TGK reconoce la Escuela Internacional de Posgrado de Ciencia e Ingeniería (IGGSE) de la Universidad Técnica de Múnich por su apoyo financiero. HK reconoce el Centro de Ciencias de la proteína integrada Múnich (CIPSM) por su apoyo.

Nota: Todos los reactivos y disolventes se obtuvieron de proveedores comerciales y se usaron sin purificación adicional. Precaución: Por favor, consultar a todas las hojas de datos de seguridad (MSDS) antes de usar. Utilice todo el equipo de seguridad adecuado al realizar la síntesis química (por ejemplo, campana extractora de humos, gafas de seguridad, guantes, bata de laboratorio, pantalones de longitud completa, y zapatos cerrados). 1. Síntesis de los precursores Guanidinylation <ol><li> especies alquiladas <ol><li> especies metilados <ol><li> Disolver 1,0 g de N, N &#39;-di-Boc-1 H-pirazol-1-carboxamidina (3,2 mmol, 1 eq.) Y 1,0 g de trifenilfosfina (PPh3, 3,8 mmol, 1,2 eq.) En 10 ml de seco tetrahidrofurano (THF) en un matraz de fondo redondo de 50 ml en una atmósfera inerte utilizando un septo de goma a temperatura ambiente (RT). Añadir 194! ​​L de metanol seco mediante una jeringa (4,8 mmol, 1,5 eq.) Y let se agita a RT. </li><li> Por separado, preparar una solución con 747! L de azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD, 3,8 mmol, 1,2 eq.) En 2 ml de THF seco en un vial de vidrio pequeño. Mientras se agita, añadir la solución de DIAD en THF gota a gota a la solución de N, N &#39;-di-Boc-1 H-pirazol-1-carboxamidina, PPh3, y metanol usando una jeringa (más de 15 min). Deje que la agitación solución durante 2 h a TA. </li><li> Eliminar el disolvente bajo presión reducida usando un evaporador rotatorio y se disuelve el producto bruto en 1 ml de diclorometano (DCM). Cargar una columna ultrarrápida (2,5 cm x 20 cm) con 100 g de sílice en acetato de etilo 10% (EtOAc) en una solución de pentano. Cargar el producto bruto disuelto en la columna y añadir el disolvente a presión (1,5 bar). </li><li> Reunir las fracciones (sistema disolvente: isocrático 10% de EtOAc en pentano), identificar el punto de compuesto deseado por cromatografía en capa fina (TLC), y recogerlo (Rf = 0,4, EtOAc / pentano 1: 9, UV). Combinar el deseadofracciones y evaporar el disolvente a presión reducida usando un evaporador rotatorio para obtener 0,85 g del compuesto del título como un aceite viscoso de color amarillo (2,6 mmol, 81% de rendimiento). Almacenar el compuesto producido a temperatura ambiente para su uso posterior. </li></ol></li><li> Hexilamina especies modificadas <ol><li> Disolver 1,0 g de N, N &#39;-Di-BOC-1 H-pirazol-1-carboxamidina (3,2 mmol, 1,0 eq.), 0,9 g de Dde-6-aminohexanol (3,8 mmol, 1,2 eq.), Y 1,0 g de PPh3 (3,8 mmol, 1,2 eq.) en 10 ml de THF seco en un matraz de fondo redondo de 50 ml en atmósfera inerte utilizando un septo de goma a temperatura ambiente. </li><li> Por separado, preparar una solución con 747 l de DIAD (3,8 mmol, 1,2 eq.) En 2 ml de THF seco en un vial de vidrio pequeño. Mientras se agita, añadir la solución de DIAD en THF gota a gota a la solución de N, N &#39;-di-Boc-1 H-pirazol-1-carboxamidina, PPh3, y Dde-6-aminohexanol usando una jeringa (más de 15 min) . Deje que la agitación solución durante 2 h a TA. </li><li>Eliminar el disolvente bajo presión reducida usando un evaporador rotatorio y tomar el producto bruto en 1 ml de DCM. Cargar una columna ultrarrápida (2,5 cm x 20 cm) con 100 g de sílice en una solución de pentano / EtOAc (2: 1). Aplicar el producto bruto disuelto en la columna y añadir disolvente a presión (1,5 bar). </li><li> Reunir las fracciones (sistema disolvente: isocrático 2: 1 de pentano / EtOAc), identificar las fracciones deseadas con TLC, y recogerlos (R f = 0,66, 2: 1 de pentano / EtOAc, UV). Combinar las fracciones deseadas y se evapora el disolvente a presión reducida usando un evaporador rotatorio para obtener 1,6 g del compuesto del título como un aceite viscoso de color amarillo (2,8 mmol, 88% de rendimiento). Almacenar el compuesto producido a temperatura ambiente para su uso posterior. </li></ol></li></ol></li><li> Especies aciladas (2 etapas de reacción) <ol><li> Disolver 1,4 g de S hemisulfato -methylisothiuronium (10 mmol, 1,0 eq.) Y 2,2 g de di (terc-butil) dicarbonato (10 mmol, 1,0 eq.) En un agitar vigorosamentesonar solución bifásica de DCM / sat. ac. De NaHCO3 y se deja agitar durante 24 h a TA. </li><li> Separar las capas en un embudo de decantación y se extrae la fase acuosa tres veces con DCM. Se combinan las fases orgánicas, se secan con Na 2 SO 4, y eliminar el disolvente a presión reducida usando un evaporador rotatorio. Tome el producto bruto en 1 ml de hexano. </li><li> Cargar una columna ultrarrápida (2,5 cm x 20 cm) con 100 g de sílice en una solución de 4: 1 hexano / EtOAc. Cargar el producto bruto disuelto en la columna. Añadir disolvente bajo presión. Identificar las fracciones deseadas con TLC (sistema disolvente: 4: 1 hexano isocrático / EtOAc (detección UV: 254 nm), y recogerlos (R f = 0,30). </li><li> Combinar las fracciones deseadas y se evapora el disolvente a presión reducida usando un evaporador rotatorio para obtener 1,1 g del compuesto del título como un aceite viscoso de color amarillo (5,8 mmol, 58% de rendimiento). Almacenar el reactivo, N - (terc -butoxicarbonil) - S -methylisothiourea, a TA durante su uso posterior. </li><li> Disolver 250 mg de N - (terc -butoxicarbonil) - S -methylisothiourea (1,3 mmol, 1,0 eq.) En 10 ml de N, N -dimetilformamida seca (DMF) en un matraz de fondo redondo de 50 ml en una atmósfera inerte a RT. Añadir 440! L de N, N-diisopropiletilamina (DIPEA) (2,6 mmol, 2 eq.) Utilizando una jeringa. Mientras se agita, añadir 245 l de Ac 2 O (5,2 mmol, 4,0 eq.) Gota a gota usando una jeringa y se deja agitar durante 1 h a TA. </li><li> Añadir un exceso de metanol (2 ml) a la mezcla usando una jeringa y se deja agitar durante 15 min a TA. Eliminar el disolvente bajo presión reducida usando un evaporador rotatorio. Tome el producto bruto en 1 ml de DCM. </li><li> Cargar una columna ultrarrápida (2,5 cm x 20 cm) con 60 g de sílice en una solución de 3: 1 de hexano / EtOAc 3: 1. Aplicar el producto bruto se disolvió a la columna. Añadir disolvente (3: 1 hexano / EtOAc) y la presión (1,5 bar). Identificar las fracciones deseadas con TLC (3: 1 de hexano / EtOAc, UV: 220 nm), y colLect ellos (Rf = 0,62). </li><li> Combinar las fracciones deseadas y se evapora el disolvente a presión reducida usando un evaporador rotatorio para obtener 210 mg del compuesto del título como un sólido blanco (0,9 mmol, 70% de rendimiento). Almacenar el compuesto a temperatura ambiente para su uso posterior. </li></ol></li></ol> 2. Síntesis de péptido cíclico Precursores <ol><li> Cargando y taponado de resina TCP <ol><li> Añadir 1,00 g de resina de 2-chlortriyl cloruro de (CTC) (0,9 mmol / g) y 320 mg de Fmoc-Gly-OH (1,2 eq.) En una jeringa de plástico de 20 ml con una frita. Preparar una solución de 313 l de DIPEA (2 eq.) En 5 ml de DCM seco y añadirlo a la jeringa. Deje que se gire durante 1 h a RT utilizando una unidad giratoria. </li><li> Mientras tanto, preparar una solución de 2 ml de 5: 1 de metanol / DIPEA (v / v; solución tapado). Añadir la solución de nivelación a la jeringa y se deja girar durante otros 15 minutos. Se lava la resina con DCM (5x) y DMF (3x). </li></ol></li><li> On-resina Fmoc desprotección<ol><li> Tratar el unido a la resina Fmoc-Gly con 20% de piperidina en DMF durante 10 min y luego durante 5 min. Lavar la resina con DMF (3x). </li></ol></li><li> On-resina acoplamiento de Fmoc-Orn (Dde) -OH <ol><li> Añadir 934 mg de-l-Orn Fmoc -OH (Dde) (2 eq.), 684 mg de 1- [bis (dimetilamino) metileno] -1H-1,2,3-triazolo [4,5-b] piridinio hexafluorofosfato de 3-óxido (HATU) (2 eq.), y 245 mg de 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (HOAt) (2 eq.) a un vial de vidrio pequeño y se disuelven en 5 ml de DMF. Añadir 814! L de DIPEA. </li><li> Añadir esta solución a la Gly desprotegió Fmoc-, se lavó, y unido a la resina y se deja girar durante 1 h. Lavar la resina con DMF (3x). </li></ol></li><li> On-resina Fmoc desprotección <ol><li> Tratar el unido a la resina Fmoc-Orn (Dde) Gly con 20% de piperidina en DMF durante 10 min y luego durante 5 min. Lavar la resina con DMF (3x). </li></ol></li><li> Acoplamiento sobre resina de Fmoc-Val-OH <ol><li> Añadir 610 mg de Fmoc-Val-OH (2 eq.), 684 mg de HATU (2 eq.), Y 245 mg de HOAt (2 eq.) A un pequeño vial de vidrio y se disuelven en 5 ml de DMF. Añadir 814! L de DIPEA. </li><li> Añadir esta solución a la Fmoc-desprotegió, se lava, y Orn unido a la resina (Dde) Gly y se deja girar durante 1 h. </li></ol></li><li> On-resina Fmoc desprotección <ol><li> Tratar el unido a la resina Fmoc-Val-Orn (Dde) Gly con 20% de piperidina en DMF durante 10 min y luego durante 5 min. Lavar la resina con DMF (3x). </li></ol></li><li> On-resina N- metilación <ol><li> Se lava la resina con DCM (3x). Disolver 887 mg de 2-nitrobencenosulfonilo (O NBS-Cl, 4 eq.) En DCM y añadir 1,2 ml de 2,4,6-colidina (10 eq.). </li><li> Añadir la solución del péptido unido a la resina y se deja incubar durante 20 min a TA. </li><li> Se lava la resina con CH 2 Cl 2 (3x) y con THF (5x). Preparar una solución con 1,18 g de PPh 3 (5 eq.) Y 365 l de metanol en THF. Añadir esta solución a lajeringuilla. </li><li> Preparar una solución con 883 l de DIAD en 2 ml de THF y añadirlo a la jeringa. Deje que se incuba durante 15 min. Se lava la resina con THF (5x) y con DMF (5x). </li></ol></li><li> o desprotección ns <ol><li> Preparar una solución con 570 l de mercaptoetanol (10,0 eq.) Y 672 l de diazabicycloundecen (DBU) en 2 ml de DMF. Añadir esta solución a la jeringa y se deja incubar durante 5 minutos. </li><li> Repetir la etapa de desprotección y después se lava la resina con DMF (5x). </li></ol></li><li> Acoplamiento On-resina de Fmoc- D-Phe-OH <ol><li> Añadir 697 mg de Fmoc-D-Phe-OH (2 eq.), 684 mg de HATU (2 eq.), Y 245 mg de HOAt (2 eq.) A un pequeño vial de vidrio y se disuelven en 5 ml de DMF . Añadir 814! L de DIPEA. </li><li> Añadir esta solución al péptido desprotegido Fmoc-, se lavó, y unido a la resina y se deja girar durante 1 h. </li></ol></li><li> On-resina Fmoc desprotección <ol><li> El tratamiento de la resina-bound péptido con 20% de piperidina en DMF durante 10 min y luego durante 5 min. Lavar la resina con DMF (3x). </li></ol></li><li> Acoplamiento sobre resina de Fmoc-Asp (Ot Bu) -OH <ol><li> Añadir 741 mg de Fmoc Asp (Ot Bu) -OH (2 eq.), 684 mg de HATU (2 eq.), Y 245 mg de HOAt (2 eq.) A un pequeño vial de vidrio y se disuelven en 5 ml de DMF. Añadir 814! L de DIPEA. </li><li> Añadir esta solución al péptido desprotegido Fmoc-, se lavó, y unido a la resina y se deja girar durante 1 h. </li></ol></li><li> La escisión del péptido lineal de la resina <ol><li> Se lava la resina con DCM (3x) y, posteriormente, preparar 10 ml de una solución de hexafluoroisopropanol (HFIP) en DCM (1: 4; v / v). </li><li> Añadir la solución a la resina y se deja girar durante 15 min. Recoger la solución en un matraz de fondo redondo. Repita la escisión y evaporar el disolvente usando un evaporador rotatorio. </li></ol></li><li> La ciclación del péptido lineal <ol><li> dissolve 384 mg de NaHCO3 (5,0 eq.) y 582 l de difenilfosforil azida (DPPA) (3,0 eq.) en 50 ml de DMF y añadirlo al producto bruto. Deje que se agita durante una noche o hasta que no se observa ningún péptido lineal con ESI-MS (10 h) 17. </li><li> Bajo presión reducida, reducir el disolvente a un pequeño volumen usando un evaporador rotatorio. Preparar una solución acuosa saturada de NaCl (salmuera). Utilizando una pipeta Pasteur, añadir gota a gota el péptido ciclado a 40 ml de solución acuosa saturada de NaCl en un tubo de centrífuga. </li><li> Centrifugar la suspensión (5.000 xg, 5 min) y se lava el precipitado con agua de grado HPLC (2x). Liofilizar el producto. </li></ol></li></ol> 3. Guanidinylation y desprotección en la Solución <ol><li> Guanidinylation con los precursores hechos a la medida <ol><li> Disolver una pequeña cantidad (por ejemplo, 25 mg) del péptido cíclico ortogonalmente desprotegido en un pequeño volumen de DMF (por ejemplo, 2 mL). Añadir 2 eq. del precursor guanidinylation y 2 eq. de DIPEA a la solución y se deja agitar durante 2 h a TA. </li><li> Monitorear el progreso de la reacción con HPLC-MS. Después de que la reacción es completa, retire la re-disolver el péptido cíclico disolvente, guanidinylated en acetonitrilo, y llevar a cabo la purificación por HPLC semipreparativa 16. </li></ol></li><li> La eliminación de grupos de cadena lateral lábil protector de ácido <ol><li> Preparar 2 ml de una solución que contiene ácido trifluoroacético (TFA), agua, y triisopropilsilano (TIPS) (95 / 2,5 / 2,5; v / v / v). Añadir esta solución al producto purificado en un pequeño vial de vidrio y se deja agitar a TA durante al menos 1 h. Observe la desprotección completa con ESI-MS 17. </li><li> Se evapora el disolvente bajo presión reducida a un pequeño volumen. Preparar éter enfriado con hielo y añadir 10 ml en un tubo de centrífuga de 50 mL. Precipitar el péptido desprotegido en éter enfriado con hielo utilizando una pipeta Pasteur añadiéndolagota a gota. Centrifugar la suspensión (5.000 xg, 5 min) para obtener un pellet. </li><li> Lavar el precipitado con éter enfriado con hielo y centrifugar ella (5000 xg, 5 min, 2x). Se disuelve el producto en 2 ml de agua de calidad de HPLC y se purifica con HPLC semipreparativa 16. </li></ol></li></ol> 4. Datos analíticos y parámetros para la purificación <ol><li> Analytical HPLC-ESI-MS <ol><li> Realizar analítico HPLC-ESI-MS con un espectrómetro de masas LCQ usando una columna C18 (tamaño de 12 nm de poro, tamaño de partícula 3-m, 125 mm x 2,1 mm) o una columna C8 (tamaño de poro de 20 nm, partículas 5-m tamaño, 250 mm x 2,1 mm), con H 2 O (0,1% v v / ácido fórmico) / acetonitrilo (0,1% v v / ácido fórmico) como eluyentes. </li></ol></li><li> HPLC semi-preparativa <ol><li> Realizar HPLC semi-preparativa usando un instrumento de HPLC preparativa con un ODS-A de columna (20 x 250 mm, 5 micras), una velocidad de flujo de 8 ml / min, y los gradientes linealesde H 2 O (0,1% v / v de TFA) y acetonitrilo (0,1% v / v de TFA). </li></ol></li></ol>

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Los autores no tienen nada que revelar.

El precursor para guanidinylation es un derivado de péptido cíclico ortogonalmente desprotegido, (c (OrnD (Ot Bu) Gf (N Me) V)), que se sintetiza por un protocolo Fmoc estándar de síntesis de péptidos en fase sólida (SPPS). Ornitina se utilizó como el derivado protegido ortogonalmente, (Fmoc-Orn (Dde) -OH), que puede desprotegerse con hidrazina en DMF después de la ciclación del andamio péptido. El precursor del péptido se purifica mediante la precipitación del compuesto y por la l...

Entre los grupos farmacofóricos más abundantes en ligandos naturales es el grupo de guanidina, que está implicado en interacciones múltiples 1, 2. Por ejemplo, sirve como un potencial de cuatro veces donante de hidrógeno en las interacciones de enlaces de hidrógeno y está implicado en interacciones electrostáticas, tales como puentes de sal o interacciones de cationes π. En la química medicinal, este grupo se encuentra a menudo en las drogas y fármacos candidatos 4, aunque muy a menudo como miméticos de guanidina 5, 6. La razón para el desarrollo de miméticos de guanidina es la eliminación del grupo guanidina ubicuo, cargado positivamente, así como el ajuste de la lipofilicidad del ligando. En ligandos peptídicos, el único aminoácido que contiene un grupo de guanidina es arginina, que por lo tanto se encuentra a menudo en la región bioactiva de ligandos peptídicos. Una muy prejemplo ominent para una familia ligando que contiene arginina-es la subfamilia de las integrinas RGD-unión. En general, las integrinas son una clase de receptores de adhesión celular, que tienen más de funciones importantes en todos los organismos superiores. Algunas de estas funciones implican la adhesión celular, la migración y la supervivencia celular. Por lo tanto, ellos también están involucrados en indicaciones patológicas, como el cáncer y fibrosis. Las integrinas son proteínas heterodiméricas de transmembrana que consisten en un α- y una β-subunidad que forman 24 subtipos de integrina actualmente conocidos; 8 de ellos reconocen la secuencia de tripéptido Arg-Gly-Asp (RGD =) en sus ligandos 7. La región de unión se encuentra en la interfaz entre estos dos subtipos en la parte extracelular, el llamado grupo de cabeza integrina 8. RGD es reconocido por dos interacciones comunes: la región del sitio de adhesión a metal-ion-dependiente (MIDAS), que se encuentra en la subunidad beta y que se une el ácido carboxílico en los ligandos (cha secundariosen de Asp); y el grupo guanidina en los ligandos, que se encuentra en la subunidad alfa. La mayoría de los subtipos de integrina son promiscuos y comparten al menos una parte de su matriz extracelular naturales (ECM) ligandos 9. Por lo tanto, para el desarrollo de ligandos de integrinas artificiales, el principal objetivo es, además de una alta afinidad de unión, la selectividad del subtipo. Recientemente, hemos sido capaces de dar a conocer un elemento clave para la generación de ligandos selectivos de subtipo: el grupo guanidina. A través de modificaciones distintas, ligandos biselective para el αv- y α5 que contienen subtipos de integrina se pueden convertir en compuestos selectivos por modificaciones sencillas en el grupo guanidina, que puede discriminar la diferente α-subunidades 10. En el bolsillo de alpha v, el grupo guanidina interactúa lado-a través de un puente de sal bidentado con Asp218 11, 12. Esta interacción cuna también observarse en α5β1 (aquí, con Asp227 en α5), pero, además, se observa un extremo en la interacción del grupo de guanidina con un residuo de Gln (Gln221) hay 13. Por lo tanto, hemos modificado el grupo guanidina de dos maneras opuestas: en un caso, mediante el bloqueo del lado de la interacción con la metilación de la δ N del grupo de guanidina, y en el otro caso, con la metilación de la ω guanidina N, bloqueo de la interacción de fin en. Sorprendentemente, esta pequeña modificación dio lugar a un cambio completo selectividad en los ligandos. Además de la alquilación, se introdujo un nuevo método de funcionalización en esta publicación. El método de funcionalización clásica para este tipo de ligando pentapeptidic es a través de la conjugación de la cadena lateral de un aminoácido no implicada en la unión (por ejemplo, K en c (RGDfK)) 14, 15. Aquí,se muestra que la funcionalización es también posible mediante la modificación de la guanidina - que es crucial para la unión - con un acilo o enlazador alquilado. La carga positiva que es esencial para la unión se retiene, y los modelos sugieren que los puntos de cadena larga fuera del bolsillo de unión, proporcionando así una posibilidad ideal para la fijación de otros enlazadores y equipos de etiquetado (por ejemplo, un marcador fluorescente o un quelante para molecular de formación de imágenes). En este trabajo, nos concentramos en las etapas preparativas para la modificación del grupo guanidina en ligandos que contienen arginina. Esto implica la síntesis de las especies -methylated N ω, así como guanidinas con unidades enlazadoras más largos. Las diferentes modificaciones comprenden grupos acilo y alquilo.

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;N,N&amp;prime;&lt;/em&gt;-Di-Boc-1H-pyrazole-1-carboxamidine, 98%&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>434167&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Triphenylphosphine, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T84409&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahydrofuran, &gt;99.5%</td><td>Carl Roth</td><td>4745</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahydrofuran anhydrous, 99.8%</td><td>Carl Roth</td><td>5182</td><td></td></tr><tr><td>Methanol anhydrous, 99.8%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>322415&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Diisopropyl azodicarboxylate, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>225541&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Dichlormethan, for synthesis, 99.5%</td><td>Carl Roth</td><td>8424</td><td></td></tr><tr><td>Silica gel for flash chromtaography</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60738&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>n-Pentane, 99%</td><td>Carl Roth</td><td>8720</td><td></td></tr><tr><td>n-Hexane, 99%</td><td>Carl Roth</td><td>CP47</td><td></td></tr><tr><td>Ethylacetate, 99.5%</td><td>Carl Roth</td><td>7338</td><td></td></tr><tr><td>Aminohexanol, 95%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A56353&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;S&lt;/em&gt;-Methylisothiourea hemisulfate, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M84445 ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Di-&lt;em&gt;tert&lt;/em&gt;-butyl dicarbonate, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>205249&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;N,N&lt;/em&gt;-Dimethylformamid, 99.8%</td><td>Carl Roth</td><td>A529</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;N,N&lt;/em&gt;-Diisopropylethylamin, 99.5%</td><td>Carl Roth</td><td>2474</td><td></td></tr><tr><td>Acetic anhydrid, 99%</td><td>Carl Roth</td><td>4483</td><td></td></tr><tr><td>Chlortrityl resin</td><td>Carbolution</td><td>CC11006</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Gly-OH, 98%</td><td>Carbolution</td><td>CC05014</td><td></td></tr><tr><td>Piperidin, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>104094&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Orn(Dde)-OH</td><td>Iris-Biotech</td><td>FAA1502</td><td></td></tr><tr><td>HATU, 99%</td><td>Carbolution</td><td>CC01011</td><td></td></tr><tr><td>HOAt, 99%</td><td>Carbolution</td><td>CC01004</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Val-OH</td><td>Carbolution</td><td>CC05028</td><td></td></tr><tr><td>2-Nitrobenzenesulfonyl chloride, 97%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N11507&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>2,4,6-Collidine, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>27690&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Mercaptoethanol, 99%&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M6250&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Diazabicycloundecen, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>139009&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-D-Phe-OH, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>47378&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Asp(OtBu)-OH, 98%</td><td>Carbolution</td><td>CC05008</td><td></td></tr><tr><td>Hexafluoroisopropanol</td><td>Carbolution</td><td>CC03056</td><td></td></tr><tr><td>Diphenylphosphoryl azide, 97%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>178756&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>TFA, 99.9%</td><td>Carl Roth</td><td>P088</td><td></td></tr><tr><td>Triisopropylsilan, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>233781&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrile, HPLC grade</td><td>Carl Roth</td><td>HN44</td><td></td></tr></tbody></table>

modification and functionalization of the guanidine group by tailor-made precursors

El grupo guanidina es uno de los grupos farmacofóricos más importantes en la química medicinal. El único aminoácido que lleva un grupo de guanidina es arginina. En este artículo, se proporciona un método fácil para la modificación del grupo guanidina en ligandos peptídicos, con un ejemplo de ligandos de integrina de unión a RGD. Se ha demostrado recientemente que la modificación distinta del grupo guanidina en estos ligandos permite la modulación selectiva del subtipo (por ejemplo, entre los subtipos alpha v y α5). Por otra parte, una estrategia anteriormente desconocida para la funcionalización a través del grupo guanidina se demostró, y el enfoque sintético se revisa en este documento. Las modificaciones descritas aquí implican terminal (N ω) grupos guanidina alquiladas y acetilados. Para la síntesis, las moléculas precursoras hechos a la medida son sintetizados, que se somete luego a una reacción con una amina ortogonalmente desprotege para transferir el pregrupo guanidina -Modificado. Para la síntesis de guanidinas alquiladas, precursores basan en N, N &#39;-Di-Boc-1 H-pirazol-1-carboxamidina se utilizan para sintetizar compuestos acilados, el precursor de elección es un derivado correspondientemente acilado de N -Boc- S - metilisotiourea, que puede ser obtenido en las reacciones de uno y de dos pasos.

El precursor del péptido cíclico fue sintetizado como un péptido lineal, ciclizado, y ortogonalmente desprotege-Dde. Después de la precipitación, la pureza del compuesto se analizó con HPLC-MS (Figura 1). Para supervisar el progreso de la reacción, se realizó un análisis HPLC después del tiempo de reacción de 2 h (Figura 2). Para los residuos más grandes en el grupo de guanidina, e...

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Modification and Functionalization of the Guanidine Group by Tailor-made Precursors

Se presenta un protocolo para la síntesis de guanidinas modificados con alquilo basados ​​en el uso de los precursores correspondientes.

Modificación y funcionalización del grupo guanidina por Precursores adaptado

The guanidine group is one of the most important pharmacophoric groups in medicinal chemistry. The only amino acid carrying a guanidine group is arginine. ...

modification-functionalization-guanidine-group-tailor-made

Research

JoVE Journal

Biochemistry

10.5K vistas.  Technische Universität München.  Se presenta un protocolo para la síntesis de guanidinas modificados con alquilo basados ​​en el uso de los precursores correspondientes. 

Video: Modification and Functionalization of the Guanidine Group by Tailor-made Precursors

Microwave-assisted Functionalization of Poly(ethylene glycol) and On-resin Peptides for Use in Chain Polymerizations and Hydrogel Formation

One of the main benefits to using poly(ethylene glycol) (PEG) macromers in hydrogel formation is synthetic versatility. The ability to draw from a large variety of PEG molecular weights and configurations (arm number, arm length, and branching pattern) affords researchers tight control over resulting hydrogel structures and properties, including Young&#8217;s modulus and mesh size. This video will illustrate a rapid, efficient, solvent-free, microwave-assisted method to methacrylate PEG precursors into poly(ethylene glycol) dimethacrylate (PEGDM). This synthetic method provides much-needed starting materials for applications in drug delivery and regenerative medicine. The demonstrated method is superior to traditional methacrylation methods as it is significantly faster and simpler, as well as more economical and environmentally friendly, using smaller amounts of reagents and solvents. We will also demonstrate an adaptation of this technique for on-resin methacrylamide functionalization of peptides. This on-resin method allows the N-terminus of peptides to be functionalized with methacrylamide groups prior to deprotection and cleavage from resin. This allows for selective addition of methacrylamide groups to the N-termini of the peptides while amino acids with reactive side groups (e.g.&#160;primary amine of lysine, primary alcohol of serine, secondary alcohols of threonine, and phenol of tyrosine) remain protected, preventing functionalization at multiple sites. This article will detail common analytical methods (proton Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy (;H-NMR) and Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight mass spectrometry (MALDI-ToF)) to assess the efficiency of the functionalizations. Common pitfalls and suggested troubleshooting methods will be addressed, as will modifications of the technique which can be used to further tune macromer functionality and resulting hydrogel physical and chemical properties. Use of synthesized products for the formation of hydrogels for drug delivery and cell-material interaction studies will be demonstrated, with particular attention paid to modifying hydrogel composition to affect mesh size, controlling hydrogel stiffness and drug release.

Microwave-assisted Functionalization of Polyethylene glycol and On-resin Peptides for Use in Chain Polymerizations and Hydrogel Formation

This video will illustrate a rapid, efficient method to methacrylate poly(ethylene glycol), enabling chain polymerizations and hydrogel synthesis. It will demonstrate how to similarly introduce methacrylamide functionalities into peptides, detail common analytical methods to assess functionalization efficiency, provide suggestions for troubleshooting and advanced modifications, and demonstrate typical hydrogel characterization techniques.

Funcionalización asistida por microondas de poli (etilenglicol) y los péptidos sobre resina para uso en polimerizaciones de cadena y Formación de hidrogel

One of the main benefits to using poly(ethylene glycol) (PEG) macromers in hydrogel formation is synthetic versatility. The ability to draw from a large ...

Investigación

Química

Nucleoside Triphosphates - From Synthesis to Biochemical Characterization

The traditional strategy for the introduction of chemical functionalities is the use of solid-phase synthesis by appending suitably modified phosphoramidite precursors to the nascent chain. However, the conditions used during the synthesis and the restriction to rather short sequences hamper the applicability of this methodology. On the other hand, modified nucleoside triphosphates are activated building blocks that have been employed for the mild introduction of numerous functional groups into nucleic acids, a strategy that paves the way for the use of modified nucleic acids in a wide-ranging palette of practical applications such as functional tagging and generation of ribozymes and DNAzymes. One of the major challenges resides in the intricacy of the methodology leading to the isolation and characterization of these nucleoside analogues.
	
	In this video article, we present a detailed protocol for the synthesis of these modified analogues using phosphorous(III)-based reagents. In addition, the procedure for their biochemical characterization is divulged, with a special emphasis on primer extension reactions and TdT tailing polymerization. This detailed protocol will be of use for the crafting of modified dNTPs and their further use in chemical biology.

The protocol described herein aims to explain and abridge the numerous obstacles in the way of the intricate route leading to modified nucleoside triphosphates. Consequently, this protocol facilitates both the synthesis of these activated building-blocks and their availability for practical applications.

Nucleósidos Trifosfatos - De la síntesis a la Caracterización bioquímica

The  traditional strategy for the introduction of chemical functionalities is the  use of solid-phase synthesis by appending suitably modified ...

High-throughput Synthesis of Carbohydrates and Functionalization of Polyanhydride Nanoparticles

Transdisciplinary approaches involving areas such as material design, nanotechnology, chemistry, and immunology have to be utilized to rationally design efficacious vaccines carriers. Nanoparticle-based platforms can prolong the persistence of vaccine antigens, which could improve vaccine immunogenicity1. Several biodegradable polymers have been studied as vaccine delivery vehicles1; in particular, polyanhydride particles have demonstrated the ability to provide sustained release of stable protein antigens and to activate antigen presenting cells and modulate immune responses2-12.
The molecular design of these vaccine carriers needs to integrate the rational selection of polymer properties as well as the incorporation of appropriate targeting agents. High throughput automated fabrication of targeting ligands and functionalized particles is a powerful tool that will enhance the ability to study a wide range of properties and will lead to the design of reproducible vaccine delivery devices.
The addition of targeting ligands capable of being recognized by specific receptors on immune cells has been shown to modulate and tailor immune responses10,11,13 C-type lectin receptors (CLRs) are pattern recognition receptors (PRRs) that recognize carbohydrates present on the surface of pathogens. The stimulation of immune cells via CLRs allows for enhanced internalization of antigen and subsequent presentation for further T cell activation14,15. Therefore, carbohydrate molecules play an important role in the study of immune responses; however, the use of these biomolecules often suffers from the lack of availability of structurally well-defined and pure carbohydrates. An automation platform based on iterative solution-phase reactions can enable rapid and controlled synthesis of these synthetically challenging molecules using significantly lower building block quantities than traditional solid-phase methods16,17.
Herein we report a protocol for the automated solution-phase synthesis of oligosaccharides such as mannose-based targeting ligands with fluorous solid-phase extraction for intermediate purification. After development of automated methods to make the carbohydrate-based targeting agent, we describe methods for their attachment on the surface of polyanhydride nanoparticles employing an automated robotic set up operated by LabVIEW as previously described10. Surface functionalization with carbohydrates has shown efficacy in targeting CLRs10,11 and increasing the throughput of the fabrication method to unearth the complexities associated with a multi-parametric system will be of great value (Figure 1a).

In this article, a high throughput method is presented for the synthesis of oligosaccharides and their attachment to the surface of polyanhydride nanoparticles for further use in targeting specific receptors on antigen presenting cells.

De alto rendimiento de síntesis de carbohidratos y funcionalización de nanopartículas polianhidrido

Transdisciplinary approaches involving areas such as material design, nanotechnology, chemistry, and immunology have to be utilized to rationally design ...

Bioingeniería

A Direct, Early Stage Guanidinylation Protocol for the Synthesis of Complex Aminoguanidine-containing Natural Products

The guanidine functional group, displayed most prominently in the amino acid arginine, one of the fundamental building blocks of life, is an important structural element found in many complex natural products and pharmaceuticals. Owing to the continual discovery of new guanidine-containing natural products and designed small molecules, rapid and efficient guanidinylation methods are of keen interest to synthetic and medicinal organic chemists. Because the nucleophilicity and basicity of guanidines can affect subsequent chemical transformations, traditional, indirect guanidinylation is typically pursued. Indirect methods commonly employ multiple protection steps involving a latent amine precursor, such as an azide, phthalimide, or carbamate. By circumventing these circuitous methods and employing a direct guanidinylation reaction early in the synthetic sequence, it was possible to forge the linear terminal guanidine containing backbone of clavatadine A to realize a short and streamlined synthesis of this potent factor XIa inhibitor. In practice, guanidine hydrochloride is elaborated with a carefully constructed protecting array that is optimized to survive the synthetic steps to come. In the preparation of clavatadine A, direct guanidinylation of a commercially available diamine eliminated two unnecessary steps from its synthesis. Coupled with the wide variety of known guanidine protecting groups, direct guanidinylation evinces a succinct and efficient practicality inherent to methods that find a home in a synthetic chemist&#39;s toolbox.

Here, we present a protocol for direct, early stage guanidinylation that enables rapid total synthesis of aminoguanidine-containing small organic molecules. An advanced synthetic intermediate used in the synthesis of a blood coagulation factor XIa inhibitor was prepared using this protocol.

Un directa, Protocolo Guanidinylation Etapa Temprana para la Síntesis de complejos productos naturales que contiene aminoguanidina-

The guanidine functional group, displayed most prominently in the amino acid arginine, one of the fundamental building blocks of life, is an important ...

Facile Preparation of 4-Substituted Quinazoline Derivatives

Reported in this paper is a very simple method for direct preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from a reaction between substituted 2-aminobenzophenones and thiourea in the presence of dimethyl sulfoxide (DMSO). This is a unique complementary reaction system in which thiourea undergoes thermal decomposition to form carbodiimide and hydrogen sulfide, where the former reacts with 2-aminobenzophenone to form 4-phenylquinazolin-2(1H)-imine intermediate, whilst hydrogen sulfide reacts with DMSO to give methanethiol or other sulfur-containing molecule which then functions as a complementary reducing agent to reduce 4-phenylquinazolin-2(1H)-imine intermediate into 4-phenyl-1,2-dihydroquinazolin-2-amine. Subsequently, the elimination of ammonia from 4-phenyl-1,2-dihydroquinazolin-2-amine affords substituted quinazoline derivative. This reaction usually gives quinazoline derivative as a single product arising from 2-aminobenzophenone as monitored by GC/MS analysis, along with small amount of sulfur-containing molecules such as dimethyl disulfide, dimethyl trisulfide, etc. The reaction usually completes in 4-6 hr at 160 &#186;C in small scale but may last over 24 hr when carried out in large scale. The reaction product can be easily purified by means of washing off DMSO with water followed by column chromatography or thin layer chromatography.

A protocol for facile preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from 2-aminobenzophenones, thiourea and dimethyl sulfoxide is presented.

Preparación Facile de derivados de quinazolina 4-sustituidos

Reported in this paper is a very simple method for direct preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from a reaction between substituted ...

Chemoselective Modification of Viral Surfaces via Bioorthogonal Click Chemistry

The modification of virus particles has received a significant amount of attention for its tremendous potential for impacting gene therapy, oncolytic applications and vaccine development.1,2,3 Current approaches to modifying viral surfaces, which are mostly genetics-based, often suffer from attenuation of virus production, infectivity and cellular transduction.4,5 Using chemoselective click chemistry, we have developed a straightforward alternative approach which sidesteps these issues while remaining both highly flexible and accessible.1,2
The goal of this protocol is to demonstrate the effectiveness of using bioorthogonal click chemistry to modify the surface of adenovirus type 5 particles. This two-step process can be used both therapeutically1 or analytically,2,6 as it allows for chemoselective ligation of targeting molecules, dyes or other molecules of interest onto proteins pre-labeled with azide tags. The three major advantages of this method are that (1) metabolic labeling demonstrates little to no impact on viral fitness,1,7 (2) a wide array of effector ligands can be utilized, and (3) it is remarkably fast, reliable and easy to access.1,2,7
In the first step of this procedure, adenovirus particles are produced bearing either azidohomoalanine (Aha, a methionine surrogate) or the unnatural sugar O-linked N-azidoacetylglucosamine (O-GlcNAz), both of which contain the azide (-N3) functional group. After purification of the azide-modified virus particles, an alkyne probe containing the fluorescent TAMRA moiety is ligated in a chemoselective manner to the pre-labeled proteins or glycoproteins. Finally, an SDS-PAGE analysis is performed to demonstrate the successful ligation of the probe onto the viral capsid proteins. Aha incorporation is shown to label all viral capsid proteins (Hexon, Penton and Fiber), while O-GlcNAz incorporation results in labeling of Fiber only.
In this evolving field, multiple methods for azide-alkyne ligation have been successfully developed; however only the two we have found to be most convenient are demonstrated herein &#x2013; strain-promoted azide-alkyne cycloaddition (SPAAC) and copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition (CuAAC) under deoxygenated atmosphere.

Adenovirus particles are engineered to contain either the unnatural amino acid analogue azidohomoalanine or the azido sugar O-GlcNAz. The azide group of each is chemoselectively ligated via "click" chemistry reactions as a means of viral surface modification.

Modificación de superficies quimioselectiva virales a través de Química Haga clic en Bioorthogonal

The modification of virus particles has received a significant amount of attention for its tremendous potential for impacting gene therapy, oncolytic ...

Inmunología e Infección

Preparation of N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamides from N-tosyl-1,2,3-triazoles and Subsequent Conversion to Substituted Phthalans and Phenethylamines

Decomposition of N-tosyl-1,2,3-triazoles with rhodium(II) acetate dimer in the presence of alcohols forms synthetically versatile N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamides, which react under a variety of conditions to afford useful N- and O-containing compounds. Acid-catalyzed addition of alcohols or thiols to N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamide-containing phthalans provides access to ketals and thioketals, respectively. Selective reduction of the vinyl group in N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamide-containing phthalans via hydrogenation yields the corresponding phthalan in good yield, whereas reduction with sodium bis(2-methoxyethoxy)aluminumhydride generates a ring-opened phenethylamine analogue. Because the N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamide functional group is synthetically versatile, but often hydrolytically unstable, this protocol emphasizes key techniques in preparing, handling, and reacting these pivotal substrates in several useful transformations.

Preparation of N-2-alkoxyvinylsulfonamides from N-tosyl-1,2,3-triazoles and Subsequent Conversion to Substituted Phthalans and Phenethylamines

Representative experimental procedures for the synthesis of N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamides and subsequent conversion to phthalan and phenethylamine derivatives are presented in detail.

Preparación de N-(2-alkoxyvinyl) sulfonamidas de N- tosyl-1,2,3-triazoles y posterior conversión a Phthalans sustituidos y fenetilaminas

Decomposition of N-tosyl-1,2,3-triazoles with rhodium(II) acetate dimer in the presence of alcohols forms synthetically versatile ...

Regioselective O-Glycosylation of Nucleosides via the Temporary 2',3'-Diol Protection by a Boronic Ester for the Synthesis of Disaccharide Nucleosides

Disaccharide nucleosides, which consist of disaccharide and nucleobase moieties, have been known as a valuable group of natural products having multifarious bioactivities. Although chemical O-glycosylation is a commonly beneficial strategy to synthesize disaccharide nucleosides, the preparation of substrates such as glycosyl donors and acceptors requires&#160;tedious protecting&#160;group manipulations and a purification at each synthetic step. Meanwhile, several research groups have reported that boronic and borinic esters serve as a protecting or activating group of carbohydrate derivatives to achieve the regio- and/or stereoselective acylation, alkylation, silylation, and glycosylation. In this article, we demonstrate the procedure for the regioselective O-glycosylation of unprotected ribonucleosides utilizing boronic acid. The esterification of 2&#39;,3&#39;-diol of ribonucleosides with boronic acid makes the temporary protection of diol, and, following O-glycosylation with a glycosyl donor in the presence of p-toluenesulfenyl chloride and silver triflate, permits the regioselective reaction of the 5&#39;-hydroxyl group to afford the disaccharide nucleosides. This method could be applied to various nucleosides, such as guanosine, adenosine, cytidine, uridine, 5-metyluridine, and 5-fluorouridine. This article and the accompanying video represent&#160;useful (visual) information for the O-glycosylation of unprotected nucleosides and their analogs for the synthesis of not only disaccharide nucleosides, but also a variety of biologically relevant derivatives.

Regioselective O-Glycosylation of Nucleosides via the Temporary 2',3'-Diol Protection by a Boronic Ester for the Synthesis of Disaccharide Nucleosides

Here, we present protocols for the synthesis of disaccharide nucleosides by the regioselective O-glycosylation of ribonucleosides via a temporary protection of their 2&#39;,3&#39;-diol moieties utilizing a cyclic boronic ester. This method applies to several unprotected nucleosides such as adenosine, guanosine, cytidine, uridine, 5-methyluridine, and 5-fluorouridine to give corresponding disaccharide nucleosides.

Regioselectiva O- glicosilación de nucleósidos a través de la temporal 2', 3'-Diol protección por un éster borónico para la síntesis de nucleósidos del disacárido

Disaccharide nucleosides, which consist of disaccharide and nucleobase moieties, have been known as a valuable group of natural products having ...

Preparation of 6-aminocyclohepta-2,4-dien-1-one Derivatives via Tricarbonyl(tropone)iron

aza-Michael adducts of tricarbonyl(tropone)iron are synthesized by two different methods. Primary aliphatic amines and cyclic secondary amines participate in a direct aza-Michael reaction with tricarbonyl(tropone)iron under solvent-free conditions. Less nucleophilic aniline derivatives and more hindered secondary amines add efficiently to the cationic tropone complex formed by protonation of tricarbonyl(tropone)iron. While the protocol utilizing the cationic complex is less efficient overall for accessing the aza-Michael adducts than the direct, solvent-free addition to the neutral complex, it allows the use of a broader range of amine nucleophiles. Following protection of the amine of the aza-Michael adduct as a tert-butyl carbamate, the diene is decomplexed from the iron tricarbonyl fragment upon treatment with cerium(IV) ammonium nitrate to provide derivatives of 6-aminocyclohepta-2,4-dien-1-one. These products can serve as precursors to diverse compounds containing a seven-membered carbocyclic ring. Because the demetallation requires protection of the amine as a carbamate, the aza-Michael adducts of secondary amines cannot be decomplexed using the protocol described here.

Preparation of 6-aminocyclohepta-2,4-dien-1-one Derivatives via Tricarbonyltroponeiron

Representative experimental procedures for the addition of amine nucleophiles to tricarbonyl(tropone)iron and subsequent demetallation of the resulting complexes are presented in detail.

Preparación de 6-aminocyclohepta-2,4-dien-1-one Derivados a través de Tricarbonyl(tropone)hierro

aza-Michael adducts of tricarbonyl(tropone)iron are synthesized by two different methods. Primary aliphatic amines and cyclic secondary amines participate ...

The Synthesis of RGD-functionalized Hydrogels as a Tool for Therapeutic Applications

The use of polymers as biomaterials has provided significant advantages in therapeutic applications. In particular, the possibility to modify and functionalize polymer chains with compounds that are able to improve biocompatibility, mechanical properties, or cell viability allows the design of novel materials to meet new challenges in the biomedical field. With the polymer functionalization strategies, click chemistry is a powerful tool to improve cell-compatibility and drug delivery properties of polymeric devices. Similarly, the fundamental need of biomedicine to use sterile tools to avoid potential adverse-side effects, such as toxicity or contamination of the biological environment, gives rise to increasing interest in the microwave-assisted strategy.
The combination of click chemistry and the microwave-assisted method is suitable to produce biocompatible hydrogels with desired functionalities and improved performances in biomedical applications. This work aims to synthesize RGD-functionalized hydrogels. RGD (arginylglycylaspartic acid) is a tripeptide that can mimic cell adhesion proteins and bind to cell-surface receptors, creating a hospitable microenvironment for cells within the 3D polymeric network of the hydrogels. RGD functionalization occurs through Huisgen 1,3-dipolar cycloaddition. Some PAA carboxyl groups are modified with an alkyne moiety, whereas RGD is functionalized with azido acid as the terminal residue of the peptide sequence. Finally, both products are used in a copper catalyzed click reaction to permanently link the peptide to PAA. This modified polymer is used with carbomer, agarose and polyethylene glycol (PEG) to synthesize a hydrogel matrix. The 3D structure is formed due to an esterification reaction involving carboxyl groups from PAA and carbomer and hydroxyl groups from agarose and PEG through microwave-assisted polycondensation. The efficiency of the gelation mechanism ensures a high degree of RGD functionalization. In addition, the procedure to load therapeutic compounds or biological tools within this functionalized network is very simple and reproducible.

We present a protocol for the synthesis of RGD-functionalized hydrogels as devices for cell and drug delivery. The procedure involves copper catalyzed alkyne-azide cycloaddition (CuAAC) between alkyne-modified polyacrylic acid (PAA) and a RGD-azide derivative. The hydrogels are formed using microwave-assisted polycondensation and their physicochemical properties are investigated.