Name: determination of biofilm initiation on virus-infected cells by bacteria and fungi
Uploaded: 2016-07-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 33 s
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This project was supported by Midwestern University, IL Office of Research and Sponsored Programs (ORSP) and Midwestern University College of Dental Medicine-Illinois (CDMI).

1. HSV 균주 및 취급 참고 : 재조합 비 확산 HSV-1 (KOS) gL86과 HSV-2 (KOS) 333gJ을 - V. Twiari (36, 37)에 의해 제공되었다 사용되는 베타 - 갈 락토시다 아제 리포터 활동. <ol><li> 1에서 -80 ° C에서 단일 많이 매장에서 바이러스를 사용하여 둘 베코의 변형 이글의 중간 20 % 소 태아 혈청 (FBS)와 (DMEM)의 1의 비율로 사용 할 때까지 우유를 탈지. 바이러스 많이 저장하기 전에 입출력 -nitrophenyl-β-D-갈 락토 (ONPG) 및 5- 브로 모 -4- 클로로 -3- 인돌 릴 β-D-갈 락토 (X-GAL) 분석으로 바이러스의 농도를 결정한다. </li><li> 이전에 (그림 1) 14 설명한 바와 같이, 기자 바이러스 항목 분석을 사용하여 각 실험 분석 실행을 위해 X-걸 염색에 의한 바이러스의 생존과 감염 (MOI)의 다양성을 결정합니다. </li><li> 원하는 MOI로 바이러스 (수신 거부 MEM)을 희석. 단일 층 (파라 포름 알데히드를 0.5 ㎖ / 웰) 수정 염색 전합니다. 별도의 microti에서 바이러스의 생존 컨트롤을 배치polymicrobial 분석 플레이트와 병렬 터 플레이트. </li></ol> 2. 헬라 299 셀 처리 <ol><li> 4.5 g / L 글루코스, 10 % 열 - 불 활성화 된 소 태아 혈청 (FBS), 겐타 마이신 (50 μg의 / ml) 및 L- 글루타민으로 DMEM에서 37 ° C, 5 % CO 2에서 성장한다. 트립신 용액과 80 %의 합류 통로 세포 (0.05 % 트립신, 에틸렌 디아민 테트라 아세트산, 0.53 M EDTA 5 ㎖ / 플라스크). </li></ol> 3. C. 알비 칸스 처리 참고 : C를 임상 실험에서 얻어진 소스 알비 매체 2X 탈지 우유 Remmel에서 -80 ° C에 저장된다. <ol><li> 문화 사부로 포도당 중간 (37 ° C)에 주식을 동결. 24 시간 배양 C. 후 Fungisel 매체에 알비 칸스 (37 ° C, 48 시간) 사용. </li><li> 세균 튜브 (GT) 형태의 생성 (3 ML의 FBS를, 대표적인 식민지를 선택 3 시간 37 ° C, 복근 600, 0.3). 배양 후, 세척 GT (HBSS를, 배, XG 4000 참조). (37 예열 HBSS로 세척 GT 추가# 176; C; 0.32 복근 600). GT 양식은 혈구 수에 의해 결정되는 관찰 세포의 99 %이어야한다. </li><li> 대표 Fungisel 식민지를 선택하여 효모 형태 (YF) 주식 현탁액을 (HBSS, 3 ㎖를, 0.32 복근 600). YF 형태의 수를 카운트 / 혈구 현미경을 사용 ㎖로. YF 양식은 혈구 수에 의해 결정되는 관찰 세포의 99 %이어야한다. </li><li> 곰팡이 주식을 작동합니다 (25 ml의 HBSS에 GT 또는 YF 주식의 250 μl를 37 ° C, 10 5 CFU / ㎖) </li></ol> 4. S. 구균 처리 <ol><li> 스토어 S. 구균 ATCC 25923 (-80 ° C; Remmel 우유의 2 배를 탈지). 양 혈액 아가 상 배양 (5 %, 37 ℃, 24 시간). 대표적인 식민지를 선택하고 재고 2 일 이내에 매체 염을 만니톨로 전송 (37 ° C, 18 시간을). </li><li> S.합니다 구균 재고 서스펜션 (3 ml의 HBSS, 1.32 복근 600 10 8 CFU / ㎖) <ol><li> S. 작업 확인 구균 재고 (100 μL25 ml의 HBSS의 재고; 105 CFU / ㎖). </li></ol></li></ol> 5. 칸디다 및 S. 구균 현탁액 <ol><li> 혼합 C. 확인 알비 칸스 및 S. 구균 현탁액 (250 μL의 YF 또는 GT 재고 및 25 ml의 HBSS 100 μL S. 구균 주). </li></ol> 6. Polymicrobial 바이오 필름 분석 <ol><li> 2 × 105 HeLa 세포 / ㎖의 200 μL (85 % 합류 레벨)와 종자를 96 웰 플레이트. 락 플레이트 (30-45 분 37 ° C) 배양 전 (37 ° C, 5 % CO 2 배양기 18 시간). 워시 단일 층 (1 배, 수신 거부 MEM) 다음 HSV와 시드 (HSV-1 (KOS) gL86 또는 HSV-2 (KOS) 33 GJ - 100 μL에서 탈퇴 MEM, MOI 50, 10). 판을 품어 (37 ° C, 3 시간 5 % CO 2). 하루에 단 하나의 바이러스 균주를 사용합니다. </li><li> 감염 단일 층을 씻으 (1 배, 인산염 완충 생리 식염수 마그네슘이와 칼슘이와 (PBS) 100 μL). 25 &amp; # 떠나는 따뜻한 HBSS와 PBS를 교체(181) 각각 잘 리터. <ol><li> YF, GT 및 / 또는 S. 추가 (, 셀 비율 = 5 100 μL 대상 : 1; N = 16) 작동 구균 현탁액. 표 1에 나타낸 바와 같이 판 부화 (정적를 30 분, 37 ° C, 5 % CO 2). </li></ol></li><li> 배양 후, 한 번에 흡인 한 열은 즉시 마그네슘이와 칼슘이 300 ㎕의 PBS로 보충. (시 50 분 희석 200 μL; 필터 살균 RIPA)는 무선 면역 분석 용해 버퍼를 추가 한 다음 두 번이 단계를 반복합니다. </li><li> 빠르게 헬라 세포 용 해물 후 만니톨 염 (MS) 및 / 또는 Fungisel (F) 미디어 (그림 2)에 50 μl를 배치 ​​씹다. 90 ° 각도로 유리로드 절곡하여 분해물을 확산. (37 ° C에서 18 시간) 번호판을 품어. 수동 접시 당 콜로니의 수를 계산합니다. 컨트롤 S. 구성 구균 및 / 또는 C. HSV-감염되지 않은 HeLa 세포에 albicans에 부착. </li></ol> 7. 이미징 연구 &lt;/ P&gt; <ol><li> 각 라운드 유리 커버 슬립을 씻으 (12mm, 50 ml의 아세톤 비이커 100). 건조하고 소독 된 커버 (매직 잉크를 킴 와이프, 유리 페트리 접시). 알코올 불꽃 소독 집게로 멸균 24 웰 플레이트의 우물에 건조 멸균 된 커버를 놓습니다. </li><li> 세척 멸균 라운드 커버 글라스를 포함하는 24 웰 플레이트의 웰에, HeLa 세포 (96 웰 플레이트에 사용되는 5 배 볼륨 1 ml)에 추가합니다. 위의 단계 6.4 6.2.1에 설명 된대로 다음 부화 및 프로세스, 5 배 96 웰 플레이트에 사용되는 볼륨의 템플릿 (표 2)에 따라 바이러스, 세균 및 곰팡이를 추가합니다. </li><li> 최종 세척 한 후, 메탄올 슬라이드를 범람하고 증발 할 수 있도록하여 현미경 세포를 고정합니다. 염색 할 때까지 실온에서 접시를 저장합니다. </li><li> 밝은 필드 현미경 (1000 배 최종 원래 배율)의 경우 탈 이온수로 메탄올 고정 된 커버를 포함하는 우물을 입력합니다. 즉시 물을 대기음. 그램 크리스탈 바이올렛 각 커버 슬립 커버. 워시가 아닌 바운드 얼룩 (탈 이온수)의 무료 된 커버. 현장에서 건조 된 커버는 레이블 슬라이드 매체를 장착 하드 세트 (그림 3)로를 준수합니다. </li><li> 형광 현미경 (100 배 대물, 1000 배 최종 원래 배율)의 경우 단계 7.4에 설명 된대로 세척은 본질적으로 메탄올 무료로 된 커버. 우물에서 커버 슬립을 건조. <ol><li> 건조 후, 커버 전표를 제거하고 표시된 슬라이드에 배치합니다. (- 5 μL 1) 다음 형광 이소 티오 시아 네이트 (FITC) 공역 계 단순 포진 바이러스 유형의 1시 20분 희석의 커버 슬립을 커버하는 1 + 2 GD 항체를 충분한 양을 추가합니다. </li><li> 30 분 동안 37 ℃에서 습도 챔버에 슬라이드를 부화. 부화 후, PBS의 4 변화에 커버 슬립을 씻는다. </li><li> 최종 세척 후, 표시된 슬라이드에 커버 슬립을 반환합니다. 4 &#39;, 6-diamidino -2- 페닐 인돌 (; 수분 챔버에서 30 분 동안 37 ° C DAPI)로 염색. 부화 후 4 찬으로 된 커버를 세척PBS의 GES 후 하드 세트 장착 매체와 표지 슬라이드에 부착합니다. </li><li> 설치 매체가 어둠 속에서 실온에서 24 시간 동안 치료하도록 허용합니다. 밝은 필드 현미경 또는 FITC와 DAPI 차단 필터 형광 현미경 중 하나에 기름 목표 아래 커버 슬립을 검사합니다. 공동 현지화 (그림 4) 적어도 50 분야 (생물 최소 100 세포) 사진을 검사합니다. </li></ol></li></ol>

The authors have nothing to disclose.

현재 어떤 정보는 원핵 생물 진핵 세포 및 바이러스 성 즉, 다수의 분류 학적 영역을, 교차 호스트 마이크로 바이 옴의 준 상임 이사국에 영구적 인 사이의 복잡한 상호 작용에 사용할 수 없습니다. 그러므로 우리는 S.으로 생물막 개시를 연구하기 위해 체외 모델 시스템에서 새로운 개발 구균 및 C. HSV-1 또는 HSV-2에 알비 칸스는 헬라 229 (헬라) 세포 (38)을 감염 시켰습니다. 헬라 세포 모델 시스템은 고유 한 장점을 제공한다. 이것은 두 S.위한 수용체로서 작용 표면 피브로넥틴 발현의 부족에 기인 구균 및 C. 알비 칸스 39-41. 점막 상피의 정점 (42) 표면은 일반적으로 더 밀접하게 자연 감염과 식민지 43-47에서 관찰 모방을 피브로넥틴,이 시스템이 부족하기 때문이다. 따라서, 우리는 더 많은 직접 마이크로 바이 옴의 다른 구성원에 의해 후속 준수의 역할 특정 바이러스 항목 수용체 회전율 연극을 검사 할 수 있습니다. 사용 항목 능숙 비 확산 HSV-1과 HSV-2,이 연구 결과는 HSV-1 또는 HSV-2의 세포 항목 S. 슈퍼 감염에 반응 세포를 렌더링하는 것을 보여 구균, C를 강화하면서 바이러스 농도 의존적으로 알비 칸스 부착 (그림 4). 흥미롭게도, YF 대 GT 형태에서 HSV-1의 효과는, HSV-2, 48-51에서 임상상 질 칸디다증의 촉진에 중요한 영향을 가질 수있는 발견 측정 그 반대였다. 병인의 관점에서, 일반적으로 허용되는 C.의 GT 표현형 알비 칸스는 YF 공생 상태 51-54로, 병원성 형태입니다. C.의 준수 S.와 공동 배양 하였다 알비 GT 구균 YF 측정에 비하여, HSV 감염 HeLa 세포에 결합 변화된 패턴을 보였다 - S. 구균 바인딩. HSV-1이지만 SIG에, HeLa 세포에 GT의 접착 성을 향상전술 한 바와 같이, 즉, YF의 준수에 대한 YF 부착 및 GT 부착 190 %의 제어를위한 즉 270 %의 제어를 측정보다이 유의 작은 범위 (P &lt;0.05). 또한, 반면 S. 구균 GT 바인딩의 HSV-1 개선에 아무런 영향을 미치지 않았다 상기 구균은 HSV-2의 존재에 의해 매개되는 향상된 접착 성을 무효화. 역방향 패턴 S. 관찰되었다 바이러스에 감염된 세포와 YF 상호 작용에 구균 효과. HSV-1 HSV-2 (GT) 대 (YF)에 의해 다른 곰팡이 양식이 편애는 생체 내에서 공생 국가의 역할 연출 유지 보수를 재생할 수 있습니다. S. GT의 형태의 효과에 관해서 구균 결합의 GT는 거의 완전히 헬라 세포에 포도상 구균 준수의 HSV-1 억제를 폐지. 한편, HSV-1, S.의 존재에 비해 HSV-2 감염 세포와 연관 GT의 능력은 크게 증가 하였지만 구균은 준수의 HSV-2 매개 증가를 차단했습니다. S.을 차단하는 나타나는지 확인 할 수 있었다 구균은 S. 이후, 상호 작용을 -cell 구균 감염되지 않은 HeLa 세포에 전적으로 부착. 또한, 세포의 현미경 검사는 칸디다와 HSV-1과 HSV-2 공동 현지화 된 것으로 나타났다. 본 연구의 결과는 polymicrobial 상호 작용의 연구를위한 모델의 유용성을 나타내는 식민지의 생체 관측 사이트 특이성을 평행 함께 여기에 사용됩니다. 여기에 기술 된 프로토콜의 효과적인 사용은 다양한 요인에 따라 달라집니다. 우선, 확산 결핍 바이러스의 용도. 이것은 깨끗한 examina 수 있습니다효과 바이러스 항목 및 세포 신호 전달의 기는 감싸 수집을하기 전에 셀을 떠나기로 인해 발생할 수있는 변화의 합병증없이 후속 미생물의 상호 작용에있다. 또한, 결함이있는 바이러스의 사용은 바이오 클래스 두 병원균 취급 안전한 환경을 허용한다. 둘째,이 프로토콜은 바이러스와 세균 부착 변형 모두의 사용을 허용한다. 특정 수용체​​에 결합 변형의 사용은 미생물, 또는 신규 한 수용체를 선택적으로 검출 공유 수용체의 묘사를 허용한다. 수용체에 대한 모노클로 날 항체의 사용을 통해,이 미생물 표면에 어드 현지화의 시각화에 대한 가능성과 변경된 어드 식을 연구하는 도구를 제공합니다. 이 프로토콜은 선택적으로 차분 매체 상에 분리 될 수없는 미생물의 연구에 적합하지 않다. 이 방법은 바이러스의 특정 단백질에 대한 단일 클론 항체의 가용성에 따라 달라집니다. 비록이 연구에서 nalysis 문제의 미생물 형태와 크기가 비슷해야 효과적인 해결 방법이 될 것 효모와 박테리아, 차등 찬란 태그의 사용 예를 들어 텍사스 레드, 미생물 특정 단일 클론 항체 사이의 크기 차이에 의해 강화되었다.

<html> 인간 마이크로 바이 옴 몸에 지리적 영역을 공유하는 여러 분류 학적 왕국에서 다양한 생물이 포함되어 있습니다. 세포 표면에 준수는 마이크로 바이 옴의 식민지화 과정의 일부입니다 생물막 형성에 필수적인 첫 번째 단계입니다. 마이크로 바이 옴에 포함 된 만성 및 지속적인 감염의 원인 바이러스가 될 수 있습니다. 이 바이러스에 의한 만성 세포 감염이 추정되는 수용체의 가용성에 변화를 일으킬 수 있습니다. 또한 1, 2, 세포 내 병원균에 의한 세포 항목도 차례로 박테리아와 곰팡이를 포함한 다른 마이크로 바이 옴 회원의 첨부 파일을 변경할 수 있습니다 호스트 막 유동성 / 소수성에 영향을 미칠 수 . 인간 숙주의 동일한 지리적 영역에서 - 지역화 공동이 여러 병원체 사이에서 발생할 수있는 상호 작용을 이해하기 위해, 우리는 점막 표면에 존재하는 분류학 왕국의 스펙트럼을 나타내는 병원체의 상호 작용을 연구 할 수 있어야한다. t &quot;&gt;는 헤르페스는 마이크로 바이 옴의 상임 이사국으로 인간의 100 %에 존재하는 미생물의 가족은 3,4. 또한 그들은 또한 지속적으로 증상의 유무에 모두 흘려 될 수있다. 특히, 단순 포진 바이러스 1 및 단순 헤르페스 바이러스 -2 (HSV-1, HSV-2, 각각)는 oronasopharynx 및 생식기의 마이크로 바이 영구 부재이다. 면역 능력이 개인, 두 HSV-1, HSV-2 원인 gingivostomatitis은 물론 음부 포진 5-8.이 사이트에서 HSV는 만성 지속적 nectins, 헤파 란 황산, 지질 뗏목 및 헤르페스 바이러스 항목 중재자의 표면 발현의 변화 세포 결과로 HSV 9. 항목 흘리기 바이러스 증상 / 종양 괴사 특징으로하는 잠재 감염의 원인 인자 수용체 (HVEM / TNFR) 10-25. 일부 박테리아와 곰팡이, 예를 들면 황색 포도상 구균과 C. albicans에 대한이 잠재적으로 공유 나타냅니다 수용체있는 기회 병원균 동안,또한 oronasopharynx (26, 27)의 점막 마이크로 바이 옴의 구성원으로 상주 할 수 있습니다. oronasopharynx S. 내 구균 및 C. 알비 칸스는 식민지의 두 가지 위치를 차지한다. 자연 치아와 호스트에서 구강 점막은 HSV-1과 C.에서 공유 알비 칸스, 전방 코 콧 구멍은 S.에 의해 점유하는 동안 구균 28. 그러나에도 불구하고 체외 조사 결과 그 S. 구균 입 상피 세포에 부착, 29, 30 S. 정상 조직은 29, 30 존재할 때 구균은 드물게 구강 검체에서 분리된다. 리틀는 임상 연구 결과 그 이상 생식기 공동 식민지의 틈새 시장에 관한 알려져있다 S. 구균은 C.하면서, 생식기 염증, 방전 및 성교통 특징, 에어로빅 질염과 연관된 알비 구강 31-35에서 관찰 된 것과 유사한 점막 병변을 생성한다. 따라서, 구강과 생식기 microbi 이러한 회원하지만의 상호 작용에 관한 알려진 작은 오메 크로스 분류 학적 왕국 숙주 세포 표면 5 준수를 통해 biofilm 형성을 시작하기에 영향을 미치기 능력이있다. 이 프로토콜은 효과적으로 공동 정착 / 감염의 기능적 결과를 결정하는데 적용되었다.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;C.albicans&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BBL Sabouraud Dextrose</td><td>BD</td><td>211584</td><td></td></tr><tr><td>Fungisel Agar</td><td>Dot Scientific</td><td>7205A</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;S.aureus&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mannitol Salt Agar</td><td>Troy Biologicals</td><td>7143B</td><td></td></tr><tr><td>Sheep blood agar</td><td>Troy Biologicals</td><td>221239</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Hela cells&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x DMEM (Dubelcco&#039;s Modified Eagle Medium, with 4.5 g/L glucose and L-glutamine, without sodium pyruvate</td><td>Corning</td><td>10-017-CM</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin 50 mg/ml</td><td>Sigma</td><td>1397</td><td>50 &amp;micro;g/ml final concentration in the complete DMEM</td></tr><tr><td>Trypsin EDTA (0.05% Trypsin, 0.53 M EDTA)Solution 1x</td><td>Corning</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td>10% final concentration in the complete DMEM</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Other medium and reagents&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ONPG</td><td>Thermo Scientific</td><td>34055</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Pure X gal</td><td>Invitrogen</td><td>15520-018</td><td></td></tr><tr><td>1x HBSS (Hanks&#039; Balanced Salt Solution)</td><td>Corning</td><td>20-021-CV</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Dot Scientific</td><td>30042-500</td><td></td></tr><tr><td>RIPA Lysis</td><td>Life Technologies</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Staining&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A433P-4</td><td></td></tr><tr><td>HSV 1&amp;amp;2, specific for gD</td><td>ViroStat</td><td>196</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>SIGMA</td><td>D8417-5MG</td><td></td></tr><tr><td>Gram Crystal Violet</td><td>Troy Biologicals</td><td>212527</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Supplies&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Petri dish 100 x 15</td><td>Dot Scientific</td><td>229693&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish 150 x 15</td><td>Kord Valmark</td><td>2902</td><td></td></tr><tr><td>96-Well plates</td><td>Evergreen Scientific</td><td>222-8030-01F</td><td></td></tr><tr><td>24-well plates</td><td>Evergreen Scientific</td><td>222-8044-01F</td><td></td></tr><tr><td>Culture tubes 100 x 13</td><td>Thomas Scientific</td><td>9187L61</td><td></td></tr><tr><td>Cover slip circles, 12 mm</td><td>Deckglaser</td><td>CB00120RA1</td><td></td></tr></tbody></table>

determination of biofilm initiation on virus-infected cells by bacteria and fungi

곰팡이, 박테리아와 바이러스를 포함 분류학 왕국에서 polymicrobial 상호 작용의 연구는 이전에 마이크로 바이 옴의 바이러스 성 회원이 바이러스에 감염된 숙주 세포와 후속 미생물의 상호 작용에 미치는 영향에 대해 조사되지 않았다. 세균 및 진균과 바이러스의 공동 주거 구강 및 생식기의 점막 표면에 주로 존재한다. 점막 세포, 지속적인 만성 또는 지속적인 잠재 바이러스 감염 특히이 표현 수용체의 상당수에서 바이러스 변경을 통해 마이크로 바이 옴의 구성원에 미치는 영향과 유형을 가질 수있다. 숙주 세포의 막 구조의 변형이 바이오 필름의 형성, 즉 부착하는 첫 번째 단계를 개시하기 위해 상주하고 기회 병원균 후속 부재 변형 기능을 초래할 것이다. 이 연구는 biofil의 시작에 HSV의 효과의 정량 및 육안 검사하는 방법을 설명합니다S. m의 형성 (부착) 구균 및 C. 알비 칸스.

이 보고서에 설명 된 시스템에서 얻을 수있는 데이터의 안정성의 수준은 그림 2 AF (38)에 표시됩니다. 이 시스템의 사용을 통해 바이러스로 감염된 세포와의 상호 접착에 미치는 효과 포도상 진균 작용의 조절을 묘사 할 수있다. polymicrobial 상호 작용은 동일한 세포에서 발생되는지 여부를 결정하기 위해도 3 및도 4에 도시 된 바와 같이 38 연구 이러한 유형의 상호 작용에 대한 현미경 검사를 필요로한다. 본 연구에서는 차등 세포 상호 작용은 특정 바이러스 종이다 포도상 진균 순응도 HSV 변조의 결과로서 관찰된다. 황색 포도상 구균 및 C. 동일한 HSV-헬라 비감염 대조군 세포에 부착 알비 칸스 (GT 및 YF). 세포에이 공동 현지화은 phys의 부족을 나타냅니다<html> 측정 된 차동 준수의 측정 수준 서로의 헬라 세포 부착과 그 iCal을 추론은 HSV-매개 (그림 3A, A1) (38) 것으로 나타났다. 그러나, HSV-1 또는 HSV-2에 HeLa 세포를 포도상 구균 및 C. 어떠한 공동 지역화 감염되지 알비 관찰되었다. (도 3B, B1, B2, B3, C1, C2). 형광 현미경을 사용하여 (FITC 공액 안티 HSV-GD 모노클로 날 항체)를 추가로 확인 S. 구균은 C.와 공동 현지화을하지 않은 것으로 보입니다 알비도 HSV-1 또는 HSV-2 (도 4A, A1, A2, A3, A4, B1, B2, B3). HSV와 칸디다 간의 협력은 모두 효모 및 세균 튜브 형태 C의 (그림 2A-F)로 확장 알비 칸스. 미생물의 화음 사이의 연결이 특이도는 호스트 oronasopharynx 점막에 훨씬 광범위한 규모에서 본 식민지의 특이성을 반영한다. <html> 1 &quot;&gt; <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/54162/54162fig1.jpg" /> 헬라 세포의 복용량 의존 HSV-1 감염의 그림 1. X-여자 염색 사진. 스테인드 다양한 MOI와 X-갈에서 HSV-1에 감염된 HeLa 세포. X-갈 염색 모의에 감염된 헬라 세포 제어 96 웰 플레이트의 웰 (A) HeLa 세포; 20 배의 초기 배율을; (B)의 감염 다중도 10의 (MOI)에서 HSV-1 감염 X 갤런 염색 헬라 세포로 96 웰 플레이트의 웰에서 HeLa 세포; 20 배의 초기 배율을; 감염의 다중성 (50) (MOI)에서 HSV-1에 감염된 X-갈 스테인드 헬라 세포와 96 웰 플레이트의 웰 (C) HeLa 세포; 20 배의 초기 배율을; 줄이 모두 적용 규모. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54162/54162fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 파일 / ftp_upload / 54162 / 54162fig2.jpg &quot;/&gt; (패널 A, C, E) 감염 다중도에서와 HSV-2 (패널 B, D, F) 50과 10의 (MOI) S.의 준수에 HSV-1의 그림 2. 효과 구균 및 / 또는 C. HeLa 세포에 알비. (A) S. 구균 (사행)는 (C)의 존재하에 HSV-1 감염 세포에 결합 알비 칸스 배아 튜브 (GT) 또는 효모 양식 (YF); (B) S. 구균 (사행)는 (C)의 존재하에 HSV-2 감염 세포에 결합 알비 칸스 배아 튜브 (GT) 또는 효모 양식 (YF); (C) C. S.의 존재하에 HSV-1 감염 세포에 결합 알비 배아 튜브 (GT) 아우 레 우스 (SA) (D) C. S.의 존재하에 HSV-2 감염 세포에 결합 알비 배아 튜브 (GT) 아우 레 우스 (SA); (E) C. S.의 존재하에 HSV-1 감염 세포에 결합 알비 효모 형태 (YF) 아우 레 우스 (SA); (F) C. S.의 존재하에 HSV-2 감염 세포에 결합 알비 효모 형태 (YF) 구균 (사). 모든 데이터 포인트는 평균이다 +/- SEM, N = 16 정규화 된 바이러스 무료 제어 할 수 있습니다. * = 감염되지 않은 헬라 세포 컨트롤에서 유의 한 차이 (p &lt;0.05). 괄호로 표시 한 쌍의 관점에서 # = 유의 한 차이 (p &lt;0.05); 스케일 바는 모두에 적용됩니다. (38)는 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54162/54162fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/54162/54162fig3.jpg" /> S. 그림 3. 부족 구균 및 C. HSV-1, HSV-2 감염 HeLa 세포에 대한 상호 작용 알비. S.와 HSV-1, HSV-2 감염 (MOI 50) 헬라 세포 단층 구균 및 C. 알비 칸스 (5 : 셀에 1 대상). 밝은 필드<html> 현미경은 세포 단층 후, 광학 현미경에 의해 검사 그람 크리스탈 바이올렛으로 염색 하였다. 칸디다 균 또는 S. 양성했다 세포 구균은 (미생물 신호 당 100 개별 셀 / 커버 슬립 당)은 이차적으로 추가 미생물의 공동 현지화 신호의 존재 (1000 배 초기 배율)를 검사 하였다. (A &amp; A1) S. 구균 (SA)와 C. 알비 칸스 효모 양식 (YF) 또는 세균 튜브 형태 (GT) 감염되지 않은 HeLa 세포에 공동 현지화; (A2는, 삽입). 공동 지역화 또는 개별 미생물과 헬라 세포의 비율; (B - B3) S.의 부족. 구균 및 C. HSV-1의 존재 하에서 알비 공동 지역화; (C - C2) S. 부족 구균 및 C. HSV-2의 존재 알비 공동 지역화. ± SEM을 의미; 스케일 바는 모두에 적용됩니다. (38)rget = &quot;_ 빈&quot;&gt;이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/54162/54162fig4.jpg" /> S.의 공동 현지화 그림 4. 부족 C.와 구균 알비 칸스 HSV-1 또는 HSV-2 감염 헬라 세포에. S.와 헬라 세포 단층의 도전을 HSV는 감염 구균 및 C. 알비 칸스 (5 : 1 셀에 대상) 염색 (FITC 접합 된 항 HSV GD 항체 및 DAPI). 사진은 칸디다 균과 S. 검사 HSV에 대한 신호를 양성이었다 세포 검사에서 결과의 대표 구균 후 이차적으로 추가 미생물의 공동 현지화 신호의 존재를 검사 하였다 (coverslip에 당 미생물 신호 당 100 개별 셀) (1000 배 초기 확대, 니콘). (A - A4) C. 알비 칸스 (A2, 삽입, DAPI 염색) ​​공동 현지화 HSV-1; (B- B3) C. 알비 칸스의 공동 현지화 HSV-2 (B1은, 삽입, C가. DAPI 염색을 칸디다 알비 칸스)와 함께. ± SEM을 의미; 스케일 바는 모두에 적용됩니다. (38)는 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54162/54162fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td></td><td> 1 </td><td> 이 </td><td> 삼 </td><td> 4 </td><td> 6 </td><td> (7) </td><td> 8 </td><td> 9 </td><td> (10) </td><td> (11) </td><td> (12) </td></tr><tr><td> 튜브 </td><td> GT </td><td> YF </td><td> MSSA </td><td colspan="2"> GT / MSSA </td><td colspan="2"> YF / MSSA </td><td> GT </td><td> YF </td><td> MSSA </td><td colspan="2"> GT / MSSA </td><td colspan="2"> YF / MSSA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 미디어 </td><td> 에프 </td><td> 에프 </td><td> MS </td><td> MS </td><td> 에프 </td><td> MS </td><td> 에프 </td><td> 에프 </td><td> 에프 </td><td> MS </td><td> MS </td><td> 에프 </td><td> MS </td><td> 에프 </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 에이 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 비 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 기음 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 디 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 이자형 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 에프 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 지 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> H </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 1 번 테이블. Polymicrobial 상호 작용에서 미생물 준수의 일반 템플릿 결정 GT = 칸디다 알비 칸스 배아 튜브 표현형.; YF = C. 알비 칸스 효모 형태의 표현형; MSSA는 = 메티 실린 민감 황색 포도상 구균을; MS 매체 만니톨 염 =; F = Fungisel 매체. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54162/54162table1.xlsx" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> 플레이트 (1) </td><td> 1 </td><td> 이 </td><td> 삼 </td><td> 4 </td><td> (5) </td><td> 6 </td></tr><tr><tD&gt; 제어 </td><td> HeLa 세포에서만 </td><td> 헬라 + GT </td><td> 헬라 + YF </td><td> 헬라 + 사 </td><td> 헬라 + GT + 사 </td><td> 헬라 + YF + 사 </td></tr><tr><td> 에이 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 비 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 기음 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 디 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 판 (2) </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> HSV </td><td> HeLa 세포 + HSV </td><td> HSV + 헬라 + GT </td<html> &gt; <td> HSV + 헬라 + YF </td><td> HSV + 헬라 + 사 </td><td> HSV + 헬라 + GT + 사 </td><td> HSV + 헬라 + YF + 사 </td></tr><tr><td> 에이 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 비 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 기음 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 디 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 표 2. HSV 감염 및 감염되지 않은 헬라 세포와 Polymicrobial 상호 작용의 시각적 분석을위한 일반 템플릿 GT = 칸디다 알비 칸스 배아 튜브 표현형.; YF = C. 알비 칸스 효모 형태의 표현형; SA는 메티 실린 민감 황색 포도상 구균을 =; HSV는 단순 포진 바이러스 =.ve.com/files/ftp_upload/54162/54162table2.xlsx &quot;대상 =&quot;_ 빈 &quot;&gt;이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.

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Determination of Biofilm Initiation on Virus-infected Cells by Bacteria and Fungi

A method is described herein for the determination of inter-Kingdom association and competition (bacterial and fungal) for adherence to virus-infected HeLa cell monolayers. This protocol can be extended to multiple combinations of prokaryotes, eukaryotes, and viruses.

박테리아와 균류에 의해 바이러스에 감염된 세포에 바이오 필름 개시의 결정

The study of polymicrobial interactions across the taxonomic kingdoms that include fungi, bacteria and virus have not been previously examined with ...

determination-biofilm-initiation-on-virus-infected-cells-bacteria

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

9.6K 조회수.  Midwestern University. A method is described herein for the determination of inter-Kingdom association and competition (bacterial and fungal) for adherence to virus-infected HeLa cell monolayers. This protocol can be extended to multiple combinations of prokaryotes, eukaryotes, and viruses.

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Microtiter Dish Biofilm Formation Assay

Biofilms are communities of microbes attached to surfaces, which can be found in medical, industrial and natural settings. In fact, life in a biofilm probably represents the predominate mode of growth for microbes in most environments. Mature biofilms have a few distinct characteristics. Biofilm microbes are typically surrounded by an extracellular matrix that provides structure and protection to the community. Microbes growing in a biofilm also have a characteristic architecture generally comprised of macrocolonies (containing thousands of cells) surrounded by fluid-filled channels. Biofilm-grown microbes are also notorious for their resistance to a range of antimicrobial agents including clinically relevant antibiotics.
The microtiter dish assay is an important tool for the study of the early stages in biofilm formation, and has been applied primarily for the study of bacterial biofilms, although this assay has also been used to study fungal biofilm formation. Because this assay uses static, batch-growth conditions, it does not allow for the formation of the mature biofilms typically associated with flow cell systems. However, the assay has been effective at identifying many factors required for initiation of biofilm formation (i.e, flagella, pili, adhesins, enzymes involved in cyclic-di-GMP binding and metabolism) and well as genes involved in extracellular polysaccharide production. Furthermore, published work indicates that biofilms grown in microtiter dishes do develop some properties of mature biofilms, such a antibiotic tolerance and resistance to immune system effectors.
This simple microtiter dish assay allows for the formation of a biofilm on the wall and/or bottom of a microtiter dish. The high throughput nature of the assay makes it useful for genetic screens, as well as testing biofilm formation by multiple strains under various growth conditions. Variants of this assay have been used to assess early biofilm formation for a wide variety of microbes, including but not limited to, pseudomonads, Vibrio cholerae, Escherichia coli, staphylocci, enterococci, mycobacteria and fungi.
In the protocol described here, we will focus on the use of this assay to study biofilm formation by the model organism Pseudomonas aeruginosa. In this assay, the extent of biofilm formation is measured using the dye crystal violet (CV). However, a number of other colorimetric and metabolic stains have been reported for the quantification of biofilm formation using the microtiter plate assay. The ease, low cost and flexibility of the microtiter plate assay has made it a critical tool for the study of biofilms.

The assay describes a rapid means to measure early biofilm formation in bacteria and fungi. This method uses a microtiter plate as the substratum for microbial biofilm formation, and the biofilm is visualized using crystal violet strain. The assay provides either a qualitative or quantitative assay for early biofilm formation.

Microtiter 디시 Biofilm 형성 분석

Biofilms are communities of microbes attached to surfaces, which can be found in medical, industrial and natural settings.  In fact, life in a biofilm ...

연구

면역학 및 감염병학

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. Biofilms are community-associated bacteria attached to a surface and encased in a matrix. The role of the extracellular matrix is multifaceted, including facilitating nutrient acquisition, and offers significant protection against environmental stresses (e.g. host immune responses). In an effort to acquire a better understanding as to how the bacteria within a biofilm respond to environmental stresses we have used a protocol wherein we visualize bacterial biofilms which have formed in an 8-well chamber slide. The biofilms were stained with the BacLight Live/Dead stain and examined using a confocal microscope to characterize the relative biofilm size, and structure under varying incubation conditions. Z-stack images were collected via confocal microscopy and analyzed by COMSTAT. This protocol can be used to help elucidate the mechanism and kinetics by which biofilms form, as well as identify components that are important to biofilm structure and stability.

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

This article describes the procedure for the formation and visualization of a bacterial biofilm grown within an 8-well chamber slide

8 잘 회의소 슬라이드에서 체외의 Biofilm 형성에

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Methodologies for Studying B. subtilis Biofilms as a Model for Characterizing Small Molecule Biofilm Inhibitors

This work assesses different methodologies to study the impact of small molecule biofilm inhibitors, such as D-amino acids, on the development and resilience of Bacillus subtilis biofilms. First, methods are presented that select for small molecule inhibitors with biofilm-specific targets in order to separate the effect of the small molecule inhibitors on planktonic growth from their effect on biofilm formation. Next, we focus on how inoculation conditions affect the sensitivity of multicellular, floating B. subtilis cultures to small molecule inhibitors. The results suggest that discrepancies in the reported effects of such inhibitors such as D-amino acids are due to inconsistent pre-culture conditions. Furthermore, a recently developed protocol is described for evaluating the contribution of small molecule treatments towards biofilm resistance to antibacterial substances. Lastly, scanning electron microscopy (SEM) techniques are presented to analyze the three-dimensional spatial arrangement of cells and their surrounding extracellular matrix in a B. subtilis biofilm. SEM facilitates insight into the three-dimensional biofilm architecture and the matrix texture. A combination of the methods described here can greatly assist the study of biofilm development in the presence and absence of biofilm inhibitors, and shed light on the mechanism of action of these inhibitors.

Methodologies for Studying B. subtilis Biofilms as a Model for Characterizing Small Molecule Biofilm Inhibitors

This study presents the development of reproducible methodologies to study biofilm inhibitors and their effects on Bacillus subtilis multicellularity.

유학을위한 방법론<em&gt; B. 서브 틸리</em작은 분자 바이오 필름 억제제를 특성화 모델로&gt; 바이오 필름

This work assesses different methodologies to study the impact of small molecule biofilm inhibitors, such as D-amino acids, on the development and ...

A New Method for Qualitative Multi-scale Analysis of Bacterial Biofilms on Filamentous Fungal Colonies Using Confocal and Electron Microscopy

Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and can be involved in numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic cooperation, competition, or predation. The study of biofilms is important in many biological fields, including environmental science, food production, and medicine. However, few studies have focused on such bacterial biofilms, partially due to the difficulty of investigating them. Most of the methods for qualitative and quantitative biofilm analyses described in the literature are only suitable for biofilms forming on abiotic surfaces or on homogeneous and thin biotic surfaces, such as a monolayer of epithelial cells.
While laser scanning confocal microscopy (LSCM) is often used to analyze in situ and in vivo biofilms, this technology becomes very challenging when applied to bacterial biofilms on fungal hyphae, due to the thickness and the three dimensions of the hyphal networks. To overcome this shortcoming, we developed a protocol combining microscopy with a method to limit the accumulation of hyphal layers in fungal colonies. Using this method, we were able to investigate the development of bacterial biofilms on fungal hyphae at multiple scales using both LSCM and scanning electron microscopy (SEM). This report describes the protocol, including microorganism cultures, bacterial biofilm formation conditions, biofilm staining, and LSCM and SEM visualizations.

This protocol describes a new method to grow and qualitatively analyze bacterial biofilms on fungal hyphae by confocal and electron microscopy.

새로운 방법 사상 진균 식민지에 세균 바이오 필름의 질적 다중 스케일 분석을 위해 사용 공 촛점 및 전자 현미경

Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and can be involved in numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. albicans is its ability to form biofilms, structured communities of cells attached to biotic and abiotic surfaces. C. albicans biofilms can form on host tissues, such as mucosal layers, and on medical devices, such as catheters, pacemakers, dentures, and joint prostheses. Biofilms pose significant clinical challenges because they are highly resistant to physical and chemical perturbations, and can act as reservoirs to seed disseminated infections. Various in vitro assays have been utilized to study C. albicans biofilm formation, such as microtiter plate assays, dry weight measurements, cell viability assays, and confocal scanning laser microscopy. All of these assays are single end-point assays, where biofilm formation is assessed at a specific time point. Here, we describe a protocol to study biofilm formation in real-time using an automated microfluidic device under laminar flow conditions. This method allows for the observation of biofilm formation as the biofilm develops over time, using customizable conditions that mimic those of the host, such as those encountered in vascular catheters. This protocol can be used to assess the biofilm defects of genetic mutants as well as the inhibitory effects of antimicrobial agents on biofilm development in real-time.

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

This protocol describes the use of a customizable automated microfluidic device to visualize biofilm formation in Candida albicans under host physiological conditions.

Candida albicans 자동 미세 장치를 사용 하 여에서 Biofilm 형성의 시각화

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Bile Salt-induced Biofilm Formation in Enteric Pathogens: Techniques for Identification and Quantification

Biofilm formation is a dynamic, multistage process that occurs in bacteria under harsh environmental conditions or times of stress. For enteric pathogens, a significant stress response is induced during gastrointestinal transit and upon bile exposure, a normal component of human digestion. To overcome the bactericidal effects of bile, many enteric pathogens form a biofilm hypothesized to permit survival when transiting through the small intestine. Here we present methodologies to define biofilm formation through solid-phase adherence assays as well as extracellular polymeric substance (EPS) matrix detection and visualization. Furthermore, biofilm dispersion assessment is presented to mimic the analysis of events triggering release of bacteria during the infection process. Crystal violet staining is used to detect adherent bacteria in a high-throughput 96-well plate adherence assay. EPS production assessment is determined by two assays, namely microscopy staining of the EPS matrix and semi-quantitative analysis with a fluorescently-conjugated polysaccharide binding lectin. Finally, biofilm dispersion is measured through colony counts and plating. Positive data from multiple assays support the characterization of biofilms and can be utilized to identify bile salt-induced biofilm formation in other bacterial strains.

This protocol enables the reader to analyze bile salt-induced biofilm formation in enteric pathogens using a multifaceted approach to capture the dynamic nature of bacterial biofilms by assessing adherence, extracellular polymeric substance matrix formation, and dispersion.

담 즙 소금 유도 Biofilm 형성 장 병원 체에서: 식별 및 정량화 기술

Biofilm formation is a dynamic, multistage process that occurs in bacteria under harsh environmental conditions or times of stress. For enteric pathogens, ...

Measuring the Migration and Biofilm Formation of Various Bacteria

As microbes that thrive in the host body primarily have adaptive abilities that facilitate their survival, methods for classifying and identifying their nature would be beneficial in facilitating their characterization. Currently, most studies focus only on one specific characterization method; however, the isolation and identification of microorganisms from the host is a continuous process and usually requires several combinatorial characterization methods. Herein, we describe methods of identifying the microbial biofilm-forming ability, the microbial respiration state, and their chemotaxis behavior. The methods are used to identify five microbes, three of which were isolated from the bone tissue of Sprague-Dawley (SD) rats (Corynebacterium stationis, Staphylococcus cohnii subsp. urealyticus, and Enterococcus faecalis) and two from the American Type Culture Collection (ATCC)-Staphylococcus aureus ATCC 25923&#160;and Enterococcus faecalis V583. The microbes isolated from the SD rat bone tissue include the gram-positive microbes. These microbes have adapted to thrive under stressful and nutrient-limiting environments within the bone matrix. This article aims to provide the readers with the specific know-how of determining the nature and behavior of the isolated microbes within a laboratory setting.

<meta charset="utf8"></head><body>다양한 박테리아의 이동 및 생물막 형성 측정

Here, we present a practical method for the isolation and identification of microorganisms within the host. In this way, the physicochemical properties of microorganisms and possible ways of living in the host are clearly described.

다양한 박테리아의 이동 및 생물막 형성 측정

As microbes that thrive in the host body primarily have adaptive abilities that facilitate their survival, methods for classifying and identifying their ...

생물학

아시네토박터 생물막 형성 평가 및 생물막의 특성화

Quantification, Viability Assessment, and Visualization Strategies for Acinetobacter Biofilms

Acinetobacter causes nosocomial infections and its biofilm formation can contribute to the survival on dry surfaces such as hospital environments. Thus, biofilm quantification and visualization are important methods to assess the potential of Acinetobacter strains to cause nosocomial infections. The biofilms forming on the surface of the microplate can be quantified in terms of volume and cell numbers. Biofilm volumes can be quantified by staining using crystal violet, washing, destaining using ethanol, then measuring the solubilized dye using a microplate reader. To quantify the number of cells embedded in the biofilms, the biofilms are scrapped off using cell scrapers, harvested in the saline, vigorously agitated in the presence of glass beads, and spread on Acinetobacter agar. Then, the plates are incubated at 30 &#176;C for 24-42 h. After incubation, the red colonies are enumerated to estimate the number of cells in biofilms. This viable count method can also be useful for counting Acinetobacter cells in mixed-species biofilms. Acinetobacter biofilms can be visualized using fluorescent dyes. A commercially available microplate designed for microscopic analysis is employed to form biofilms. Then, the bottom-surface attached biofilms are stained with SYTO9 and propidium iodide dyes, washed, then visualized with confocal laser scanning microscopy.

저자 스포트라이트: Acinetobacter Biofilm 정량화, 평가 및 시각화를 위한 포괄적인 프로토콜 

This protocol describes the preparation of the inoculum, the biofilm quantification on microtiter plates using crystal violet dye, the viable count in biofilms, and the visualization of biofilms of Acinetobacter.

Acinetobacter Biofilms에 대한 정량화, 생존력 평가 및 시각화 전략

Acinetobacter causes nosocomial infections and its biofilm formation can contribute to the survival on dry surfaces such as hospital environments. Thus, ...

박테리아와 균류에 의해 바이러스에 감염된 세포에 바이오 필름 개시의 결정

요약

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Microtiter 디시 Biofilm 형성 분석

8 잘 회의소 슬라이드에서 체외의 Biofilm 형성에

유학을위한 방법론

새로운 방법 사상 진균 식민지에 세균 바이오 필름의 질적 다중 스케일 분석을 위해 사용 공 촛점 및 전자 현미경

Candida albicans 자동 미세 장치를 사용 하 여에서 Biofilm 형성의 시각화

담 즙 소금 유도 Biofilm 형성 장 병원 체에서: 식별 및 정량화 기술

다양한 박테리아의 이동 및 생물막 형성 측정

다양한 박테리아의 이동 및 생물막 형성 측정

Acinetobacter Biofilms에 대한 정량화, 생존력 평가 및 시각화 전략

Acinetobacter Biofilms에 대한 정량화, 생존력 평가 및 시각화 전략