HeLa cell monolayers. This protocol can be extended to multiple combinations of prokaryotes, eukaryotes, and viruses.

Determinación de Biofilm Iniciación, el virus de las células infectadas por bacterias y hongos

The study of polymicrobial interactions across the taxonomic kingdoms that include fungi, bacteria and virus have not been previously examined with ...

determination-biofilm-initiation-on-virus-infected-cells-bacteria

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

9.6K vistas.  Midwestern University. A method is described herein for the determination of inter-Kingdom association and competition (bacterial and fungal) for adherence to virus-infected HeLa cell monolayers. This protocol can be extended to multiple combinations of prokaryotes, eukaryotes, and viruses.

Video: Determination of Biofilm Initiation on Virus-infected Cells by Bacteria and Fungi

Assay for Adhesion and Agar Invasion in S. cerevisiae

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, biofilms can reduce industrial productivity, destroy structures, and threaten human life. 1-3 On the other hand, harnessing the power of biofilms can help clean the environment and generate sustainable energy. 4-8
The ability of S. cerevisiae to colonize surfaces and participate in complex biofilms was mostly ignored until the rediscovery of the differentiation programs triggered by various signaling pathways and environmental cues in this organism. 9, 10 The continuing interest in using S. cerevisiae as a model organism to understand the interaction and convergence of signaling pathways, such as the Ras-PKA, Kss1 MAPK, and Hog1 osmolarity pathways, quickly placed S. cerevisiae in the junction of biofilm biology and signal transduction research. 11-20 To this end, differentiation of yeast cells into long, adhesive, pseudohyphal filaments became a convenient readout for the activation of signal transduction pathways upon various environmental changes. However, filamentation is a complex collection of phenotypes, which makes assaying for it as if it were a simple phenotype misleading. In the past decade, several assays were successfully adopted from bacterial biofilm studies to yeast research, such as MAT formation assays to measure colony spread on soft agar and crystal violet staining to quantitatively measure cell-surface adherence. 12, 21 However, there has been some confusion in assays developed to qualitatively assess the adhesive and invasive phenotypes of yeast in agar.
Here, we present a simple and reliable method for assessing the adhesive and invasive quality of yeast strains with easy-to-understand steps to isolate the adhesion assessment from invasion assessment. Our method, adopted from previous studies, 10, 16 involves growing cells in liquid media and plating on differential nutrient conditions for growth of large spots, which we then wash with water to assess adhesion and rub cells completely off the agar surface to assess invasion into the agar. We eliminate the need for streaking cells onto agar, which affects the invasion of cells into the agar. In general, we observed that haploid strains that invade agar are always adhesive, yet not all adhesive strains can invade agar medium. Our approach can be used in conjunction with other assays to carefully dissect the differentiation steps and requirements of yeast signal transduction, differentiation, quorum sensing, and biofilm formation.

We describe a qualitative assay for yeast adhesion and agar invasion as a measure of invasive and pseudohyphal differentiation. This simple assay can be used to assess the invasive phenotype of various mutants as well as the effects environmental cues and signaling pathways on yeast differentiation.

Ensayo de adhesión y la invasión de agar en S. cerevisiae

Yeasts are found in natural biofilms, where many microorganisms colonize surfaces. In artificial environments, such as surfaces of man-made objects, ...

Investigación

Biología

Invasion of Human Cells by a Bacterial Pathogen

Here we will describe how we study the invasion of human endothelial cells by bacterial pathogen Staphylococcus aureus . The general protocol can be applied to the study of cell invasion by virtually any culturable bacterium. The stages at which specific aspects of invasion can be studied, such as the role of actin rearrangement or caveolae, will be highlighted. Host cells are grown in flasks and when ready for use are seeded into 24-well plates containing Thermanox coverslips. Using coverslips allows subsequent removal of the cells from the wells to reduce interference from serum proteins deposited onto the sides of the wells (to which S. aureus would attach). Bacteria are grown to the required density and washed to remove any secreted proteins (e.g. toxins). Coverslips with confluent layers of endothelial cells are transferred to new 24-well plates containing fresh culture medium before the addition of bacteria. Bacteria and cells are then incubated together for the required amount of time in 5% CO2 at 37&deg;C. For S. aureus this is typically between 15-90 minutes. Thermanox coverslips are removed from each well and dip-washed in PBS to remove unattached bacteria. If total associated bacteria (adherent and internalised) are to be quantified, coverslips are then placed in a fresh well containing 0.5% Triton X-100 in PBS. Gentle pipetting leads to complete cell lysis and bacteria are enumerated by serial dilution and plating onto agar. If the number of bacteria that have invaded the cells is needed, coverslips are added to wells containing 500 &mu;l tissue culture medium supplemented with gentamicin and incubation continued for 1 h, which will kill all external bacteria. Coverslips can then be washed, cells lysed and bacteria enumerated by plating onto agar as described above. If the experiment requires direct visualisation, coverslips can be fixed and stained for light, fluorescence or confocal microscopy or prepared for electron microscopy.

A general protocol for the study of invasion of host cells by a bacterial pathogen, focusing on Staphylococcus aureus and human endothelial cells.

La invasión de las células humanas por un patógeno bacteriano

Here we will describe how we study the invasion of human endothelial cells by bacterial pathogen Staphylococcus aureus . The general protocol can be ...

Inmunología e Infección

Methodologies for Studying B. subtilis Biofilms as a Model for Characterizing Small Molecule Biofilm Inhibitors

This work assesses different methodologies to study the impact of small molecule biofilm inhibitors, such as D-amino acids, on the development and resilience of Bacillus subtilis biofilms. First, methods are presented that select for small molecule inhibitors with biofilm-specific targets in order to separate the effect of the small molecule inhibitors on planktonic growth from their effect on biofilm formation. Next, we focus on how inoculation conditions affect the sensitivity of multicellular, floating B. subtilis cultures to small molecule inhibitors. The results suggest that discrepancies in the reported effects of such inhibitors such as D-amino acids are due to inconsistent pre-culture conditions. Furthermore, a recently developed protocol is described for evaluating the contribution of small molecule treatments towards biofilm resistance to antibacterial substances. Lastly, scanning electron microscopy (SEM) techniques are presented to analyze the three-dimensional spatial arrangement of cells and their surrounding extracellular matrix in a B. subtilis biofilm. SEM facilitates insight into the three-dimensional biofilm architecture and the matrix texture. A combination of the methods described here can greatly assist the study of biofilm development in the presence and absence of biofilm inhibitors, and shed light on the mechanism of action of these inhibitors.

Methodologies for Studying B. subtilis Biofilms as a Model for Characterizing Small Molecule Biofilm Inhibitors

This study presents the development of reproducible methodologies to study biofilm inhibitors and their effects on Bacillus subtilis multicellularity.

Metodologías para el estudio<em&gt; B. subtilis</em&gt; Las biopelículas como modelo para la caracterización de Pequeño Biofilm inhibidores de moléculas

This work assesses different methodologies to study the impact of small molecule biofilm inhibitors, such as D-amino acids, on the development and ...

A New Method for Qualitative Multi-scale Analysis of Bacterial Biofilms on Filamentous Fungal Colonies Using Confocal and Electron Microscopy

Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and can be involved in numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic cooperation, competition, or predation. The study of biofilms is important in many biological fields, including environmental science, food production, and medicine. However, few studies have focused on such bacterial biofilms, partially due to the difficulty of investigating them. Most of the methods for qualitative and quantitative biofilm analyses described in the literature are only suitable for biofilms forming on abiotic surfaces or on homogeneous and thin biotic surfaces, such as a monolayer of epithelial cells.
While laser scanning confocal microscopy (LSCM) is often used to analyze in situ and in vivo biofilms, this technology becomes very challenging when applied to bacterial biofilms on fungal hyphae, due to the thickness and the three dimensions of the hyphal networks. To overcome this shortcoming, we developed a protocol combining microscopy with a method to limit the accumulation of hyphal layers in fungal colonies. Using this method, we were able to investigate the development of bacterial biofilms on fungal hyphae at multiple scales using both LSCM and scanning electron microscopy (SEM). This report describes the protocol, including microorganism cultures, bacterial biofilm formation conditions, biofilm staining, and LSCM and SEM visualizations.

This protocol describes a new method to grow and qualitatively analyze bacterial biofilms on fungal hyphae by confocal and electron microscopy.

Un nuevo método para el análisis cualitativo multi-escala de biopelículas bacterianas en filamentosa fúngica Colonias Utilizando microscopía confocal y electrónica

Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and can be involved in numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. albicans is its ability to form biofilms, structured communities of cells attached to biotic and abiotic surfaces. C. albicans biofilms can form on host tissues, such as mucosal layers, and on medical devices, such as catheters, pacemakers, dentures, and joint prostheses. Biofilms pose significant clinical challenges because they are highly resistant to physical and chemical perturbations, and can act as reservoirs to seed disseminated infections. Various in vitro assays have been utilized to study C. albicans biofilm formation, such as microtiter plate assays, dry weight measurements, cell viability assays, and confocal scanning laser microscopy. All of these assays are single end-point assays, where biofilm formation is assessed at a specific time point. Here, we describe a protocol to study biofilm formation in real-time using an automated microfluidic device under laminar flow conditions. This method allows for the observation of biofilm formation as the biofilm develops over time, using customizable conditions that mimic those of the host, such as those encountered in vascular catheters. This protocol can be used to assess the biofilm defects of genetic mutants as well as the inhibitory effects of antimicrobial agents on biofilm development in real-time.

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

This protocol describes the use of a customizable automated microfluidic device to visualize biofilm formation in Candida albicans under host physiological conditions.

Visualización de la formación de Biofilm de Candida albicans utilizando un dispositivo microfluídico automatizado

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Microfluidic Tools for Probing Fungal-Microbial Interactions at the Cellular Level

Filamentous fungi are successful inhabitants of soil and play a major role in soil ecosystems, such as in the decomposition of organic and inorganic matter, as well as regulation of nutrient levels. There they also find numerous opportunities to interact with a variety of other microbes such as bacteria or other fungi. Studying fungal interactions at the cellular level, however, can be challenging owing to the black box-like nature of soil. New microfluidic tools are being developed for the study of fungal interactions; two platforms designed to study bacterial-fungal and fungal-fungal interactions are highlighted. Within these microchannels, fungal-microbial interactions can be monitored in controlled physico-chemical environments at higher temporal and spatial resolution than previously possible. Application of these tools have yielded numerous novel biological insights, such as the observation of bacterial polar attachment to hyphae or revealing uncharacterised fungal-fungal antagonisms. A key feature of these methodologies regards the ease of use of this tool by non-experts, yielding highly translatable technologies for use in microbiology labs.

Owing to the opacity of soil, interactions between its constituent microbes cannot easily be visualised with cellular resolution. Here, two microfluidic tools are presented, which offer new opportunities for investigating fungal-microbial interactions. The devices are versatile and simple to use, enabling high spatiotemporal control and high-resolution imaging at the cellular level.

Herramientas microfluídicas para sondear las interacciones fúngico-microbianas a nivel celular

Filamentous fungi are successful inhabitants of soil and play a major role in soil ecosystems, such as in the decomposition of organic and inorganic ...

Bioingeniería

Measuring the Migration and Biofilm Formation of Various Bacteria

As microbes that thrive in the host body primarily have adaptive abilities that facilitate their survival, methods for classifying and identifying their nature would be beneficial in facilitating their characterization. Currently, most studies focus only on one specific characterization method; however, the isolation and identification of microorganisms from the host is a continuous process and usually requires several combinatorial characterization methods. Herein, we describe methods of identifying the microbial biofilm-forming ability, the microbial respiration state, and their chemotaxis behavior. The methods are used to identify five microbes, three of which were isolated from the bone tissue of Sprague-Dawley (SD) rats (Corynebacterium stationis, Staphylococcus cohnii subsp. urealyticus, and Enterococcus faecalis) and two from the American Type Culture Collection (ATCC)-Staphylococcus aureus ATCC 25923&#160;and Enterococcus faecalis V583. The microbes isolated from the SD rat bone tissue include the gram-positive microbes. These microbes have adapted to thrive under stressful and nutrient-limiting environments within the bone matrix. This article aims to provide the readers with the specific know-how of determining the nature and behavior of the isolated microbes within a laboratory setting.

<meta charset="utf8"></head><body>Medición de la migración y la formación de biopelículas de diversas bacterias

Here, we present a practical method for the isolation and identification of microorganisms within the host. In this way, the physicochemical properties of microorganisms and possible ways of living in the host are clearly described.

Medición de la migración y la formación de biopelículas de diversas bacterias

As microbes that thrive in the host body primarily have adaptive abilities that facilitate their survival, methods for classifying and identifying their ...

Candida albicans Biofilm Formation in an In Vivo Mouse Model

Source: Kuchar&#237;kov&#225;, S., et al.&#160; <a href="https://app.jove.com/v/52239">Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging.</a> J. Vis. Exp. (2015).
This video demonstrates the development of an in vivo mouse model to study the biofilm formation of Candida albicans in subcutaneous tissue. The experiment involves implanting Candida-infected devices in the animal&#39;s back region for biofilm development.

Candida albicans Formación de biopelículas en un modelo de ratón in vivo

1. C. albicans Growth

	Twenty-four hours before the initiation of the animal experiment, prepare yeast extract peptone dextrose, YPD plates by adding 10 ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Immunology

Immunodiagnostics

In Vitro and In Vivo Models

A Method for Sample Preparation to Visualize Biofilm Forming Bacteria on Fungal Hyphae

Source: Guennoc, Cora Miquel, et al, <a href="https://app.jove.com/v/54771">A New Method for Qualitative Multi-scale Analysis of Bacterial Biofilms on Filamentous Fungal Colonies Using Confocal and Electron Microscopy.</a> J. Vis. Exp. (2017).
This video describes a method to grow and qualitatively analyze bacterial biofilms on fungal hyphae using microscopy. Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and involve numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic cooperation, competition, or predation.

Un método para la preparación de muestras para visualizar bacterias formadoras de biopelículas en hifas fúngicas

1. Preparation of an In Vitro Biofilm of Bacteria on the Fungal Colony

	Centrifuge the bacterial culture at 5,000 x g for 3 min and suspend the pellet in ...

Determinación de Biofilm Iniciación, el virus de las células infectadas por bacterias y hongos

Resumen

Explorar más videos

Capítulos en este video

Ensayo de adhesión y la invasión de agar en S. cerevisiae

La invasión de las células humanas por un patógeno bacteriano

Metodologías para el estudio

Un nuevo método para el análisis cualitativo multi-escala de biopelículas bacterianas en filamentosa fúngica Colonias Utilizando microscopía confocal y electrónica

Visualización de la formación de Biofilm de Candida albicans utilizando un dispositivo microfluídico automatizado

Herramientas microfluídicas para sondear las interacciones fúngico-microbianas a nivel celular

Medición de la migración y la formación de biopelículas de diversas bacterias

Medición de la migración y la formación de biopelículas de diversas bacterias

Candida albicans Formación de biopelículas en un modelo de ratón in vivo

Un método para la preparación de muestras para visualizar bacterias formadoras de biopelículas en hifas fúngicas