Esta técnica se puede utilizar para revisar algunas propiedades básicas de la electrofisiología interregional para la lateralización del hemisferio, así como la conectividad, la direccionalidad y el acoplamiento. La medición electrofisiológica es un método sensible y eficaz de evaluación en los animales, actividades neuronales. Este protocolo proporciona una mejor manera de apuntalar en la sincronización de señales eléctricas.
La comprensión del mecanismo subyacente de posible lateralización cerebral alterada en la patogénesis de la enfermedad de Alzheimer, puede proporcionar nuevas perspectivas sobre los biomarcadores potenciales para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer. Antes de la cirugía, confirme la profundidad de la anestesia del ratón, realizando un pellizco de cola o dedo del dedo del dedo delfín con fórceps. A continuación, coloque el ratón en el aparato estereotaxico y fije su cabeza.
Aplica pomada en ambos ojos para mantenerlos húmedos. Luego, afeita la cabeza y esteriliza el área. Haga una pequeña incisión de 12 a 15 milímetros, en el centro del área afeitada.
Usando fórceps, tire suavemente del cuero cabelludo lejos de la línea media. Después, separe la piel suavemente y retire el tejido residual. Limpie el cráneo, utilizando brotes de algodón recubiertos de peróxido de hidrógeno.
Bajo un microscopio estéreo, perforar dos pequeños agujeros, de uno a 1,5 milímetros radios, en ambos lados izquierdo y derecho del cráneo, para permitir la inserción de los microelectrodos de grabación en las regiones M2. Retire con cuidado la dura mater con una aguja de tungsteno. A continuación, inserte dos microelectrodos de grabación separados, llenos de cloruro de sodio molar 0,5, en los orificios, en un ángulo de 60 grados, utilizando micromanipuladores mecánicos.
Para la grabación LFP, baje lentamente los electrodos de vidrio izquierdo y derecho a las coordenadas M2. Para el control de calidad, pruebe la resistencia de cada electrodo, utilizando el amplificador diferencial. A continuación, establezca el proceso de grabación en 0,1 hercios de paso alto, y 1000 hercios de paso bajo, con 1000 veces la amplificación.
Recopile los datos digitalizados de LFP sin procesar en estado estable, durante al menos 60 segundos, con el ratón respirando uniformemente a dos respiraciones por segundo, bajo anestesia. Después de la grabación, levante lentamente los electrodos del cerebro. Guarde los datos y analice sin conexión, con el software de análisis.
Para realizar análisis de correlación cruzada, en el software de análisis, haga clic en análisis, luego correlación de forma de onda e importe los datos. A continuación, asigne una señal de canal de forma de onda para que sea el primer canal y el otro como referencia. Establezca la anchura como dos y desfase como uno.
Posteriormente, establezca la duración de ambos LFP en 100 segundos, seleccionando la hora de inicio y la hora de finalización. A continuación, pulse el botón de proceso para realizar un análisis de correlación cruzada. Haga clic en archivo, exporte como y, a continuación, guarde los resultados de correlación cruzada correspondientes al gráfico emergente resultante en formato de texto.
Después, elimine los valores de correlación en el tiempo los retrasos oscilados en cero más y menos 01 segundos y luego tratar con el resto de los datos de correlación cruzada. Para realizar un análisis de coherencia, ejecute los datos en el software de análisis. A continuación, organice las dos señales LFP como los canales de forma de onda primero y segundo y, a continuación, establezca el valor de tamaño de bloque como 4096.
Tamaño de bloque significa el número de puntos de datos utilizados en el primero para la transformación real. Cuanto mayor sea el tamaño del bloque, mejor será la resolución de frecuencia. Mueva las líneas punteadas manualmente, para asegurarse de que la precisión del tiempo para las señales en ambos canales se establecen como el mismo período.
Pulse el botón Añadir área para cargar el área y realizar análisis de coherencia. Después haga clic en el archivo y guarde como, para guardar los resultados de coherencia correspondientes al gráfico emergente resultante en formato de texto. Para ver si la patología temprana de la enfermedad de Alzheimer afecta la capacidad de la lateralización del hemisferio, se registraron LFP extracelulares en el M2 izquierdo y derecho de ratones APP/PS1 y controles de tipo salvaje, y se analizó su correlación cruzada.
En ratones de tipo salvaje, los resultados demostraron que la correlación media entre los LFP izquierdo y derecho en tiempos positivos difería significativamente de que en el momento negativo se retrasa, lo que implica la existencia de asimetrías hemisféricas en las áreas M2 de los controles de tipo salvaje. En comparación, los LFP izquierdo y derecho de los ratones APP/PS1 mostraron un mayor sincronizado en el dominio del tiempo, lo que sugiere una reducción de la asimetría entre el M2 izquierdo y el derecho. Las oscilaciones gamma se filtraron entonces de los LFP y se realizó un análisis de coherencia para medir la similitud de las señales eléctricas en el rango de frecuencia gamma. El resultado mostró que la coherencia gamma entre el M2 izquierdo y el derecho en ratones APP/PS1 era significativamente mayor que la de los ratones de tipo salvaje, lo que indica una mayor sincronización, y en consecuencia redujo la lateralización entre el M2 izquierdo y el derecho en ratones APP/PS1.
El uretano es tóxico y cancerígeno, así que por favor siempre tenga cuidado, y siga las normas de seguridad al manipularlo. Es muy importante probar la profundidad de la anestesia cada hora, con el fin de asegurar que se registren LVP estables. El proceso de grabación y análisis se puede aplicar a otras vías cerebrales, especialmente para laboratorios que no tienen sistemas para la grabación multicanal en animales en movimiento libre.
