I metodi tradizionali di trasferimento a mano dei reagenti sfusi in piastre a microtitoro sono lenti e soggetti a errori umani. Questa tecnologia raddoppia più che raddoppiata l'efficienza del processo e aiuta a eliminare tale errore. Questa tecnica può aiutare gli utenti a comprendere le operazioni eseguite in micropiatte, ridurre le opportunità di errori e aumentare l'efficienza dell'utente durante le operazioni di pipettatura manuale.
Questa tecnica avrà un impatto positivo sui risultati in contesti precli clinici e clinici rimuovendo e riducendo gli errori che possono essere costosi e persino pericolosi per la vita se non corretti. Questo sistema open source può essere facilmente adattato per altre applicazioni, come le ispezioni delle copie di micropiatta, per eliminare le incongruenze nel posizionamento di composti o biosa test, per esigenze chimiche e biologiche. A dimostrare la procedura di trasferimento del campione sarà Lina Deluca, compound manager del laboratorio di identificazione dei lead.
Per impostare un trasferimento semi-automatizzato di campioni da piastra a piastra, utilizzare un'applicazione di modifica del foglio di calcolo per generare un file CSV contenente targhe di origine e destinazione, etichettando il codice a barre sorgente delle colonne, il codice a barre di destinazione, il pozzo di origine, il pozzo di destinazione e il volume di trasferimento. Sotto le colonne, includere una riga nel file per ogni operazione di pipettaggio desiderata che indica il codice a barre alfanumerico del mircoplato sorgente, se presente, il codice a barre alfanumerico della micropiastra di destinazione, se presente, l'identificatore di riga e colonna alfanumerico da cui il pozzo deve essere pipettato nella piastra di origine, la riga alfanumerica e l'identificatore di colonna per il pozzo da pipettare dalla piastra di destinazione e il volume da trasferire dall'origine nella colonna del codice a barre di origine alla destinazione bene nel codice a barre di destinazione. Aprite il programma Light Guide per aprire l'applicazione di interfaccia utente grafica dell'emettitore di luce di pipettazione assistiva micropiastra e fate clic su Seleziona file cherrypick.
Nella finestra del browser di file aprire il file CSV. L'applicazione analizzerà la prima riga del file CSV e illuminerà i pozzi corrispondenti nelle piastre di origine e di destinazione. Utilizzare i pulsanti Pozzo precedente"e Pozzo successivo" per attraversare il file CSV come desiderato.
L'interfaccia utente grafica evidenzierà in grigio tutte le righe precedentemente illuminate ed evidenzierà, in marrone, le righe attualmente attive. Eseguire le operazioni di pipettazione in base alle esigenze per trasferire i campioni tra il pozzo di origine della piastra di origine, al pozzo di destinazione della piastra di destinazione. Oltre all'interfaccia utente, i codici a barre della piastra possono essere verificati tramite i display LCD collegati ai pannelli di illuminazione.
Quindi fare clic su Avanti bene"per continuare fino al punto in cui viene raggiunta la fine del file CSV. Per caricare un nuovo file CSV, fare clic su Seleziona file cherrypick"in qualsiasi momento. Per uscire dal programma, fare clic sulla X rossa nell'angolo in alto a destra dell'interfaccia.
Per le illuminazioni multi-pozzo, aprire l'applicazione seriale di deluzione seriale dell'emettitore di luce assistente micropiastra e specificare la modalità di titolazione desiderata, la densità della piastra e le righe o colonne di partenza. Utilizzare i pulsanti Avanti"e Precedente" per spostarsi tra le righe o le colonne in sequenza dalla riga iniziale o dalla colonna, all'ultima riga o colonna della lastra. Ogni volta che si fa clic sul pulsante Next"o Previous", il pannello luminoso illuminerà i LED corrispondenti sulla micropiatta.
Continuare fino a raggiungere la fine della sequenza di titolazione prima di uscire dal programma. Per simulare visivamente un saggio, inserire una micropiatta nella guida luminosa portatile. La guida alla luce contiene una batteria e tutta l'elettronica necessaria per essere utilizzata indipendentemente da un computer per consentire l'utilizzo della guida in modalità palmare che può essere controllata con pulsanti integrati per passare da una modalità dimostrativa all'altra.
Utilizzare l'interruttore di accensione sull'involucro portatile della guida luminosa per accendere il sistema e selezionare la modalità di guida luminosa portatile appropriata per l'esperimento. Nella modalità demo di screening ad alta velocità effettiva, utilizzare l'interruttore a pulsante destro nella parte superiore della guida luminosa portatile per attivare o disattivare i modelli di illuminazione del campione. I pozzali illuminati con colore rosso simulano l'erogazione del reagente di un saggio, ad esempio le cellule sospese nei supporti.
I pozzali illuminati con il colore giallo simulano l'aggiunta di reagenti di rilevamento. Successivamente, una sorgente luminosa di eccitazione viene simulata con tutti i pozzi che divavolvono in blu, seguita dalla simulazione della luce emessa. La prima e l'ultima colonna di pozzi sono illuminate in verde e le colonne centrali del campo campione sono illuminate di blu per indicare la piastra che viene letta su un lettore di micropiastrine.
I pozzi casuali nel campo campione avranno anche un colore verde di varia intensità per rappresentare i colpi. Per attivare o disattivare la guida alla luce tra la modalità demo di screening ad alta velocità effettiva e la modalità demo di titolazione, premere l'interruttore a pulsante sinistro. Quando la guida luminosa entra nella modalità demo di titolazione, tutti i pozzi nelle colonne tre e 13 verranno illuminati con il colore giallo.
Premendo l'interruttore a pulsante più a destra si illumineranno le colonne successive in sequenza. Quando il pulsante viene premuto dopo aver raggiunto le colonne 12 e 22, i pozzali nelle colonne da quattro a 12 e da 13 a 22 verranno illuminati in un'intensità decrescente di giallo per rappresentare la titolazione. Per l'illuminazione artefatto, posizionare la micropiatta nella guida luminosa portatile e premere due volte l'interruttore a pulsante più a sinistra per passare la guida luminosa alla modalità illuminazione.
Utilizzare il pulsante destro per alternare un insieme di colori predefiniti in base alle esigenze dell'applicazione. Il pannello chiaro accenderà tutti i LED in sequenza in rosso, blu, verde, arancione, bianco, viola, giallo e indaco con ogni pressione del pulsante destro. Opzionalmente, una fotocamera o uno smartphone possono essere utilizzati per fotografare la piastra illuminata per la registrazione o la documentazione dell'opera.
Il trasferimento di campioni tra piastre e la preparazione di una diluizione seriale possono essere realizzati senza la preoccupazione di distrazioni o di perdere traccia di quali operazioni di pipettazione rimangono. La piattaforma MAPLE può essere utilizzata per aiutare ad illuminare la micropiatta per identificare potenziali artefatti, come precipitati, pozzi vuoti, pozzi parzialmente riempiti o bolle d'aria. Gli utenti possono quindi adottare misure per migliorare i campioni prima di fornirli ai processi di laboratorio a valle.
In questo esperimento rappresentativo, l'elenco di lavoro consisteva in 49 operazioni di pipettazione da due micropiatte sorgente da 384 pozzetti contenenti un assortimento casuale di coloranti colorati che digitano Jove in una singola micropiatta di destinazione da 384 pozzetti. La disposizione dei pozzi nella piastra di destinazione conferma che l'utente ha in pipettato nei pozzi corretti. Il modello di colore dei pozzi nella piastra di destinazione può essere utilizzato per identificare errori per i quali l'utente non ha pipettato dal pozzo corretto delle piastre di origine.
I risultati di questo test testa a testa mostrano un risparmio di tempo medio del 50% quando gli utenti eseguito questo test utilizzando MAPLE rispetto a un elenco di lavoro stampato offline. Inoltre, il tasso di errore delle piastre create utilizzando MAPLE era dello 0% per tutti gli utenti, mentre è stato osservato un tasso di errore del 6% per un utente alle prime armi utilizzando un elenco di lavoro per l'attività di preparazione del campione. Le formulazioni di sinergia farmacologica richiedono una preparazione della matrice 2D basata su una diluizione seriale per colonna per il primo farmaco e una diluizione seriale per fila per il secondo farmaco.
Stiamo studiando l'uso di pannelli luminosi a LED per illuminare l'erogazione di microgocce. Strobing LED light, possiamo catturare immagini di campioni liquidi per il controllo e l'analisi della qualità. Questo strumento può ridurre l'esposizione di un utente a materiali e agenti pericolosi limitando il tempo di interazione e facilitando un uso appropriato dei reagenti.
