Los métodos tradicionales de transferencia manual de reactivos a granel en placas de microtíter son lentos y propensos a errores humanos. Esta tecnología duplica con más de lo que la eficiencia del proceso y ayuda a eliminar ese error. Esta técnica puede ayudar a los usuarios a comprender las operaciones realizadas en microplacas, reducir las oportunidades de errores y aumentar la eficiencia del usuario durante las operaciones de pipeteo manual.
Esta técnica tendrá un impacto positivo en los resultados en entornos preclínicos y clínicos mediante la eliminación y reducción de errores que pueden ser costosos e incluso potencialmente mortales si no se corrigen. Este sistema de código abierto se puede adaptar fácilmente para otras aplicaciones, como las inspecciones de copia de microplacas, para eliminar las incoherencias en la colocación de compuestos o bioensayos, para necesidades químicas y biológicas. Demostrar el procedimiento de transferencia de muestras estará Lina Deluca, gerente de compuestos del laboratorio de identificación principal.
Para configurar una transferencia de muestra de placa a placa semiautomatizada, utilice una aplicación de edición de hoja de cálculo para generar un archivo CSV que contenga placas de origen y destino, etiquetando el código de barras de origen de las columnas, el código de barras de destino, el pozo de origen, el pozo de destino y el volumen de transferencia. Bajo las columnas, incluya una fila en el archivo para cada operación de pipeteo deseada que indique el código de barras alfanumérico de la mircopla de origen, si hay una, el código de barras alfanumérico de la microplaca de destino, si hay una, la fila alfanumérica y el identificador de columna para el pozo que se va a pipetar en la placa de origen, la fila alfanumérica y el identificador de columna para el pozo que se va a pipetar desde la placa de destino , y el volumen que se transferirá desde el pozo de origen en la columna de código de barras de origen, al pozo de destino en el código de barras de destino. Abra el programa de guía de luz para abrir la aplicación de interfaz gráfica de usuario de placa a placa de canalización de audio de microplaca y haga clic en Seleccionar archivo cherrypick.
En la ventana del explorador de archivos, abra el archivo CSV. La aplicación analizará la primera fila del archivo CSV e iluminará los pozos correspondientes en las placas de origen y destino. Utilice los botones Pozo anterior"y Siguiente bien" para recorrer el archivo CSV como desee.
La interfaz gráfica de usuario resaltará en gris las filas que se hayan iluminado previamente y resaltará, en marrón, las filas activas actualmente. Realice las operaciones de pipeteo según sea necesario para transferir muestras entre el pozo de origen de la placa de origen, al pozo de destino de la placa de destino. Además de la interfaz de usuario, los códigos de barras de la placa se pueden verificar a través de las pantallas LCD conectadas a los paneles de iluminación.
A continuación, haga clic en Siguiente pozo"para continuar hasta que se alcance el final del archivo CSV. Para cargar un nuevo archivo CSV, haga clic en Seleccionar archivo cherrypick"en cualquier momento. Para salir del programa, haga clic en la X roja"en la esquina superior derecha de la interfaz.
Para iluminaciones de varios pocillos, abra la aplicación de delución serie del emisor de luz de canalización de microplaca y especifique el modo de valoración deseado, la densidad de la placa y las filas o columnas de inicio. Utilice los botones Siguiente" y Anterior para navegar por las filas o columnas en secuencia desde la fila o columna inicial de inicio hasta la última fila o columna de la placa. Cada vez que se haga clic en el botón Siguiente"o Anterior", el panel de luz iluminará los LED correspondientes sobre la microplaca.
Continúe hasta que se alcance el final de la secuencia de valoración antes de salir del programa. Para simular visualmente un ensayo, coloque una microplaca en la guía de luz portátil. La guía de luz contiene una batería y toda la electrónica necesaria para ser utilizado independientemente de un ordenador para permitir que la guía se utilice en un modo de mano que se puede controlar con botones de presión incorporados para alternar entre los modos de demostración.
Utilice el interruptor de encendido del gabinete de guía de luz portátil para encender el sistema y seleccionar el modo de guía de luz portátil adecuado para el experimento. En el modo de demostración de cribado de alto rendimiento, utilice el interruptor de botón derecho en la parte superior de la guía de luz portátil para alternar entre los patrones de iluminación de la muestra. Los pozos iluminados con color rojo simulan la dispensa de reactivos de un ensayo, por ejemplo, las células suspendidas en medios.
Los pozos iluminados con el color amarillo simulan la adición del reactivo de detección. A continuación, se simula una fuente de luz de excitación con todos los pozos volviéndose azules, seguidos de la simulación de la luz emitida. La primera y la última columna de los pozos se iluminan en verde, y las columnas de campo de muestra central se iluminan en azul para indicar la placa que se lee en un lector de microplacas.
Los pozos aleatorios en el campo de muestra también tendrán un color verde de intensidad variable para representar los impactos. Para alternar la guía de luz entre el modo de demostración de cribado de alto rendimiento y el modo de demostración de valoración, presione el interruptor del pulsador izquierdo. Cuando la guía de luz entra en el modo de demostración de valoración, todos los pozos en las columnas tres y 13 se iluminarán con el color amarillo.
Al pulsar el interruptor de botón más a la derecha se iluminarán las columnas posteriores en secuencia. Cuando se pulsa el pulsador después de alcanzar las columnas 12 y 22, los pozos de las columnas de cuatro a 12 y del 13 al 22 se iluminarán en una intensidad decreciente de amarillo para representar la valoración. Para la iluminación de artefactos, coloque la microplaca en la guía de luz portátil y pulse dos veces el interruptor del pulsador situado más a la izquierda para cambiar la guía de luz al modo de iluminación.
Utilice el pulsador derecho para alternar entre un conjunto de colores predefinidos según sea necesario para la aplicación. El panel de luz encenderá todos los LED en rojo, azul, verde, naranja, blanco, violeta, amarillo e índigo en secuencia con cada pulsación del botón derecho. Opcionalmente, una cámara o un teléfono inteligente se puede utilizar para fotografiar la placa iluminada para el mantenimiento de registros o la documentación de la obra.
La transferencia de muestras entre placas y la preparación de una dilución en serie se puede lograr sin la preocupación de distracción o pérdida de la pista de qué operaciones de pipeteo permanecen. La plataforma MAPLE se puede utilizar para ayudar a iluminar la microplaca para identificar posibles artefactos, como precipitados, pozos vacíos, pozos parcialmente llenos o burbujas de aire. Los usuarios pueden entonces tomar medidas para mejorar las muestras antes de proporcionarlas a los procesos de laboratorio posteriores.
En este experimento representativo, la lista de trabajo consistió en 49 operaciones de pipeteo de dos microplacas de origen de 384 pozos que contenían una variedad aleatoria de tintes de colores que deletrean Jove en una sola microplaca de destino de 384 pocólveres. El diseño de los pozos en la placa de destino confirma que el usuario se canalla en los pozos correctos. El patrón de color de los pozos en la placa de destino se puede utilizar para identificar errores para los que el usuario no pipetó desde el pozo correcto de las placas de origen.
Los resultados de esta prueba cara a cara muestran un ahorro de tiempo promedio del 50% cuando los usuarios realizaron esta prueba con MAPLE frente a una lista de trabajo impresa sin conexión. Además, la tasa de error de las placas creadas con MAPLE fue del 0% para todos los usuarios, mientras que se observó una tasa de error del 6% para un usuario principiante que utiliza una lista de trabajo para la tarea de preparación de ejemplo. Las formulaciones de sinergia de fármacos requieren una preparación de matriz 2D basada en una dilución en serie por columna para el primer fármaco y una dilución en serie por fila para el segundo fármaco.
Estamos investigando el uso de paneles de luz LED para iluminar la dosificación de microdropletas. Mediante la luz LED estroboscópica, podemos capturar imágenes de muestras líquidas para el control de calidad y el análisis. Este instrumento puede reducir la exposición de un usuario a materiales y agentes peligrosos limitando su tiempo de interacción y facilitando el uso adecuado de reactivos.
