Nuestro protocolo proporciona un modelo fácil, rentable, reproducible y clínico relevante para investigadores en el campo de la hiperplasia intimal venosa. Nuestro protocolo es económica, clínica y técnicamente equilibrado. Por lo tanto, es muy recomendable para los investigadores que quieren aplicar sus resultados in vitro a un entorno in vivo.
Creemos que nuestro protocolo se puede aplicar a un modelo animal más grande para el desarrollo de nuevas estrategias de tratamiento en enfermedades isquémicas del corazón y de las extremidades inferiores. Nuestro protocolo es principalmente relevante para el campo de la cirugía cardiovascular. Sin embargo, también se puede utilizar para abordar cambios degenerativos en las fístulas arteriovenosas en pacientes con enfermedad renal terminal.
Después de la administración analgésica anestésica local y profiláctica, desinfecte el sitio quirúrgico con 10%povidona-yodo. Y hacer una incisión de 50 a 60 milímetros con un bisturí quirúrgico en la región cervical del macho anestesiado conejo blanco japonés. Disecciona rotulosamente los tejidos subcutáneos y la fascia para exponer un segmento de 20 a 30 milímetros de la vena yugular.
Y usa suturas de seda 4-0 para ligar todas las ramas de la vena expuesta. Coloque una sutura de seda 2-0 alrededor de las venas yugulares internas y externas y haga una incisión de un milímetro en la pared venosa del lado distal de la vena. Inserte un catéter de globo de 2 francos desde el corte hacia el lado proximal de la vena.
Y ligar la sutura de seda 2-0 en los sitios distales de las venas yugulares. Inflar el globo con 200 microlitros de aire. Y usa el globo para denude la intima de la vena tres veces para la exfoliación endotelial.
Después del tercer pasaje, ligar el extremo proximal de la vena y cortar la vena en el sitio distal. A continuación, inserte un catéter intravenoso de calibre 20 en la vena cosechada desde la dirección distal hasta la proximal, y corte la vena en el sitio proximal. Para interponer la arteria carótida con la vena yugular de la cosecha, exponga un segmento de 20 a 30 milímetros de la arteria carótida ipsilateral.
Y separe la arteria cuidadosamente de la vena y el nervio cercanos. Ligar todas las ramas de la vena expuesta con sutura de seda 4-0. Y administrar por vía intravenosa 200 Unidades Internacionales por kilogramo de heparina sódica.
Sujete los extremos proximal y distal de la arteria con abrazaderas quirúrgicas de goma. Y corta la arteria entre las abrazaderas. Inyectar solución salina normal en la arteria carótida incisada proximally y distalmente para distender la arteria.
Y coloque la vena de la cosecha cerca de la arteria para anastomose el vaso de una manera invertida de extremo a extremo. Para anastomose el extremo proximal de la vena hasta el extremo distal de la arteria, coloque dos puntos de anclaje de 8-0 polipropileno en el sitio y en el sitio opuesto. Agregue puntos de sutura en la parte superior de la línea de anastomosis entre los puntos de anclaje.
Voltee la arteria y el injerto de venas boca abajo. Y agregue puntos de sutura en la parte restante de la línea de anastomosis. A continuación, retire el catéter intravenoso de la vena y sujete el injerto venoso proximally.
Declamp la arteria carótida distalmente. Y observe si el injerto de vena se expande gradualmente. Uso de 8-0 polipropileno interrumpido suturas, anastomose el extremo distal de la vena hasta el extremo proximal de la arteria.
Y declampe la arteria para comprobar si hay sangrado de los sitios de anastomosis. Finalmente, ligar la arteria carótida interna con una sutura de seda 4-0 para simular una mala condición de escorrentía y facilitar la hiperplasia íntima. A continuación, limpie la herida con solución salina.
Cierre la incisión con 3-0 poliglactin 910 en capas. Y permitir que el conejo se recupere completamente con monitoreo antes de devolver el animal a su jaula de origen. En esta imagen representativa, se puede observar una hiperplasia íntima exitosa a las 2 semanas después de la cirugía de interposición venosa.
Aquí, se pueden observar los efectos terapéuticos de las nanopartículas de poli(ácido láctico-co-glicólico cargados de microRNA-145 en la morfología de la hiperplasia íntima. De hecho, el tratamiento con microRNAs cargados con nanopartículas poli(ácido láctico-co-glicólico)resulta en una atenuación significativa de la hiperplasia intimal. Además, la inmunostaining para Ki-67, un marcador proliferativo celular, revela menos células Ki-67 positivas dentro del grupo tratado con microRNA-145 que indica un cambio de fenotipo en las células musculares lisas vasculares desde el estado proliferativo inmaduro hasta el estado contráctil maduro.
El objetivo principal de nuestro protocolo es lograr la patencia del injerto implantado. También es importante confirmar que el injerto se expande después de declampar la arteria carótida.
